微生物實驗問題與答案

1、微生物實驗問題與答案一、光學(xué)顯微鏡的操作及細菌、放線菌個體形態(tài)的觀察1、為什么油鏡的放大倍數(shù)比普通物鏡大？答：油鏡能減少光的折射，進而提高視野的亮度；通過提高顯微鏡的數(shù)值口徑增加顯微鏡的分辨力。2、數(shù)值口徑的表達公式？答案：N.A=n ×sin ，n為介質(zhì)折射率；為光線最大入射角的半數(shù)。3、顯微鏡數(shù)值口徑與分辨力的關(guān)系？答案：分辨力是指顯微鏡能辨別兩點之間最小距離的能力，它與光的波長成反比，與數(shù)值口徑成正比。4、油鏡的使用與普通物鏡有何不同？答案：油鏡必須借助于光折射率等于或接近于玻璃的試劑，如香柏油等才能使用，而普通物鏡則不需要；油鏡是由100×物鏡與香柏油構(gòu)成，而普通物

2、鏡則限于10×物鏡、40×物鏡等。5、使用油鏡時應(yīng)特別注意什么？答案：上下調(diào)節(jié)鏡頭時應(yīng)使用微螺旋，否則容易損壞鏡頭；應(yīng)使油鏡始終浸泡在香柏油中，否則就不是油鏡；使用完畢后，必須用搽鏡紙沾取二甲苯等有機溶劑搽去殘留的油跡，否則會玷污油鏡。6、什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？答：在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進行觀察時，物像將保持基本準焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細調(diào)節(jié)器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤

3、操作而損壞鏡頭或載玻片。7、 根據(jù)你的實驗體會,談?wù)剳?yīng)如何根據(jù)所觀察微生物的大小,選擇不同的物鏡進行有效地觀察答：細菌用油鏡，真菌用高倍鏡。都是先用低倍鏡找到目標后，再用高倍鏡調(diào)到合適的視野和合適的清晰度。答：放線菌、酵母菌、多細胞真菌相對較大，用放大40倍的物鏡就可以看了，細菌小，要用放大1000倍的物鏡看，感覺還很小。病毒那就要用電子顯微鏡看了。二、微生物染色1、單染色的原理是什么？答案：主要基于微生物細胞能與各種染料進行不同程度地結(jié)合。2、單染色過程中，為什么干燥固定？答案：因為通過干燥可以使菌體蛋白變性，細胞質(zhì)凝固，進而可以使菌體緊密地附著于載玻片表面。3、單染色過程中，為什么水洗時水

4、流要緩慢地從載玻片上端流下？答案：因為如果水流直接沖洗有菌部位，容易使菌體被沖洗掉。4、為什么載玻片要完全干燥后，才能使用油鏡？答案：因為香柏油與水不相溶，容易造成光線發(fā)生折射或散射，一方面無法構(gòu)成油鏡，另一方面也會降低視野的亮度。5、革蘭氏染色的原理是什么？答案：對于G+細菌來說，當(dāng)用乙醇脫色時，由于肽聚糖含量高，網(wǎng)孔小，再加上脂量低，所以乙醇脫色后，進一步地縮小了網(wǎng)孔，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物無法脫出，第二次用番紅染色時無法著色，進而呈紫色；對于G-細菌來說，當(dāng)用乙醇脫色時，由于肽聚糖含量低，網(wǎng)孔大，再加上脂量高，所以乙醇脫色后，進一步地擴大了網(wǎng)孔，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被脫出，第二次用番紅染色時著色，

5、進而呈紅色。6、革蘭氏染色時，為什么要加碘液？答案：碘可以與結(jié)晶紫染料形成較大的復(fù)合物，從而可以阻止結(jié)晶紫向細胞外滲透；另一方面也可以增加結(jié)晶紫與細胞質(zhì)的親和力。7、革蘭氏染色時，為什么要用酒精沖洗？答案：加酒精是為了溶解細胞壁中的脂類和脫去細胞內(nèi)的有機染料。8、革蘭氏染色時，為什么不能涂片太厚？答案：涂片太厚，容易使菌體重疊，造成假陽性。9、革蘭氏染色時，為什么說脫色（乙醇脫色）是最關(guān)鍵的一步？答案：如果脫色時間較短，則容易使革蘭氏陰性細菌脫色不完全，造成假陽性；如果脫色時間較長，則容易使革蘭氏陽性細菌內(nèi)的染料被脫出，造成假陰性。10、革蘭氏染色時，如何證明你的染色操作是正確的？答案：將革蘭

