結核病細菌學檢驗

1、結核病細菌學檢驗一、目的和任務結核病人的細菌學檢查，是發(fā)現(xiàn)傳染源的最主要途徑和手段，是確定結核病診斷和化療方案的重要依據(jù),也 是考核療效、評價防治效果的可靠標準。因此，結核病細菌學檢查是國家結核病控制規(guī)劃（NTP）的重要組成部分，在結核病防治工作中起著不可缺少的重要作用。二、實驗室的職能為落實國家結核病控制規(guī)劃中對結核病傳染源監(jiān)控要求，應建立各級結核病細菌學實驗室，明確其職能和工作 范圍。各級結核病細菌學參比實驗室（簡稱參比實驗室），應明確為各自轄區(qū)的結核病控制工作服務的宗旨。（一）國家結核病參比實驗室在衛(wèi)生部結核病控制中心領導下，國家結核病參比實驗室負責全國結核病細菌學工作的規(guī)劃，實施等技術

2、管理，并向中心報告工作國家結核病參比實驗室應保持適當數(shù)量和結構的人員編制：專業(yè)人員1520人,其中高級專業(yè)技術職稱3名以上，中級10名,初級7名。參比實驗室的職能：1 根據(jù)國家結核病控制規(guī)劃的要求，規(guī)劃全國結核病細菌學工作，制定實施措施，對全國結核病細菌學監(jiān)控質量進行督導和評估。國家結核病參比實驗室負有指導、協(xié)調、督導各省（市、自治區(qū)）參比實驗室的工作，2 建立結核病細菌學實驗技術標準化準則、操作規(guī)程及規(guī)章制度。推行WHC推薦的國際通用的結核病細菌學檢查技術。3 建立可行的涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、藥物敏感性試驗的質量控制標準和質量控制系統(tǒng)。4 承擔非結核分支桿菌菌種的最后鑒定和其它非常規(guī)分析手段的

3、實施。5 建立結核分支桿菌和非結核分支桿菌臨床菌株而網。制定而網的管理、交流和資源提供辦法。6 開展結核病細菌學等實驗診斷新技術，新方法的基礎研究，及其實際應用可行性評估,7 對我國結核病控制的實施性研究，提供細菌學服務。此外，對常規(guī)結核病細菌學檢查方法進行實施性研究8 培訓?。ㄊ?、自治區(qū)）或地、市參比室技術人員。（-）省（市、自治區(qū)）參比實驗室省級參比實驗室，是我國結核病控制規(guī)劃細菌學監(jiān)測中的重要環(huán)節(jié)。在省結核病防治所（科）的領導和國家結核病參比實驗室的指導下負貢所在轄區(qū)結核病細菌學工作計劃的制定和實施等技術管理。省級參比實驗室，應有510名專業(yè)人員，其中含中、高級專業(yè)技術職稱人員2名以上。

4、省級參比實驗室，至少具有50平方米以上的實驗工作場所。具備開蜴檢查項目的相應儀器和設備，包括：生物安全柜一臺、高壓蒸汽滅菌鍋一臺、培養(yǎng)基蒸汽凝固滅菌器一臺、恒溫培養(yǎng)箱和雙目生物光學顯 微鏡均不少于兩臺、熒光顯微鏡一臺、離心機一臺、冰箱12臺。已建立菌株分原的省參比室，應有-20 C或-80 C冷冰箱。參比實驗室的職能：1根據(jù)國家和省結核病控制規(guī)劃的褥要，規(guī)劃本省結核病細菌學工作，制定實施措施，協(xié)調省內各級細菌實 驗室工作，對地、縣結核病細菌學質量，進行監(jiān)控、督導和評怙。2 開展涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、藥物鼓感性檢測和臨床分離株種的初步鑒定Q有條件的省參比實險室，可建立完整的分支懺菌菌種鑒定體系，所

