翻譯日本錦鯉感染嗜水氣單胞菌引起的相關(guān)病毒血癥的組織病理學(xué)觀察

1、日本錦鯉感染嗜水氣單胞菌引起的相關(guān)病毒血癥的組織病理學(xué)觀察摘要：嗜水氣單胞菌感染引發(fā)相關(guān)ANA-AKI-BYO病毒血癥是目前在日本錦鯉有高度傳染性的一種疾病。當(dāng)前的研究，是為了確定電暈狀病毒和A之間的相互關(guān)系。我們通過患病鯉魚與正常鯉魚之間的自然同居進(jìn)行細(xì)菌的人為傳染實驗發(fā)現(xiàn)正常鯉魚皮膚已被輕微受損。實驗成功表現(xiàn)出電暈狀病毒病毒血癥和A的聯(lián)合作用。在嗜水氣單胞菌的感染中?；疾〉孽庺~表現(xiàn)出規(guī)模囊性水腫，腹水及眼球突出，皮膚形成潰瘍等癥狀。另外還有由于電暈狀病毒和A引起感染的病理變化。發(fā)生嗜水氣單胞菌感染后，全身水腫的皮膚表現(xiàn)出表皮分離，擴(kuò)大規(guī)模液囊，以及真皮水腫并伴有出血和壞死。底層橫紋肌水腫且

2、肌肉纖維發(fā)生明顯萎縮。肝細(xì)胞發(fā)生萎縮或腫脹呈顆粒狀。腎小管細(xì)胞呈空泡變性，混濁腫脹，壞死和損傷。在脾和造血組織的巨噬細(xì)胞以及肝細(xì)胞中發(fā)生鐵血黃素沉積。因為細(xì)菌細(xì)胞不直接侵入這些受影響的組織，所以這些變化可能受細(xì)菌毒素誘導(dǎo)。 關(guān)鍵詞：病毒血癥 科羅納類病毒 嗜水氣單胞菌 鯉魚 皮膚潰瘍 全身水腫 腎病簡介 據(jù)最近報道，一種新的病毒病，viremia - associated ANA-AKI-BYO，在日本錦鯉中普遍流行（宮崎等，2000）。我們確定首次患電暈狀病毒（CLV）血癥的患病鯉魚是受到水傳播的二次細(xì)菌入侵，導(dǎo)致皮膚潰瘍的形成。且CLV對鯉魚本身是致死的。 1999年，通過長期觀察發(fā)現(xiàn)患病

3、鯉魚出現(xiàn)規(guī)模囊水腫，眼球突出，腹水以及皮膚潰瘍等癥狀。另外可以從病變真皮和內(nèi)臟器官分離的CLV，從水腫鱗片囊，潰瘍性病變和腹水中分離嗜水氣單胞菌。病毒血癥CLV與嗜水氣單胞菌聯(lián)合感染并不令人意外，因為它之前已被大眾所知。雖然病毒和細(xì)菌，以及其病理特征之間的相互關(guān)系尚未完全確定，但眾所周知，患病鯉魚患有“鯉春病毒血癥”（Rhab- dovirus鯉魚感染，F(xiàn)ijan等1971）常常是因為感染嗜水氣單胞菌。而復(fù)感染被稱為“傳染性水腫'（Fijan1972）。 在本研究中，這種復(fù)雜的疾病被發(fā)現(xiàn)在飼養(yǎng)有高度傳染性鯉魚群的池塘中。因此，我們進(jìn)行感染實驗以確定病毒和細(xì)菌是如何被同居的自然患病鯉魚傳

4、染給皮膚已經(jīng)輕微受損的健康鯉魚。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，合并感染成功實現(xiàn)。并通過電子顯微鏡檢查病魚組織，觀察其復(fù)雜的病理特征來確定疾病與CLV和嗜水氣單胞菌之間的相互關(guān)系。 材料與方法患病的鯉魚和鯽魚的健康：患病鯉魚（3歲齡，200300克），；來至于飼養(yǎng)在1999年6月和七月之間的寒春的魚群中，通常表現(xiàn)為水腫但不發(fā)生皮膚潰爛。在六月收集五條病魚進(jìn)行組織病理學(xué)檢查和病毒和細(xì)菌分離。七月，從同一組的魚中再次收集16條病魚作為供體進(jìn)行感染實驗。為實驗從池塘中挑選未感染“viremia-associated ana-aki-byo”病毒的健康鯉魚（2至4歲齡）。這些魚立即以50ppm的福爾馬林溶液浸泡24小時以除

