基因工程試題

1、基因工程試題、選擇題（每題1分，共15分）F列有關基因的敘述，錯誤的是【 A】A蛋白質是基因表達的唯一產物B基因是DNA鏈上具有編碼功能的片段C基因也可以是RNAD基因突變不一定導致其表達產物改變結構2、基因工程的單元操作順序是【A增，轉，檢，切，接C接，轉，增，檢，切3、生物工程的上游技術是【A】A基因工程及分離工程C基因工程及酶工程1、4、下列各組專業(yè)術語中，含義最為接近的是A終止子與終止密碼子C DNA退火與DNA復性5、根據酶切活性對鹽濃度的要求，A 2大類 B 3大類切，接，轉，增，檢 切，接，增，轉，檢基因工程及發(fā)酵工程基因工程及細胞工程【C】基因表達與基因轉譯 重組子與轉化子BD

2、 限制性核酸內切酶可分成【B】C 4大類 D 5大類6、T 4 -DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起,其底物的關鍵基團是【D】A 2' -OH 和 5' -PBC 3' -OH 和 2' -PDF列有關連接反應的敘述，錯誤的是【ABCD7、2' -OH 和 3' -P5' -OH 和 3' -PA】連接反應的最佳溫度為 37 C 連接反應緩沖體系的甘油濃度應低于 連接反應緩沖體系的 ATP 連接酶通常應過量2-5倍10%濃度不能高于1mM8、原生質體轉化方法不大適用于A大腸桿菌B枯草桿菌【A】C酵母菌9、下

3、列各常用載體的裝載量排列順序，正確的是A Cosmid > 九DNA > PlasmidBC Plasmid >X-DNA > CosmidDD鏈霉菌【A】入-DNA > Cosmid > PlasmidCosmid > Plasmid >2-DNA10、若某質粒帶有l(wèi)acZ標記基因，那么與之相匹配的篩選方法是在篩選培 養(yǎng)基中加入【D】A半乳糖 B異丙基巰基-禺半乳糖苷（IPTG ）C蔗糖 D 5-溴 4 氯-3-吲哚基-B-D-半乳糖苷（X-gal ）F列各組用于外源基因表達的受體細胞及其特點的對應關系中，錯誤的11、是【C】A 大腸桿菌-繁殖

4、迅速C 鏈霉菌-遺傳穩(wěn)定12、分子雜交的化學原理是形成B枯草桿菌-分泌機制健全D 酵母菌-表達產物具有真核性 【D】A共價鍵B離子鍵C疏水鍵D氫鍵13、某一重組DNA （ 6.2 kb ）的載體部分有兩個 Smal酶切位點。用 SmaI酶切后凝膠電泳上出現四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數據吻合，該重組分子插入片段上的 SmalA 4個B 3個14、 下列設計的探針中，最佳的是【A ACATTAAATTATTC ACCTTGATAAGGT15、cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點是【A成功率高 B不含內含子酶切位點共有【D】C 2個D 至少2個D】B GGGCAD CGGACTTGACCATCA】

5、C操作簡便 D表達產物可以分泌二、名詞解釋（每題2分，共20 分）1、Southern blotting Southern印跡：Southern發(fā)明的一種影印轉移物質的方法。2、Cosmid vector黏粒載體：含有cos位點的質粒載體。3、cDNA library:cDNA文庫：是指某生物某一發(fā)育時期所轉錄形成的 cDNA片 段與某種載體連接而成的克隆的集合。4、 RACE:是一種通過PCR進行cDNA末端快速克隆的技術，是以 mRNA為模板反轉錄 成cDNA第一鏈后用PCR技術擴增出某個特異位點到3,或5，端之間未知序列的方法。5、Probe:探針：指被標記物質標記了的核酸。6、RT-P

6、CR :逆轉錄PCR：先用逆轉錄酶作用于 mRNA，以寡聚dT為引物合成 cDNA第一鏈，然后用已知一對引物，擴增嵌合分子，這種方法稱為逆轉錄PCR。7、Insert inactivation:插入失活，基因工程載體上的某些選擇標記基因常常含某 種或某幾種限制性內切酶的單一酶切位點，在該位點用相應的限制性內切酶處理，并將外源DNA片段插入該位點，則插入的外源 DNA片段將破壞原有基因 的讀碼框，往往導致原有的選擇標記基因無法翻譯表達，或即使翻譯表達，形成的也是喪失了原有生物活性的蛋白質，這一現象稱為插入失活。8、S-D SequenceS-D序列：在大腸桿菌mRNA的核糖體結合位點上，含有一個

7、 轉譯起始密碼子及同16S核糖體RNA 3,末端堿基互補的序列，該序列最初由 Shine、Dalgarno發(fā)現，故后來命名為 Shine Dalgarno序列，簡稱S-D序列。9、Shuttle plasmid vector穿梭質粒載體：指一類由人工構建的具有兩種不同復 制起點的選擇標記，因而可在兩種不同宿主細胞中存活和復制的質粒載體。10、MCS:指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內切酶的酶切位點 的DNA片段。三、簡答題（每題5分，共25分）1、理想質粒載體的必備條件?答：具有較小的分子質量和較高的拷貝數。具有若干限制性核酸內切酶的單一酶切位點。具有兩種以上的選擇標記基因。缺失m

