豬用抗生素的替代

1、農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i calternatives of alternatives of antibiotics for pigsantibiotics for pigs豬用抗生素的替代豬用抗生素的替代defa li 李德發(fā)李德發(fā)ministry of agriculture feed industry centre 農(nóng)業(yè)部飼料工業(yè)中心農(nóng)業(yè)部飼料工業(yè)中心20062006年年11 11月月3030日于北京日于北京農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i c豬營養(yǎng)豬營養(yǎng)營養(yǎng)需要營養(yǎng)需要與代謝與代謝分子生物學(xué)分子生物學(xué)植物提取

2、物植物提取物免疫學(xué)免疫學(xué)微生物學(xué)微生物學(xué)分析化學(xué)分析化學(xué)營養(yǎng)與免疫營養(yǎng)與免疫基因工程菌基因工程菌細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)分子營養(yǎng)分子營養(yǎng)與肉品質(zhì)與肉品質(zhì)團(tuán)隊研究團(tuán)隊研究農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cantibiotics抗生素抗生素 residue殘留殘留resistance耐藥性耐藥性harmful to animal and human health影響動物和人類的健康影響動物和人類的健康reduce the use of antibiotics減少抗生素的使用減少抗生素的使用 eu歐盟歐盟china中國中國current situation and

3、future development 現(xiàn)狀與展望現(xiàn)狀與展望農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i calternatives of antibiotics 抗生素替代抗生素替代uantimicrobial peptides 抗菌肽抗菌肽 uherbal extracts 天然提取物天然提取物uenzyme preparations 酶制劑酶制劑uprobiotics 益生素益生素農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cprobiotics益生素益生素農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i clactob

4、acillus乳酸桿菌乳酸桿菌mechanism機(jī)理研究機(jī)理研究application應(yīng)用研究應(yīng)用研究綠色熒光蛋白綠色熒光蛋白(gfp)gfp)標(biāo)記標(biāo)記蛋白組學(xué)蛋白組學(xué)粘附位點粘附位點無抗發(fā)酵飼料無抗發(fā)酵飼料蛋白差異蛋白差異復(fù)合發(fā)酵培養(yǎng)復(fù)合發(fā)酵培養(yǎng)悉生動物悉生動物模型模型信號傳導(dǎo)信號傳導(dǎo)作用機(jī)制作用機(jī)制農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i c targeting distribution 目的細(xì)菌在腸道中的定位分布情況，其與腸道菌系之目的細(xì)菌在腸道中的定位分布情況，其與腸道菌系之 間的關(guān)系間的關(guān)系 specific passway and function 具體

5、作用途徑與功能的研究具體作用途徑與功能的研究experimental model of gnotobiotic animals悉生動物實驗?zāi)Ｐ拖ど鷦游飳嶒災(zāi)Ｐ涂瞻捉M空白組農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cdevelopment of antibiotics-free fermented feed無抗發(fā)酵飼料的開發(fā)無抗發(fā)酵飼料的開發(fā)農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cfermentative respiratory membrane發(fā)酵呼吸膜發(fā)酵呼吸膜 single way valve 單向閥門單向閥門 co2 venti

6、ng, preventing air to enter 排出袋內(nèi)微生物產(chǎn)生的排出袋內(nèi)微生物產(chǎn)生的co2，阻止大氣進(jìn)入，阻止大氣進(jìn)入農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i ca, e. coli k88 大腸桿菌大腸桿菌k88b, e. coli k99 大腸桿菌大腸桿菌k99c, s. typhimurium 鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌 d, staph. aureus 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌int. j. gener. mol. microbiol., x. h. guo, defa li, 2006inhibitory activity of baci