5、去皮膚和鰓上的寄生物。感染實驗：每兩只皮膚潰瘍且自然患病的鯉魚被安置在6個養(yǎng)魚池（30L 20）中通氣，而剩下的病魚被放養(yǎng)在水箱中（300 L 20）。 在實驗期間，當(dāng)病魚在養(yǎng)魚池中死亡，需要從另備份組中選取另一條病魚替換。同居前，去除掉幾個身體受到輕度損傷的健康鯉魚（2年生，40至70g）。在每一個養(yǎng)魚池中，3或四只健康魚與兩條病魚進(jìn)行共同飼養(yǎng)。當(dāng)實驗魚變得奄奄一息，立即清除它們，并更換新的實驗魚。這個實驗中，在30 天20°C環(huán)境下，.共有30條實驗魚經(jīng)歷了同居實驗。作為對照，6例健康魚（2歲，50克）的皮膚已經(jīng)損傷，以同樣的方式作為實驗魚的健康鯉魚（3歲，類似于自然病

6、魚的大?。┮渤霈F(xiàn)相同癥狀。病毒和細(xì)菌的分離：根據(jù)宮崎等人的說法，CLV病毒是從天然病魚和實驗病魚中分離出來的 （2000）。從潰瘍性病變皮膚，水腫鱗片囊，腹水和腎中分離的細(xì)菌，在心臟浸液瓊脂平皿上20下進(jìn)行3天培養(yǎng)。對于大多數(shù)從水腫鱗片囊，腹水和腎臟的樣品，采用API20測試生長在瓊脂平板上單一類型的細(xì)菌是否是嗜水氣單胞菌。這種細(xì)菌表現(xiàn)出對綿羊血瓊脂平板上溶血活性。這顯示出突出的均裂一些菌落選擇人工感染。人工感染嗜水氣單胞菌：CLV的致病性在我們以前的研究（宮崎等，2000）有所描述。我們對分離的嗜水氣單的致病性進(jìn)行了檢測。生物體在20下培養(yǎng)在心臟浸液肉湯（HI肉湯）48小時。離心培養(yǎng)物以30

7、00×g的速度離心15分鐘，使細(xì)胞懸浮在鹽水上。向10條鯉魚進(jìn)行皮下注射菌懸液（0.5毫升），劑量為7.8×104.0 CFU ml-1。為對照，將5條鯉魚注射相同量的無菌鹽水。如后面所指出的，在HI肉湯培養(yǎng)所述細(xì)菌并不致病。我們試圖在Luria-BERTANI肉湯（LB肉湯用于培養(yǎng)大腸桿菌;細(xì)菌蛋白胨10克，酵母提取物5g，氯化鈉5克，水1000ml）中培養(yǎng)細(xì)菌，其中補(bǔ)充有從健康鯉魚（4年生2公斤）中提取的5鯉魚血清。因為嗜水氣單胞菌經(jīng)常被發(fā)現(xiàn)在患病金魚鯽魚（Kubota等.1981），鯽魚內(nèi)（Miyazaki & Kaige ，1986年）和日本鰻鱺鰻鱺（Egu

8、sa 1978, Miyazaki 1980, Kubota 等. 1981），以及健康魚（Sorimachi & Egusa 1971, Aoki 1974, 1975, Kanai 等. 1977)的消化腸道中，所以選擇使用LB培養(yǎng)基。因此，在該方面，嗜水氣單胞菌類似于大腸桿菌。此外，嗜水氣單胞菌出現(xiàn)在患病鯉魚的鱗片囊和腹水中。因此，我們選用LB培養(yǎng)基為基礎(chǔ)液，用鯉魚血清補(bǔ)充它。細(xì)菌在20下可以良好生長在該培養(yǎng)基中48小時。再次制備細(xì)菌懸浮液，5條鯉魚注入2.6×10 5.0 CFU毫升-1或1 ml的劑量于皮膚下，在6條鯉魚腹部空腔內(nèi)注射同樣劑量0.5ml 5.2

9、15;10 5.0 CFU毫升-1的菌懸液。建立兩個對照組，每一個類型的注射，5魚注射等量的無菌生理鹽水并在20°C下的養(yǎng)魚池中.喂養(yǎng)觀察了30天，然后取樣進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。沒有注射的魚觀測其死亡期。病理組織學(xué)和電子顯微鏡檢查：用1.5氨基甲酸乙酯溶液進(jìn)行麻醉，對外部采樣后再進(jìn)行內(nèi)部解剖和觀察。用于組織學(xué)觀察的病變真皮和內(nèi)臟器官的組織固定在10磷酸鹽緩沖的福爾馬林溶液中。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備蘇木精 - 伊紅（HE），阿贊，吉姆薩（對于細(xì)菌），柏林藍(lán)（對于含鐵血黃素）和高碘酸希夫（PAS）用于固定組織的生化反應(yīng)。根據(jù)電子顯微鏡（EM）標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將剩余的病變真皮，心臟，脾和腎的組織用70的K

10、arnovsky和1OSO4的溶液處理并固定。 結(jié)論 病魚的自然爆發(fā) 自然患病鯉魚出現(xiàn)松果樣外觀（規(guī)模囊性水腫）腫脹并伴隨著皮內(nèi)出血及毛細(xì)血管擴(kuò)張，眼球突出和腹部腹水膨脹另外還形成了皮膚潰瘍（圖1A）。皮膚潰瘍發(fā)生后的10到14天，病魚逐漸發(fā)展上述水腫變化且活著。腹腔內(nèi)包含有清晰血性腹水。肝，脾，腎和鰓表色蒼白。在一些魚中，腸和脾出血，橫紋肌有明顯水腫，并含有渾濁或發(fā)白肌纖維。在所有的病魚中，可以從規(guī)模囊水腫和腹水和A.中分離出嗜水氣單胞菌進(jìn)行純培養(yǎng)。從病變的潰瘍皮膚中將嗜水氣單胞菌與其他細(xì)菌進(jìn)行分離。我們可以成功的從潰瘍性皮膚，脾，腎和心臟中分離出宮崎等人（2000）所說的能導(dǎo)致相同的細(xì)胞病

11、變效應(yīng)的那種病毒。圖.1.鯉魚 （A）自然患病鯉魚吻部，和鰓蓋尾鰭顯示潰瘍性病變，且有規(guī)模囊水腫，內(nèi)皮出血，腹水及眼球突出。（B）患病實驗用鯉魚與同居自然病魚：這種魚表現(xiàn)在對一個受傷的部位的身體發(fā)生皮膚潰瘍伴且隨著出血和水腫規(guī)模囊。 潰瘍性病變損失的組織病理學(xué)癥狀大多與“viremia-associated ANA-AKI-BYO'相同（Miyazaki等人，2000）。然而，在一些區(qū)域顯示水腫規(guī)模囊和皮內(nèi)出血，且水腫規(guī)模囊不斷擴(kuò)大，表皮脫落，真皮疏松結(jié)締中組織規(guī)模囊周圍，出血，壞死纖維細(xì)胞，裂解紅細(xì)胞和擴(kuò)張毛細(xì)血管上層有纖維蛋白的沉積。底層真皮致密結(jié)締組織也出現(xiàn)水腫。皮下脂肪組織有明

12、顯的出血和炎性細(xì)胞的浸潤。橫向肌肉有明顯的水腫和出血，肌肉纖維是廣泛萎縮且變得破碎（圖2A）。雖然細(xì)菌是從水腫規(guī)模型囊分離的，但是姬姆薩染色結(jié)果顯示，細(xì)菌細(xì)胞在這些病變沒有顯著倍增。在電鏡觀察下，皮膚損傷處中毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞（圖2B）和纖維細(xì)胞（圖2D）中顯示的許多CLV顆粒伴隨著形成電子致密夾雜物，但在細(xì)胞質(zhì)中沒有狹窄管狀結(jié)構(gòu)。此外，許多壞死毛細(xì)血中的血管內(nèi)皮細(xì)胞呈現(xiàn)細(xì)胞核退化，線粒體退化現(xiàn)象，基底膜很多小塊狀物質(zhì)且邊界不清。因此，毛細(xì)管被部分損壞，并允許紅細(xì)胞從毛細(xì)血管（圖2C）泄漏。受毛細(xì)血管影響的周邊膠原纖維發(fā)生水腫分離并呈邊界不清帶型。底層的橫向肌肉包含許多肌纖維呈現(xiàn)出碎片化的肌原纖

13、維，線粒體退化和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大。 在心臟的心室和心房，心臟肌纖維含有支離破碎的肌原纖維發(fā)生空泡變性，或包含凝結(jié)肌原纖維存在萎縮心肌的內(nèi)層。在心肌的外層，出血有時發(fā)生在受損的肌肉纖維（圖3A）。紅細(xì)胞的小血塊形成在管腔心內(nèi)膜上。在一些魚中，管腔包含了很多來源于紅細(xì)胞裂解的細(xì)胞核。心外膜表現(xiàn)出血和周圍擴(kuò)張血管炎性細(xì)胞滲透。然而，沒有證據(jù)表明，在壞死性病變心臟內(nèi)有任何增殖活躍的細(xì)菌細(xì)胞。電子顯微鏡下的心肌纖維，通常受影響的纖維具有零散肌原纖維束，許多線粒體退化，而且?guī)缀鯖]有糖原顆粒（圖3B）。這一批肌纖維均顯著零散和紊亂，或者是裂解伴有腫脹帶狀。退化線粒體顯示2種不同類型損壞的：要么擴(kuò)大要么凝固。擴(kuò)大線

14、粒體通常顯示為圓形，嵴損壞且無規(guī)則。在凝結(jié)的線粒體中，嵴大部分消失了，取而代之用非晶體物質(zhì)。二價陽離子的許多基質(zhì)的電子致密顆粒會沉積在這些損傷的線粒體?？张菁±w維具有很多空的空間，在肌漿中有擴(kuò)展流暢的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（SER）和小數(shù)目CLV顆粒，而萎縮的肌肉纖維的肌漿中的CLV粒子通常很難觀察到.圖.2. 鯉魚在自然爆發(fā)。（A-D）水腫病變皮膚。（A）皮膚水腫病變。表皮被分離。底層真皮疏松結(jié)締組織是高度水腫，并伴隨著輕微的出血。出血性皮損好發(fā)于皮下的脂肪組織和肌肉外側(cè)。 HE。比例尺=200微米。（B）真皮毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞的電子顯微鏡照片，出現(xiàn)許多電暈狀病毒（CLV）顆粒（箭頭）并伴隨著電子致密物質(zhì)的

15、生成的夾雜結(jié)晶?；啄るy以界定。=1微米。 （C）真皮毛細(xì)血管的電子顯微照片展現(xiàn)具有壞死內(nèi)皮細(xì)胞和未清除的基底膜。毛細(xì)血管（箭頭）被部分損壞，并允許紅細(xì)胞漏出。比例尺= 2.5微米。（D）一種皮膚纖維細(xì)胞的電子顯微照片。許多CLV顆粒（箭頭）和電子致密材料出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中。比例尺=2m的。 B：基底膜; C：膠原纖維; D：真皮致密結(jié)締組織; E：紅細(xì)胞; G：粒細(xì)胞; H：出血;I：含結(jié)晶夾雜電子致密材料; L：真皮疏松結(jié)締組織; M：橫向肌肉 在肝臟中，肝細(xì)胞萎縮或腫脹且呈粒狀外形（圖3C）。有少數(shù)肝細(xì)胞呈現(xiàn)含鐵血黃素沉積顆粒和含鐵血黃素巨噬細(xì)胞的血竇。該含鐵血黃素顆粒柏林藍(lán)染色后

16、為深藍(lán)色。在電子顯微鏡觀察下的混濁腫脹肝細(xì)胞，其擴(kuò)大核邊際顯示有染色質(zhì)沉積，嵴破壞的線粒體明顯擴(kuò)大，支離破碎，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增大（RER），沒有糖原顆粒，且電子透亮細(xì)胞質(zhì)中無CLV顆粒（圖3D）。一些膨脹RER包含電子致密物質(zhì)。萎縮肝細(xì)胞具有少量凝結(jié)的線粒體，許多零散的RER，含鐵血黃素的夾雜物具有高電子密度的細(xì)顆粒和無糖原顆粒。脾中許多壞死細(xì)胞在漿和護(hù)套組織發(fā)生纖維蛋白沉積。脾中大多數(shù)巨噬細(xì)胞顯示有許多有吞噬作用的紅細(xì)胞和含鐵血黃素沉積或蠟樣色素（圖4A）。電子顯微鏡下的脾臟，可見護(hù)套組織中的網(wǎng)狀細(xì)胞在包含了眾多的含鐵血黃素電子致密細(xì)顆粒。（圖4B）。網(wǎng)狀細(xì)胞的護(hù)套組織和血竇壞死并顯示許多CLV

17、顆粒，在電子透亮的細(xì)胞質(zhì)中有許多狹窄管狀，含有結(jié)晶夾雜電子致密物質(zhì)，和脹擴(kuò)大的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖4C）。 腎臟顯示出腎小管上皮細(xì)胞混濁腫脹，空泡變性并伴隨有核變性，管狀破壞隨后壞死（圖4D）。有時，這些受影響腎小管細(xì)胞，像正常腎小管上皮細(xì)胞一樣，含有含鐵血黃素顆粒。腎小球包含的壞死細(xì)胞有時會被部分摧毀。這些壞死性病變并沒有表現(xiàn)出任何細(xì)菌入侵的證據(jù)。在電子顯微鏡下，空泡腎小管細(xì)胞顯示出有巨大的空余空間，變圓，線粒體發(fā)生退化，電子透亮細(xì)胞質(zhì)發(fā)生網(wǎng)狀擴(kuò)大（圖5A）。凝固性壞死的腎小管細(xì)胞表現(xiàn)出濃縮線粒體中的嵴消失。在整個細(xì)胞（圖5B）中沉積許多為二價陽離子的基層電子致密顆粒。此外，壞死的腎小管上皮細(xì)胞有明顯

18、破裂的嵴且擴(kuò)大了的線粒體和在電子透亮細(xì)胞質(zhì)中的廣大RER（圖5C）。因此，在細(xì)胞質(zhì)或管狀細(xì)胞周圍的任何細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)都沒有顯示出任何能影響腎小管細(xì)胞的CLV粒子。在造血組織中，有廣泛的壞死細(xì)胞和少量巨噬細(xì)胞顯示有吞噬紅細(xì)胞和含鐵血黃素沉積。在電鏡下，各種各樣的細(xì)胞壞死且顯示出許多CLV顆粒，在電子透亮細(xì)胞質(zhì)中電子致密物質(zhì)含有結(jié)晶夾雜物和管狀結(jié)構(gòu)。圖. 3. 鯉魚在自然中爆發(fā)。（A）在心肌外層，出血發(fā)生在肌肉受損纖維中。內(nèi)層心肌纖維是高度空泡化。 HE。比例尺=100微米。（B）心肌纖維的電子顯微照（米），肌原纖維束支離破碎呈現(xiàn)腫帶型。一個開放的箭頭指示許多腫脹與嵴破壞的線粒體。黑色箭頭示出許多凝固

19、線粒體。糖原顆粒消失在一個高度空泡的肌漿中。比例尺=1微米。（C）在肝臟中，肝細(xì)胞顯示出顆粒狀且腫脹的外觀。一個箭頭指向含鐵血黃素的巨噬細(xì)胞在正弦位置。 HE。比例尺= 50微米。（D）電子顯微照片中飯肝細(xì)胞呈現(xiàn)混濁腫脹。細(xì)胞擁有2膨脹核邊際顯示染色質(zhì)沉積，有明顯損管狀嵴且膨脹的線粒體破，破碎膨脹擴(kuò)大的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（RER），而在電子透亮細(xì)胞質(zhì)中沒有糖原顆粒。比例尺=1微米。圖. 4.鯉魚在自然中爆發(fā)。（A）脾臟中巨噬細(xì)胞中有許多吞噬紅細(xì)胞和柏林藍(lán)染色為陽性含鐵血黃素沉積。比例尺=100微米。（B）從電子顯微照片中觀察到,脾臟的保護(hù)組織中有吞噬作用的巨噬細(xì)胞存在。它們包含許多含鐵血黃素電子致密細(xì)

20、顆粒。比例尺=2微米。（C）病毒感染的電子顯微鏡照片中，網(wǎng)狀細(xì)胞排列在脾竇內(nèi)。出現(xiàn)許多CLV顆粒（箭頭）和管狀結(jié)構(gòu)。小箭頭指向細(xì)胞質(zhì)中CLV病毒粒子。一個大箭頭指示出從細(xì)胞釋放出來的CLV病毒粒子。比例尺= 900納米。 (D)腎臟中，顯示許多腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，壞死，腎小管被破壞。 HE。比例尺=100微米。 H：含鐵血黃素顆粒的團(tuán)塊; R：網(wǎng)狀纖維; S：脾竇。 圖.5 .健康鯉魚。（A-C）自然病魚。（A）電子顯微照片中腎小管上皮細(xì)胞呈現(xiàn)空泡變性。電子透亮細(xì)胞質(zhì)有空泡變圓且退化的的線粒體。比例尺= 5微米。（B）在電子顯微圖中，腎小管上皮細(xì)胞呈現(xiàn)凝固性壞死。顯示有無嵴凝集的線粒體，整

21、個細(xì)胞中沉積有許多電子二價陽離子的致密顆粒。比例尺=4微米。（C）電子顯微鏡圖可見壞死的腎小管上皮細(xì)胞。它們有邊緣色素沉著的細(xì)胞核，嵴破損的增大線粒體，電子透亮細(xì)胞質(zhì)中的增大RER。比例尺=2微米。（D）在沒有表現(xiàn)外部病變實驗病魚的造血組織的電子顯微圖。壞死的細(xì)胞含有許多CLV顆粒（箭頭）。比例尺=2微米。 B：腎小管上皮基底膜; C：毛細(xì)管上腎小管。共養(yǎng)的感染實驗 共有30條實驗鯉魚經(jīng)歷與自然患病鯉魚的同居，其中28條死亡或瀕死再第4日至28天之間（圖6）。在實驗結(jié)束后只有2條活且著沒有發(fā)生任何病理變化。一共有8條瀕死的魚除了僅在受傷部位有輕微出血外沒有其他任何跡象。這8條魚中有五條瀕死在第

22、4天和6天之間，其他3條瀕死在第10天和16天之間。這些垂死的魚組織顯示在脾和造血組織有大量的壞死細(xì)胞。其心肌纖維呈萎縮性或空泡化。 電子顯微鏡顯示在脾和造血組織的壞死細(xì)胞中有許多CLV的粒子（圖5D）。與此相反，一共有20條魚顯示潰瘍性皮膚病變。在4條魚中，潰瘍性病變形成在傷口部位且它們?yōu)l死于第4天。潰瘍性病變表現(xiàn)壞死的真皮被許多細(xì)菌細(xì)胞入侵。這些魚在內(nèi)臟器官顯示的病理變化同發(fā)生在垂死魚的病理變化相似，且沒有外部跡象。在7天后剩余16魚變得奄奄一息且通常顯示皮膚潰瘍不僅發(fā)生在傷口部位，此外，在其他一些身體部位也發(fā)生規(guī)模囊水腫，眼球突出和腹水等癥狀（圖1B）。潰瘍性病變顯示的病理組織學(xué)特點(diǎn)大多

23、于自然爆發(fā)找到的那些相同。病變顯示規(guī)模囊水腫水腫的變化和真皮和外側(cè)肌肉的出血（圖7A）。在潰瘍性病變及病變水的皮膚腫中，成纖維細(xì)胞經(jīng)常含有CLV顆粒。其內(nèi)臟器官也表現(xiàn)出于自然爆發(fā)中相同病理跡象。心肌纖維呈萎縮或空泡化，并包含CLV顆粒，肌原纖維束支離破碎，線粒體退化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大且無糖原顆粒（圖7B）。在一些魚中，心腔包含許多裂解紅細(xì)胞且外層心肌出血。在腎臟，在腎病變化的腎小管細(xì)胞通常會發(fā)生但于自然爆發(fā)的那些魚比較發(fā)生較少（圖7C）。在造血組織中，壞死細(xì)胞包含許多CLV顆粒，含電子致密物質(zhì)有結(jié)晶內(nèi)含物和管狀結(jié)構(gòu)存在（圖7D）。此外，巨噬細(xì)胞中吞噬紅細(xì)胞和含鐵血黃素，和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量增加。脾臟通

24、常包含大量的壞死細(xì)胞和含吞噬紅細(xì)胞和含鐵血黃素的巨噬細(xì)胞。在肝臟中，表現(xiàn)出的肝細(xì)胞混濁腫脹，并擁有管狀嵴受損的線粒體，擴(kuò)大內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和次級溶酶體。在大多數(shù)的這些20條魚，嗜水氣單胞菌從可從潰瘍性病變或腹水中分離。CLV也可從脾臟分離。圖7.鯉魚（A-D）實驗病魚表現(xiàn)皮膚潰瘍。（A）在水腫患處皮膚，真皮和外側(cè)的肌肉是廣泛水腫和出血。 HE。比例尺=200微米。（B）心肌纖維的電子顯微照片。肌原纖維束支離破碎呈現(xiàn)腫帶型。線粒體擁有零散嵴。糖原顆粒消失。比例尺=1微米。（C）在腎臟中，大部分腎小管上皮細(xì)胞是壞死并裂解。 HE。比例尺=100微米。（D）造血組織電子顯微鏡照片。一個壞死的細(xì)胞含有許多CLV

25、顆粒（箭頭），含有結(jié)晶夾雜物和管狀結(jié)構(gòu)的電子致密物質(zhì)。巨噬細(xì)胞，紅細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量增加。比例尺=2微米。人工感染嗜水氣單胞菌 注射了加有5鯉魚血清HI肉湯和LB肉湯培養(yǎng)的細(xì)菌，所有的魚沒有顯示任何死亡或任何病理變化，在實驗期間，即使在注射部位的身體。在大多數(shù)的魚中，細(xì)菌沒有從腎臟再次分離。在任何被檢查魚器官內(nèi)臟中也未出現(xiàn)明顯的組織學(xué)變化。討論 Viremia-associated ana-aki-byo是在日本錦鯉中流行的一種病毒。我們確定肌膚潰瘍性病變是CLV細(xì)菌通過水傳播二次入侵進(jìn)入皮膚被損壞真皮（Miyazaki等人，2000）。A和嗜水氣單胞菌混合感染發(fā)生會使患病鯉魚顯示除了皮膚

26、潰瘍以外地規(guī)模囊水腫，眼球突出及腹水等癥狀。這些水腫變化沒有在只由CLV感染患病的鯉魚中觀察到。（Miyazaki等人，2000）。與此相反，感染A與嗜水氣單胞菌會造成鯉魚水腫變化和皮膚出血，但不會發(fā)生皮膚潰瘍。在傳輸實驗的同居自然患病鯉魚中，皮膚已經(jīng)受傷實驗鯉魚會瀕死并展出1的2種不同類型的外部特征：沒有外部標(biāo)志，或同時發(fā)生水腫體征和皮膚潰瘍。在垂死的魚沒有外部跡象，有嚴(yán)重心肌損傷，脾和造血組織廣泛壞死。此外CLV可成功分離，顯微鏡顯示壞死細(xì)胞有許多CLV顆粒。這些結(jié)果表明，由于病毒CLV致使這些鯉魚瀕死。這些魚的癥狀與那些通過腹腔內(nèi)接種CLV人工感染的魚相同（Miyazaki等人，2000）。自然病魚真皮纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞含有CLV顆粒。VLC似乎是通過損壞表皮被釋放到水中。因此，健康的鯉魚通過輕微的傷口獲得來自患病鯉魚體內(nèi)病毒。 與此相反，除了皮膚潰瘍顯示水腫體征實驗患病鯉魚顯示心肌出血，肝細(xì)胞變性，腎病和含鐵血黃素沉著。電子顯微鏡顯示出真皮損傷纖維細(xì)胞，心肌纖維，脾細(xì)胞和造血細(xì)胞中的CLV顆粒，從而確定CMV感染，含鐵血黃素沉著似乎是由溶