布魯氏菌病原學(xué)血清學(xué)診斷

1、布魯氏菌布魯氏菌病原學(xué)、病原學(xué)、血清學(xué)血清學(xué)診斷診斷麗水市疾病預(yù)防控制中心麗水市疾病預(yù)防控制中心蘭進(jìn)權(quán)蘭進(jìn)權(quán) 主要內(nèi)容：主要內(nèi)容：1 1、布魯氏菌病原學(xué)；、布魯氏菌病原學(xué)；2 2、布魯氏菌診斷標(biāo)準(zhǔn)；、布魯氏菌診斷標(biāo)準(zhǔn)；3 3、布魯氏菌血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的幾種方法。、布魯氏菌血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的幾種方法。（一）（一）布氏菌概述布氏菌概述 18871887年英國(guó)醫(yī)生布魯氏首先從死于年英國(guó)醫(yī)生布魯氏首先從死于“馬爾他熱馬爾他熱”的英的英國(guó) 士 兵 脾 臟 中 分 離 出 羊 種 布 氏 菌 后 ， 布 魯 氏 菌 屬?lài)?guó) 士 兵 脾 臟 中 分 離 出 羊 種 布 氏 菌 后 ， 布 魯 氏 菌 屬（Brucella

2、Brucella) )，包括包括6 6個(gè)種個(gè)種1919個(gè)生物型。個(gè)生物型。 羊種布氏菌（羊種布氏菌（Br Br melitensismelitensis) ) 牛種布氏菌（牛種布氏菌（Br Br abortusabortus) ) 豬種布氏菌（豬種布氏菌（Br Br suissuis) ) 沙漠森林野鼠種布氏菌（沙漠森林野鼠種布氏菌（Br Br neotomaeneotomae) ) 綿羊附睪種布氏菌（綿羊附睪種布氏菌（Br Br ovisovis) ) 犬種布氏菌（犬種布氏菌（Br Br caniscanis) ) 布魯氏菌的發(fā)展史布魯氏菌的發(fā)展史年份年份菌名菌名發(fā)現(xiàn)人發(fā)現(xiàn)人國(guó)家國(guó)家宿主宿主

3、1887羊種菌羊種菌Bruce馬爾他馬爾他羊羊1897牛種菌牛種菌Bang丹麥丹麥牛牛1914豬種菌豬種菌Traun美國(guó)美國(guó)豬豬1953綿羊附睪種菌綿羊附睪種菌Buadle新西蘭新西蘭公綿羊公綿羊1956沙漠森林鼠種菌沙漠森林鼠種菌Stoennen美國(guó)美國(guó)沙漠森林野鼠沙漠森林野鼠1966犬種菌犬種菌Carmichael美國(guó)美國(guó)小獵犬小獵犬（一）病原學(xué)概述（一）病原學(xué)概述布魯氏菌屬（布魯氏菌屬（BrucellaBrucella) ) 包括包括6 6個(gè)種個(gè)種1919個(gè)生物型。個(gè)生物型。 牛種布氏菌（牛種布氏菌（Br Br abortusabortus) ) ： 1 1、2 2、3 3、4 4、5

4、5、6 6、7 7、9 9型型 羊種布氏菌（羊種布氏菌（Br Br melitensismelitensis) ) ：1 1、2 2、3 3型型 豬種布氏菌（豬種布氏菌（Br Br suissuis) ) ： 1 1、2 2、3 3、4 4、5 5型型 沙漠森林野鼠種布氏菌（沙漠森林野鼠種布氏菌（Br Br neotomaeneotomae) ) 綿羊附睪種布氏菌（綿羊附睪種布氏菌（Br Br ovisovis) ) 犬種布氏菌犬種布氏菌 （Br Br caniscanis) ) 1 1、形、形 態(tài)態(tài)n布魯氏菌是一組微小的球狀、球桿狀、短布魯氏菌是一組微小的球狀、球桿狀、短桿狀細(xì)菌；桿狀細(xì)菌；