7、llus spp. 139 against pathogenic bacteria, but not lactobacillus外源芽孢桿菌可抑制有害菌，對乳酸菌無影響外源芽孢桿菌可抑制有害菌，對乳酸菌無影響農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cmulti-strains combination, creating anaerobic condition automatically 多菌種組合，自身創(chuàng)造厭氧環(huán)境多菌種組合，自身創(chuàng)造厭氧環(huán)境yeast酵母菌酵母菌bacillus spp.芽胞桿菌芽胞桿菌好氧好氧兼性兼性兼性兼性lactobacillus repr

8、oduction in anaerobic condition 乳酸桿菌乳酸桿菌厭氧發(fā)酵厭氧發(fā)酵oligosaccharide寡糖寡糖nsp enzyme非淀粉多糖酶非淀粉多糖酶activator激活劑激活劑 刺激刺激activate農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cinoculating, packing, then fermentation先接種、包裝，后發(fā)酵先接種、包裝，后發(fā)酵接菌接菌激活劑激活劑原料原料發(fā)酵發(fā)酵輕工業(yè)副產(chǎn)物：玉米漿、果渣輕工業(yè)副產(chǎn)物：玉米漿、果渣農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i ceffect o

9、f fermentation time on energy and gossypol能量與游離棉酚隨發(fā)酵時間的變化能量與游離棉酚隨發(fā)酵時間的變化 decrease the content of gossypol 降低游離棉酚的含量降低游離棉酚的含量fermentation time (h)energygossypolgossypol（mg/kg）energy（kcal/g）農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i ceffects of antibiotics-free fermented feed on growth performance in pigs無抗發(fā)酵

10、飼料對豬生產(chǎn)性能的影響無抗發(fā)酵飼料對豬生產(chǎn)性能的影響p 0.05農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i crfid systemrfid rfid 追溯系統(tǒng)追溯系統(tǒng) 基因芯片基因芯片ugene chip ：the on line examination technique of antibiotics 基因芯片：快速檢測分割肉中的抗生素含量（基因芯片：快速檢測分割肉中的抗生素含量（20-100 ppb）農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cproteomics 蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心

11、心 m a f i cproteomics analysis of interaction between lactobacillus and intestine乳酸桿菌和腸道細(xì)胞相互作用的蛋白質(zhì)組學(xué)研究乳酸桿菌和腸道細(xì)胞相互作用的蛋白質(zhì)組學(xué)研究j. nutr., j. j. wang, defa li, 2006蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)雙向電泳雙向電泳樣品制備樣品制備數(shù)據(jù)庫比對鑒定蛋白數(shù)據(jù)庫比對鑒定蛋白相互作用機(jī)制相互作用機(jī)制生物功能生物功能差異蛋白差異蛋白質(zhì)譜分析質(zhì)譜分析圖像分析圖像分析膠內(nèi)酶切膠內(nèi)酶切蛋白蛋白lactobacillus乳酸桿菌乳酸桿菌intestinal epithelial

12、 cells腸道上皮細(xì)胞腸道上皮細(xì)胞等點聚焦等點聚焦sds-page農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cexperimental design試驗設(shè)計試驗設(shè)計intestinal cellsadhered or notlactobacillus fermentum i5007 cellsculture medium, 37c 3737c溫箱溫箱4 hrabbit jejunum兔子空腸兔子空腸ltwo-dimensional gel electrophoresis 雙向電泳雙向電泳37c 1 hlmass spectrometry 質(zhì)譜質(zhì)譜different

13、ial proteins差異蛋白差異蛋白農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i clactobacillus in rabbit jejunum culture兔子空腸培養(yǎng)條件下乳酸桿菌表達(dá)差異的蛋白兔子空腸培養(yǎng)條件下乳酸桿菌表達(dá)差異的蛋白electrophoresis, f. yang, defa li, 2006glycoside hydrolase糖苷水解酶（粘蛋白的分解酶）糖苷水解酶（粘蛋白的分解酶）降解腸粘膜表達(dá)的粘蛋白降解腸粘膜表達(dá)的粘蛋白有利于乳酸桿菌粘附定植有利于乳酸桿菌粘附定植fructose-6-phosphate phosphoketolas

