防曬劑檢測方法

1、防曬劑含量檢測方法防曬劑即紫吸收劑。它能吸收紫外線中可引起人產(chǎn)生急性皮炎（紅斑）和皮膚灼傷的波長為280320nn的中波紫外線(即U.V.B)和（或）可使皮膚變黑的波長32400nn的長波紫紫外線（即U.V.A）?；瘖y品中紫外線吸收劑用量過多對皮膚有不利影響，因此，化妝品衛(wèi)生標準規(guī)定了防曬劑的使用量（見附錄1中的表5）、對甲氧肉桂酸乙氧乙酯高效液相色譜法（HPLC）對甲氧肉桂酸乙氧乙酯：（4-甲氧肉桂酸-2-乙氧乙酯，C14H18O4，分子量250.29)是淡黃色透明的粘稠性液體,266Pa時沸點為184187；在水中溶解度為0.05%,在甘油中為0.5%,在丙二醇中約5%,能經(jīng)任意比例與其它

2、醇類、植物油相混合；吸收波長280320nm，常作紫外吸收劑。我國化妝品衛(wèi)生標準規(guī)定最大允許濃度為10%。1 應用范圍本方法適用于化妝品中對甲氧肉桂酸乙氧乙酯的測定。2 原理樣品中的對甲氧肉桂酸乙氧乙酯溶解于四氫呋喃等有機溶劑，有機溶劑提取后用高效液相色譜定性、定量。3 試劑3.1 四氦呋喃：色譜純。(1)3.2 乙腈。3.3 對甲氧肉桂酸乙氧乙酯標準溶液:精確稱取對甲氧肉桂酸乙氧酯0.5g,用少量四氫呋喃溶解,移入100.0ml容量瓶中并定容至刻度。移取10.0ml置于50.0ml容量瓶中,用四氫呋喃定容至刻度。此溶液1.00ml含1000?g對甲氧肉桂酸乙氧乙酯。4 儀器4.1 高效液相色

3、譜儀：具紫外分光光度檢測器4.2超聲波儀。5 分析步驟5.1 樣品預處理5.1.l 液體、乳液、膏霜(2)：稱取約0.12.0g(3)樣品于50m1離心管中，加20m1四氫呋喃。用超聲波充分溶解混勻后加四氫呋喃至50.0ml。溶液中有不溶物時離心分離。取上清液用。（4）5.1.2 指甲油：稱取約1.0g樣品(3)于50ml離心管中，加15ml乙腈，攪拌均勻，加水至25.0ml，3000r/min離心10min，或用聚四氟乙烯濾膜過濾，取上清液備用。(4)(5)5.2 色譜條件色譜柱：碳十八結合硅膠（4.0mm id×250mm）。(6)流動相：乙腈+水（64）。(7)流速：1.0m1

4、min。檢測器波長：310nm。5.3測定5.3.1 定性取標準溶液2.0ml，加四氫呋喃稀釋至50.0m1，取5µl注入HPLC，求出保留時間，取樣品溶液5?l同樣操作，以保留時間進行比較和定性。（8）5.3.2 定量移取標準溶液用四氫呋喃稀釋，配制成1ml相當于0.0、20.0、40.0、60.0、80.0?g的標準系列，依次取5µl注入HPLC，繪制濃度-峰高（或峰面積）標準曲線。取樣品溶液5?l注入HPIC，記錄峰高或峰面積，從標準曲線查出對應的對甲氧肉桂酸乙氧乙酯的含量A（µg/m1）。6 計算c=A×V/m×1/1000式中：c一一

5、對甲氧基肉桂酸乙酸乙酯含量，%；A一由標準曲線查出的樣液中對甲氧基肉桂酸乙氧乙酯含量，µgml；V一樣品溶液總體積，m1；m樣品質量，g。注解：（1）四氫呋喃中常常加入抗氧化劑，必須采用色譜純試劑。（2）乳液、膏霜指防曬油、擦手香酯、夜霜等。（3）稱取的樣品量根據(jù)對甲氧肉桂酸乙氧乙酯含量來決定，應含14mg。（4）樣液中若仍有不溶物，用聚四氟乙烯濾膜（5?m）過濾。（5）指甲油的預處理方法除用乙腈外，還可用下法：即取苯或醚10ml，水20ml與樣品充分混合，離心分離（3000r/min） 10min，或靜置分層后，取苯或醚層，將有機相揮干，用乙腈稀釋至一定體積備用。（6）常用的色譜柱

