煙用紙中三羥甲基丙烷的測(cè)定方法(修改稿)

1、權(quán)利要求書(shū)1、一種煙用紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定方法，其特征在于：首先將煙用紙剪碎后加超純水，然后超聲萃取，萃取液離心后直接以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定紙張中的1,1,1-三羥甲基丙烷，具體包括以下步驟：a、稱取1.0 g樣品（精確至0.01 g），并置于50 mL具塞三角瓶中；b、樣品的提取：準(zhǔn)確加入20 mL 萃取液：超純水（為何不用低級(jí)醇等，環(huán)保？最好能證明不是隨意選擇而是經(jīng)過(guò)了優(yōu)化試驗(yàn)而確定。分別在實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性樣品中加入甲醇、乙腈和水4種溶劑進(jìn)行超聲提取30 min然后離心過(guò)濾。不同的溶劑對(duì)煙用紙張中1,1,1-三羥基甲基丙烷的提取效果幾乎一致，平均回收率均在85%以上。但是甲醇和乙腈

2、均有一定的毒性，而且色譜峰行不對(duì)稱。所以綜合考慮選擇超純水作為萃取溶劑。），超聲萃取30 min；c、樣品凈化：靜置5 min, 移取萃取液8 mL于10 mL離心管中，以5000 rpm 速率離心10 min，吸取上清液,經(jīng)0.22 mm有機(jī)相濾膜過(guò)濾；d、移取100 mL的濾液，用超純水將樣品稀釋至1.0 mL，作為樣品待測(cè)液進(jìn)LC-MS/MS分析；e、準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：稱取0.01g的1,1,1-三羥甲基丙烷標(biāo)準(zhǔn)品到10mL容量瓶中，用超純水稀釋并最終配制成具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； f、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定:吸取配制好的不同濃度的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作溶液以及樣品待測(cè)液，分別注入液相色譜-串

3、聯(lián)質(zhì)譜儀；g、1，1，1-三羥甲基丙烷測(cè)定結(jié)果的計(jì)算以外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，即以1,1,1-三羥甲基丙烷的定量離子對(duì)峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)大于等于0.999；對(duì)提取后的樣品待測(cè)液進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得檢出1,1,1-三羥甲基丙烷的定量離子對(duì)峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品中的1,1,1-三羥甲基丙烷的殘留量。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙用紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定方法，其特征在于：標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制方式如下：準(zhǔn)確稱取10 mg的1,1,1-三羥甲基丙甲烷于10 mL容量瓶中，精確至0.1 mg，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為1000 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；分別移取10

4、0 mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液到10 mL容量瓶中，用甲醇定容，此標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為10.0 mg/mL；分別移取一定體積的工作溶液于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容，即配制成不同濃度的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度分別為：10 ng/mL，20 ng/mL，50 ng/mL，100 ng/mL，200 ng/mL和500 ng/mL。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙用紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定方法，其特征在于：采用的液相色譜條件為：色譜柱：ZORBAX HILIC Plus (150 mm×2.1 mm，3.5 mm, 美國(guó)安捷倫公司)；流動(dòng)相：0.1 %甲酸水溶液，流速：200

5、 mL/min；柱溫：40 ；進(jìn)樣量：10 mL；采用的質(zhì)譜條件：掃描方式：正離子掃描; 電噴霧離子源(ESI); 霧化氣流量為60 psi; 氣簾氣流量20 psi; 輔助加熱氣流量為40 psi; 離子化溫度500 ; 碰撞氣流量為6 psi; 4種氣體均為氮?dú)? 停留時(shí)間為100 msec; 電離電壓4500 V, 檢測(cè)方式：正離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙用紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定方法，其特征在于：所述煙用紙為煙用內(nèi)襯紙、接裝紙或條盒包裝紙。2說(shuō)明書(shū)摘要本發(fā)明屬于煙用紙中有害物質(zhì)殘留的理化檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種煙用紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定