14、e (f6ppk) 6-6-磷酸果糖磷酸酮酶磷酸果糖磷酸酮酶lactate dehydrogenase乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶dihydrolipomide dehydrogenase二氫硫辛酸脫氫酶二氫硫辛酸脫氫酶（丙酮酸脫氫酶系）（丙酮酸脫氫酶系）糖酵解糖酵解三羧酸循環(huán)三羧酸循環(huán)磷酸戊糖途徑磷酸戊糖途徑減少氧自減少氧自由基產(chǎn)生由基產(chǎn)生nadphnadph生成增加生成增加有利于乳酸桿菌存活有利于乳酸桿菌存活農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cintestinal cells after lactobacillus adhesion腸細(xì)胞被乳酸桿菌粘附條件下表達(dá)

15、差異的蛋白腸細(xì)胞被乳酸桿菌粘附條件下表達(dá)差異的蛋白electrophoresis, f. yang, defa li, 2006voltage-dependent anion channel 1 電壓依從性陰離子通道電壓依從性陰離子通道1 1glutathione transferase 谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶heat shock protein gp96 熱應(yīng)激蛋白熱應(yīng)激蛋白gp96gp96調(diào)控膜通透性調(diào)控膜通透性改善機(jī)體免疫改善機(jī)體免疫減少氧化應(yīng)激減少氧化應(yīng)激改善腸道完整性改善腸道完整性及其健康及其健康農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i csynbi

16、otics 合生素合生素農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cfunctional mechanism of synbiotics 合生素的作用機(jī)理合生素的作用機(jī)理synbiotics 合生素合生素bacillus subtilis枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌astragalus, aloe polysaccharide, etc.黃芪多糖，蘆薈多糖黃芪多糖，蘆薈多糖等等immunity免疫力免疫力antibacterial substance 抑菌物質(zhì)抑菌物質(zhì)organic acid有機(jī)酸有機(jī)酸health動物健康動物健康農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè)

17、 中中 心心 m a f i c bacteriophagel 產(chǎn)生抗菌素產(chǎn)生抗菌素l 揮發(fā)性脂肪酸：乙酸、丙酸、丁酸揮發(fā)性脂肪酸：乙酸、丙酸、丁酸 tolerance of the intestinal environment 耐受腸道內(nèi)環(huán)境耐受腸道內(nèi)環(huán)境bacillus subtilis枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i czno氧化鋅氧化鋅農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i chypothesis假設(shè)假設(shè)intestine function腸道功能腸道功能enteric nervous syste

18、m 腸神經(jīng)系統(tǒng)腸神經(jīng)系統(tǒng)feed intake采食量采食量diarrhea腹瀉腹瀉生產(chǎn)性能生產(chǎn)性能growth performancegastrointestinal hormones胃腸激素胃腸激素mast cell mediators肥大細(xì)胞介質(zhì)肥大細(xì)胞介質(zhì)intestinal igf-1 system小腸小腸igf-1igf-1系統(tǒng)系統(tǒng) hormone on eating采食相關(guān)激素采食相關(guān)激素zno農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i ceffects of dietary supplement of 3000 mg/kg zno on the expr

19、ession of fundic gland ghrelin gene in piglets日糧中添加日糧中添加3000 mg/kg3000 mg/kg氧化鋅對斷奶仔豬胃底腺氧化鋅對斷奶仔豬胃底腺ghrelinghrelin基因表達(dá)的影響基因表達(dá)的影響p = 0.008increase the expression of the ghrelin gene 顯著提高斷奶仔豬胃底腺顯著提高斷奶仔豬胃底腺ghrelinghrelin基因的表達(dá)基因的表達(dá), , 提高采食提高采食量量農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i c improve the intestinal f