5、n寬約寬約0.30.30.50.5微米、長(zhǎng)微米、長(zhǎng)0.60.61.51.5微米。電微米。電鏡下見(jiàn)到的羊種菌為明顯的球桿狀、牛種鏡下見(jiàn)到的羊種菌為明顯的球桿狀、牛種菌和豬種菌為短桿狀；菌和豬種菌為短桿狀；n6 6種布魯氏菌靠形態(tài)很難區(qū)分，一般來(lái)說(shuō)，種布魯氏菌靠形態(tài)很難區(qū)分，一般來(lái)說(shuō)，羊種菌最小，牛種菌產(chǎn)次之，豬種菌較大；羊種菌最小，牛種菌產(chǎn)次之，豬種菌較大；n布魯氏菌沒(méi)有鞭毛，不形成芽胞和夾膜。布魯氏菌沒(méi)有鞭毛，不形成芽胞和夾膜。2 2、染、染 色色n涂片染色檢查多為單個(gè)排列，少見(jiàn)成對(duì)涂片染色檢查多為單個(gè)排列，少見(jiàn)成對(duì)短鏈排列。短鏈排列。n布魯氏菌可被堿性染料著色；布魯氏菌可被堿性染料著色；n革

6、蘭染色陰性；革蘭染色陰性；n柯茲羅夫斯基提出用柯茲羅夫斯基提出用0.5%0.5%沙黃水溶液染沙黃水溶液染色，加熱出現(xiàn)氣泡，水洗后用色，加熱出現(xiàn)氣泡，水洗后用0.5%0.5%孔雀孔雀綠或綠或1%1%美蘭復(fù)染，布魯氏菌呈美蘭復(fù)染，布魯氏菌呈紅色紅色，其，其它細(xì)菌呈綠色和蘭色。它細(xì)菌呈綠色和蘭色。布魯氏菌布魯氏菌： 革蘭陰性，革蘭陰性， 長(zhǎng)約長(zhǎng)約0.6-1.5m, 寬約寬約0.3-0.6m, 用柯氏染色染成紅用柯氏染色染成紅色色,無(wú)鞭毛、不形成無(wú)鞭毛、不形成芽胞和莢膜。芽胞和莢膜。3 3、培養(yǎng)特性、培養(yǎng)特性1.1.布魯氏菌培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求高：布魯氏菌培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求高： 需要各種氨基酸和各種金屬離子，有的菌

7、種需需要各種氨基酸和各種金屬離子，有的菌種需要血清才能生長(zhǎng)。要血清才能生長(zhǎng)。2.2.生長(zhǎng)緩慢：生長(zhǎng)緩慢：一般需經(jīng)一般需經(jīng)4 46 6天，有的甚至天，有的甚至21213030天才能長(zhǎng)出菌落。天才能長(zhǎng)出菌落。3.3.生長(zhǎng)所需溫度：生長(zhǎng)所需溫度：20204040，最適為，最適為37,37,超過(guò)超過(guò)4242則不生長(zhǎng)。則不生長(zhǎng)。4. 4. C0C02:2: 綿羊附睪種菌和牛種菌的某些生物型菌需嚴(yán)格綿羊附睪種菌和牛種菌的某些生物型菌需嚴(yán)格的的C0C02 2(5(51010) )。 （4 4） 細(xì)菌變異細(xì)菌變異n布氏菌在各種理化因素作用下易發(fā)生變異布氏菌在各種理化因素作用下易發(fā)生變異; ;n即從光滑型（即從