6、還有TSK凝膠柱LS4l0及等效物。（7）流動相乙腈和水的比例范圍在73l1之間都可得到良好的分離。（8）用本法測定時，對甲氧肉桂酸乙氧乙酯的保留時間是10min，能與其同分異構體完全分離。以對甲氧肉桂酸乙氧乙酯的相對保留時間作為1.00時，2-乙基己基-對2-甲基胺基苯甲酸酯（ESOALOL 507）是8.47，2-乙基己基對甲氧肉桂酸酯是8.94，同時和其它紫外吸收劑也能完全分離。二、羥苯甲酮高效液相色譜法（HPLC）羥苯甲酮即2-羥-4甲氧二苯甲酮。（oxybenzone，2-hydroxy-4-methoxybenzo phenone C14H12O3,228.25）是微黃色結晶粉末，

7、熔點66（Merek Index），6066（化妝品原料標準）在100g不同溶媒中溶解的克數(shù)分別為：水0.O，95乙醇5.85，正己烷4.36，苯56.2，二甲苯44.3，二硫化碳30.0，四氯化碳34.5。羥苯甲酮的最大吸收波長（0.001乙醇溶液）為242±4nm， 288±4nm， 325±14nm,在化妝品中用作紫外線吸收劑。我國化妝品衛(wèi)生標準規(guī)定的最大允許濃度為10。1 應用范圍本方法適用于不同類型化妝品中羥苯甲酮的測定。2 原理用有機溶劑提取化妝品中的羥苯甲酮，用高效液相色譜進行測定，以保留時間定性，以標準峰高（或峰面積）進行定量。3 試劑3.1 四氫

8、呋喃：色譜純。(1)3.2 羥苯甲酮標準溶液：精確稱取羥苯甲酮0.25g，加少量四氫呋喃溶解，移置于100ml容量瓶中。加四氫呋喃定容至刻度。移取5.0ml置于50.0ml容量瓶中，用四氫呋喃定容至刻度。此液1.0ml含250?g羥苯甲酮。4 儀器4.1 高效液相色譜儀：具紫外分光檢測器。4.2 超聲波儀。5 分析步驟5.1 樣品預處理5.1.1 液體、乳狀樣品：準確稱取約0.12.5g(2)樣品于50m1離心管中，加四氫呋喃40. 0ml，用超聲波儀分散或溶解，加四氫呋喃至50ml，如樣液混濁離心分離，取上清液備用。5.1.2 指甲油：稱取約1. 0g(3)樣品，置于離心管中，加四氫呋喃5.

9、0ml經(jīng)超聲波儀超聲提取后，加氯仿至20ml，3000rmin離心10min，取上清液備用。5.2 色譜條件色譜柱：不銹鋼填充柱（4.6mm id×25Onm）填充C8（5?m）。(4)流動相：甲醇+四氫呋喃+水+60過氯酸（5020300.15）。(5)流速，1.0m1min。檢測器：紫外吸收檢測器，波長288nm。5.3 測定5.3.1 定性吸取6.0ml標準溶液置于50.0ml容量瓶中,加四氫呋喃定容至刻度，取5µl注入HPLC，求出保留時間。取5µl樣品待測溶液注入HPLC，求出保留時間，與標準保留時間,與標準保留時間比較進行定性。(6,7)5.3.2 定

10、量配制每毫升含羥甲氧基苯酮0.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0?g的標準系列，分別取5µl注入HPLC。繪制峰高（或峰面積）-濃度標準曲線，取樣品待測溶液5µl注入HPLC，以標準曲線查出樣品溶液中的羥苯甲酮含量（?g/ml）。6 計算c%=A×V/m×1/10000式中：c一羥苯甲酮含量，%；A以標準曲線查出的樣品溶液中羥苯甲酮含量，µg/m1；V一樣品溶液稀釋的總體積，m1；m一一樣品質量，g。注解：（1）一般在四氫呋喃中加入了微量的抗氧化劑，故要使用色譜純的四氫呋喃。（2）進行樣品預處理時，稱取的樣品質量應含0.52.