20、unction 藥理劑量氧化鋅促進(jìn)仔豬腸道健康藥理劑量氧化鋅促進(jìn)仔豬腸道健康the small intestinal morphology of weaned pigs receiving a diet with or without supplementation of 3000 mg/kg zn 日糧中添加日糧中添加3000 mg/kg3000 mg/kg氧化鋅氧化鋅zno對仔豬小腸形態(tài)對仔豬小腸形態(tài)的影響的影響j. nutr., x. l. li, defa li, 2006itemsznso4zno groupsempvillus height, m 341 387 14 0.036c

21、rypt depth, m 194 179 8 0.248農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i c increase the expression of igf-1 gene 提高小腸提高小腸 igf-1 igf-1 基因的表達(dá)基因的表達(dá) 通過通過igf-1igf-1的旁分泌作用促進(jìn)仔豬腸道健康和生長的旁分泌作用促進(jìn)仔豬腸道健康和生長effects of dietary supplement of 3000 mg/kg zno on the expression of small-intestinal mucosa igf-1 gene in piglets日糧

22、中添加日糧中添加3000 mg/kg3000 mg/kg氧化鋅對仔豬小腸粘膜氧化鋅對仔豬小腸粘膜igf-1igf-1基因表達(dá)的影響基因表達(dá)的影響p = 0.012p = 0.041ab libitum pair-fedj. nutr., x. l. li, defa li, 2006農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i chistamine concentrations in the small intestine of weanling piglets fed diets containing normal and high-levels of zno高鋅日糧

23、對斷奶仔豬小腸組胺濃度的影響高鋅日糧對斷奶仔豬小腸組胺濃度的影響udecrease the release of the histamine in the small intestine 高鋅顯著降低斷奶仔豬小腸組胺的釋放高鋅顯著降低斷奶仔豬小腸組胺的釋放穩(wěn)定小腸通透性穩(wěn)定小腸通透性p = 0.005p = 0.049p = 0.049duodenum jejunum ileum 農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cthe numbers of mast cells (cell/cm2) in the small intestine of weanling

24、piglets fed diets containing normal or high-levels of zinc oxide高鋅日糧對斷奶仔豬小腸肥大細(xì)胞數(shù)量的影響高鋅日糧對斷奶仔豬小腸肥大細(xì)胞數(shù)量的影響 decrease the numbers of the mast cells in the small intestine 高鋅顯著降低斷奶仔豬小腸各層肥大細(xì)胞數(shù)高鋅顯著降低斷奶仔豬小腸各層肥大細(xì)胞數(shù)改善小腸功能改善小腸功能locationcontroltreatmentp duodenum mucosa74.9 21.936.7 8.90.01jejunum mucosa99.7 13

25、.1 48.8 13.20.01ileum mucosa81.4 19.555.1 3.40.01農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cmrna and protein levels for the stem cell factor (scf) gene in the mid jejunum of weanling piglets fed diets containing normal and high-levels of zno高鋅對空腸中段干細(xì)胞因子表達(dá)（基因與蛋白）的影響高鋅對空腸中段干細(xì)胞因子表達(dá)（基因與蛋白）的影響 decrease the expr

26、ession of scf 高鋅顯著降低空腸干細(xì)胞因子的表達(dá)高鋅顯著降低空腸干細(xì)胞因子的表達(dá) 調(diào)控肥大細(xì)胞數(shù)量及介質(zhì)釋放調(diào)控肥大細(xì)胞數(shù)量及介質(zhì)釋放p = 0.016proteinnormal znohigh znop = 0.024mrnanormal znohigh zno農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cthe effects of dietary zinc on the changes in isc (isczn) and in g (gzn)日糧鋅對短路電流和電導(dǎo)率改變的影響日糧鋅對短路電流和電導(dǎo)率改變的影響comp. biochem. physi