5、有細菌學檢查應嚴格遵照國家參比實驗室制定的標準化準則、操作規(guī)程及規(guī)章制度進行。3 根據(jù)國家參比實驗室制定的質控標準，對全省痰片鏡檢和分離培養(yǎng)工作進行質量控制。為地、市參比實驗 室開展分離培養(yǎng)，提供培養(yǎng)基服務。核準地、市實驗室自制培養(yǎng)基4 承擔藥物坡感性測定，接受國家參比實驗室和跨國參比實驗室，定期藥物坡感性測定質量控制。5 省臨床分離野生侏菌而，應參加全國菌株而網，遵守菌庫的管理、交流和資源提供辦法。為省結核病控制規(guī)劃有關研究工作，提供細菌學服務Q6 將省結核病細菌學監(jiān)測工作、質量控制年報表上報國家參比實驗室Q（三）地（市）級細菌學實驗室在省參比實驗室的指導下， 地（市）級細菌學實驗室負貢本地

6、（市）結核病細菌學監(jiān)測。應有相 應的專用工作場所和不少于4名專業(yè)人員應詼開展痰涂片鏡檢工作并具有相應的儀器設備，包括：無菌柜、雙 目光學顯微鏡（備油鏡鏡頭）、蒸汽高壓滅菌鍋、紫外線滅菌燈、冰箱、離心機及染片所需的器材。實驗室職能：1 在省參比實驗室的指導下，制定本地 （市）結核病細菌學檢測工作計劃02 依照國家參比室制定的操作規(guī)程，開膜痰直接涂片鏡檢工作。為縣（市）結核病細菌學實驗室提供抗酸染色液。3 依照國家參比實驗室制定的操作規(guī)程，為各縣（市）提供分離培養(yǎng)服務。其培養(yǎng)基或由省參比實驗室供給，或經省參比實驗室核準后自制4 定期督導和評價縣（市）細菌學實驗室的結核病細菌學檢查工作，定期向省參比

7、實驗室報告其督導、評價結果和質控報表。定期培訓所僻縣（市）細菌學實驗室技術人員。監(jiān)督轄區(qū)內細菌學檢驗人員培訓后上明制度（四）縣（市）級細菌學實驗室5 省、地（市）參比實驗室指導下，負災全縣（市）結核病細菌學工作。應有1名以上專職工作人員，開 展直接痰涂片鏡檢工作。應具有單獨的涂片檢查工作室，配備相應的儀器設備，包括雙目光學顯微鏡（備油鏡鏡頭）、蒸汽高壓滅菌鍋、紫外線滅菌燈、冰箱及染片所褥的器材?？h（市）實驗室職能：1 在省、地（市）參比實驗室的指導下，制定本縣（市）結核病細菌學檢測的工作計劃。2 接受省、地（市）參比實驗室的定期培訓。痰檢人員應在培訓后上陰，并保持穩(wěn)定。3 按照國家參比室制定的

8、操作規(guī)程開展痰直接涂片鏡檢工作。4 應用統(tǒng)一的“結核病細菌學實驗室登記本“，記錄痰涂片鏡檢結果。5 保存3個月的全部痰涂片，留待上級實驗室坦驗質控后方可銷毀。6 運送需作分離培養(yǎng)的標本至上級實驗室待檢。7 條件具備的縣（市）實驗室，經省參比實驗室核準后，依照國家參比實驗室制定的操作規(guī) 程進行分離培養(yǎng)工作。并從省/地（市）參比實驗室獲得分離培養(yǎng)基。8 接受省參比實驗室的定期質控檢查。（五）鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院鏡檢站在一些遠離縣（市）結防所、交通不便的鄉(xiāng)鎮(zhèn)，可選擇鄉(xiāng)鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院建立涂片鏡檢站，鏡檢人員需經地（市）或縣（市）實驗室培訓后方可上肉，人員保持穩(wěn)定，接受定期更訓。其涂片應全部保存，每13月由縣（市）