8、ob基因。插入外源基因的重組質粒較易導入宿主細胞并自制和表達2、核酸操作的基本技術有哪些?答：核酸提取與純化 核酸的檢測與保存 核酸的凝膠電泳 核酸分子雜交3、影響核酸保存的關鍵因素是什么？怎樣保存核酸制品？答：關鍵因素：保存液的酸堿度保存溫度保存方法： 一般保存可用濃鹽液，NaCL-檸檬酸緩沖液或O.1mol/L醋酸緩沖液。對 DNA來說，在pH411的范圍分子的堿基較穩(wěn)定，超出此范圍DNA易變性或降 解，低溫、稀堿下保存DNA及低溫下保存RNA勻較穩(wěn)定。固態(tài)核酸通常在0C 以上低溫干燥保存即可。4、合成cDNA第二鏈的主要策略有哪些？答：自身引導合成法 置換合成法 PCR合成法 快速擴增c

9、DNA末端法 雙鏈cDNA末端的處理 cDNA與載體的連接5、基因工程誕生的理論基礎是什么？答：是現代分子生物學領域理論上的三大發(fā)現和技術上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現： 證實了 DNA是遺傳物質 揭示了 DNA分子的雙螺旋結構模型和半保留復制機理 遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術上的三大發(fā)明： 限制核酸內切酶的發(fā)現與 DNA切割 DNA連接酶的發(fā)現與DNA片段的連接 基因工程載體的研究與應用四、問答題（每題10分，共40分）1 PCR技術主要應用在哪些領域？答：核酸基礎研究 序列分析 檢測基因表達 從cDNA文庫中放大特定序列 研究已知片段鄰近基因或未知 DNA片段 進化分析 醫(yī)學

10、應用 分析生物學證據 性別控制 轉基因檢測。2細菌的限制與修飾系統(tǒng)有什么意義？大腸桿菌 K12限制與修飾系統(tǒng)的遺傳分析揭示的4種表型是什么？答： 宿主控制的限制與修飾現象廣泛存在于原核細菌中，它有兩方面的作用， 一是保護自身DNA不受限制；二是破壞入侵外源DNA使之降解。細菌正是利用限 制與修飾系統(tǒng)來區(qū)分自身 DNA與外源DNA勺。外源DNA可以通過多種方式進入某 一生物體內，但是它必須被修飾成受體細胞的限制內切酶無法辯認的結構形式， 才能在寄主細胞內得以生存，否則會很快被破壞。因此，在基因工程中，常采用 缺少限制作用的菌株作為受體，以保證基因操作的順利完成。大腸桿菌K12限制與修飾系統(tǒng)的遺傳

11、分析揭示，它有以下 4種表型：rk+mk+野生型rmk+限制缺陷型rmk-限制和修飾缺陷型rk+m k-修飾缺陷型3試述5 RAC豉術原理和方法。答：PCF用于擴增代表mRNA專錄物某一單位點與其3'或5'末端之間區(qū)域的部 分cDNA稱為快速擴增cDNA末端技術（RACE。如果已知mRN的片段鏈內短序 列，據此或設計基因特異引物，用原先存在的poly（A）尾（3'末端）或附加的同聚尾（5'末端）互補的序列做末端引物，就可以獲得從未知末端直到已知區(qū) 域的部分cDNA序列。為獲得5'末端部分cDNA克隆需用基因特異引物，產物第 一鏈產物，可用末端脫氧核苷酸轉

12、移酶及 dATP加poly（A）尾。通過QT引物和反 轉錄使用的上游基因特異引物生成第二鏈 cDNA4大腸桿菌作為基因工程受體菌具有哪些特點？真核基因在大腸桿 菌中表達存在哪些障礙？答：特點：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本低廉，基礎生物學、分子遺傳學 等方面的背景知識清楚，對其基因表達調控的分子機理也比較了解，而且歷經二 十年的基因工程實踐，大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系，有多 種適用的寄主菌株和載體系列，大腸桿菌易于進行工業(yè)化批量生產。存在的障礙：第一，在大腸桿菌的mRNA的核糖體結合位點上，含有一個起始密碼子及 16S核糖體RNA 3 '末端堿基互補序列，即S-D序