27、ol., z. k. feng, 2006 zn improves tight junction permeabilityl 高鋅降低斷奶仔豬小腸粘膜跨上皮電位差高鋅降低斷奶仔豬小腸粘膜跨上皮電位差l 維持腸道緊密連接的完整性維持腸道緊密連接的完整性itemsdietssempzn2500dietzndiet zn- zn+ znisczn (m/cm2)9.012.45.10.450.230.84gzn (ms/cm2)1.3a 0.4bc0.30.03 0.0010.82農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cenzyme preparations酶制劑酶制

28、劑農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i ccomplex enzyme-mutation and selection復(fù)合酶復(fù)合酶誘變選育誘變選育 aspergillus sulphureus-mafic001 可高產(chǎn)復(fù)合酶的硫色曲霉及其誘變篩育方法和固態(tài)發(fā)酵制可高產(chǎn)復(fù)合酶的硫色曲霉及其誘變篩育方法和固態(tài)發(fā)酵制備飼用復(fù)合酶的應(yīng)用備飼用復(fù)合酶的應(yīng)用 high yield of complex enzyme: xylanase, -glucanase, pectinase, etc. 高產(chǎn)復(fù)合酶：木聚糖酶、高產(chǎn)復(fù)合酶：木聚糖酶、 -葡聚糖酶、果膠酶等葡聚糖酶、果膠酶等

29、 industrial production 工業(yè)化生產(chǎn)，商業(yè)利潤超過工業(yè)化生產(chǎn)，商業(yè)利潤超過1000萬元萬元 aspergillus niger-mafic005 飼用非淀粉多糖酶高產(chǎn)菌種的選育及其固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)飼用非淀粉多糖酶高產(chǎn)菌種的選育及其固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù) high yield of complex enzyme: xylanase, -glucanase, pectinase, etc. 高產(chǎn)復(fù)合酶：木聚糖酶、葡聚糖酶、果膠酶等高產(chǎn)復(fù)合酶：木聚糖酶、葡聚糖酶、果膠酶等農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cexisting questions and

30、 the methods to increase the yield of -mannanase存在問題及提高存在問題及提高 - -甘露聚糖酶產(chǎn)量的方法甘露聚糖酶產(chǎn)量的方法 low yield and enzymatic activity, difficult for massive application of -mannanase 產(chǎn)量低，酶活力不高，使產(chǎn)量低，酶活力不高，使 - -甘露聚糖酶不能大量推廣使用甘露聚糖酶不能大量推廣使用uscreening high yielding a. sulphureus mafic001 -mannanase strains by a mutant

31、treatment 誘變選育高產(chǎn)硫色曲霉誘變選育高產(chǎn)硫色曲霉mafic001 mafic001 - -甘露聚糖酶菌種甘露聚糖酶菌種umodifying -mannanase gene sequence according to codon bias 根據(jù)密碼子偏好性，優(yōu)化根據(jù)密碼子偏好性，優(yōu)化 - -甘露聚糖酶基因序列甘露聚糖酶基因序列 -mannanase-aspergillus sulplhureus mafic001 -甘露聚糖酶硫色曲霉甘露聚糖酶硫色曲霉mafic001農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i crt-pcr and rapid amplif

32、ication of cdna ends (race) techniquert-pcrrt-pcr和和cdnacdna末端快速擴(kuò)增技術(shù)末端快速擴(kuò)增技術(shù)partial sequence c-terminal domain n-terminal domain 5-race (5-full race core set)3-race (3-full race core set)primer 1：5-ttcaacgacgtcaacac -3primer 2：5-a（t/c）ccagcc（g/a）ttgcccca-3 primer 1 and primer 2 used to amplify the pa

33、rtial sequence of -mannanase 設(shè)計引物設(shè)計引物primer 1primer 1和和primer 2primer 2擴(kuò)增擴(kuò)增 - -甘露聚糖酶部分序列甘露聚糖酶部分序列 obtain the n-terminal and c-terminal of -mannanase gene sequence using race technique 使用使用racerace技術(shù)獲得技術(shù)獲得 - -甘露聚糖酶的甘露聚糖酶的n-n-端和端和c-c-端序列端序列農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i c1375 bp947 bp1152 bpj biot