6、氏陽性細菌葡萄球菌與革蘭氏陰性細菌-大腸桿菌制成混合涂片，經(jīng)革蘭氏染色后，如果葡萄球菌呈紫色，而大腸桿菌呈紅色，則說明染色操作是正確的。11、固定的目的之一是殺死菌體，這與自然死亡的菌體有何不同？自然死亡的菌體本身已經(jīng)部分自溶，結(jié)構(gòu)已經(jīng)改變。固定殺死細菌時細菌結(jié)構(gòu)是保持死亡時的狀態(tài)的。12、不經(jīng)復(fù)染這一步能否區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌？能。在酒精脫色后，不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽性菌（G），被酒精脫色為革蘭氏陰性菌。最后一步用番紅染液復(fù)染，是為了讓結(jié)果更清楚。三、無菌操作（補充）1、無菌操作過程中，為什么試管或三角燒瓶在開塞或回塞之前，口部要過火幾次？答案：這樣可以燒去管口或瓶口的微生物

7、。2、開塞后的試管或三角燒瓶口部微生物要平放？答案：如果口部向上或朝下，則容易通過空氣對流污染培養(yǎng)物。3、接種針接種前后微什么要過火焚燒？答案：主要防止微生物培養(yǎng)物之間交叉污染，也防止污染操作臺面。4、.試述高壓蒸汽滅菌的操作方法和原理。答：高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達121。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。 操作方法：加水裝料、加蓋排氣升壓、保壓、和降壓取料5、如何確定平板上某單個菌落是否為純培養(yǎng)？請寫出實驗的主要步驟。答：通過觀察菌落特征；單個菌落再

8、次劃線分離。6、為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需溫度高 時間長？在濕熱條件下，有水蒸汽的作用：a高溫水蒸汽導(dǎo)熱比干空氣要快；b高溫水蒸汽冷凝變水時有放熱過程；c高溫水蒸汽能穿透細菌的細胞膜，直接進入細胞內(nèi)破壞細胞；c高溫水蒸汽能水解一部分細胞結(jié)構(gòu)，加速導(dǎo)熱。（濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；濕熱的穿透力比干熱大；濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出226kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。）8、人工培養(yǎng)基：人工配制的供微生物生長繁殖并積累代謝產(chǎn)物的一種營養(yǎng)基質(zhì)。9、.天然培養(yǎng)基：由化學(xué)

9、成分不完全清楚的天然物質(zhì)如馬鈴薯,麩皮等配制而成的培養(yǎng)基。10、巴氏消毒：巴氏消毒是法國微生物學(xué)家巴斯德發(fā)明的一種消毒方法。是在62-63的條件下,保溫半小時殺死微生物的營養(yǎng)體(主要是病原菌)的方法。11、間歇滅菌：利用100的溫度殺死微生物的營養(yǎng)體.每次1小時連續(xù)三天,中間的空隙時間讓未殺死的芽胞萌發(fā)成營養(yǎng)體,在下一次100的溫度下被殺死。如此反復(fù)兩次可將培養(yǎng)基的微生物(包括芽胞)全部殺死。該方法適用于沒有高壓滅菌器的地方進行滅菌處理。12、過濾除菌:利用一定孔徑的濾膜阻止微生物的通過而除去溶液中或者空氣中微生物的除菌方法13、消毒:只殺死微生物的營養(yǎng)體(主要是病原菌),而不能殺死微生物的芽

10、胞的除菌方法。14、滅菌:利用物理或化學(xué)方法殺死所有微生物包括細菌的芽胞的除菌方法稱為滅菌。四、細菌的染色及活細菌的運動性觀察1、細菌的鞭毛染色的原理答案：細菌的鞭毛較細，在普通光學(xué)顯微鏡下無法觀察。但可以通過對鞭毛進行染色，再結(jié)合染料堆積使鞭毛加粗，從而便可以在普通光學(xué)顯微鏡下觀察鞭毛的形態(tài)。一定要充分洗凈A液后再加B液，否則背景很臟，影響觀察效果。2、鞭毛染色時，應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？答案：用新培養(yǎng)的并且轉(zhuǎn)接2-3次的菌種為易，因為老化菌種的鞭毛易脫落；載玻片要干凈，防止鞭毛變態(tài)；挑菌時應(yīng)不帶培養(yǎng)基；干燥后應(yīng)盡快染色防止鞭毛脫落。3、細菌運動性觀察時，菌液中的細菌與灰塵顆粒的運動有什么區(qū)別？答案