11、5mg羥苯甲酮。（3）稱取指甲油時，由于樣品中的溶媒易揮發(fā)，稱取操作應敏捷。（4）可用Lichrosorh RP-18色譜柱（E.Merck公司制品）或Nueleosil C18色譜柱（Macherey Nagel公司制品）。（5）如用乙腈+水（7+3）作流動相，不能將ESCA LOL 506紫外吸收劑與羥甲氧基苯酮分離。（6）本方法選擇的儀器條件，羥苯甲酮與其它異構體分離良好，羥苯甲酮的相對保留時間為1.00時，其它異構體的相對保留時間如下：2-羥基-4甲氧基二苯甲酚-5磺酸是0. 48，2-羥基二苯甲酮是0.72，2，2羥基二苯甲酮是0.75，2，2，4，4-四羥基二苯甲酮是0.56，2，

12、2羥基4，4甲氧苯酮是0.89。三、水楊酸高蓋酯等14種防曬劑反相高效液相色譜法防曬化妝品的組分含有紫外線吸收劑。常用的紫外線吸收劑為水楊酸、對氨基苯甲酸、肉桂酸、二苯甲酮等的衍生物。此外，為了完全防止紫外線，防曬化妝品中還加有能使紫外線散亂起到遮蔽作用的無機覆蓋劑，如氧化鋅、氧化鈦、滑石粉、高嶺土等，我國化妝品衛(wèi)生標準GB 7916一87對紫外線吸收劑的使用量做了限制。本法使用高效液相色譜，一次進樣同時測定2，4-二羥基二苯甲酮等14種紫外吸收劑，分離效果好。本法簡單、快速、靈敏、實用。1 應用范圍本法適用于防曬化妝品中紫外線吸收劑的檢測，可檢測14種紫外線吸收劑，其最低檢測量見表2-3-2

13、7。表2-3-27紫外吸收劑及化妝品衛(wèi)生標準（GB 9716-87）中規(guī)定的化妝品中最大允許濃度序號代號物質名稱英文名稱本法檢出限(?g/g)最大允許濃度(%)供應商保留時間(min)?m(nm)5-11SALA9水楊酸高()(此字由艸和孟組成)脂Homomenthyl salicylate2510Quest In-ternational(NL)43.22250.615-20SALA9水楊酸-4-異丙基芐酯4-Isopropylbenzyl salicylate4Vebvy()39.59240.755-3PABA8對-二甲按基苯甲酸-2-乙酸已酯2-ehylhexyl 4-dime-thyla

14、minobenzoate2.58Van Dyk (NL)42.35304.20BENZ12,4-二羥基二苯甲酮2,4-Dithydroxyben-zophenone5.0-Sigma()27.05284.75BENZ22,2-二羥基-4-甲氧基二苯甲酮2,2-Dihydroxy-4-methoxyben-zophenone7.5-Saipo()29.85284.39BENZ32,2-二羥基-4,4-二甲氧基二苯甲酮-5-磺酸(鈉鹽)2,2-Dehydroxy-4,4-dimethoxyben-zophenone-5-sulfon-ic acid(sodium salt)10.0-Saipo()

15、3.27263.06BENZ42,2,4,4-甲羥基二苯甲酮2,2,4,4-Tetrahy-droxybenzophenone5-Saipo()17.05292.075-32BENZ52-羥基-4-甲氧基二苯甲酮2-Hydroxy-4-methoxyeben-zophenon510Sigma()33.84284.005-33BENZ62-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸(鈉鹽)2-Hydroxy-4-methoxy-benzophe-none-5-sulfonic acid (sodium salt)7.55(酸)Sigma()9.91266.825-17CAMP43-(4-甲基亞芐基茨烷-