6、方法，其特征在于：首先將煙用紙剪碎后加超純水，然后超聲萃取，萃取液離心后直接以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定紙張中的1,1,1-三羥甲基丙烷。本方法能夠快速、準(zhǔn)確檢測(cè)紙張中1,1,1-三羥甲基丙烷殘留量，具有測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、測(cè)定干擾少、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。6說(shuō)明書(shū)煙用紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定方法技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明屬于煙用紙中有害物質(zhì)殘留的理化檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及煙用內(nèi)襯紙、接裝紙、條盒包裝紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定方法，具體說(shuō)是采用超聲方式萃取1,1,1-三羥甲基丙烷，以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜直接測(cè)定的方法。背景技術(shù)1,1,1-三羥基甲基丙烷（TMP）是白色片狀結(jié)晶，易溶于水、低級(jí)醇、

7、丙三醇、二甲基甲酰胺，部分溶于乙酸乙酯、丙酮，微溶于乙醚、氯仿、四氯化碳，不溶于脂肪烴、芳烴和氯代烴類。三羥甲基丙烷分子上有3個(gè)典型的羥甲基，因而具有類似于甘油的多元醇性質(zhì)，是一種用途廣泛的有機(jī)化工原料和化工產(chǎn)品。三羥甲基丙烷主要用于醇酸樹(shù)脂、聚氨酯、不飽和樹(shù)脂、聚酯樹(shù)脂、涂料等領(lǐng)域，三羥甲基丙烷也可用于合成航空潤(rùn)滑油、印刷油墨等，三羥甲基丙烷還可用作紡織助劑和聚氯乙烯樹(shù)脂的熱穩(wěn)定劑。TMP對(duì)小鼠毒性為微毒，對(duì)日本青鳉胚胎毒性為低毒。紙包括煙用內(nèi)襯紙、接裝紙、條盒包裝紙等的生產(chǎn)過(guò)程中，需要加入各種各樣的化學(xué)品如漂白劑、加工助劑、印刷油墨、防腐殺菌劑等化學(xué)物，以改善其包裝性能和美觀性。但是研究發(fā)

8、現(xiàn)，這些化學(xué)品包括1,1,1-三羥基甲基丙烷會(huì)殘留在紙張中，進(jìn)而遷移到卷煙中，其中一些遷移物具有毒性甚至致癌作用，對(duì)消費(fèi)者的健康構(gòu)成危害。美國(guó)、歐盟、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家都對(duì)與食品接觸的包裝材料制定了相應(yīng)的法規(guī)和限量標(biāo)準(zhǔn)，并實(shí)施了嚴(yán)格的市場(chǎng)準(zhǔn)入管理。因此有必要建立一種高效靈敏的檢測(cè)方法檢測(cè)煙用材料中的1,1,1-三羥基甲基丙烷。對(duì)1,1,1-三羥基甲基丙烷的分析方法文獻(xiàn)報(bào)道較少，有Beldie等人發(fā)表的化學(xué)分析法【Beldie C， et a1SeDaration and determination of trimethvl01propane【J 】RevChim，1984，35(10)：93793

9、9】；Tsarfin等人【Tsarfin Ya A，Khar C V DGaschromatographic determination of some diols【JIh. Anal. Khin，1978，33(10)：2 05l2 054】報(bào)道的氣相色譜分析方法。在國(guó)內(nèi)有高毅飛【高毅飛寬孔石英毛細(xì)管氣相色譜測(cè)定三羥甲基丙烷J輻射研究與輻射工藝學(xué)報(bào)，1995， 13(I)：5557】報(bào)道的用寬孔石英毛細(xì)管氣相色譜法，另一篇是楊挺等人【楊挺等反相高效液相色譜測(cè)定三羥甲基丙烷J華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，(2)：124126】報(bào)道的反相高效液相色譜測(cè)定1,1,1-三羥甲基丙烷，還有吳愛(ài)芹等【吳愛(ài)