8、光滑型（S S）變?yōu)榉枪饣妥優(yōu)榉枪饣痛植诖植? (R)R)或粘液或粘液( (M)M)狀。狀。n變異菌落常比光滑型稍長(zhǎng)，表面有顆粒。變異菌落常比光滑型稍長(zhǎng)，表面有顆粒。菌落顏色為灰白色或褐色，菌落顏色為灰白色或褐色，（5 5） 抵抗力抵抗力 n布氏菌在合適條件下能生存布氏菌在合適條件下能生存很長(zhǎng)時(shí)間很長(zhǎng)時(shí)間，有，有較高的抗滅活能力。較高的抗滅活能力。n對(duì)濕熱、紫外線(xiàn)和各種射線(xiàn)以及常用的消對(duì)濕熱、紫外線(xiàn)和各種射線(xiàn)以及常用的消毒劑、抗生素、化學(xué)藥物比較敏感；毒劑、抗生素、化學(xué)藥物比較敏感；n對(duì)對(duì)低溫低溫和和干燥有較強(qiáng)干燥有較強(qiáng)的抵抗力，故可用冷的抵抗力，故可用冷凍真空干燥法保存菌種。凍真空干燥法

9、保存菌種。布氏菌在自然條件下的生存能力自然條件自然條件生存時(shí)間（天）生存時(shí)間（天）自然條件自然條件生存時(shí)間（天）生存時(shí)間（天）水水50120奶油奶油2565塵塵4120奶酪奶酪2190糞糞2172凍肉凍肉1447畜舍墻棚畜舍墻棚4150腌肉腌肉2045地面地面4150培養(yǎng)基培養(yǎng)基60318衣服衣服3080干燥胎膜干燥胎膜120皮毛皮毛45120腐敗臟器腐敗臟器死亡死亡鮮牛乳鮮牛乳2550人工胃液人工胃液2050 (1)(1)對(duì)物理因子的抵抗力對(duì)物理因子的抵抗力 物理因子對(duì)布氏菌的影響物理因子對(duì)布氏菌的影響物理因子物理因子 生存時(shí)間生存時(shí)間 物理因子物理因子 生存時(shí)間生存時(shí)間濕熱濕熱5656 6

10、060分鐘以上分鐘以上 干熱干熱8080 6060分鐘以上分鐘以上濕熱濕熱6363 6060分鐘以上分鐘以上 干熱干熱9090 6060分鐘以上分鐘以上濕熱濕熱8080 3030分鐘以上分鐘以上 干熱干熱100100 7 7分鐘以上分鐘以上濕熱濕熱9090 10 10分鐘以上分鐘以上 直射陽(yáng)光直射陽(yáng)光 1 14 4小時(shí)小時(shí)濕熱濕熱100100 半分鐘死亡半分鐘死亡 散射陽(yáng)光散射陽(yáng)光 7 78 8天天 (2)(2)對(duì)化學(xué)因子的抵抗力對(duì)化學(xué)因子的抵抗力 化學(xué)因子對(duì)布氏菌的影響化學(xué)因子對(duì)布氏菌的影響 藥物名稱(chēng)藥物名稱(chēng) 濃度濃度(%) (%) 生存時(shí)間生存時(shí)間 藥物名稱(chēng)藥物名稱(chēng) 濃度濃度(%) (%)

11、 生存時(shí)間生存時(shí)間 新潔爾滅新潔爾滅 0.1 300.1 30秒鐘秒鐘 漂白粉漂白粉 0.20.22.52.5 2 2分鐘以?xún)?nèi)分鐘以?xún)?nèi) 石炭酸石炭酸 1 12 2 1 15 5分鐘分鐘 紅紅 汞汞 2 72 7分鐘分鐘 來(lái)蘇兒來(lái)蘇兒 2 12 13 3分鐘分鐘 過(guò)錳酸鉀過(guò)錳酸鉀 0.10.10.2 70.2 71515分鐘分鐘 來(lái)蘇兒來(lái)蘇兒 3 13 1分鐘以?xún)?nèi)分鐘以?xún)?nèi) 甲甲 醛醛 0.2 200.2 20分鐘以上分鐘以上 氯亞明氯亞明 0.2 50.2 57 7分鐘分鐘 乳乳 酸酸 0.50.5 1 1分鐘以?xún)?nèi)分鐘以?xún)?nèi) 氯亞明氯亞明 0.5 30.5 35 5分鐘分鐘 氫氧化鉀氫氧化鉀 2

