第一細胞因子檢測概述

1、 第一節(jié)第一節(jié) 細胞因子檢測概述細胞因子檢測概述一、細胞因子的類型與作用特點二、細胞因子檢測的特點與方法 由非神經內分泌細胞產生的一大類與免疫應答活動密切相關的低分子蛋白與多肽。細胞因子細胞因子的類型與作用特點細胞因子的類型與作用特點1、細胞因子的分類2、細胞因子的作用特點以生物學作用進行劃分的分類以生物學作用進行劃分的分類白細胞介素（interleukin） il-1、il-2、 il-18干擾素（interferon） ifn-、ifn-、ifn-腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor） tnf- 、 tnf- 集落刺激因子（colony-stimulating fact

2、or） m-csf、g-csf轉化生長因子（transforming growth factor） tgf- 趨化因子（chemokine） il-8、gros、mcp-1生長因子（growth factor） egf、fgf、igf、pdgftnfsilsifnstgfschemokinescsfs各類細胞因子間關系各類細胞因子間關系1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性2、多源與同源性3、高效性4、多效性（pleiotropy）5、豐余性（redundancy）6、協(xié)同性7、拮抗性8、網絡性細胞因子細胞因子細胞因子受體細胞因子受體細胞因子的自分泌與旁分泌性細胞因子

3、的自分泌與旁分泌性 i l-2 i fn- tnf-細胞因子的同源性與多源性細胞因子的同源性與多源性i fn-t細胞t細胞nk細胞il-4th細胞肥大細胞th細胞b細胞細胞因子的多效性細胞因子的多效性th細胞b細胞細胞因子的豐余性細胞因子的豐余性il-2il-4il-5th細胞b細胞細胞因子的協(xié)同性細胞因子的協(xié)同性il-4il-5th2細胞b細胞細胞因子的拮抗性細胞因子的拮抗性th1細胞il-4 i fn- 細胞因子的網絡性細胞因子的網絡性il-3、il-5、il-4、il-6、 gm-csftnf tgf il-1 ifnil-1 ifntnfil-1 tgfifnil2 il-4ifn i

4、l2 il-4 il-5 il-6tnf ifn il-1 tgftnf il-1 ifn il-5 gm-csf g-csf m-gsftnftnf il-1 tgfil-1 il-6 gm-csf g-csf m-gsf il-1 il-6il-1 il-6 gm-csf g-csf m-gsf ifn內皮細胞成纖維細胞tb細胞因子檢測的特點與方法細胞因子檢測的特點與方法1、檢測的特點2、檢測的方法 細胞因子檢測的特點細胞因子檢測的特點免疫原性較弱樣品含量低樣品具有時效性生物效應特異性差細胞因子檢測的方法細胞因子檢測的方法免疫學檢測方法抗原性檢測細胞生物學檢測方法生物活性檢測分子生物學檢測

5、方法基因表達檢測 第二節(jié)第二節(jié) 細胞因子檢測的方法與原理細胞因子檢測的方法與原理一、細胞因子的細胞生物學檢測二、細胞因子的免疫學檢測三、細胞因子的分子生物學檢測細胞因子的細胞生物學檢測細胞因子的細胞生物學檢測1、檢測方法與原理2、檢測中的操作注意要點 檢測方法與原理檢測方法與原理細胞增殖或增殖抑制試驗細胞病變抑制試驗細胞毒試驗細胞趨化試驗濾膜：計數受趨化細胞趨化因子細胞趨化試驗原理示意趨化試驗原理示意檢測中的操作注意要點檢測中的操作注意要點靶細胞的選擇與培養(yǎng)檢測標本的制備顯示檢測結果靶細胞的選擇與培養(yǎng)靶細胞的選擇與培養(yǎng)1、對所測的細胞因子有特異的敏感性2、易培養(yǎng)、保存、生物學特性穩(wěn)定3、有良好

6、的生長狀態(tài)4、種屬適配各類細胞因子檢測的常用靶細胞各類細胞因子檢測的常用靶細胞細胞因子 實驗系統(tǒng) 干擾因素il-1 d10（m）增殖法 il-2、il-4 el-4（m）增殖法 il-4 a352（h）增殖抑制法il-2 ctll（m）增殖法 il-4il-3 kg-1（h）增殖法 tf-1（h）增殖法 gn-csf、il-5 il-6、epoil-4 ctll（m）增殖法 il-2il-5 bcl-1（m）增殖法 il-4各類細胞因子檢測的常用靶細胞各類細胞因子檢測的常用靶細胞細胞因子 實驗系統(tǒng) 干擾因素il-6 b9（m）增殖法 il-4、il-11 bm60（h）增殖法 il-7 clo

7、ne-ixn/2b（m）增殖法 il-8 中性粒細胞（m、h）趨化法gm-csf tf-1（h）增殖法 il-3、il-5 il-6、il-5tnf/ l929 （m、h）細胞毒法ifn wish（h）病變保護法 ifn- 、 ifn- l929（m）病變保護法 ifn- 、 ifn- 檢測標本的準備檢測標本的準備1、分離特定的產生細胞2、對產生細胞進行誘導、激活3、選擇適當的收集時間顯示檢測結果顯示檢測結果1、細胞增殖狀態(tài)的顯示： 放射性核素摻入法、 胞內酶活性顯示法 活細胞染色法 細胞熒光測定法2、細胞毒或細胞病變狀態(tài)的顯示 活細胞染色法 胞內酶活性顯示法 dna斷片測定法細胞因子的免疫學

8、檢測細胞因子的免疫學檢測分泌型細胞因子的檢測細胞內細胞因子的檢測elispot細胞內細胞因子檢測技術細胞內細胞因子檢測技術激活膜抗原標記細胞內細胞因子標記細胞因子的分子生物學檢測細胞因子的分子生物學檢測原位雜交技術rt-pcr技術 第三節(jié)第三節(jié) 常用細胞因子的檢測方法常用細胞因子的檢測方法一、il-2的檢測二、ifn-的檢測三、tnf的檢測待檢樣品（細胞上清） 指示細胞（ctll-2）按不同稀釋度加入37c，16-20小時加入3htdr（1-5ci）37c，4-6小時收集細胞測定白細胞介素白細胞介素-2-2的測定示意圖的測定示意圖待檢樣品（細胞上清） 指示細胞（l929）按不同稀釋度加入37c，4小時37c，24-48小時棄取上清，加入vsv觀察細胞病變（鏡檢或比色）干擾素的測定示意圖干擾素的測定示意圖腫瘤壞死因子的測定示意圖腫瘤壞死因子的測定示意圖待檢樣品（細胞上清） 指示細胞（l929）按不同稀釋度加入37c，24小時棄取上清，洗滌加入結晶紫染液，洗滌加入細胞裂解液，比色 第四節(jié)第四節(jié) 細胞因子受體的檢測細胞因子受體的檢測一、細胞因子受體的類型二、細胞因子受體的檢測 細胞因子受體的類型細胞因子受體的類型膜型細胞因