9、實驗室負貢人更驗一次。三、實驗室人員培訓（-）國家參比實驗室1 國家結核病參比實驗室，每年召開省參比實驗室負貢人會議一次：報告工作，交流經驗，研究和討論工作中出現(xiàn)的問題及解決辦法。2 結合工作會議，每二年舉辦一次結核病細菌學研討會介紹有關結核病細菌學流行病學和實驗室檢測的新理論、新技術和新方法。3 舉辦省級參比實驗室專題培訓。4 接受省、地（市）實驗人員的進修。（二）省級參比實驗室每年至少斃流培訓下轄地（市）細菌實驗室人員一次。培訓可擴展至縣（市）專業(yè)人員，或安排地（市） 實驗室對縣（市）專業(yè)人員的培訓。培訓內容包括：1 結核病流行病概念和我國及本省結核病流行現(xiàn)狀和問題。2 國家結核病控制規(guī)劃

10、的原則。3 結核病細菌學檢查在國家結核病控制規(guī)劃中的作用。4 痰涂片檢查的規(guī)范，包括細菌實驗室的安全、顯微鏡使用和保養(yǎng)、涂片的制作染色液的制備、染色和鏡檢操作，正確的記錄、報告方法等。5 痰涂片鏡檢，分離培養(yǎng)的質量控制和報告方式。6 結核病細菌學檢驗工作督導、訪視技術督導報告及要求。（三）地（市）細菌學實驗室地（市）實驗室應按省參比實驗室的安排，結合痰片鏡檢和分離培養(yǎng)質量控制，每年對縣級實驗室專業(yè)人員進行培訓?？h（市）新任痰檢人員，需經不少于兩周的技術培訓，方可上陰。四、痰標本收集和送檢的有關規(guī)定（-）對象1因癥求診者檢查：凡因肺結核癥狀求診者及轉診的可疑肺結核病人均應送痰標本作涂片鏡檢（詳見

11、第三 章“肺結核病人發(fā)現(xiàn)“，第17頁）。2 療效考核：凡已確診、登記、治療的肺結核病人，在化療期間應按規(guī)定定期作痰菌更查：1）初治涂陽病人在療程滿2、5、6月時，究治涂陽病人在療程滿2、5、8月時，各查痰一次。2）初、熨治涂陽病人在療程滿2月時痰菌仍為陽性者，應在治療滿3月時增加查痰一次。 曳治涂陽病人若滿5個月治療時痰菌仍陽性，應在滿7個月時增加查痰一次。3） 確診、登記的涂陰肺結核病人，即使病人因故未接受治療，也應在登記后滿2和6月時 進行痰菌檢查。（-）要求1 初診病人應送3份痰標本（夜間痰、清晨痰和即時痰）如無夜間痰，在留取清晨痰后2 3小時再留取一份痰標本；或在送痰時，留取兩份即時痰

12、。療程中或更診隨訪病人按期每次送檢兩份痰（晨痰和夜間痰）Q2 痰標本采集：即時痰為病人就診時咳出的痰液。清晨痰為清晨深咳出的痰液Q夜間痰為 就診前夜間咳出的痰液。痰標本應以膿樣、干酪樣或膿性粘液樣性質的痰液為合格標本，痰量應為35亳升。 應由檢驗人員或專人驗收痰標本，痰液不合格者，要求重新送檢。難以獲得合格標本時，也應進行細菌學檢查，但應注明標本性狀，以供分析結果時參考。 痰標本的容器，應采用國家參比實驗室推薦的國際通用痰瓶，或采用直徑4厘米、高2厘米的塑料或涂蠟紙密閉盒。留痰容器上應注明病人姓名、編號（門診序號，或病人登記號）及日期。3 痰標本的保存和輸送：痰標本容器密封，勿倒置，嚴防痰液外

13、溢。不能立即作分離培養(yǎng)的痰標本須置 4c冰箱保存，防止痰液干洞或污染。需送上一級細菌實驗室培養(yǎng)的痰標本，夕卜送前應認真核對痰標本容器上標注是否正確和清晰是否與化驗單 一致。痰容器應采用專用的結核桿菌和痰標本冰盒這送，或以紙張和塑料袋封裝、扎牢，順序放置于包裝袋內。盒外注明勿倒置標志。4 送檢時，縣（市、區(qū)）結防所（科）醫(yī)師應填寫檢驗單。填寫項目包括：病人姓名、地址、登記號（或 門診序號）、送檢日期（或初診日期）、送檢原因（初診病人或陰訪病人）。檢驗單應與痰標本分別放置在不同 容器中，一齊送交上級實驗室5 收到痰標本后，實驗室檢驗人員仔細核對標本和檢驗單各項內容，察看痰標本是否合格。隨后按順序編