12、32 3分鐘分鐘 升升 汞汞 0.05 1 0.05 1分鐘以?xún)?nèi)分鐘以?xún)?nèi) 肥皂肥皂 2 20 2 20分鐘以上分鐘以上主要化學(xué)藥品對(duì)三型菌的影響主要化學(xué)藥品對(duì)三型菌的影響 濃度濃度 布魯氏菌生存時(shí)間布魯氏菌生存時(shí)間( (分鐘分鐘) 化學(xué)藥品名稱(chēng)化學(xué)藥品名稱(chēng) (%) (%) 羊型羊型 牛型牛型 豬型豬型 石石 碳碳 酸酸 1 5 3 5 1 5 3 5 石石 碳碳 酸酸 2 1 2 1 2 1 2 1 來(lái)來(lái) 蘇蘇 兒兒 2 3 1 3 2 3 1 3 來(lái)來(lái) 蘇蘇 兒兒 3 3 瞬間瞬間 瞬間瞬間 瞬間瞬間 漂白粉澄清液漂白粉澄清液 0.2 1-2 0.2 1-2 瞬間瞬間 瞬間瞬間 漂白粉乳劑漂

13、白粉乳劑 2.5 1-2 2.5 1-2 瞬間瞬間 瞬間瞬間 肥肥 皂皂 水水 2 20 20 20 2 20 20 20 （二）布魯氏菌分離培養(yǎng)（二）布魯氏菌分離培養(yǎng)n采用何種方法、采用何種方法、n取何種材料、取何種材料、n何種培養(yǎng)基何種培養(yǎng)基 n實(shí)驗(yàn)室條件實(shí)驗(yàn)室條件布氏菌的分離培養(yǎng)布氏菌的分離培養(yǎng)n一、一、從可疑病人分離布氏菌從可疑病人分離布氏菌 n血培養(yǎng)：血培養(yǎng)： 3030天未培養(yǎng)出菌，可定位陰性天未培養(yǎng)出菌，可定位陰性 。 n骨髓培養(yǎng)：抽取骨髓（接種雙相培養(yǎng)基）骨髓培養(yǎng)：抽取骨髓（接種雙相培養(yǎng)基）n尿培養(yǎng)：尿培養(yǎng)：n其他病原材料培養(yǎng)其他病原材料培養(yǎng): :乳、腦脊液、關(guān)節(jié)液乳、腦脊液、關(guān)

14、節(jié)液和滑囊液分離布氏菌，參照血培養(yǎng)觀察和滑囊液分離布氏菌，參照血培養(yǎng)觀察結(jié)果，結(jié)果，1515天不長(zhǎng)菌定為陰性天不長(zhǎng)菌定為陰性 二、從牲畜材料中分離布氏菌二、從牲畜材料中分離布氏菌 n 從牲畜流產(chǎn)羔檢菌：從牲畜流產(chǎn)羔檢菌： n 從胎衣檢菌：從胎衣檢菌： n 從陰道分泌物檢菌：從陰道分泌物檢菌： n 尿液檢菌：尿液檢菌：n 乳汁檢菌：乳汁檢菌：n 膿汁檢菌：膿汁檢菌： n 血液培養(yǎng)：血液培養(yǎng)： n 臟器檢菌：臟器檢菌：我國(guó)出菌宿主及材料我國(guó)出菌宿主及材料n我國(guó)從人、羊、牛、豬、犬、鹿、馬、駱駝等家畜及黃我國(guó)從人、羊、牛、豬、犬、鹿、馬、駱駝等家畜及黃羊、巖羊、黃鼠、黃胸鼠等野生動(dòng)物檢出布氏菌。從牧

