茉莉花香氣相關(guān)基因JsDXS及其啟動(dòng)子的克隆與表達(dá)分析

1、園 藝 學(xué) 報(bào) 2014，41（6）：12361244 http: / www. ahs. ac. cn acta horticulturae sinica e-mail: yuanyixuebao 收稿日期：20131213；修回日期：20140410 基金項(xiàng)目：福建省科技廳區(qū)域重大項(xiàng)目（2010n3001）；福建農(nóng)林大學(xué)園藝植物種質(zhì)與高優(yōu)生產(chǎn)技術(shù)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（cxtd12013） * 通信作者 author for correspondence（e-mail：ynxtea，guixinchen；tel 茉莉花香氣相關(guān)基因jsdxs及其啟動(dòng)子的克隆與表達(dá)分析 孫

2、 君1，陳桂信1,*，葉乃興1,2,*，呂恃衡1，劉志欽3，黃 瑋1，林志達(dá)1 （1福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院，福州 350002；2福建農(nóng)林大學(xué)茶葉科技與經(jīng)濟(jì)研究所，福州 350002；3福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福州 350002） 摘 要：以雙瓣茉莉花瓣為材料，采用rt-pcr和race技術(shù)相結(jié)合的方法，獲得茉莉花香氣形成限速酶即5磷酸脫氧木酮糖合成酶（deoxyoxylulose-5-phosphate synthase，dxs）基因（命名為jsdxs）；采用染色體步移技術(shù)獲得該基因的啟動(dòng)子序列；采用實(shí)時(shí)熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)該基因在花瓣發(fā)育過程中的表達(dá)動(dòng)態(tài)。結(jié)果表明，jsdxs全長(zhǎng)cdna

3、 為2 505 bp，其中orf（open reading frame）為2 145 bp，編碼714個(gè)氨基酸，含有tpp-dxs、tpp-pyr-dxs-tk-like和transketolase c等保守功能結(jié)構(gòu)域；分離得到j(luò)sdxs基因上游調(diào)控序列745 bp，其含啟動(dòng)子核心元件tata-box及t/gboxatpin2（茉莉酮酸酯相關(guān)元件）、ciacadianlelhc（生物鐘相關(guān)元件）、mycconsensusat（低溫相關(guān)元件）等與花香形成相關(guān)的重要順式作用元件；熒光定量pcr分析表明，該基因在18：00時(shí)表達(dá)量較低，隨著時(shí)間的推移逐漸上調(diào)，到夜間22：00時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高，逐漸又

4、出現(xiàn)下調(diào)的趨勢(shì)，直至凌晨2：00時(shí)表達(dá)量降到最低，說(shuō)明該基因的表達(dá)受生物鐘的控制。 關(guān)鍵詞：茉莉花；香氣；5磷酸脫氧木酮糖合成酶；啟動(dòng)子；順式作用元件；表達(dá)分析 中圖分類號(hào)：s 685.16 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：a 文章編號(hào)：0513-353x（2014）06-1236-09 cloning and expression analysis of deoxyoxylulose-5-phosphate synthase gene related to aroma from jasminum sambac and isolation of its promoter sun jun1，chen gui-xin

5、1,*，ye nai-xing1,2,*，lÜ shi-heng1，liu zhi-qin3，huang wei1，and lin zhi-da1 （1college of horticulture，fujian agriculture and forestry university，fuzhou 350002，china；2the institute of tea science and technology and economy，fujian agriculture and forestry university，fuzhou 350002，china；3college of

6、life science，fujian agriculture and forestry university，fuzhou 350002，china） abstract：the full length cdna sequence of deoxyoxylulose-5-phosphate synthase gene（jsdxs）was cloned from jasminum sambacby using rt-pcr and rapid amplification of cdna ends（race）method. according to the 2 505 bp sequence，th

7、e promoter of jsdxs was isolated using genome walking method. the gene expression pattern in blooming was analyzed by the real-time pcr. gene structure 6期 孫 君等：茉莉花香氣相關(guān)基因jsdxs及其啟動(dòng)子的克隆與表達(dá)分析 1237 analysis showed that the full length cdna contained a 2 145 bp open reading frame（orf），encoding a protein o

8、f 714 amino acid. there were several conserved domains，such as tpp-dxs，tpp-pyr-dxs- tk-like，transketolase c，etc. one 745 bp sequence was found to be the promoter of jsdxs，which contained many cis-acting elements，such as tata-box，t/gboxatpin2（related to jasmonate signaling），mycconsensusat（related to

9、cold stress），ciacadianlelhc（necessary for circadian expression）. the real-time pcr analysis revealed that the gene expression at 18：00 was low and started to increase and reached a maximum at 22：00，and then started to decrease and reached a minimum at 2：00. this phenomenon perhaps illustrated that t

10、he expression of jsdxs was regulated by circadian. key words：jasminum sambac；aroma；deoxyoxylulose-5-phosphate synthase；promoter；cis-acting element；expression analysis 茉莉花jasminum sambac（l.）ait是木犀科（oleaceae）素馨屬（jasminum）茶用香花植物。茉莉花茶質(zhì)量的優(yōu)劣取決于花朵的質(zhì)量，尤其是花朵中香氣釋放量與持續(xù)時(shí)間。前人對(duì)茉莉花品種形態(tài)特征和香氣特性做了大量研究（郭友嘉 等，1993，1994

11、；張麗霞 等，2002；葉乃興 等，2007；楊江帆，2008；李鶴，2012），發(fā)現(xiàn)茉莉花香氣成分中含芳樟醇、法呢烯、石竹烯、橙花叔醇、依蘭油烯、萜品醇等萜類化合物，烯萜類物質(zhì)為茉莉花香氣中最多的一大類。dxp（1脫氧d木酮糖5二磷酸）途徑是1條類萜物質(zhì)前體合成途徑，提供萜類物質(zhì)生物合成的基本骨架異戊烯基焦磷酸（isopentenyl diphosphate，ipp）和二甲基烯丙基焦磷酸（dimethy lallyl diphosphate，dmapp）。dxs（5磷酸脫氧木酮糖合成酶）在該途徑中以丙酮酸和磷酸甘油醛為底物，生成dxp，是該途徑中第1個(gè)限速酶，是萜類物質(zhì)代謝工程的重要靶點(diǎn)（e

12、stévez et al.，2001；潘夕春 等，2007），對(duì)茉莉花萜烯類物質(zhì)的形成具有重要作用。 dxs最早從大腸桿菌中分離出來(lái)（sprenger et al.，1997），在植物中最早得到dxs的是擬南芥arabidopsis thaliana和胡椒薄荷mentha piperita（lange et al.，1998），隨后又從番茄solanum lycopersicum（lois et al.，2000）、甜葉菊stevia rebaudiana（totté et al.，2003）、菊花chrysanthemum morifolium（kishimoto &am

13、p; ohmiya，2006）、橡膠hevea brasiliensis（seetang-nun et al.，2008）、陽(yáng)春砂amomum villosum（yang et al.，2012）等多種植物中克隆到，muñoz-bertomeu等（2006）將擬南芥dxs轉(zhuǎn)入薰衣草（lavandula angustifolia）后，其單萜烯精油的含量顯著提高，子一代仍然具有轉(zhuǎn)基因親本的特性，且形態(tài)和生長(zhǎng)習(xí)性等均無(wú)變化。 本研究中以開放的雙瓣茉莉花瓣為材料，采用rt-pcr和race技術(shù)，分離得到j(luò)sdxs全長(zhǎng)cdna，對(duì)該基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，找出jsdxs的功能結(jié)構(gòu)域。采用染色體

14、步移技術(shù)，分離jsdxs上游的啟動(dòng)子序列，發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子中含有多個(gè)與生物鐘相關(guān)等順式作用元件。采用熒光定量pcr技術(shù)，分析jsdxs在花不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)模式，為將來(lái)深入研究jsdxs在茉莉花香氣釋放中的功能奠定基礎(chǔ)，以期為生產(chǎn)上調(diào)控茉莉花香強(qiáng)度和釋香時(shí)間提供理論依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 茉莉花瓣總rna及茉莉花基因組dna的提取 茉莉花供試材料為雙瓣茉莉花，于2012年6月取自福建農(nóng)林大學(xué)茉莉花種質(zhì)資源圃。 采用改良ctab法提取茉莉花瓣總rna（鄭鴻昌，2012）；采用biospin植物基因組dna提取試劑盒（杭州博日科技有限公司cat#bsc13s1）提取茉莉花基因組dna。 1238

15、 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷 1.2 jsdxs保守區(qū)、5race、3race及全長(zhǎng)orf的pcr擴(kuò)增 以茉莉花總rna為模板，參考鄭鴻昌（2012）的方法，合成雙鏈cdna，于20 保存?zhèn)溆?。根?jù)已報(bào)道的油橄欖（olea europaea）、丹參（salvia miltiorrhiza）、連翹（forsythia suspense）、金魚草（antirrhinum majus）等dxs基因序列，用dnaman設(shè)計(jì)出保守區(qū)簡(jiǎn)并引物。dxs-r：5-tggga(t/c)gt(c/t)gg(t/c)ca(c/t)cag(g/t)(c/t)-3；dxs-f：5-gc(t/c)tc(g/a)tc(a/t)

16、ga (a/t)ggagccat-3。pcr擴(kuò)增體系：2.5 µl 10× ex-taq，buffer（mg2+ plus），4 µl dntps（2.5 mmol · l-1），1 µl模板，0.5 µl dxs-r，0.5 µl dxs-f，0.2 µl ex-taq酶（5 u · µl-1），補(bǔ)ddh2o至25 µl體系。95 預(yù)變性5 min，95 變性30 s，53 退火45 s，72 延伸90 s，35個(gè)循環(huán)，最后72 延伸10 min進(jìn)行pcr擴(kuò)增。根據(jù)保守區(qū)克隆結(jié)果分別

17、設(shè)計(jì)特異性5race和3race引物（primer premier 5軟件）。5-dxs：5-agtagttcgtgtatgactgagttggtgc-3；3-dxs：5-catgcaaagggcttatgaccaggtagtgc-3。將保守區(qū)pcr體系中引物改為0.5 µl 5-dxs/3-dxs，0.25 µl接頭引物l4m，并補(bǔ)ddh2o至25 µl，并將保守區(qū)pcr擴(kuò)增程序中的退火溫度提高至55 進(jìn)行pcr擴(kuò)增。將獲得的全長(zhǎng)cdna，在其orf兩端設(shè)計(jì)特異引物（qdxs-r：5-atggctctctgtacatatgcatgtc-3；qdxs-f：5-tt

18、atacaattgttacacccccggtc-3）擴(kuò)增全長(zhǎng)序列。 1.3 jsdxs啟動(dòng)子的分離 依據(jù)加拿大bio s & t inc的genome walking kit試劑盒，從起始密碼子下游200 bp內(nèi)設(shè)計(jì)3條巢式引物（primer premier 5.0軟件）。dxs-a：5-gtgagtgatactctgctctttccgacaagg-3；dxs-b：5-ccctgctgccctctttcttacctgctta-3；dxs-c：5-aaacccactgtcttgctcaa attcccag-3。以茉莉花基因組dna為模板，參照試劑盒說(shuō)明書，以巢式引物和試劑盒配套引物進(jìn)行3

19、輪pcr擴(kuò)增。 1.4 pcr產(chǎn)物純化回收及克隆 將1.2和1.3所得pcr產(chǎn)物純化回收并克隆至pmd18-t載體（takara），16 連接過夜后進(jìn)行轉(zhuǎn)化測(cè)序（北京六合華大基因有限公司）。 1.5 序列分析 jsdxs基因序列通過在線ncbi的blast功能進(jìn)行氨基酸序列同源性比較；通過protparam軟件對(duì)基因的分子量、等電點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，初步分析目的基因的功能；通過signalp 4.1進(jìn)行信號(hào)肽預(yù)測(cè)；通過protcomp version 9.0進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)；通過tmpred進(jìn)行蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)；通過在線sopma預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)。 啟動(dòng)子序列通過在線plantcare（htt

20、p：/bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）及place軟件（http：/www.dna.affrc.go.jp/place/signalscan.html）預(yù)測(cè)其順式作用元件（劉志欽 等，2013）。 1.6 熒光定量pcr表達(dá)分析 分別提取18：00、20：00、22：00、0：00、2：00時(shí)的茉莉花瓣總rna，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（takara）反轉(zhuǎn)錄成cdna，稀釋10倍作模板。以茉莉花actin基因?yàn)閮?nèi)參（actin：5-cactgctgagcggg aaattgt-3，actin：5-gatcctccaatccagac

21、actgt-3）（歐雪鳳，2012）。運(yùn)用primer premier 5.0軟件，按照熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)熒光定量pcr引物（rtdxs-r：5-gttgctgtaa 6期 孫 君等：茉莉花香氣相關(guān)基因jsdxs及其啟動(dòng)子的克隆與表達(dá)分析 1239 taggcgatggtg-3，rtdxs-f：5-cctgttggactgtaatctgctaag-3）。參照sybr prime scripttm rt-pcr kit（takara）說(shuō)明書，進(jìn)行熒光定量pcr擴(kuò)增體系：cdna模板1 µl，2×sybr premix ex-taqtm 5 µl，上下游

22、引物（10 µmol · l-1）各0.2 µl，用rnase-free h2o補(bǔ)足至10 µl。95 預(yù)變性30 s，95 變性5 s，60 復(fù)性34 s，共40個(gè)循環(huán)。每份樣品設(shè)3次重復(fù)。 試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用microsoft excel 2003軟件，采用2-ct法計(jì)算其相對(duì)表達(dá)量；應(yīng)用spss軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析。應(yīng)用microsoft excel 2003軟件作柱狀圖。 2 結(jié)果與分析 2.1 jsdxs克隆及序列分析 茉莉花瓣總rna，28s與18s亮度比約為21，總rna較完整，可進(jìn)行rt-pcr擴(kuò)增等后續(xù)試驗(yàn)。通過rt-pcr和race

23、技術(shù)得到保守區(qū)pcr產(chǎn)物、5race和3race的pcr產(chǎn)物，最終克隆得到保守區(qū)1 181 bp、5race片段1 411 bp和3race片段883 bp。利用特異性引物擴(kuò)增其orf，測(cè)序后其精確長(zhǎng)度為2 145 bp（圖1）。 圖1 茉莉花總rna及從茉莉花中分離的jsdxs電泳圖 m：marker dl2000；1：總rna電泳圖；2：保守區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物；3：5race擴(kuò)增產(chǎn)物；4：3race擴(kuò)增產(chǎn)物； 5：jsdxs orf全長(zhǎng)擴(kuò)增產(chǎn)物；6：jsdxs啟動(dòng)子擴(kuò)增產(chǎn)物。 fig. 1 result of rna and amplification product of jsdxs from

24、jasminum sambac m：marker dl2000；1：result of rna；2：amplification product of conserved region；3：amplification product of 5race； 4：amplification product of 3race；5：full-length amplification product of jsdxs orf； 6：the promoter product of jsdxs . 將保守區(qū)、5race和3race序列拼接，得到茉莉花dxs基因cdna全長(zhǎng)2 505 bp（圖2），包含1個(gè)完整的

25、閱讀框（232 2 380 bp），編碼714個(gè)氨基酸，該基因含有起始密碼子atg、終止密碼子taa、16個(gè)a的poly a尾巴和aataaa加尾信號(hào)，并含有保守功能結(jié)構(gòu)域tpp-dxs、tpp-pyr-dxs-tk-like及transketolase-c。其相對(duì)分子量：76 768.0，分子式：c3396h5412n950o1010s33，等電點(diǎn)：7.08，不穩(wěn)定系數(shù)：39.28，屬于穩(wěn)定蛋白；帶負(fù)電氨基酸總和（asp + glu）：73，帶正電氨基酸總和（arg + lys）：72；脂溶指數(shù)：90.90。其蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)中38.74%為螺旋，14.97%為延伸鏈，7.13%為轉(zhuǎn)角，39.

26、16%為無(wú)規(guī)則卷曲。無(wú)信號(hào)肽，亞細(xì)胞定位在細(xì)胞質(zhì)，其蛋白質(zhì)無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)。 與其他植物氨基酸序列同源性為：丹參（salvia miltiorrhiza）88%，橡膠樹（hevea brasiliensis）87%、穿心蓮（andrographis paniculata）87%、杜仲（eucommia ulmoides）87%、可可（theobroma cacao）86%、陽(yáng)春砂（amomum villosum）86%、檄樹（morinda citrifolia）72%、甜葉菊（stevia rebaudiana）72%、歐洲云杉（picea abies）71%。 1240 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷

27、圖2 jsdxs基因的核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列 atg：起始密碼子；taa：終止密碼子；aataaa：聚腺苷酸化加尾信號(hào)；tpp-dxs、tpp-pyr-dxs-tk-like、transketolase-c：保守域。 fig. 2 nucleotide sequence and deduced amino acid sequence of the jsdxs atg：start anticodon；taa：terminate anticodon；aataaa：the polyadenylation signal； tpp-dxs，tpp-pyr-dxs-tk-like，transketo

28、lase-c：conserved domain. 2.2 啟動(dòng)子分離及順式作用元件分析 將啟動(dòng)子pcr擴(kuò)增產(chǎn)物（圖1）克隆測(cè)序，得到上游啟動(dòng)子調(diào)控序列745 bp（圖3），含有與茉莉酮酸酯相關(guān)元件t/gboxatpin2，脫落酸相關(guān)元件abre，生物鐘相關(guān)元件ciacadianlelhc，低溫相關(guān)元件mycconsensusat，熱激相關(guān)元件hse，光響應(yīng)相關(guān)元件gatabox、sorlip1at、tct-motif，水楊酸相關(guān)元件tca-element，磷酸烯醇丙酮酸羧化酶相關(guān)元件cactftppca1，花粉特異性相關(guān)元件pollen1lelat52，胚乳表達(dá)相關(guān)元件skn-1 motif等

29、。 6期 孫 君等：茉莉花香氣相關(guān)基因jsdxs及其啟動(dòng)子的克隆與表達(dá)分析 1241 圖4 茉莉花開放過程中jsdxs基因表達(dá)分析 不同字母代表不同時(shí)刻間存在顯著差異（p < 0.05）。 fig. 4 express analysis of jsdxs during blooming the results with same letters are not significantly different at p < 0.05 according to duncans multiple-range test. 圖3 茉莉花dxs基因啟動(dòng)子序列及部分順式作用元件 abre：脫落酸

30、相關(guān)元件；cactftppca1：參與磷酸烯醇丙酮酸羧化酶反應(yīng)；ciacadianlelhc：生物鐘相關(guān)元件；gatabox、sorlip1at、tct-motif：光響應(yīng)相關(guān)元件；hse：熱激相關(guān)元件；iboxcore、rebetalglhcb2i：光敏色素調(diào)節(jié)元件；mycconsensusat：低溫相關(guān)元件；pollen1lelat52：花粉特異性相關(guān)元件；skn-1 motif：胚乳表達(dá)相關(guān)元件；tca-element：水楊酸相關(guān)元件； t/gboxatpin2：參與茉莉酮酸酯反應(yīng)相關(guān)元件。 fig. 3 the promoter sequence of jsdxs and partia

31、l cis-acting elements abre：involved in the abscisic acid responsiveness；cactftppca1：involved in phosphoenolpyruvate carboxylase responsiveness；ciacadianlelhc：necessary for circadian expression；gatabox，sorlip1at，tct-motif：related to light； hse：involved in heat stress responsiveness；iboxcore，rebetalgl

32、hcb2i：involved in phytochrome regulation； mycconsensusat：related to cold；pollen1lelat52：responsible for pollen specific activation； skn-1 motif：required for endosperm expression；tca-element：involved in salicylic acid responsiveness； t/gboxatpin2：play a key role in jasmonate signaling. 2.3 相對(duì)熒光定量pcr表

33、達(dá)分析 以茉莉花actin為內(nèi)參，采用實(shí)時(shí)熒光定量pcr對(duì)茉莉花開放過程中jsdxs的表達(dá)進(jìn)行了分析，結(jié)果（圖4）表明，其表達(dá)量在18：00時(shí)較低，隨著時(shí)間的推移，呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì)，在22：00時(shí)達(dá)到最高，隨后呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)，在2：00時(shí)最低。 3 討論 dxs是dxp途徑的第一個(gè)酶，也是第一個(gè)關(guān)鍵酶。研究表明，超量表達(dá)dxs可提高單萜化合物、類胡蘿卜素、萜類化合物和萜類吲1242 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷 哚生物堿的含量（bouvier et al.，1998；chahed et al.，2000；lois et al.，2000）。本試驗(yàn)中克隆得到茉莉花jsdxs全長(zhǎng)cdna 2 505 bp，與

34、同屬植物丹參相似度最高為88%，與其他植物如橡膠樹（87%）、穿心蓮（87%）、杜仲（87%）、可可（86%）、陽(yáng)春砂（86%）也有很高的同源性，與檄樹（72%），甜葉菊（72%），歐洲云杉（71%）同源性的也較高。jsdxs含有功能保守域tpp-dxs、tpp-pyr-dxs- tk-like、transketolase-c，其中transketolase-c認(rèn)為是分子調(diào)控結(jié)合位點(diǎn)（lindqvist et al.，1992；nikkola et al.，1994），說(shuō)明dxs在長(zhǎng)期進(jìn)化中較保守。前人對(duì)dxs表達(dá)模式的研究多以不同組織器官（空間）為對(duì)象，其表達(dá)的節(jié)律性（時(shí)間）還鮮有報(bào)道。本研

35、究中得出茉莉花瓣jsdxs的表達(dá)量在18：00時(shí)較低，隨著時(shí)間的推移，呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì)，在22：00時(shí)達(dá)到最高，隨后出現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)，在2：00時(shí)最低。在整個(gè)花開放的過程中，jsdxs表達(dá)與茉莉花香強(qiáng)度呈現(xiàn)一定的關(guān)聯(lián)，與李鶴（2012）報(bào)道的雙瓣茉莉花萜烯類香氣物質(zhì)在17：0003：00這個(gè)時(shí)間段內(nèi)所表現(xiàn)的趨勢(shì)相一致，與茉莉花香相關(guān)cds和hpl基因的表達(dá)模式（歐雪鳳，2012）也一致。 本研究中利用染色體步移方法分離得到j(luò)sdxs上游調(diào)控序列，其包含多個(gè)與茉莉生長(zhǎng)發(fā)育及開花密切相關(guān)的順式作用元件。其中，t/gboxatpin2（boter et al.，2004）與茉莉酮酸酯相關(guān)，而茉莉酮酸酯類，包

36、括茉莉酮酸（jasmonic acid，ja）和它的甲基酯（methyl jasmonate，meja）是許多花和果實(shí)中芳香物質(zhì)的成分之一（薛炳燁和姚勝蕊，1999）。王鑫威等（2011）、魏潔書等（2013）對(duì)雨生紅球藻及陽(yáng)春砂dxs的研究表明meja對(duì)dxs表達(dá)有促進(jìn)作用，茉莉酮酸酯與dxs及茉莉花開花的相關(guān)性還需進(jìn)一步深入研究探討。茉莉花屬于夜晚開花植物，dxs上游調(diào)控序列中發(fā)現(xiàn)的與生物鐘相關(guān)元件ciacadianlelhc（piechulla et al.，1998）及低溫相關(guān)元件mycconsensusat（chinnusamy et al.，2003；lee et al.，2005

37、）可能誘導(dǎo)茉莉花在低溫的夜晚開花。此外，該啟動(dòng)子還含有與光響應(yīng)相關(guān)元件gatabox、sorlip1at（hudson & quail，2003；jiao et al.，2005），光敏色素調(diào)節(jié)元件iboxcore（terzaghi & cashmore，1995）、rebetalglhcb2i（degenhardt & tobin，1996）等，其具體與茉莉花開花及香氣物質(zhì)合成相關(guān)的元件還需進(jìn)一步通過點(diǎn)突變來(lái)驗(yàn)證。jsdxs是否調(diào)控茉莉花開花及花香物質(zhì)合成還需對(duì)該基因進(jìn)行轉(zhuǎn)基因功能鑒定，構(gòu)建啟動(dòng)子缺失載體和啟動(dòng)子表達(dá)載體來(lái)研究啟動(dòng)子核心元件和組織表達(dá)部位。 refer

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