11、：菌液中的細菌常常會由一個位置運動到另一個位置，而灰塵顆粒的運動屬于布郎運動，位置基本不變。4、一般運動性細菌的運動方式有幾種？答案：細菌運動主要包括直線、波浪或翻滾式運動。5、如何用懸滴法觀察細菌運動？答案：懸滴法觀察細菌運動。取干凈的凹玻片與蓋玻片個一塊，并在蓋玻片的四角涂少許凡士林。加一滴變形桿菌菌液于蓋玻片中央，并輕輕翻轉(zhuǎn)，使菌滴直對凹玻片凹陷處，輕壓于凹玻片上。鏡檢，觀察細菌的運動情況。在觀察細菌運動時，應(yīng)注意區(qū)分非菌顆粒與細菌細胞，前者的運動屬于原地布朗運動，而后者做移位運動。6、芽孢染色的原理是什么？用單染色可以看到芽孢嗎？答案：由于芽孢壁厚，不易著色，所以須采用著色力強的染色劑

12、，并需加熱，以便提高芽孢壁的透性，使染料易于進入菌體。用單染色可以將看到芽孢，但是無色的。7、芽孢染色加熱時，為什么染料不能沸騰？答案：因為染料沸騰后，容易時菌體從載玻片上脫落。8、莢膜染色時，為什么莢膜不易著色？答案：莢膜主要成分是多糖，很難著色，同時水洗時多糖易溶于水，因而只能采用襯托的方法將背景與菌體染色，而襯托出白色而透明的莢膜。9、莢膜染色時，為什么不允許加熱？答案：莢膜很薄，加熱容易變形。10、如何觀察細菌莢膜？答案：采用襯托法進行。取干凈的普通載玻片，并在載玻片的一端滴加蒸餾水，將巨大芽孢桿菌輕沾于水滴中。加少許墨汁于菌滴中，加蓋玻片，輕輕擠壓，除去多余的液體。鏡檢，可以觀察到菌

13、體周圍的白色莢膜。11、細菌與酵母菌的菌落有何區(qū)別答：細菌菌落光滑，易于基質(zhì)脫離；酵母菌菌落較細菌菌落大而厚且酵母菌的菌落較濕潤12、能否用血球計數(shù)板在油鏡下進行計數(shù)？為什么？ 答：不能。計數(shù)時滴在血球計數(shù)板上的是菌懸液，相當(dāng)于在鏡頭和計數(shù)板直接加了一層水。13.菌種保藏中，石蠟油的作用是什么？答：作用是密封。防止空氣進入，降低菌種的生理活性。14.經(jīng)常使用的細菌菌株，使用哪種保藏方法比較好？答：用甘油冷凍保藏方法保存，在液體培養(yǎng)基中加入百分子十五的甘油，然后低溫冷凍（-7度）左右。五、 酵母菌形態(tài)觀察及死活細胞鑒別1、呂氏堿性美藍染液濃度和作用時間的不同對酵母菌死細胞數(shù)量有何影響?是分析其原

14、因。美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變成為無色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細胞是無色的，而死細胞或代謝作用微弱的衰老細胞則呈藍色或淡藍色，借此即可對酵母菌的死細胞和活細胞進行鑒別。 美藍濃度高了，代謝不太活躍的活細胞也會被染色，從而使觀察到的死細胞較多，活細胞較少；反之，則代謝微弱的細胞也能還原美藍，不被染色，從而使觀察到的死細胞較少，活細胞較多。2、顯微鏡下細菌 放線菌 酵母菌和霉菌的主要區(qū)別是什么？放線菌與細菌需要在油鏡下才能觀察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍鏡

15、下即可看到。細菌：為細而短的單細胞微生物（個體微?。?，主要形態(tài)有：球、桿、螺旋狀等。（部分桿菌還可形成芽孢）放線菌：存在分枝絲狀體和菌絲體，革蘭氏陽性菌，有孢子絲和孢子（球形、橢圓形、桿狀、柱狀）。酵母菌：單細胞，菌體呈圓球、卵形或橢圓形，少數(shù)呈檸檬形、尖形等。菌體比細菌大幾倍到幾十倍，部分處于出芽繁殖過程中菌體還可觀察到芽體，大多數(shù)菌體上還有芽痕。霉菌：菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多，常是細菌菌體寬度的幾倍到幾十倍，在低倍鏡下即可看到，并還可看到孢子囊梗、囊軸、孢子囊、包囊孢子等。3、測定細胞數(shù)目的方法有直接計數(shù)法（如血球計數(shù)板計數(shù)計數(shù)）和間接計數(shù)法（如平板菌落計數(shù)法） 顯微鏡計數(shù)

16、的優(yōu)點是直觀、快速、操作簡單，缺點是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和，且難以對活動性強的活菌進行計數(shù)。 其中血細胞計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，常用于個體相對較大的酵母細胞，霉菌孢子等計數(shù)。4、稀釋平板計數(shù)法將一定量的樣品經(jīng)十倍稀釋后,用平板培養(yǎng)最后三個稀釋度的樣品稀釋液。待菌落長出后,計數(shù)出某一稀釋度的菌落數(shù)后再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品中的含菌數(shù)。5、顯微直接計數(shù)利用血球計數(shù)板或細菌計數(shù)板在顯微鏡下測計出每小格的微生物細胞數(shù)量后,再換算出單位體積中微生物細胞總數(shù)的測數(shù)方法。六、環(huán)境因子對微生物生長的影響1、pH對微生物生長作用的原理是什么？細菌、真菌和放線菌所需要的最佳pH為多少？答案：pH

17、對微生物生長作用的原理是：使蛋白質(zhì)和核酸等大分子物質(zhì)的電荷發(fā)生變化影響微生物活性；影響細胞膜表面電荷，進而影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收；改變環(huán)境中營養(yǎng)物質(zhì)的可給性及有毒物質(zhì)的毒性。細菌要求pH為7.0-7.2，真菌pH自然，放線菌pH為7.2-7.4。2、重金屬對微生物影響的機理是什么？答案：使菌體變性或與-SH基結(jié)合，導(dǎo)致微生物酶失活。3、氯化鈉等鹽類對微生物的影響機理？答案：通過調(diào)節(jié)微生物細胞的滲透壓影響微生物。七、培養(yǎng)基的配制、消毒、滅菌與土壤微生物分離1、培養(yǎng)基配制原則是什么？答案：目的明確；根據(jù)微生物的營養(yǎng)需要；注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度配比；要控制具體pH、滲透壓、水活度和氧化還原電位；

18、經(jīng)濟。2、培養(yǎng)基配制應(yīng)注意什么？答案：稱取藥品蛋白胨時要迅速，防止吸潮；培養(yǎng)基融化時要不斷攪拌以防燒焦；針對不同的培養(yǎng)基要調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)膒H；培養(yǎng)基滅菌時應(yīng)按高壓蒸汽滅菌鍋的操作過程進行，以免危險發(fā)生。滅菌后培養(yǎng)基要及時處理，防止凝固或污染。3、為什么培養(yǎng)微生物時，平板培養(yǎng)基要倒置？答案：第一培養(yǎng)基倒置可以防止冷凝水落到培養(yǎng)基表面，使菌落分散開；第二可以防止空氣對流，污染培養(yǎng)基。4、為什么高壓蒸汽滅菌效果好？答案：因為在濕熱情況下，濕熱的穿透力強，菌體吸收水分使蛋白質(zhì)容易凝固，而且當(dāng)蒸汽與菌體接觸后冷凝成水時可以放出熱量，進而提高鍋內(nèi)的溫度。5、如何使用高壓蒸汽滅菌鍋？答案：首先檢查滅菌鍋內(nèi)的水是