14、號，及時檢查和登記。對不合格標本要求重送。填寫說明：均用同一實驗序1）實驗序號：初診病人的3份標本，及其后每次檢查的痰標本，號編號。2）痰標本來源：初診病人門診序號以門診登記本為據(jù)；隨訪病人登記號 登記本為據(jù)“3）痰標本性質，按膿樣痰、干酪樣痰、血性樣痰、膿性粘液痰和水樣痰6 廢棄標本和污染物的處理：以病人分類登記。嚴禁不經滅1）痰盒和廢棄標本等污染物，均須經高壓蒸汽滅菌后才能丟棄或清洗，菌隨意處理。2)化不徹底焚燒是有害的。痰檢工作面 片操作。痰盒等污染物如采用焚燒處理，須比于焚燒爐內徹底焚化。焚，或暴露3)的消毒：可將痰標本置干一搪鎏盤中，在操作廚中進行痰涂涂片操作完成后，將盤與廢棄物等一

15、并進行高壓蒸汽滅菌，或與操作臺面同時以3%石碳酸或其它可靠的消毒液擦拭后再以紫外然滅菌燈(距離1米)照射30分鐘五、痰直接涂片檢查法(-) 涂片取經95%乙醇擦拭脫脂過的干燥、清潔、無油污、無劃痕的新玻理片，于破片背面的左端1/3處以藍色或黑色 記號筆(玻璃鉛筆)編號。用接種環(huán)或折斷的竹簽茬端，挑取痰標本的膿樣、干酪樣部分約0050.1ml，于破片正面的右惻三分之二處均勻涂沫成2X25厘米卵切形痰膜自然T燥后待檢一張破片只可涂沫一份標本。玻片只應使用一次，不得清洗后再次使用。(二)姜爾-尼爾遜氏染色法(Ziehl-Neelsen)簡稱姜尼氏染色法：1 試劑：1) 堿性現(xiàn)紅乙醇染色儲存液：堿性熨

16、紅液：8克堿性更紅溶于95%L醇100亳升中。5%石碳酸水溶液：5克石碳酸溶于100亳升蒸鏘水中。2) 堿性現(xiàn)紅乙醇染色液：10軍升堿性史紅儲存液與90軍升5%石碳酸水溶液混合。3) 5%鹽酸乙醇脫色液：5亳升濃鹽酸與95亳升95%乙醇混合。4) 0.3%亞甲蘭復染儲存液：0.3克亞甲絲溶于50亳升95%乙醇中，完全溶解后加蒸鏘水至終體積100亳升。5) 亞甲絲復染液：以蒸飾水10倍稀釋0.3%亞甲蘭更染儲存液即得亞甲蘭更染液。2 染色步驟：1) 火焰固定涂片。2) 滴加堿性更紅乙醇染色液，蓋滿痰膜。小心火焰加熱至出現(xiàn)蒸汽后，脫離火焰，保持染色三分鐘。染色期間應始終保持痰膜被染色液裝蓋，必要時

17、可續(xù)加染色液。切勿使染色液沸騰。3) 流水自破片背面上端輕洗，洗清染色液。4) 自痰膜上端外緣滴加脫色液，流過痰膜。褥脫至痰膜無可視紅色為止。脫色應單片進行。5) 流水自破片背面上端輕洗，去脫色液。6) 滴加亞甲蘭身染液，染色 30秒鐘。7) 流水自破片背面上端輕洗，去究染液。8) 待干后鏡檢。3鏡檢與報告：光學顯微鏡鏡檢（目鏡10X ,油鏡100X）染色痰片在淡藍色背景下，抗酸桿菌呈紅色，其它細菌和細胞呈藍色按照下列標準報告所得結果:1）抗酸桿菌陰性：連續(xù)觀察300個不同視野,未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌2）抗酸桿菌可疑（士）3）抗酸桿菌陽性（1 +）12條抗酸桿菌/300視野。39條抗酸桿菌/100視野