15、羊、巖羊、黃鼠、黃胸鼠等野生動(dòng)物檢出布氏菌。從牧區(qū)水塘水和羊毛中也檢出過(guò)布氏菌。區(qū)水塘水和羊毛中也檢出過(guò)布氏菌。n出菌材料有血液、關(guān)節(jié)液、滑囊液、骨髓、腦髓液、胸出菌材料有血液、關(guān)節(jié)液、滑囊液、骨髓、腦髓液、胸液、淋巴結(jié)、乳汁、膿汁、膽汁、尿、陰道分泌物、等液、淋巴結(jié)、乳汁、膿汁、膽汁、尿、陰道分泌物、等2020余種。余種。n由于取材難易等原因，人多由血液、關(guān)節(jié)液、滑囊液、由于取材難易等原因，人多由血液、關(guān)節(jié)液、滑囊液、骨髓出菌；羊多由流產(chǎn)羔、胎盤(pán)、死羔檢出菌；牛多由骨髓出菌；羊多由流產(chǎn)羔、胎盤(pán)、死羔檢出菌；牛多由流產(chǎn)犢、乳汁檢出菌；豬多由流產(chǎn)仔豬、胎盤(pán)出菌。流產(chǎn)犢、乳汁檢出菌；豬多由流產(chǎn)仔豬

16、、胎盤(pán)出菌。布氏菌的鑒定及分型布氏菌的鑒定及分型 ( (一一) )常規(guī)確定布氏菌屬細(xì)菌的方法常規(guī)確定布氏菌屬細(xì)菌的方法n菌落生長(zhǎng)時(shí)間和形態(tài)菌落生長(zhǎng)時(shí)間和形態(tài); ;n菌體形態(tài)和染色菌體形態(tài)和染色; ;n布氏菌血清凝集試驗(yàn)布氏菌血清凝集試驗(yàn); ;( (二二) )特殊方法：特殊方法：n1 1細(xì)菌細(xì)菌DNADNA鳥(niǎo)嘌呤十胞嘧啶克分子百分比鳥(niǎo)嘌呤十胞嘧啶克分子百分比( (C+CMOLC+CMOL) )的測(cè)定的測(cè)定; ;n2 2布氏菌布氏菌DNADNA與可疑菌與可疑菌DNADNA雜交試驗(yàn)雜交試驗(yàn); ;n3 3應(yīng)用色譜技術(shù)鑒定布氏菌應(yīng)用色譜技術(shù)鑒定布氏菌; ; 布氏菌屬的種、型鑒定方法布氏菌屬的種、型鑒定方

17、法 初代分離培養(yǎng)對(duì)二氧化碳的需要初代分離培養(yǎng)對(duì)二氧化碳的需要 硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn) 染料抑菌試驗(yàn)染料抑菌試驗(yàn) 單項(xiàng)特異性血清單項(xiàng)特異性血清A A、M M、R R凝集試驗(yàn)?zāi)囼?yàn) 粗糙型（粗糙型（R R型）血清凝集試驗(yàn)（玻片、試管法）型）血清凝集試驗(yàn)（玻片、試管法） 噬菌體裂解試驗(yàn)噬菌體裂解試驗(yàn) 尿素酶活性試驗(yàn)?zāi)蛩孛富钚栽囼?yàn)布魯氏菌分離用培養(yǎng)基布魯氏菌分離用培養(yǎng)基n血清葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基血清葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基n胰酶大豆培養(yǎng)基胰酶大豆培養(yǎng)基n土豆瓊脂培養(yǎng)基土豆瓊脂培養(yǎng)基n胰示瓊脂胰示瓊脂nAlbimiAlbimi瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基n肝瓊脂培養(yǎng)基肝瓊脂培養(yǎng)基n土豆土豆+10%+10%馬血清培養(yǎng)

18、基馬血清培養(yǎng)基 效果最好效果最好 SAT滴度與培養(yǎng)陽(yáng)性的符合率0 010102020303040405050606070708080909010010020204040808016016032032064064012801280符合率符合率BSLBSL2 2：實(shí)驗(yàn)室設(shè)施實(shí)驗(yàn)室設(shè)施 ( (二級(jí)屏障二級(jí)屏障) )人間布病診斷方法和判定標(biāo)準(zhǔn)人間布病診斷方法和判定標(biāo)準(zhǔn)1 1、流行病學(xué)接觸史：流行病學(xué)接觸史： 密切接觸家畜、野生動(dòng)物、畜產(chǎn)品、密切接觸家畜、野生動(dòng)物、畜產(chǎn)品、 布魯氏菌培養(yǎng)物等或生活在疫區(qū)內(nèi)的居民。布魯氏菌培養(yǎng)物等或生活在疫區(qū)內(nèi)的居民。2 2、臨床癥狀和體征、臨床癥狀和體征: :應(yīng)排除其他

