HPLC異常問(wèn)題原因及解決辦法辦法

1、HPLC異常問(wèn)題原因及解決辦法辦法（一）壓力異常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在右側(cè)的列 表中參考相應(yīng)的解決方法。A、沒(méi)有壓力顯示，沒(méi)有流動(dòng)相流動(dòng)原因解決方法1、電源問(wèn)題1、接通電源，開機(jī)2、保險(xiǎn)絲被燒壞2、更換保險(xiǎn)絲3、控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗3、a采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定b、修理或更換控制器4、柱塞桿折斷4、更換柱塞桿5、泵頭內(nèi)有空氣5、溶劑脫氣、啟動(dòng)泵抽出空氣6、流動(dòng)相不足6、a、補(bǔ)充流動(dòng)相b、更換入口濾頭7、單向閥損壞7、更換單向閥&漏液&擰緊或更換手緊接頭B、流動(dòng)相流動(dòng)正常，但沒(méi)有壓力顯示原因解決方法1、儀表?yè)p壞1、更換儀表2、壓力傳感器損壞2

2、、更換壓力傳感器C、壓力持續(xù)偏高原因解決方法1流速設(shè)定過(guò)高1、調(diào)整流速設(shè)定2、柱前篩板堵塞2、a在允許情況下反沖色譜柱b、更換篩板C、更換色譜柱3、流動(dòng)相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相晶沉淀b、沖洗色譜柱4、色譜柱選擇不當(dāng)4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱5、進(jìn)樣閥損壞5、清洗或更換進(jìn)樣閥6、柱溫過(guò)低6、提高溫度7、控制器失常7、修理或更換控制器8、保護(hù)柱阻塞&清洗或更換保護(hù)柱9、在線過(guò)濾器阻塞9、清洗或更換在線過(guò)濾器D、壓力持續(xù)偏低原因解決方法1流速設(shè)定過(guò)低1、調(diào)整流速2、系統(tǒng)漏液2、確定漏液位置并維修3、色譜柱選擇不當(dāng)3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱4、柱溫過(guò)高4、降低溫度5、控制器失常5、維

3、修或更換控制器E、壓力不斷上升原因解決方法1見列表C1、見列表CF、壓力降為零原因解決方法1見列表A、B1、見列表A、BG、壓力不斷下降，但不回零原因解決方法1見列表D1、見列表DH、壓力波動(dòng)原因解決方法1泵中有氣體1、a溶劑脫氣b、從泵中除去氣體2、單向閥損壞2、更換單向閥3、泵密封損壞3、更換泵密封4、脫氣不充分4、a溶劑脫氣b、改變脫氣方法（使用在線脫氣法等）5、系統(tǒng)漏液5、確定漏液位置并維修6、使用梯度洗脫6、由于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng)HPLC日常維護(hù)辦法之二：漏液漏液通?？梢酝ㄟ^(guò)擰緊或更換管路接頭來(lái)解決漏液的問(wèn)題。但值得注意 的是過(guò)份擰緊會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。

4、如果通過(guò)稍 微擰緊接頭不能解決漏液的問(wèn)題，就必須將接頭取下，檢查是否損壞（例如，卡套損壞、密圭寸表面有雜質(zhì)）；損壞的接頭應(yīng)該更換掉。A、接頭處漏液原因解決方法1接頭松動(dòng)1、擰緊2、接頭磨損2、更換3、接頭過(guò)緊3、a擰松，再重新擰緊b、更換4、接頭被污染4、a拆下清洗b、更換5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件B、 泵漏液原因解決方法1單向閥松動(dòng)1、a擰緊單向閥（不必?cái)Q的過(guò)緊）b、更換單向閥2、接頭松動(dòng)2、擰緊接頭（不必?cái)Q的過(guò)緊）3、混合器密封損壞3、a更換混合器密封b、更換混合器4、泵密封損壞4、維修或更換泵密封件5、壓力傳感器損壞5、維修或更換壓力傳感器6、脈沖阻尼器損壞6、更換脈沖阻尼器7