18、。4）抗酸桿菌陽性（2+）19條抗酸桿菌/10視野“5） 抗酸桿菌陽性（3+）19條抗酸桿菌/每個視野>> 1。條抗酸桿菌/每視野鏡檢結果，應及時記錄在“結核病細菌學實驗室登記本“和化驗報告單上。痰涂片化驗單應包括痰標本的性狀。陰性結果應填記"陰性"不得以""表達。300個視野內僅見12條抗酸桿菌者，應在報告單.匕主明條數(shù)，醫(yī)生可結合胸片進行判斷0必要時再取標本更查證實，仍見12條抗酸桿菌/300個視野，該病例可確診為涂陽病人，標本應在送檢48小時內報告結果,六、疾培養(yǎng)檢查法<-）痰標本采集新發(fā)病人應在抗結核藥物治療前留取痰標本、治療中

19、的病人應停藥23天后留取痰標本。病人于清晨漱口后，咳痰35亳升留作培養(yǎng)檢查”如需送上級實驗室檢查，應在標準痰瓶中，加入與標本等體積的防腐液0 6%溟化十六烷基吐院（CPB）的2%氨化鈉（NaCI）液，密封保存。此標本應及時送交上級實驗室。防腐處理后，痰標本可在室溫 下短期存放 >但仍以4C保存為宜存放時間不應超過2周。<-）分離培養(yǎng)基分離培養(yǎng)采用酸性歲氏培養(yǎng)基和丙酮酸鈉培養(yǎng)基。1 酸性改良歲氏培養(yǎng)基：成份：基礎液谷氨酸鈉（純度99%以上）RWB 7.2克磷酸二氫鉀14.0克硫酸鎂0.24克檸檬酸鎂06克丙三醇12亳升蒸餌水600軍升無機鹽試劑應采用化學純（CP）試劑新鮮雞卵液100

20、0吆升2%孔雀綠水溶液20兆升制備方法：1） 基礎液制備：量取蒸儲水600亳升,加入各無機鹽成份、谷氨酸鈉和丙三醇，100 C加熱30分鐘，冷卻>2） 新鮮雞卵液制備：洗凈新鮮雞卵表面，浸泡在 70%乙醇或其它稀釋消毒液中2030分鐘。取出，擦干，開口，收集雞卵液，攪勻。通過消毒的紗布過濾成雞卵液。3） 將600亳升基礎液和1000名升新鮮雞卵液混勻。加2%孔雀綠水溶液20吆升混勻，靜比1小時后，分裝6亳升至標準螺旋蓋培養(yǎng)管或7亳升于中試管（1518X 180亳米）中。雙層放置于擱架中，經培養(yǎng)基蒸汽凝固滅菌器，85 c滅菌50分鐘。培養(yǎng)基斜面應占試管的2/3。滅菌后37C無菌試驗24小時

21、。制成的培養(yǎng)基斜面應顏色鮮艷,表面光滑，有一定韌性和酸堿緩沖能力。無菌試驗后新 制備的培養(yǎng)基應4c避光保存 一月內使用2 丙酮酸鈉培養(yǎng)基：基礎液谷氨酸鈉（純度99%以上）7.2克璘酸二氫鉀2.4克硫酸鎂 （ MgSO 4 - 7H 20） 0.24 克檸檬酸鎂06克丙酮酸鈉1.6克葡萄楷4.0克蒸餌水600軍升無機鹽和有機物試劑均應采用化學純（CP）試劑新鮮雞卵液1000軍升2%孔雀綠水溶液20兆升制備方法：基礎液制備：除冷卻后加入葡萄糖外，丙酮酸鈉培養(yǎng)基制備同h。（三）前處理視痰標本性狀，加12倍體積4%氫氧化鈉（NaOH）消化液于痰瓶中，渦旋振蕩器振蕩23分鐘，使痰液 充分勻化，室溫放置。

