常用染料的激發(fā)與發(fā)射

1、常用熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長Fluorescent Dye （熒光染料）Excitation （激發(fā)波長， nm ）Emission （發(fā)射波長， nm ）Cy2 ?489506GFP （Red Shifted）488507Y0- PRO ? -1491509YOYO ? -1491509Calcein494517FITC494518<1FluorX494519Alexa ? 488490520Rhodami ne 110496520ABI,5-FAM494522Oregon Green ?500503522Oregon Green ? 488496524RlboGree n ?5005

2、25Rhodam ine Gree n ?502527Rhodami ne123507529Magn esium Gree n ?506531Calcium Gree n ?_506533TO-PRO ? -1514533TOTO-1514533ABI,JOE520548BODIPY? 530/550530550Dil549565BODIPY?R542568BODIPY7558/568558568BODIPY7564/57O564570Cy3 ?550570Alexa ? 546555570TRITC547572Magn esium Orange ?550575Phycoerythrin,R

3、& B565575Rhodam ine Phalloidin550575Calcium Orange ?549576Pyro nin Y555580Rhodam ine B555580ABI,TAMRA560582Rhodami ne Red ?570590Cy3.5 ?581596ABI,ROX588608Calcium Crims on ?590615Alexa ? 594590615Texas Red595615Nile Red549628YO- PRO ? -3612631YOYO ? -3612631R-Phycocya nin618642C-Phycocya nin6206

4、48TO-PRO ? -3642660TOTO-3642660DiD DilC 1 (5)644665Cy5 ?649670Thiadicarbocya nine651671Cy5.5675694備注：發(fā)射波長的顏色及頻率顏色波頻率紅色約625-740納米約 480-405兆赫橙色約 590-625納米約 510-480兆赫黃色約 565-570納米約 530-510兆赫綠色約 500-565納米約 600- 530兆赫青色約 485-500納米約 620- 600兆赫藍色約 440-485納米約 680-620兆赫紫色約 380-440納米約 790- 680兆赫熒光染料的使用口丫口定橙：葉

5、嚏橙是最經(jīng)典的靈敏的熒光染料，它可對細胞中的DNA和RNA同時染色而顯示不同顏色的熒光，DNA呈綠色熒光，RNA呈橙紅色熒光。EB:染 色 DNA和RNA熒光素雙醋酸酯(FDA)： FAD本身無熒光，無極性，可透過完整的原生 質膜。一旦進入原生質體后，由于受到酯酶分解而產生具有熒光的極性物質熒光 素。它不能自由出入原生質膜，因此有活力的細胞能產生熒光，無活力的原生質體不能分解FAD無熒光產生。5mgFDA溶于1 ml丙酮中，避光4C下貯存，使用 時取0.22mlFDA貯存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中使用時,使最終濃度為0.01%。 熒光染料HO33342和若丹明123:活細胞雙熒光染

6、色觀察細胞核和線粒體。一般的 生物染料不能穿透細胞膜，只有當細胞被固定后改變了細胞膜的通透性，染料才能 進入細胞內。但有些活體染料能進入活細胞，并對細胞不產生毒性作用。熒光染料 HO33342和若丹明123都是活體染料。Ho33342能與細胞中DNA進行特異的結 合，若丹明123能與線粒體進行特異的結合。采用兩種熒光染料的混合染液可對一 個活細胞的核和線粒體同時染色。熒光組化實驗中應注意的幾個問題：1 每種熒光染料，均有自己的最適PH值，此 時熒光最強。當pH改變時，不僅熒光強度減弱，而且波長將有所改變，因此熒光檢 測時要在一定的PH值的緩沖液中進行。2 一放熒光染色在20C以下時熒光比較穩(wěn) 定，溫度升高常出現(xiàn)溫度猝滅。3 在熒光觀察中，常因激發(fā)光的增強而使樣品熒光很快衰竭，造成觀察和照相困難。為此最好用能量小的長波長光進 行觀察，需照相時再適當增強激發(fā)光。4