5、、比例閥損壞7、a檢查隔膜，如果漏液立即更換b、檢查手糸接頭，損壞的立即更換8、放空閥的損壞& a擰緊放空閥b、更換放空閥C、進(jìn)樣閥漏液原因解決方法1轉(zhuǎn)子密封損壞1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥2、定量環(huán)阻塞2、更換定量環(huán)3、進(jìn)樣口密封松動(dòng)3、調(diào)整4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適4、使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針5、廢液管中產(chǎn)生虹吸5、保持廢液管咼于廢液液面6、廢液管阻塞6、更換或疏通廢液管D、色譜柱漏液原因解決方法1尾端接頭松動(dòng)1、擰緊接頭2、卡套內(nèi)有填料2、拆下、清洗卡套、重新安裝3、篩板厚度不合適3、使用合適的篩板（參考下表）篩板選擇指導(dǎo)物質(zhì)粒徑篩板孔徑3-4u0.5u5-20u2uE、檢測(cè)器漏液原因解決方法1

6、流通池墊片損壞1、a、避免過(guò)大的背景壓力（壓力降）b、更換墊片2、流通池窗破碎2、更換窗口3、手緊接頭漏液3、擰緊或更換4、廢液管阻塞4、更換廢液管5、流通池阻塞5、重新安裝或更換HPLC日常維護(hù)辦法之三：譜圖的各種問(wèn)題液相色譜系統(tǒng)的許多問(wèn)題都能在譜圖上反映出來(lái)。 其中有一些問(wèn)題可以通過(guò)改變?cè)O(shè) 備參數(shù)得到解決；而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的 正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。A、峰拖尾原因解決方法1篩板阻塞1、a、反沖色譜柱b、更換進(jìn)口篩板C、更換色譜柱2、色譜柱塌陷2、填充色譜柱3、干擾峰3、a、使用更長(zhǎng)的色譜柱b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤4、

7、調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱峰5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生5、a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)反應(yīng)性修飾劑圖b、更改色譜柱B、峰前延原因解決方法1柱溫低1、升高柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑3、樣品過(guò)載3、降低樣品含量4、色譜柱損壞4、見 A1、A2C、峰分叉原因解決方法1、保護(hù)柱或分析柱污染圖1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果 必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻 塞，拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然 存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。?果問(wèn)題仍然存在，入口可能被阻 塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相2、改變樣品溶劑。如果可能采取

8、 流動(dòng)相作為樣品溶劑。D、峰變形原因解決方法1樣品過(guò)載1、減少樣品載量E、早出的峰變形原因解決方法1樣品溶劑選擇不恰當(dāng)1、a、減少進(jìn)樣體積b、運(yùn)用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解決方法1柱外效應(yīng)1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）b、使用小體積的流通池G、K '增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重原因解決方法1二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）C、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）d、更換一支柱子2、二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）C、加入水（或多官能團(tuán)化合物）d、試用另一種方法3、

9、二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì)3、加入三乙胺（或堿性樣品）H、酸性或堿性化合物的峰拖尾原因解決方法1緩沖不合適1、a使用濃度50-100mM的緩沖液b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液I、額外的峰原因解決方法1、樣品中有其他組份1、正常2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰3、a檢查流動(dòng)相是否純凈b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑C、減少進(jìn)樣體積J、保留時(shí)間波動(dòng)原因解決方法1溫控不當(dāng)1、調(diào)好柱溫2、流動(dòng)相組分變化2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）3、色譜柱沒(méi)有平衡3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱K、保留時(shí)間不斷變化原因解決方法1流速變化1、重新設(shè)定流速2、泵中有氣