22、自加入氫氧化鈉消化液后起，整個處理時間不得超過20分鐘。樣本數(shù)較多時，應分批處理。（四）接種吸取經前處理后的痰液01亳升，均勻接種在整個培養(yǎng)基斜面。每份標本接種兩支酸性歲氏培養(yǎng)基，同時可補充接種一支丙酮酸鈉培養(yǎng)基，以利于牛分支桿菌和一些耐藥結核分支桿菌的生長?；蛲瑫r接種酸性羅氏和丙酮酸鈉培養(yǎng)基各1支。接種后，37 C平臥放置斜面24小時。然后擰緊培養(yǎng)瓶蓋或塞緊試管膠塞直立放置，37 c繼續(xù)培養(yǎng)。 含溟化十六烷基吐咤（CPB）防腐的痰標本，在接種前褥用生理鹽水或蒸鏘水定溶至30軍升,3 OOOxg離心30分鐘，再以生理鹽水或蒸儲水洗滌沉渣2次低溫時,因溟化十六烷基吐咤（CPB）產生沉淀， 需先將

23、樣本置37 C，使沉淀重新完全溶解后，再洗滌離心。同上，接種0.1ml沉渣。（五）結果與報告1抗酸桿菌生長報告：接種后第3天、第7天各觀察一次。3天發(fā)現(xiàn)菌落生長者,經抗酸染色證實后，可報告快速生長抗酸桿菌。 以后，每周觀察一次，記錄菌落生長及污染情況。陽性生長物經抗酸染色證實后，可報告抗酸桿菌生長。培養(yǎng)陰性結果須在滿8周時即第9周開始時仍未見菌落者方可報告o觀察時發(fā)現(xiàn)非抗酸桿菌生長時，應報告污染培養(yǎng)污染率應在25%范圍內污染率高,提示培養(yǎng)基滅菌不佳，標本處理、接種等環(huán)節(jié)有誤，應當分析原因，采取相應措施。培養(yǎng)結果報告方式:抗酸桿菌培養(yǎng)陰性：斜面無菌落生長，抗酸桿菌培養(yǎng)陽性(1+)菌落生長占斜面面

24、積的1/4抗酸桿菌培養(yǎng)陽性(2+)菌落生長占斜面面積的1/2抗酸桿菌培養(yǎng)陽性(3+)菌落生長占斜面面積的3/4抗酸桿菌培養(yǎng)陽性(4+)菌落生長布滿全斜面?？顾釛U菌培養(yǎng)陰性應以“（培養(yǎng)陰性）”報告，不能以”（-）”表示菌落生長不足以斜面面積1/4時，實報菌落數(shù)。污染菌生長程度報告方式：C1+污染菌占培養(yǎng)基斜面1/4以下者C2+污染菌占培養(yǎng)基斜面1/2以下者C3+污染菌占培養(yǎng)基斜面3/4以下者C4+污染菌占培養(yǎng)基全斜面。LQ:培養(yǎng)基液化。若抗酸桿菌和污染同時存在于同一斜面上，應同時報告。2饕別培養(yǎng)基：在分離培養(yǎng)基上緩慢生長的抗酸桿菌需經PNB和TCH鑒別培養(yǎng)后，方可初饕為結核分支桿菌、牛分支釬茵或

25、非結核分支釬菌。 制備：4 ）對硝基苯甲酸（PNB）培養(yǎng)基：二甲基甲酰胺少量溶解PNB后，加入改良羅氏培養(yǎng)基的基礎液中，使整個培養(yǎng)基終濃度為0 5亳克佬升培養(yǎng)基凝固滅菌同前。2）噬吩2痰酸腫（TCH）培養(yǎng)基：5宅克TCH溶于10亳升蒸餡水中，取1亳升加入100亳升羅氏培養(yǎng)基基礎液中，使整個培養(yǎng)基終濃度為5微克佬升，培養(yǎng)基凝固滅菌同前、接種：于玻璃研磨器中研磨臨床分離培養(yǎng)物成種鑒10-2 亳克/亳升均勻菌液，接種0.1吆升于上述兩別培養(yǎng)基上和對照改良歲氏培養(yǎng)基上37 c培養(yǎng)，每周觀察一次，四周后報告生長結果。鑒定:在藥物敏感性測驗同時，進行PNB和TCH鑒別培養(yǎng)基測驗，可提供臨床分離株的初步種的

