單克隆抗體(陳青)

1、動物細胞融合與單克隆抗體文筆中學 陳青遭遇 眼鏡蛇毒為混合型毒素，以神經(jīng)毒為主，早期癥狀包括眼瞼下垂、復視、吞咽困難，暈眩，繼而逐漸出現(xiàn)呼吸肌麻痹。一般醫(yī)治辦法為使用抗蛇毒血清，如醫(yī)治無效病人多于咬傷之后6-12小時死亡。死因多為呼吸麻痹而窒息。舟山眼鏡蛇尋醫(yī)缺藥抗蛇毒血清 被蛇咬后，蛇毒作為抗原進入機體。注射的抗毒血清中的有效成分抗蛇毒抗體能特異性結合蛇毒，形成復合物使毒素失去活性，并由吞噬細胞吞噬消化 。 所以被毒蛇咬傷，初步處理傷口后應在越短的時間里面注射抗蛇毒血清對機體越有益?；仡櫍后w液免疫1.提取蛇毒2.免疫馬匹3.采集血液4.分離純化5.冷凍干燥6.低溫保存疑問：為什么抗蛇毒血清那

2、么難獲得？其它的抗血清存在類似問題用傳統(tǒng)方法獲得抗體存在問題：生產(chǎn)難，周期長，產(chǎn)量少、純度差，特異性低。設想：能不能通過大規(guī)模培養(yǎng)漿細胞獲得抗體 B淋巴細胞在抗原刺激下分裂分化形成能分泌抗體的漿細胞， 漿細胞主要分布在脾臟脾臟、淋巴結等組織中。 每一種B淋巴細胞只能能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B淋巴細胞大量增殖。困難：B淋巴細胞能分泌抗體不能無限增殖 漿細胞為終末分化細胞，它們壽命只有2-3D，只能由記憶細胞增殖分化為漿細胞進行補充，不能進行分裂增殖。曙光：動物細胞融合 人們很早就注意到在自然條件下發(fā)生的細胞融合現(xiàn)象。首先在病理組織中發(fā)現(xiàn)了由細胞融合

3、產(chǎn)生的多核細胞，緊接著發(fā)現(xiàn)在脊椎動物和無脊椎動物的正常細胞中也可發(fā)生細胞融合，隨后在體外組織培養(yǎng)中也發(fā)現(xiàn)了離體細胞的融合現(xiàn)象。 1962年，日本科學家發(fā)現(xiàn)仙臺病毒能介導癌細胞融合，從而打破了細胞融合的屏障，推動細胞融合技術躍上新的臺階。 1965年英國科學家成功地用滅活仙臺病毒將體外培養(yǎng)的Hela細胞和小鼠艾氏腹腔積液癌細胞融合成一個雜交細胞，實現(xiàn)了異種細胞融合。表明異種動物細胞可融合成具有雙方親代細胞特性的雜種細胞。骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合能產(chǎn)生抗體能產(chǎn)生抗體不能無限增殖不能無限增殖+B淋巴細胞能無限增殖能無限增殖不能產(chǎn)生抗體不能產(chǎn)生抗體?雜交瘤細胞雜交瘤細胞既能產(chǎn)生抗體既能產(chǎn)生抗體又能無

4、限增殖又能無限增殖方案:困難1：融合后獲得的一定是雜交瘤細胞嗎？從小鼠脾從小鼠脾臟中獲取臟中獲取融合融合第一次篩選：篩選雜交瘤單克隆抗體困難2：雜交瘤細胞一定能分泌單一抗體？抗原A抗原B抗原C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗體B淋巴細胞 體內產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達百體內產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達百萬種以上，但是每一個萬種以上，但是每一個B淋巴細胞只分泌淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。從脾臟中獲取一種特異性抗體。從脾臟中獲取B淋巴細淋巴細胞，雜交后得到的雜交瘤細胞能分泌多種胞，雜交后得到的雜交瘤細胞能分泌多種抗體?？贵w。 第2階段篩選：專一性抗體檢測困難3：如何大規(guī)模獲得抗體？Georges J

5、.F. KhlerCsar Milstein 1975年Koehler和Milstein合作，選擇經(jīng)綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞和在體外培養(yǎng)的能持續(xù)繁殖的小鼠骨髓瘤細胞融合，最終獲得具有兩種親本細胞各自特點的雜交細胞，建立了第一個B細胞雜交瘤細胞株，它既能分泌特異性抗綿羊紅細胞抗體，又能在體外培養(yǎng)永久傳代。他們在Nature雜志上聯(lián)名發(fā)表的題為“分泌預定特異性抗體的融合細胞持續(xù)培養(yǎng)”的著名論文，宣告單克隆抗體的誕生，該項成果榮獲1984年度諾貝爾醫(yī)學獎和生理獎。榮譽運用：診斷試劑人絨毛膜促性腺激素（HCG）是由受孕婦女體內胎盤產(chǎn)生的一種糖蛋白類激素，在孕婦的尿液中大量存在。而在非妊娠婦女尿液中幾

6、乎不含有HCG。運用：生物導彈 1986年，美國FDA批準了第一個單克隆抗體藥物上市。 目前，單克隆抗體藥物已步入發(fā)展的黃金期。單克隆抗體藥物以其高特異性、有效性和安全性正在發(fā)展成為國際藥品市場上一大類新型診斷和治療藥物，日益成為癌癥及其他疾病治療市場的新寵。至2013年2月22日為止，F(xiàn)DA共有38個治療用抗體藥物被批準上市。預計到2015年抗體藥物市場將超過980億美元。 疑問：為什么抗蛇毒血清那么難獲得？第一，抗蛇毒血清生產(chǎn)難，周期長，產(chǎn)量少、純度差，特異性低。具體過程：用蛇毒反復給馬注射，待馬產(chǎn)生抗體后從血漿中分離得到抗蛇毒血清。無法流水線生產(chǎn)，時間很長，平均需要9-11個月。一匹馬大約能生產(chǎn)100支。第二，全國僅上海賽倫生物技術有限公司具有生產(chǎn)蛇毒血清的資質。第三，血清對儲存的要求很高，28避光干燥處保存。而且血清實質上是蛋白質，有一定儲存期限，由于現(xiàn)在城市被蛇咬傷的越來越少，一般大醫(yī)院才有，小醫(yī)院沒有，用的人少，報廢率高。http:/ 由于雜交瘤細胞中染色體數(shù)較正常情況下多一倍，細由于雜交瘤細胞中染色體數(shù)較正常情況下多一倍，細胞處于不穩(wěn)定狀態(tài)胞處于不穩(wěn)定狀態(tài) n 在細胞分裂時，染色體的分配不平衡，會使雜交瘤細在細胞分裂時，染色體的分配不平衡，會使雜交瘤細胞在分裂增殖過程中丟失抗體分泌能力胞在分裂增殖過程中丟失抗體分泌能力 n 因此克隆一次是