19、疑似疾病。應(yīng)排除其他疑似疾病。3 3、實(shí)驗(yàn)檢查：、實(shí)驗(yàn)檢查：病原分離病原分離 試管凝集試管凝集試驗(yàn)試驗(yàn) 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 抗人球蛋白試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)參考：（參考：（皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)試驗(yàn)、虎紅平板凝集試驗(yàn)）虎紅平板凝集試驗(yàn)） 人間布病血清學(xué)陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)人間布病血清學(xué)陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)病原分離病原分離: :檢出布魯氏菌；檢出布魯氏菌；試管凝集試管凝集試驗(yàn)試驗(yàn): :1:100(+)1:100(+)及以上為陽(yáng)性；及以上為陽(yáng)性；補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn):1:1: :10 (10 (+)+)及以上為陽(yáng)性；及以上為陽(yáng)性；抗人球蛋白試抗人球蛋白試:1:400(:1:400(+)+)及以上為陽(yáng)性

20、；及以上為陽(yáng)性； 人間布病診斷方法和判定標(biāo)準(zhǔn)人間布病診斷方法和判定標(biāo)準(zhǔn) 凡具備凡具備1 1、2 2和第和第3 3項(xiàng)中的任何一項(xiàng)檢項(xiàng)中的任何一項(xiàng)檢查陽(yáng)性即可確定為布病病人。查陽(yáng)性即可確定為布病病人。 對(duì)已確診的慢性布病病人和接種過(guò)對(duì)已確診的慢性布病病人和接種過(guò)菌苗的人，應(yīng)以臨床癥狀為主要依菌苗的人，應(yīng)以臨床癥狀為主要依據(jù)，血清學(xué)試驗(yàn)效價(jià)高低，皮變反據(jù)，血清學(xué)試驗(yàn)效價(jià)高低，皮變反應(yīng)僅供參考。應(yīng)僅供參考。(1(1）布氏菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)布氏菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)原理：原理：當(dāng)機(jī)體受布氏菌抗原作用之后，導(dǎo)致當(dāng)機(jī)體受布氏菌抗原作用之后，導(dǎo)致T T細(xì)胞細(xì)胞過(guò)敏。致敏過(guò)敏。致敏T T細(xì)胞再遇到相同抗原后進(jìn)行

21、分化，細(xì)胞再遇到相同抗原后進(jìn)行分化，衍變，產(chǎn)生能釋放各種淋巴因子的效應(yīng)細(xì)胞，局衍變，產(chǎn)生能釋放各種淋巴因子的效應(yīng)細(xì)胞，局部的皮膚變態(tài)反應(yīng)就是各種淋巴因子綜合作用的部的皮膚變態(tài)反應(yīng)就是各種淋巴因子綜合作用的結(jié)果，是一種遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。結(jié)果，是一種遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。注意：注意： 布氏菌素注射后，不會(huì)使人感染布病；也不會(huì)布氏菌素注射后，不會(huì)使人感染布?。灰膊粫?huì)導(dǎo)致常規(guī)檢測(cè)的抗體增加。導(dǎo)致常規(guī)檢測(cè)的抗體增加。器材及試劑：器材及試劑： 布氏菌素、酒精棉球，布氏菌素、酒精棉球，1 1mlml注射器，測(cè)量尺注射器，測(cè)量尺皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)操作方法皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)操作方法1.1.每次注射前必須詳細(xì)詢(xún)問(wèn)職業(yè)、健康情況曾否每