26、斐定結果需要 時，可輔以硝酸還原試驗、煙酸試驗和耐68C熱觸酶試驗?；蛱峤皇⒈葘嶒炇吟叶?。 臨床分離株種的初步饕定七、痰菌檢驗質量控制方案（-）痰涂片檢查質控實驗室痰檢質量控制，包括室內質控和空間質控兩種形式01室內質控：室內質控范圍包括痰標本收集、染色劑制備、涂片制備、染色、顯微鏡維護、顯微鏡鏡檢、標本、結果 登記以及痰片的保存。室內質控內容：1）痰標本收集：痰盒采用國家結核病參比實驗室統(tǒng)一的螺旋蓋痰瓶，或可密封有蓋塑料盒、蟒紙盒收集痰標本疾容器應標明病人姓名、送檢日期及初診病人門診序號（或隨訪病人登記號）痰標本性質合格的痰標本應為深咳痰液。肉眼觀察痰標本按下列類別記錄痰液性狀：膿樣痰、干

27、酪樣痰、血性樣痰、膿性粘液痰和水樣痰。2）姜-尼氏染色液的制備：檢查配制記錄和配方。染色液試劑瓶加標明染色液名稱、濃度和制備時間染色液須于棕色瓶內存放避光保存3）破片：用于涂片的載玻片，應95%乙解脫脂后的清潔無劃痕的新玻片。1份痰標本1張載玻片只能涂沫載破片只允許使用載破片背面的左側載玻片正面的右畫1次不得清洗后重更使用。1/3處，標明病人姓名、實驗序號。2/3中央媯涂沫0.050.1室升痰標本，面積為2.5 X 2.0阻米，厚度括當。4）染色：肉眼觀察染色后的痰膜應呈均勻淡藍色，無紅色斑塊。染色后的成片的痰膜脫落部分應小于整個涂沫面積的10%。5）鏡檢：鏡頭清晰，無霉菌生長。油鏡下視野背景

28、清晰。鏡下抗酸桿菌應為紅色，背景為淡藍色。鏡下可見炎性細胞，支氣管粘膜細胞等痰細胞，平均每油鏡視野細胞數(shù)不少于10個6）厚?。喝庋塾^察痰膜應均勻，厚薄適當。鏡檢可見23水平層。合格片應）90%7）讀片：抗酸桿菌陽性片符合率98%陰性片符合率96%。不允許1 +以上的陽性片出現(xiàn)假陰性。8）登記和痰片保存：登記對所檢查的每一份痰標本,應按“結核病細菌學實驗室登記本“準確記錄。痰片保存鏡檢后的痰片必須用二甲苯充分去除表面的香柏油不得用它物擦拭膜待玻片干燥后，重新在每張玻片的左例1/3處貼標簽，注明序號、鏡檢結果與日期。存放于玻片內°按陽性和陰性片分類保存近期3個月內的全部痰涂片，備上級實驗室史驗。質控方式：自查：查痰員當日抽片自查；互查：多名查痰員應由輪值人員抽查當日10%痰片。結果應有室質控記錄備查。2空間質控：質控模式：質控范囹：1）督導內容： 實驗室布局 實驗室安全防護和污染物處理 涂片'染色操作 顯微鏡維護狀況抽取痰涂片史驗實驗室日常工作記錄（包括室內和室間質控） 2） 督導方式：現(xiàn)場督導.上級實驗室檢驗人員赴基層實驗室現(xiàn)場指導，抽取痰片組驗。非現(xiàn)場督導基層實驗室將保存近期3個月的全部痰片，及實驗記錄送上級實驗室熨驗。國家參比實驗室以非現(xiàn)場督導為主。省級參比