細胞凝集反應(yīng)實驗報告

1、；細胞生物學實驗報告一 實驗名稱：細胞凝集反應(yīng)二 實驗原理：細胞膜是雙層脂鑲嵌蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，脂和蛋白質(zhì)又能與糖分子結(jié)合為細胞表面的分支狀糖外被。目前認為：細胞間的聯(lián)系，細胞的生長和分化，免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生都和細胞表面的分支狀糖分子有關(guān)。凝集素（lectin）是一類含糖的（少數(shù)例外）并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細胞和刺激細胞分裂的作用。凝集素使細胞凝集是由于它與細胞表面的糖分子連接，在細胞間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補的糖可以抑制細胞的凝集。凝集素是指一種從各種植物，無脊椎動物和高等動物中提純的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白，因其能凝集紅血球(含血型物質(zhì))，故名凝集素。常用的為植物凝集素(Ph

2、ytoagglutin, PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Conconvalina,ConA)、麥胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等，凝集素是它們的總稱。凝集素不是來源或參與免疫反應(yīng)的產(chǎn)物，它們具有的某些“親合”特性，能被免疫細胞化學技術(shù)方法所應(yīng)用。血型鑒別實驗，也是凝集反應(yīng)的一種。三 實驗用品： 土豆塊莖顯微鏡，粗天平，載玻片，滴管2支，離心管2支PBS緩沖液：稱取NaCl7.2g，Na2HPO41.48g,KH2PO40.43

3、g,加蒸餾水，定容至1000ml，調(diào)pH值到7.2.4.2%的紅細胞四 實驗步驟：1. 稱取土豆去皮塊莖2g，加10mlPBS緩沖液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。2. 以無菌方法抽取兔子靜脈血液（加抗凝劑），加生理鹽水3ml，在1000r/min，離心5min，重復3次離心，最后按壓積紅細胞體積用生理鹽水配成1%紅細胞液。3. 分別用滴管吸取土豆凝集素和1%紅細胞液各一滴，置雙凹片左孔內(nèi)，充分混勻。4. 同時分別用滴管吸取PBS緩沖液和1%的紅細胞懸液各一滴，置雙凹片右孔內(nèi)，充分混勻，做對照實驗。5. 搖晃510min后，觀察有無發(fā)生細胞凝集并置顯微鏡下觀察。五 實驗結(jié)果：試

4、劑土豆凝集素PBS緩沖液現(xiàn)象在振蕩過程中，溶液中的紅細胞漸漸凝集成顆粒狀，逐漸聚攏，最后在液滴中形成一大塊血紅色血塊。在振蕩過程中，紅細胞不斷向中間靠攏，最終形成中間顏色較深，邊緣顏色較淺的紅細胞渾濁溶液。結(jié)果紅細胞發(fā)生凝集紅細胞未發(fā)生凝集說明結(jié)論土豆凝集素可使血液發(fā)生凝集，PBS緩沖液不能使血液發(fā)生凝集。圖左為PBS緩沖液對照 圖右為土豆凝集素 圖一 圖二 土豆凝集素（*4）圖一中為在振蕩了11min后，細胞凝集的現(xiàn)象，中間凝結(jié)成血塊，周圍叫澄清，邊緣為干涸的紅細胞凝結(jié)成的顆粒附著在玻片上。在低倍鏡（*4）下觀察，可以看到紅細胞凝結(jié)成塊狀，周圍液體近乎透明，說明紅細胞發(fā)生了凝集。 圖三 圖四 PBS緩沖液（*4）圖三中為在振蕩了之后，紅細胞并沒有聚集成顆粒狀，只是由于向心力左右而聚攏在一起呈透明凝膠狀。在低倍鏡（*4）下觀察可見到均勻的透明液體，沒有紅細胞凝結(jié)而成的顆粒。六 實驗分析： 實驗所得結(jié)果可見，紅細胞并沒有如預期那般在中央凝結(jié)成大血塊，而周圍近乎透明，分析其原因可能為：（1） 在滴加土豆凝集素時，沒有加入半滴，而是加入了一滴，反而導致了細胞凝集效果下降。