34、echnol., x. l. chen, defa li, 2006the first time clone the full-length gene sequence of a. sulphureus mafic001 -mannanase (genbank accession no. dq328335)首次克隆了硫色曲霉首次克隆了硫色曲霉mafic001-mafic001-甘露聚糖酶全基因序列甘露聚糖酶全基因序列農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i c modifying the mature -mannanase gene sequence by codo

35、n bias 密碼子優(yōu)化改造密碼子優(yōu)化改造 - -甘露聚糖酶成熟編碼基因序列甘露聚糖酶成熟編碼基因序列constructing p. pastoris expression vector ppicza, high density fermentation of recombinant -mannanase in 10 l fermenter 構(gòu)建畢赤酵母表達(dá)載體構(gòu)建畢赤酵母表達(dá)載體ppiczppicza a，實現(xiàn)重組，實現(xiàn)重組 - -甘露聚糖甘露聚糖 酶在酶在10 l10 l發(fā)酵罐中高密度發(fā)酵發(fā)酵罐中高密度發(fā)酵pichia pastoris expression vector畢赤酵母表達(dá)載體畢

36、赤酵母表達(dá)載體 afermentation device （10 l）發(fā)酵裝置發(fā)酵裝置（10升）升）農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i csds-page of expressed -mannanase in fermentor with different induction times 發(fā)酵罐中發(fā)酵罐中 - -甘露聚糖酶在不同時甘露聚糖酶在不同時間的表達(dá)量間的表達(dá)量 highest enzymatic activity (最高酶活力最高酶活力)：1100 u/ml purity (純度純度)：96 highest protein expression le

37、vel (最高蛋白濃度最高蛋白濃度)：3 g/laccumulation of -mannanaseactivity with different induction times for fermentation發(fā)酵中發(fā)酵中 - -甘露聚糖酶活性隨誘導(dǎo)甘露聚糖酶活性隨誘導(dǎo)時間的積累時間的積累 1100 u/mljam, x. l. chen, defa li, 200635 kda 45 kda66.2kda 116 kda m 1 2 3 4 5 6 7 0 h, 12 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 120 h48 kda農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中

38、 心心 m a f i c3.3 fold3.9 fold -mannanase characterization: an extremely broad ph (2.2-8.0) range, optimum ph is 2.4 酶學(xué)特性：酶學(xué)特性：phph（2.2-8.02.2-8.0）范圍寬，最適）范圍寬，最適ph 2.4ph 2.4jam, x. l. chen, defa li, 2006 -mannanase protein expression level - -甘露聚糖酶蛋白甘露聚糖酶蛋白表達(dá)水平表達(dá)水平 -mannanase activity - -甘露聚糖甘露聚糖酶活力酶活

39、力農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cfurther research進(jìn)一步的研究進(jìn)一步的研究 pilot scale, mass-industrial production 中試，實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)中試，實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn) determine the efficacy by animal feeding trials 動物試驗驗證其效果動物試驗驗證其效果national feed engineering technology research center nankou fermentation base國家飼料工程技術(shù)研究中心南口發(fā)酵實驗基地國家飼料工程技術(shù)研究

40、中心南口發(fā)酵實驗基地農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cenzyme microb. tech., p. deng, defa li, 2006xylanase木聚糖酶木聚糖酶aspergillus niger mafic005 xylanase gene l 克隆黑曲霉克隆黑曲霉mafic005mafic005木聚糖酶木聚糖酶xynbxynb基因，基因，genbankgenbank登錄號為登錄號為 dq174549dq174549l 實現(xiàn)了在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達(dá)實現(xiàn)了在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達(dá)l 酶學(xué)性質(zhì)表明，與動物胃腸道環(huán)境相適應(yīng)酶學(xué)性質(zhì)表明，與

