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文檔簡介
1、課題課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)一、課題目標:了解有關培養(yǎng)基的基礎知識,進行無菌技術的操作,進行微生物的培養(yǎng)。二、課題重點和難點:無菌技術的操作。三、技能目標:掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術,熟練、規(guī)范地進行無菌操作,成功地培養(yǎng)微生物。一、自學導引:一、自學導引:閱讀課本p14p20,完成優(yōu)化設計p16的自學導引。1、關于培養(yǎng)基:(1)按物理狀態(tài)來分:培養(yǎng)基可分為 和 。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。(2)按功能來分,可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。(3)按成分來分,可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。不管哪種培養(yǎng)基,一般都含有 、 、 和 。二、基
2、礎知識:二、基礎知識:1、比較各種培養(yǎng)基配方(見附錄3),熟悉馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基的配制和操作過程。2、關于無菌技術:(1)獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是 。(2)如何避免雜菌污染?(3)消毒和滅菌的區(qū)別:(4)實驗室常用的消毒和滅菌方法(見附錄4)三、實驗操作三、實驗操作本實驗用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基進行草坪病原菌的純化培養(yǎng),可分成制備培養(yǎng)基和純化病原菌兩個階段進行。1、制備馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(1)計算 根據馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基配方的比例,計算配制50ml的培養(yǎng)基,各種成分的用量。(2)稱量 準確稱取各種成分。(3)溶化 將10g去皮馬鈴薯切成薄片,加水50ml,加熱到沸騰,20min后,用紗布過濾。往濾液中加入1
3、g葡萄糖、1g瓊脂,用蒸餾水定容至50ml。用清水清洗三角錐瓶,并準備好棉花塞、牛皮紙。(4)滅菌 將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉移至三角錐瓶中,塞上棉花塞,包上牛皮紙,再放入高壓蒸氣滅菌鍋,在壓力為100kpa、溫度為121,滅菌1530min。將培養(yǎng)基用舊報紙包裹,放入干熱滅菌箱內,在160170 下滅菌2h。(5)倒平板 待培養(yǎng)基冷卻到50 左右時,在酒精燈附近倒平板。(倒平板操作見課本)2d后觀察平板,無雜菌污染才可用來接種。2、純化草坪病原微生物(1)把有斑點的草坪樣本若干條剪到培養(yǎng)皿中,加入酒精消毒,用清水清洗后,浸泡待用。(2)用鑷子把樣品夾到培養(yǎng)基上,每個培養(yǎng)基放五片青草。注意無菌操作,整個操作過程都應在酒精燈附近進行,鑷子在接種前和接種后都應灼燒,防止雜菌感染,接種后培養(yǎng)基依舊倒置。注意以上所有操作都不能講話,防止唾液中微生物污染平板。(3)7d后平板應出現幾種不同的微生物,這時可挑選一種進行純化。(4)培養(yǎng)基的制取同上。用鑷子夾取少量菌絲,快速接種到平板上,操
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