10、芹等.氣相色譜法測(cè)定聚酯中的三羥甲基丙烷 J.色譜，2003，21（3）298】采用氣相色譜測(cè)定聚酯中的三羥甲基丙烷。以上方法前處理需要諸如降解、酯化、回流等復(fù)雜繁瑣步驟，由于TMP含量均很低，所以靈敏度不夠高。發(fā)明內(nèi)容：本發(fā)明的目的正是基于上述現(xiàn)有狀況而提供的一種煙用紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定方法，本方法克服了現(xiàn)有技術(shù)缺陷，能夠快速、準(zhǔn)確檢測(cè)紙張中1,1,1-三羥甲基丙烷殘留量，且測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、測(cè)定干擾少。本發(fā)明鑒于上述現(xiàn)有的分析方法，考慮到煙用紙張中1,1,1-三羥基甲基丙烷的含量很低，而且TPM沸點(diǎn)較高的特點(diǎn)因此選用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法分析。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)

11、現(xiàn)的：一種煙用紙中1,1,1-三羥甲基丙烷的測(cè)定方法，首先將煙用紙剪碎后加超純水，然后超聲萃取，萃取液離心后直接以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定紙張中1,1,1-三羥甲基丙烷的方法，具體包括以下步驟：a、稱取1.0 g樣品（精確至0.01 g），并置于50 mL具塞三角瓶中。b、樣品的提?。簻?zhǔn)確加入20 mL 萃取液：超純水（問(wèn)題同前），超聲萃取30 min；c、樣品凈化：靜置5 min, 移取萃取液8 mL于10 mL離心管中，以5000 rpm 速率離心10 min。吸取上清液,經(jīng)0.22 mm有機(jī)相濾膜過(guò)濾。d、移取100 mL的濾液，用超純水將樣品稀釋至1.0 mL，作為樣品待測(cè)液進(jìn)LC-MS

12、/MS分析；e、準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：稱取0.01g的1,1,1-三羥甲基丙烷標(biāo)準(zhǔn)品到10mL容量瓶中，用超純水稀釋并最終配制成具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； f、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定:吸取配制好的不同濃度的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作溶液以及樣品待測(cè)液，分別注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀;g、1，1，1-三羥甲基丙烷測(cè)定結(jié)果的計(jì)算以外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，即以1,1,1-三羥甲基丙烷的定量離子對(duì)峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)大于等于0.999。對(duì)提取后的樣品待測(cè)液進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得檢出1,1,1-三羥甲基丙烷的定量離子對(duì)峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品中的1,1,1-三羥甲基丙烷的殘留量。在本發(fā)明中標(biāo)準(zhǔn)工

13、作溶液的配制方式如下：準(zhǔn)確稱取10 mg的1,1,1-三羥甲基丙甲烷于10 mL容量瓶中，精確至0.1 mg，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為1000 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；分別移取100 mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液到10 mL容量瓶中，用甲醇定容，此標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為10.0 mg/mL；分別移取一定體積的工作溶液于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容，即配制成不同濃度的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度分別為：10 ng/mL，20 ng/mL，50 ng/mL，100 ng/mL，200 ng/mL和500 ng/mL； 采用的液相色譜條件為：色譜柱：ZORBAX HILIC Plus (150

14、 mm×2.1 mm，3.5 mm, 美國(guó)安捷倫公司)；流動(dòng)相：0.1 %甲酸水溶液，流速：200 mL/min；柱溫：40 ；進(jìn)樣量：10 mL；采用的質(zhì)譜條件：掃描方式：正離子掃描; 電噴霧離子源(ESI); 霧化氣流量為60 psi; 氣簾氣流量20 psi; 輔助加熱氣流量為40 psi; 離子化溫度500 ; 碰撞氣流量為6 psi; 4種氣體均為氮?dú)? 停留時(shí)間為100 msec; 電離電壓4500 V, 檢測(cè)方式：正離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），MRM參數(shù)見(jiàn)表1。表1 1,1,1-三羥甲基丙烷質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)化合物名稱離子對(duì)去簇電壓（V）碰撞能量 （V）1,1,1-三羥甲基