41、動物胃腸道環(huán)境相適應(yīng) aspergillus sulphureus mafic001 xylanase gene l 克隆硫色曲霉克隆硫色曲霉mafic001mafic001木聚糖酶木聚糖酶xynaxyna和和xynbxynb基因，基因，genbankgenbank 登錄號分別為登錄號分別為dq355509dq355509和和dq168666dq168666l 實現(xiàn)了在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達(dá)實現(xiàn)了在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達(dá)l 酶學(xué)性質(zhì)表明，與動物胃腸道環(huán)境相適應(yīng)酶學(xué)性質(zhì)表明，與動物胃腸道環(huán)境相適應(yīng) 農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i c+modified

42、 xyna改造改造xyna pgapza載體載體constitutive expression in pichia pastoris畢赤酵母中的組成型表達(dá)畢赤酵母中的組成型表達(dá)aspergillus sulphureus硫色曲霉硫色曲霉thermostability of the modified recombinant xylanase改造的重組木聚糖酶熱穩(wěn)定性研究改造的重組木聚糖酶熱穩(wěn)定性研究l enzymatic activity: 120 u/ml 最高酶活力達(dá)最高酶活力達(dá)120 u/ml120 u/ml l protein concentration: 3.78 mg/ml 蛋白濃度

43、為蛋白濃度為3.78 mg/ml3.78 mg/mll good stability: 80c for 90 min 熱穩(wěn)定性好，熱穩(wěn)定性好，80c80c保持保持90 90 minmin農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cherbal extracts(astragalus polysaccharide, aps)天然提取物（黃芪多糖）天然提取物（黃芪多糖）農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i chypothesis 假設(shè)假設(shè)inflammation reaction of lps lpslps炎性反應(yīng)炎性反應(yīng)disorder

44、 of gh/igf-i axisgh / igf-igh / igf-i軸異常軸異常immune suppress (cyclophosphamide) 免疫抑制（環(huán)磷酰胺，免疫抑制（環(huán)磷酰胺，cy cy ）immune enhancement免疫增強(qiáng)免疫增強(qiáng)immune type免疫類型免疫類型aps黃芪多糖黃芪多糖inflammation factor secretion炎性因子分泌炎性因子分泌-？+-？-？+？-cell culture細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)？農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i c(linear p 0.05)(linear p 0.05)e

45、ffects of aps on ratio of cd4+/cd8+ and lymphocyte proliferation in pigletsapsaps對仔豬對仔豬cd4cd4+ +/cd8/cd8+ +比值比值和淋巴細(xì)胞增殖的和淋巴細(xì)胞增殖的影響影響anim. sci., s. l. yuan, x. s. piao, defa li, 2006uimprove cell immune function, the optimal aps level was 500 mg/kgapsaps提高斷奶仔豬的細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)其對入侵微生物和疾病提高斷奶仔豬的細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)其對入侵微生

46、物和疾病 的抵抗力，促進(jìn)仔豬健康和生長的抵抗力，促進(jìn)仔豬健康和生長 apsaps在斷奶仔豬日糧中的最適添加量為在斷奶仔豬日糧中的最適添加量為500500 mg/kg mg/kg cd4+/cd8+淋巴細(xì)胞增殖淋巴細(xì)胞增殖農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i ceffects of dietary supplement of aps on serum cytokines in weaned pigs received cyclophosphamide (cy)apsaps（注射環(huán)磷酰胺（注射環(huán)磷酰胺, cy, cy）對斷奶仔豬血清細(xì)胞因子的影）對斷奶仔豬血清細(xì)胞因