19、否沒過電阻絲，然后放上裝有物品的內(nèi)桶。注意物品不要過多。將蓋子上的通氣管插入內(nèi)桶壁上的管槽內(nèi)，蓋上蓋子，用對角的方式旋緊螺扣，接通電源，開始滅菌。當(dāng)壓力指針達到0.05KPa時打開放氣閥放氣，反復(fù)放氣三次以便排除鍋內(nèi)的冷空氣。放氣結(jié)束后，使指針升到壓力為0.1KPa，并通過人為控制電源的開閉，在0.1KPa壓力下維持20-30min。滅菌結(jié)束后，通過冷卻使鍋內(nèi)的壓力下降到0.05，打開壓力閥放氣，待壓力為0時，對角旋開螺扣，取出物品即可。6、分離土壤微生物時，細菌、酵母、真菌和放線菌的培養(yǎng)基分別是什么？答案：細菌：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 PH 7.0-8.0放線菌：高氏一號培養(yǎng)基 PH 7.5-8.5

20、酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基 PH 3.8-6.0 YPDA培養(yǎng)基霉菌：馬鈴薯培養(yǎng)基 PH 4.0-5.87、做空白對照實驗的目的?答：目的是檢驗培養(yǎng)基是否受到污染，驗證無菌操作。8、半固體穿刺法將待檢細菌穿刺接種在半固體試管培養(yǎng)基中,若細菌僅沿穿刺線生長,說明細菌不運動。若細菌沿穿刺線向周圍擴散生長,說明細菌有運動性。9、為什么分裝于三角瓶中的培養(yǎng)基裝量不能過多？答：分裝量太多，三角瓶內(nèi)培養(yǎng)極易沾染瓶口及棉塞而造成污染；分裝量太多不利于震蕩搖勻；分裝量太多會使培養(yǎng)基滅菌不徹底。10、選擇培養(yǎng)基:根據(jù)使用的目的,控制培養(yǎng)基的組成成分,使之有利于某種微生物的生長而限制其它微生物的生長,從而能從自然界混雜

21、的群體中分離出某一種單一的微生物。如無氮培養(yǎng)基用來分離土壤中的自生固氮菌。11、加富培養(yǎng)基:在基本培養(yǎng)基中加入血清,動植物組織液或者其它生長因子而配制出來的營養(yǎng)特別豐富的培養(yǎng)基。12、鑒別培養(yǎng)基:根據(jù)微生物的代謝特點,通過指示劑的顯色反應(yīng),用以鑒別不同微生物的培養(yǎng)八、細菌的生理生化反應(yīng)1、你如何解釋淀粉酶是胞外酶？答案：淀粉酶是胞外酶可以通過觀察固體培養(yǎng)基表面的淀粉降解圈或透明圈的大小來解釋。2、糖發(fā)酵過程中如何證明有氣體產(chǎn)生？答案：在糖發(fā)酵過程中，有些微生物可以利用糖產(chǎn)生有機酸并產(chǎn)生氣體，我們可以在發(fā)酵管中加入得漢氏小管，如果產(chǎn)氣，小管內(nèi)就會有氣泡存在。3、吲哚實驗的原理是什么？答案：吲哚實

22、驗的原理是：某些微生物可以分泌色氨酸酶，該酶將蛋白質(zhì)中的色氨酸分解為吲哚和丙酮酸，吲哚可以與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色的玫瑰吲哚，進而證明色氨酸的分解。4、甲基紅實驗的原理是什么？答案：甲基紅在pH中性時呈現(xiàn)橘黃色，而在酸性條件下則為紅色，所以當(dāng)葡萄糖被分解產(chǎn)生有機酸時，可以甲基紅在酸性條件下則為紅色。5、伏-普實驗的原理是什么？答案：伏-普實驗的原理是：該實驗是用來檢驗?zāi)承┘毦闷咸烟菚r可產(chǎn)生中性末端產(chǎn)物，如丙酮酸，丙酮酸進行縮合、脫羧生產(chǎn)乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件下能被氧氣氧化成二乙酰。二乙?？梢耘c蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。6、硫化氫實驗原理是什么？答案：硫化氫實驗原理是：某些腸道細菌可以分解含硫有機物，并形成硫化氫，該氣體與醋酸鉛反應(yīng)形成黑色的硫化鉛沉淀。34.大腸菌群檢驗中為什么首先要用乳糖膽鹽發(fā)酵管？答：因為乳糖膽鹽發(fā)酵管中的成分有溴甲酚紫，中性時呈藍紫色，酸性時呈黃色，如果顏色不變（呈藍紫色），說明無產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn)酸的大腸菌群；膽鹽可以抑制其它細菌生長繁殖；看杜氏小管中是否有氣體，判斷是否為分解