16、2-酮)3-(4-Methylbenzy-lidene)-bornan-2-one2.56Merck(D)38.61294.025-27SSCR12-苯基苯咪唑-5-磺酸2-Phenylbenz-imidazole-5-sulphnic acid2.58(酸)Saipo()6.89278.295-14CINA7對-甲氧基肉桂酸二乙酸銨Diethanolammonium 4-methoxycinnamate2.53(酸)Saipo()18.49292.245-18CINA10對-甲氧基肉桂酸異戊酯Isoamyl 4-methoxycinnamate1.310Haarman & Reime

17、r (NL)37.73294.945-5CINA11對-甲氧基肉酸-2-乙酸已酯2-Ethylhexyl 4-methoxy-cinnamate10Givaudan (CH)42.29292.78* 此序號為化妝品衛(wèi)生標準(GB 7916-87)中表5的序號,5-11即表5中的序號11。2 原理化妝品中各種紫外吸收化合物由于其結構上的差異可被反相高效液相色譜分離。根據(jù)其保留時間及其紫外可見吸收光譜進行定性；峰面積進行定量。3 試劑3.1 甲醇:色譜級。3.1 乙腈:色譜級。3.3 紫外吸收劑貯備液:取表2-3-27紫外線吸收化合物各0.1000g,用甲醇溶解并定容至100.0ml。濃度為1.0

18、0mg/ml。紫外吸收劑標準溶液：取上述紫外吸收貯備液10.0ml,用甲醇定容至100ml,濃度為0.10mg/ml。3.4 高氯酸:分析純。3.5 高氯酸鈉:分析純。3.6 硫酸:分析純。3.7 水、去離子水及二次重蒸水。所有溶劑和溶液在進行HPLC分析前都經(jīng)0.45?m的微孔濾膜過濾及真空脫氣。4 儀器4.1 高效液相色譜儀：Varian 5000型（Z?g，Switzerland）。4.2 檢測器：Varian polychrom 9060型二極管珍列陣檢測器。4.3 積分儀：Varian 4290型。4.4 微量進樣器：10?l。5 分析步驟（1）5.1 稱取1g防曬化妝品于離心管中，

19、加0.25ml 2mol/L硫酸和10ml甲醇,30恒溫超聲水浴30min，然后以900r/min離心10min，提取上清液；殘留物按上述方法重新萃取一次，合并二次萃取液，用甲醇定容至25ml。5.2色譜條件5.2.1色譜柱：Lichrosorb RP-18 柱（250mm×4.6mm id.，10?m，Merck，Darmstadt，F(xiàn).R.G.）。5.2.2 流動相流動相A： 10-3molL的高氯酸和5×10-2molL高氯酸鈉的乙腈-水溶液（5+95，VV）；流動相B：1×10-3mo1L高氯酸和5×10-2mo1L高氯酸鈉的乙腈-水溶液3565

20、，VV。流動相C：1×10-3mo1L的高氯酸和5×10-2mo1L高氯酸鈉的乙腈-水溶液（8020，VV）。起始為流動相A，在20min內(nèi)線性梯度變換到流動相B：保持流動相B 5min，然后在40min內(nèi)梯度變換到流動相C。5.2.3 流速：2.5ml/min。5.2.4 柱溫：30。5.2.5 進樣體積：10?l。5.2.6 檢測波長：3l1 nm。5.2.7 檢測器靈敏度：0.32a.u.f.s.。5.2.8 紙速：0.5cmmin。5.3 測定5.3.1 定性取10?l樣品處理液（5.l），注入高效液相色譜儀。根據(jù)其保留時間（參照表2-3-27）及紫外可見吸收光譜定性。5.3.2 定量5.3.2.1 標準曲線移取0、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.0ml紫外吸收劑標準液于10ml具塞刻度管中，用甲醇稀釋至刻度。取10?l進行高效液相色