22、次注射前必須詳細(xì)詢(xún)問(wèn)職業(yè)、健康情況曾否接種過(guò)布氏菌活菌苗等。接種過(guò)布氏菌活菌苗等。2.2.前臂掌側(cè)中部皮膚用前臂掌側(cè)中部皮膚用75%75%酒精棉球消毒，待干酒精棉球消毒，待干后，用后，用1 1mlml注射器皮內(nèi)注射注射器皮內(nèi)注射0.10.1mlml。3.3.判定反應(yīng)時(shí)間：注射后判定反應(yīng)時(shí)間：注射后2424、4848h h各觀察一次各觀察一次（以（以4848H H結(jié)果為準(zhǔn)）。結(jié)果為準(zhǔn)）。4.4.判定反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性反應(yīng)局部紅腫達(dá)判定反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性反應(yīng)局部紅腫達(dá)2 2x2cmx2cm或或面積面積4 4cmcm2 2皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 部位：要皮內(nèi)注射，切勿皮下注射部位：要皮內(nèi)注

23、射，切勿皮下注射 劑量：為劑量：為0.10.1mlml，注射后應(yīng)在注射部位有小注射后應(yīng)在注射部位有小白泡隆起，注射液不得從針口漏出。白泡隆起，注射液不得從針口漏出。 消毒：用酒精，切勿用碘酒，以免引起假陽(yáng)消毒：用酒精，切勿用碘酒，以免引起假陽(yáng)性反應(yīng)。性反應(yīng)。 面積計(jì)算：浸潤(rùn)、偽足都屬于測(cè)量范圍面積計(jì)算：浸潤(rùn)、偽足都屬于測(cè)量范圍 制品渾濁，有搖不散的沉淀，有異物，安瓶制品渾濁，有搖不散的沉淀，有異物，安瓶有裂紋，標(biāo)簽不清，過(guò)期失效者不可使用。有裂紋，標(biāo)簽不清，過(guò)期失效者不可使用。 保存：保存：布氏菌素于布氏菌素于4-104-10冷暗處冷暗處. .皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)禁忌禁忌 既往有各種過(guò)敏史

24、者，既往有各種過(guò)敏史者， 支氣管哮喘病者支氣管哮喘病者 不可使用不可使用評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)： 此法敏感性較好，呈陽(yáng)性反應(yīng)的人只此法敏感性較好，呈陽(yáng)性反應(yīng)的人只表示受過(guò)布氏菌感染，不能做最后判定。表示受過(guò)布氏菌感染，不能做最后判定。 此法用于流行病學(xué)調(diào)查和大量檢疫，此法用于流行病學(xué)調(diào)查和大量檢疫，所以布病監(jiān)測(cè)時(shí)為初診方法，若皮變陽(yáng)所以布病監(jiān)測(cè)時(shí)為初診方法，若皮變陽(yáng)性，應(yīng)采血進(jìn)一步做特異性抗體檢測(cè)。性，應(yīng)采血進(jìn)一步做特異性抗體檢測(cè)。（2 2）試管凝集試驗(yàn)）試管凝集試驗(yàn)原理：原理：Ag+AbAg-AbNaclNacl電介質(zhì)電介質(zhì)布氏菌侵入機(jī)體后，就會(huì)刺激布氏菌侵入機(jī)體后，就會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，這種抗機(jī)

25、體產(chǎn)生特異性抗體，這種抗體可與相應(yīng)抗原（布氏菌體）體可與相應(yīng)抗原（布氏菌體）發(fā)生特異性結(jié)合，在電介質(zhì)作發(fā)生特異性結(jié)合，在電介質(zhì)作用下，就會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的凝用下，就會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，我們就是用已知抗原集反應(yīng)，我們就是用已知抗原查未知抗體。查未知抗體。試管凝集反應(yīng)步驟試管凝集反應(yīng)步驟1 1、加入倍比稀釋受檢血清、加入倍比稀釋受檢血清0.50.5mlml2 2、加入、加入1 1：1010稀釋布氏菌抗原稀釋布氏菌抗原0.50.5mlml3737度度2424小時(shí)觀察結(jié)果小時(shí)觀察結(jié)果同時(shí)配置比濁管便于結(jié)果判定同時(shí)配置比濁管便于結(jié)果判定0.50.50.50.5試管凝集反應(yīng)（試管凝集反應(yīng)（SATSAT