10、泡2、從泵中除去氣泡3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng)3、a更換合適的流動(dòng)相b、選擇合適的混合流動(dòng)相L、基線漂移原因解決方法1柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫 度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通 常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、 較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它 光電類檢測(cè)器。）1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器圖2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件2、使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。）的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前 進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗 流通池。如有需要，可以用1N的 硝酸。（不要用鹽酸）4、檢測(cè)器出口阻塞。（高壓造成

11、4、取出阻塞物或更換管子。參考流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個(gè) 問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流 速。6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，變化時(shí)更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品溶劑配成質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（咼K'&使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而樣之間或在分析過(guò)程中，定期用表現(xiàn)出個(gè)逐步升咼的基線。強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但

12、檢測(cè)器未調(diào)9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力整。學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。10、檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收10、將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)波長(zhǎng)處。處M、基線噪音（規(guī)則的）原因解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空 氣1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去 檢測(cè)器或泵中的空氣。2、漏液圖2、見第三部分。檢查管路接頭是 否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽 析出和不正常的噪音。如有必要， 更換泵密圭寸。3、流動(dòng)相混合不完全3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響（柱溫過(guò)咼，檢測(cè)器 未加熱）4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀， 檢查干擾是否來(lái)自于外部，加

13、以 更正。6、泵振動(dòng)6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器N、基線噪音（不規(guī)則的）原因解決方法1、漏液圖1、見第三部分。檢查接頭是否松 動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出 和不正常的噪音。如有必要，更 換密封。檢查流通池是否漏液。2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動(dòng)相的組成。3、流動(dòng)相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動(dòng)相4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問(wèn)題4、斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源， 檢杳并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡6、清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污 染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、檢測(cè)器燈能量

14、不足&更換燈9、色譜柱填料流失或阻塞9、更換色譜柱10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器，在流動(dòng) 相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的 混合裝置0、寬峰原因解決方法1流動(dòng)相組成變化1、重新制備新的流動(dòng)相2、流動(dòng)相流速太低2、調(diào)節(jié)流速3、漏液（特別是在柱子和檢測(cè)器3、見section 3。檢杳接頭是否松之間）動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密圭寸。4、檢測(cè)器設(shè)定不正確4、調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響5、a柱子過(guò)載a、小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響是 100ul）以 1: 10 或 1: 100應(yīng)過(guò)大的比例稀釋樣品C、柱子

15、與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流或管路內(nèi)徑太大通池d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)c、使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管圖路d、減少響應(yīng)時(shí)間6、緩沖液濃度太低6、增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效7、更換保護(hù)柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較&更換同樣類型的色譜柱。如果低新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷9、打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果11、柱溫過(guò)低11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過(guò)75 C12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)P、分離度降低原因解決方

16、法1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化）1、重新配置流動(dòng)相2、保護(hù)柱或分析柱阻塞圖2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必 要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻 塞，可進(jìn)行反沖。如果問(wèn)題仍然 存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染 物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕?序。如果問(wèn)題仍然存在，進(jìn)口可 能阻塞了，更換入口處的篩板或 更換色譜柱。Q、所有的峰面積都太小原因解決方法1檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)高1、減少衰減的設(shè)定2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)3、進(jìn)樣量太少3、增大進(jìn)樣量4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接R、所有的峰面積都太大原因解決方法1檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)低1、米取較大的衰減2、進(jìn)樣過(guò)多2、減少進(jìn)樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀HPLC日常維護(hù)辦法之四：你需要運(yùn)用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問(wèn)題。你最好養(yǎng)成習(xí)慣，每天 花上幾分鐘運(yùn)用你的感官（除了味覺(jué)）來(lái)“感覺(jué)”你的液相色譜是否 存在問(wèn)題，這樣可以幫助你迅速找到問(wèn)題所在。例如：在你看到漏液 之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問(wèn)題是可以通過(guò)眼睛看到A、 溶劑的氣味原因解決方法1、漏液1、見 section 32、濺出2、a檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原因解決方法1、儀器過(guò)熱