15、丙烷135.3/81(定量離子對(duì))4014135.3/99(定性離子對(duì))4011本發(fā)明的方法克服了現(xiàn)有技術(shù)樣品處理方法的不足，針對(duì)煙用接裝紙、內(nèi)襯紙和卷煙條與盒包裝紙樣品優(yōu)化了樣品前處理方法和儀器檢測(cè)條件。與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明方法具有如下優(yōu)良效果：（1）本發(fā)明方法利用LC-MS/MS測(cè)定紙張中1，1，1-三羥甲基丙烷的含量，無(wú)需進(jìn)行衍生化操作，前處理方法簡(jiǎn)單。（2）本發(fā)明所用的萃取溶劑和流動(dòng)相均為水，不造成環(huán)境污染。（3）本發(fā)明通過(guò)稀釋的方法降低了基質(zhì)效應(yīng)的干擾（更否具體說(shuō)說(shuō)緣由，不稀釋是否可以直接進(jìn)儀器測(cè)定。試樣在提取過(guò)程中，分析靶標(biāo)物被提取的同時(shí)還有很多共提物存在于提取液中，從而影響靶標(biāo)物

16、在分析儀器上的定性定量分析，需要考慮基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)的影響?；|(zhì)效應(yīng)通常不能被消除，但通過(guò)有效途經(jīng)可以減小其影響。本發(fā)明對(duì)比了溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點(diǎn)響應(yīng)信號(hào)?；|(zhì)對(duì)響應(yīng)信號(hào)的影響十分明顯。但隨著稀釋倍數(shù)的增加，基質(zhì)效應(yīng)對(duì)響應(yīng)信號(hào)的影響有明顯改善。對(duì)于接裝紙，稀釋10倍的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點(diǎn)響應(yīng)信號(hào)可以達(dá)到同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)信號(hào)的85%左右。其他煙用紙張（內(nèi)襯紙、條盒包裝紙、卡紙）均有類似的結(jié)果。稀釋倍數(shù)越高，基質(zhì)效應(yīng)的影響越小。但是稀釋倍數(shù)過(guò)高，樣品中靶標(biāo)物的濃度也在減小，從而影響方法的定量限和檢出限。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果最終選擇樣品提取液稀釋10倍進(jìn)樣檢測(cè)。）。（4）本發(fā)明方法具有操作準(zhǔn)確

17、、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。 本發(fā)明方法的檢測(cè)限：將不同濃度的1,1,1-三羥甲基丙烷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液注入LCMS/MS，以3倍信噪比（S/N = 3）計(jì)算檢測(cè)限（LOD）。 本發(fā)明方法的重復(fù)性和加標(biāo)回收率：在空白樣品中加入1，1，1-三羥甲基丙烷的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后分別進(jìn)行前處理和LCMS/MS分析，并按照加標(biāo)量和測(cè)定值計(jì)算其回收。1，1，1-三羥甲基丙烷的線性范圍10-500 ng mL-1?；厥章蔬_(dá)到90%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.2%，檢出限0.14 mg kg-1，定量限0.40 mg kg-1。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明的測(cè)定方法流程圖（該圖作為摘要附圖）。具體實(shí)施方式本發(fā)明以下結(jié)合實(shí)例

18、做進(jìn)一步描述，但并不是限制本發(fā)明。實(shí)例1：1儀器與試劑：1，1，1-三羥甲基丙烷，甲醇均為色譜級(jí)試劑；超純水，符合GB/T 6682中一級(jí)水的要求。API 4000四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀；瑞士Mettler AE 163電子天平（感量：0.0001g）。2樣品處理：準(zhǔn)確稱取1.0 g樣品；并將其置于50 mL具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入20 mL超純水，超聲萃取30 min；靜置5 min, 移取萃取液8 mL于10 mL離心管中，以10000 rpm 速率離心10 min。吸取上清液,經(jīng)0.22 mm有機(jī)相濾膜過(guò)濾。移取100 mL的濾液，用超純水將樣品稀釋至1.0 mL，進(jìn)LC-MS/MS分析。3.準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確稱取10 mg的1,1,1-三羥甲基丙甲烷于10 mL容量瓶中，精確至0.1 mg，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為1000 m