13、列，而真核上缺泛這個序列。第二，許多真核基因的蛋白質產物需要經過翻譯后的加工修飾，如正確的 折疊和組裝，而細菌中通常并沒有這樣的修飾機制， 從而可能導致真核基因在大 腸桿菌中的翻譯產物無法產生有活性的蛋白。第三、外源真核基因所表達的蛋白質分子往往能夠被細菌的蛋白酶識別， 并被當做“異已分子”降解掉。8、S-D序列：在大腸桿菌mRNA的核糖體結合位點上，含有一個轉譯起 始密碼子及同16S核糖體RNA 3，末端堿基互補的序列，該序列最初由 Shine、 Dalgarno發(fā)現，故后來命名為 Shine Dalgarno序列，簡稱S-D序列。1什么是包涵體？重組蛋白在胞內表達時，常常以不溶性蛋白聚集成

14、的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達時的普遍現象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯誤聚合， 而不是形成成熟的天然態(tài)或 完全解鏈的蛋白。2、什么是a -互補篩選？質粒載體具有B -半乳糖苷酶基因（lac Z），當外源DNAS入到它的lac Z， 可造成表達后的B -半乳糖苷酶失活，利用這一點就可以通過大腸桿菌轉化子菌 落在添加有X-gal-IPTG培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子和非重組子。有些大 腸桿菌上帶有l(wèi)ac Z基因的部分編碼序列，質粒載體中含有別一部分編碼序列， 當質粒轉入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質。這種lacZ基因上缺失了一部分編碼

15、序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實現互補的現象叫 a互補。3、限制性核酸內切酶的活性受哪些因素影響？酶的純度。DNA樣品的純度。（3）DNA的甲基化程度。酶切反應的溫度與時間。DNA分子的構型。限制性核酸內切酶的反應緩沖液。5、基因工程誕生的理論基礎是什么？是現代分子生物學領域理論上的三大發(fā)現和技術上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現： 證實了 DNA是遺傳物質 揭示了 DNA分子的雙螺旋結構模型和半保留復制機理 遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術上的三大發(fā)明： 限制核酸內切酶的發(fā)現與 DNA切割 DNA連接酶的發(fā)現與DNA片段的連接 基因工程載體的研究與應用四、問答題（每題1

16、0分，共40分）1如何有效地提高外源基因的表達效率？提高啟動子強度縮短啟動子同克隆基因間距離高效的翻譯起始序列高效的轉錄終止區(qū)提高質?？截悢导胺€(wěn)定性用以下方法提高翻譯水平：調整SD序列與AUG間的距離用點突變的方法改變某些堿基 增加mRNA勺穩(wěn)定性的減輕細胞的代謝負荷：誘導表達表達載體的誘導復 制提高表達蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表達融合蛋 白采用某種突變菌株表達分泌蛋白質2試述載體構建一般方法A目的基因分析（1） ORF分析（2）酶切位點分析B載體選擇與分析（1）多克隆位點分析（2）抗性標記分析（3）啟動子與其 他篩選標記分析C連接體系與連接時間確定4大腸桿菌作為基因工程受

17、體菌的優(yōu)缺點是什么？優(yōu)點：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本低廉，基礎生物學、分子遺傳學 等方面的背景知識清楚，對其基因表達調控的分子機理也比較了解，而且歷經二 十年的基因工程實踐，大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系，有多 種適用的寄主菌株和載體系列，大腸桿菌易于進行工業(yè)化批量生產。缺點：在通常情況下，細菌的RNA聚合酶不能識別真核的啟動子；許多真核 基因的蛋白質產物需要經過翻譯后的加工修飾， 如正確的折疊和組裝，而細菌中 通常并沒有這樣的修飾機制，從而可能導致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產物無 法產生有活性的蛋白；外源真核基因所表達的蛋白質分子往往能夠被細菌的蛋白 酶識別，并被當做“異

18、已分子”降解掉。二、選擇題（每題1分，共15分）1（ d ）限制性核酸內切酶是由細菌產生的，其生理意義是A修復自身的遺傳缺陷C強化自身的核酸代謝2（ a ）生物工程的下游技術是A基因工程及分離工程C基因工程及蛋白質工程3 （ a ）基因工程操作常用的酶是：（1 合酶B促進自身的基因重組D提高自身的防御能力B蛋白質工程及發(fā)酵工程D分離工程 及蛋白質工程內切酶II連接酶III末端轉移酶IV聚A. I + II B. I + III + IV C. II + III + IV D. I +II + IV + III4 （ d ）限制性內切核酸酶的星活性是指:A在非常規(guī)條件下，識別和切割序列也不發(fā)生變

19、化的活性。B活性大大提高C切割速度大大加快D識別序列與原來的完全不同5（ d ）下列五個DNA片段中含有回文結構的是A. GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6 （ c ）關于cDNA的不正確的提法是：A同mRNA互補的單鏈 RNAB同mRNA互補的含有內含子的 DNAC以mRNA為模板合成的雙鏈 RNAD以上都不正確7 ( a )下列有關連接反應的敘述，錯誤的是A. 連接反應的最佳溫度為 37 CB. 連接反應緩沖體系的甘油濃度應低于10%C. 連接反應緩沖體系的ATP濃度不能高于1mMD. 連接酶通常應過量2-5倍8 ( c ) T 4 -DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA片