(公開課)微生物的實驗室培養(yǎng)(人教版選修1)

1、課題課題1 1 微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)1.1.提供營養(yǎng)和條件提供營養(yǎng)和條件 2.2.防止污染防止污染一一. .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.1.基本成分：基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無機鹽碳源、氮源、水、無機鹽碳源碳源無機碳源：無機碳源：有機碳源：有機碳源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源氮源無機氮源：無機氮源：有機氮源：有機氮源：NHNH4 4、NONO3 3- -牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素牛肉膏、蛋白

2、胨、酵母膏、尿素等等注：含注：含C C、H H、O O、N N的的有機物有機物是是異異養(yǎng)型微生物的：養(yǎng)型微生物的： 碳源碳源、氮源氮源、能源。能源。一一. .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質2.2.特殊營養(yǎng)：特殊營養(yǎng)：維生素（如乳酸桿菌）、堿基等維生素（如乳酸桿菌）、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH3.pH、氧氣的需求：、氧氣的需求：霉菌（霉菌（pHpH調至酸性）調至酸性）細菌（細菌（pHpH調至中性或微堿性）調至中性或微堿性）厭氧生物需提供無氧條件。厭氧生物需提供無氧條件。一一. .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：微生物生存的

3、環(huán)境和營養(yǎng)物質微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質4.4.培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有有無無 凝固劑瓊脂凝固劑瓊脂分離分離 鑒定鑒定工業(yè)工業(yè) 生產生產化學成分：化學成分：物理性質：物理性質：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基考點考點1、微生物的實驗室培養(yǎng)、微生物的實驗室培養(yǎng)一、培養(yǎng)基的分類一、培養(yǎng)基的分類 選擇培養(yǎng)基的應用選擇培養(yǎng)基的應用加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基分離固氮菌分離固氮菌不加含碳

4、有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物伊紅美藍培養(yǎng)基伊紅美藍培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌鑒別大腸桿菌問題討論 若硝化細菌、圓褐固氮菌、不固氮的藍藻混若硝化細菌、圓褐固氮菌、不固氮的藍藻混合在一起，我們配置什么樣的培養(yǎng)即可以將合在一起，我們配置什么樣的培養(yǎng)即可以將三種微生物分離？三種微生物分離？碳源碳源氮源氮源能源能源硝化細菌硝化細菌CO2氨氨氨氨圓褐固氮菌圓褐固氮菌糖類等含糖類等含碳有機物碳有機物N2有機物有機物不固氮的藍藻不固氮的藍藻CO2銨鹽、硝酸鹽銨鹽、硝酸鹽光光不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方調節(jié)調節(jié)pHpH2

5、 2、成分、成分水、碳源、氮源、水、碳源、氮源、 無機鹽、生長因子無機鹽、生長因子( (生長因子即細菌生長必需，而自身不能合成的生長因子即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物化合物, ,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) )真菌：真菌：5 56 6 細菌：細菌：6.5 6.5 7.5 7.5 有時會加一定量的氯化鈉以維持一定的滲透壓有時會加一定量的氯化鈉以維持一定的滲透壓5. 5. 配制原則配制原則目的明確：目的明確：營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當適宜的適宜的pHpH值：值：有機碳源有機碳源異養(yǎng)型：異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的根據(jù)微生物的種類、

6、培養(yǎng)目的種類、培養(yǎng)目的選擇原料選擇原料自養(yǎng)型：自養(yǎng)型： 不加碳源不加碳源加入緩沖劑加入緩沖劑細菌偏堿，真菌偏酸細菌偏堿，真菌偏酸（COCO2 2碳源）碳源）生產生產科研科研2.2.無菌范圍：無菌范圍：實驗操作空間消毒實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具滅菌實驗用具滅菌實驗操作過程實驗操作過程二二. .無菌技術：無菌技術：防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染1.1.消毒與滅菌：消毒與滅菌：酒精燈旁操作酒精燈旁操作超凈工作臺超凈工作臺比較消毒與滅菌(原理相同）比比較較項項理化因理化因素的素的作用作用強度強度消滅微消滅微生物生物的數(shù)的數(shù)量量芽孢和芽孢和孢子孢子能否能否被消

7、被消滅滅消消毒毒滅滅菌菌較為溫和較為溫和部分生活狀態(tài)部分生活狀態(tài)的微生物的微生物不能不能能能全部微生物全部微生物強烈強烈高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）（濕熱滅菌）灑精燈灼燒滅菌灑精燈灼燒滅菌干熱滅菌干熱滅菌（1 1）滅菌方法：）滅菌方法：3 3、常用的滅菌和消毒的方法、常用的滅菌和消毒的方法培養(yǎng)基、無菌水、培養(yǎng)基、無菌水、各種耐高溫的玻璃金屬器具各種耐高溫的玻璃金屬器具100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min15-30min需要保持干燥需要保持干燥耐高溫的玻璃金屬器皿耐高溫的玻璃金屬器皿160-170 160-170 下加熱下加熱1-2h1-2h接種環(huán)等金屬

8、器具接種環(huán)等金屬器具1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學藥劑消毒法、化學藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔爾酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒滅等進行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(2)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。滅菌。如果

9、需要，請選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手單個單個或少數(shù)菌體或少數(shù)菌體2.2.特征：特征：大小、形狀、光澤度、大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。顏色、透明度等。3.3.功能：功能：1.1.定義：定義：三三. .菌落菌落鑒定菌種鑒定菌種的重要依據(jù)的重要依據(jù)固體固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上大量繁殖大量繁殖子細胞群體子細胞群體1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至定容至1000mlNaCl 5g蛋白胨蛋白胨 10g

10、牛肉膏牛肉膏 5g瓊脂瓊脂20.0g四四. .大腸桿菌的純化培養(yǎng)：大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.1.計算：計算：培養(yǎng)基用量培養(yǎng)基用量2.2.稱量：稱量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解、少量水加熱溶解 取紙取紙蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl瓊脂瓊脂 補水定容補水定容4.4.調調pHpH、分裝、封口：、分裝、封口：5.5.滅菌：滅菌：6.6.倒平板：倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個細胞分散成

11、單個細胞, ,形成單個菌落形成單個菌落7無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)的溫室中培養(yǎng)2448小小時，以檢查滅菌是否徹底。時，以檢查滅菌是否徹底。 1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時，左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。以進行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什

12、么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)

13、，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。平板劃線法：平板劃線法：二二. .大腸桿菌的純化培養(yǎng)：大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：1.1.接種：接種：稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：2.2.培養(yǎng)：培養(yǎng)：將將接種后接種后的培養(yǎng)基和一個的培養(yǎng)基和一個未接種未接種的培養(yǎng)基的培養(yǎng)

14、基放入放入3737恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h12h24h24h后，后，觀察并記錄觀察并記錄形成單個菌落形成單個菌落分散成單個細胞分散成單個細胞,（三）平板劃線分離法（三）平板劃線分離法主要器具：主要器具：操作過程：操作過程：注意：注意：無菌操作方法：同前。無菌操作方法：同前。將培養(yǎng)皿將培養(yǎng)皿_（蓋在下），放于（蓋在下），放于_恒溫培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)箱中培養(yǎng)_小時。小時。在作第二次以及其后的劃線操作時，要從在作第二次以及其后的劃線操作時，要從上一次劃線的開始上一次劃線的開始_劃線。劃線。接種環(huán)、接種環(huán)、思考：若如上圖所示進行劃線分離，則接種環(huán)總思考：若如上圖所示進行劃線分離，則接種環(huán)總共進

15、行幾次灼燒滅菌？共進行幾次灼燒滅菌？恒溫培養(yǎng)箱。恒溫培養(yǎng)箱。每次劃線前接種環(huán)都要灼燒滅菌，再冷卻。每次劃線前接種環(huán)都要灼燒滅菌，再冷卻。末端末端倒置倒置 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？接種環(huán)？ 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃使下一次劃線時，接

16、種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。2 2、在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？、在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？為什么？劃線結束后灼燒接種環(huán)，及時殺死接種環(huán)上殘留的劃線結束后灼燒接種環(huán)，及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。3.3.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。以免

17、接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。4.4.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。殖而來的菌落。5 5、如何判斷接種操作是否符合無菌要求？、如何判斷接種操作是否符合無菌要求？如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本

18、一如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求。接種過程中，無菌操作還未達到要求。（四）（四）稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法主要器具：主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管玻璃三角刮刀、移液管或吸管操作過程：操作過程：先將培養(yǎng)菌液先將培養(yǎng)菌液稀釋稀釋（1010-5-51010-7-7倍）倍）用移液管或吸管取用移液管或吸管取0.1ml0.1ml稀釋度不同的菌液，加稀釋度不同的菌液，加在

19、平板上，用無菌玻璃三角刮刀均勻涂布在培養(yǎng)在平板上，用無菌玻璃三角刮刀均勻涂布在培養(yǎng)基平面上?；矫嫔?。在適當稀釋度下在適當稀釋度下，可培養(yǎng)得到相互分，可培養(yǎng)得到相互分開的的菌落。開的的菌落。將培養(yǎng)皿倒置（蓋在下），放于將培養(yǎng)皿倒置（蓋在下），放于 恒溫培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)小時。箱中培養(yǎng)小時。劃線分離方法簡單；涂布分離，易形成單菌落，劃線分離方法簡單；涂布分離，易形成單菌落，且可計數(shù)，但操作復雜些。且可計數(shù)，但操作復雜些。6 6支試管，分別加入支試管，分別加入9ml9ml無菌水無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液：梯度稀釋菌液：菌液菌液微量微量