47、子的影響響 (pg/ml(pg/ml) )anim. sci., s. l. yuan, x. s. piao, defa li, 2006 cy cyapsapsapsapsd 14 il-2 55.4 79.8 50.6 77.8 ifn- 133.3160.1111.7138.9reverse cy-induced cell immune suppress and humour immune suppressl環(huán)磷酰胺免疫抑制模型研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)磷酰胺免疫抑制模型研究發(fā)現(xiàn)，apsaps可促進(jìn)豬的正常細(xì)胞免可促進(jìn)豬的正常細(xì)胞免 疫，也可逆轉(zhuǎn)疫，也可逆轉(zhuǎn)cycy造成的免疫抑制造成的免疫抑制l本研

48、究建立了一種評價本研究建立了一種評價apsaps對仔豬營養(yǎng)和免疫作用的有用模型對仔豬營養(yǎng)和免疫作用的有用模型農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i ceffects of aps on serum index in pigletsapsaps對仔豬血清指標(biāo)的影響對仔豬血清指標(biāo)的影響 recover the normal function of gh/igf-i axisv 炎性細(xì)胞因子過度分泌以及炎性細(xì)胞因子過度分泌以及gh/igf-igh/igf-i軸的異常，導(dǎo)致斷奶仔豬軸的異常，導(dǎo)致斷奶仔豬 發(fā)生免疫炎癥和生長速度下降發(fā)生免疫炎癥和生長速度下降v apsaps

49、通過降低炎性細(xì)胞因子、通過降低炎性細(xì)胞因子、ghgh和皮質(zhì)醇的含量，增加抗炎性和皮質(zhì)醇的含量，增加抗炎性 因子的合成，恢復(fù)因子的合成，恢復(fù)gh/igf-igh/igf-i軸的正常而發(fā)揮其免疫抗炎作用軸的正常而發(fā)揮其免疫抗炎作用 anim. sci., s. l. yuan, x. s. piao, defa li, 2006 lps lpsapsapsapsapsd 14 cortisol 115.3113.0155.5136.0 gh 3.82 3.83 4.56 3.94 igf-i 235.6240.0215.9224.9農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f

50、i cbincrease no and inos activity of the peripheral blood lymphocytes in pigletsnapsaps顯著增加仔豬外周血淋巴細(xì)胞顯著增加仔豬外周血淋巴細(xì)胞nono和和inosinos的活性，的活性，并呈劑量依賴性并呈劑量依賴性effects of aps on no and inos activity in piglets apsaps對仔豬對仔豬nono和和inosinos的影響的影響j. anim. sci., x. f. mao, defa li, 2005農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a

51、 f i c* (p 0.05)*(p 0.05)effects of aps on different cytokines apsaps對不同細(xì)胞因子的影響對不同細(xì)胞因子的影響increase the il-2 and ifn- secretionvt t細(xì)胞可能是細(xì)胞可能是apsaps直接作用的靶細(xì)胞之一直接作用的靶細(xì)胞之一vapsaps可在體外促進(jìn)細(xì)胞因子可在體外促進(jìn)細(xì)胞因子il-2il-2和和ifn-ifn-的分泌，這的分泌，這 可能是可能是apsaps的免疫調(diào)節(jié)作用之一的免疫調(diào)節(jié)作用之一anim. sci., s. l. yuan, x. s. piao, defa li, 2006

52、農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cj. anim. sci., x. f. mao, defa li, 2005mechanism of immune function of apsapsaps的免疫作用機(jī)理的免疫作用機(jī)理apsinosno細(xì)胞因子表達(dá)細(xì)胞因子表達(dá) 淋巴細(xì)胞增殖淋巴細(xì)胞增殖+改善動物免疫改善動物免疫il-2 etc.ifn-+receptorgene knockout 基因敲除基因敲除signal transduction pathway 信號傳導(dǎo)通路信號傳導(dǎo)通路tlrstoll 樣受體樣受體農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i cantimicrobial peptides(amps)抗菌肽抗菌肽農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 m a f i camps抗菌肽抗菌肽abundant and diverse group