26、）示意圖示意圖(1)(1)0.50.50.50.50.50.5稀釋血清稀釋血清1:251:501:1001:2001:4000.5棄去棄去稀釋度稀釋度比濁管的制備比濁管的制備管號(hào)1:20稀釋抗原生理鹽水清亮度標(biāo)記10.001.00100%+20.250.7575%+30.500.5050%+40.750.2525%+ +51.000.000%-每次試驗(yàn)須作三種對(duì)照每次試驗(yàn)須作三種對(duì)照 陰性血清對(duì)照陰性血清對(duì)照 陽(yáng)性血清對(duì)照陽(yáng)性血清對(duì)照 抗原對(duì)照抗原對(duì)照結(jié)果判定：結(jié)果判定： 根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄凝集反根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄凝集反應(yīng)程度（滴度），特別是應(yīng)程度（滴度），特別是50%

27、50%清亮度（清亮度（+）對(duì)判）對(duì)判定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對(duì)比判定。定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對(duì)比判定。+ + 等于完全凝集，上層液等于完全凝集，上層液100%100%清亮。清亮。+ + 等于幾乎完全凝集，上層液等于幾乎完全凝集，上層液75%75%清亮。清亮。+ + 等于顯著凝集，上層液等于顯著凝集，上層液50%50%清亮。清亮。+ + 等于有凝集出現(xiàn)，液體等于有凝集出現(xiàn)，液體25%25%清亮。清亮。- - 等于無(wú)凝集，液體不清亮。等于無(wú)凝集，液體不清亮。人的診斷標(biāo)準(zhǔn)：人的診斷標(biāo)準(zhǔn)：1:100+1:100+為陽(yáng)性，為陽(yáng)性，1:50+1:50+為可疑。為可疑。評(píng)價(jià)：試管凝集試驗(yàn)是評(píng)價(jià)

28、：試管凝集試驗(yàn)是WrightWright和和SampleSample于于18981898年首先建立的，是布病診斷在國(guó)年首先建立的，是布病診斷在國(guó)際上唯一的全標(biāo)化方法，使用廣泛，際上唯一的全標(biāo)化方法，使用廣泛，經(jīng)久不衰。特異性好，也較敏感，實(shí)經(jīng)久不衰。特異性好，也較敏感，實(shí)用性強(qiáng)，診斷、流調(diào)、監(jiān)測(cè)均適用。用性強(qiáng)，診斷、流調(diào)、監(jiān)測(cè)均適用。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 有前帶現(xiàn)象。有前帶現(xiàn)象。 不能區(qū)別人工免疫和自然感染。不能區(qū)別人工免疫和自然感染。 產(chǎn)生一定的交叉反應(yīng)。產(chǎn)生一定的交叉反應(yīng)。 慢，需要兩天。慢，需要兩天。（3 3）、虎紅平板凝集試驗(yàn)）、虎紅平板凝集試驗(yàn) ( (一一) )器材及試劑器材及試劑 清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片，清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片，0 0. .1 1毫升毫升吸管或微量加樣器、牙簽或細(xì)鐵絲?；⒓t平吸管或微量加樣器、牙簽或細(xì)鐵絲?；⒓t平板凝集抗原、被檢血清。板凝集抗原、被檢血清。( (二二) )操作方法操作方法 在玻片上加在玻片上加0 0. .0303毫升被檢血清，然后加入虎毫升被檢血清，然后加入虎紅平板抗原紅平板抗原0 0. .0303毫升，搖勻或用牙簽混勻，毫升，搖勻或用牙簽混勻，在在5 5分鐘內(nèi)判定結(jié)果。判定級(jí)別同平板凝集分鐘內(nèi)判定結(jié)果。判定級(jí)別同平板凝集反應(yīng)。亦可只分為反應(yīng)。亦可只分為(+)(+)陽(yáng)性，陽(yáng)性，(-)(-)陰性?xún)深?lèi)。陰性?xún)深?lèi)。評(píng)價(jià)評(píng)