生化試劑的基礎(chǔ)知識(shí)

1、生化試劑的根本知識(shí)一、生化試劑的分類2一按照化學(xué)性質(zhì)分類2二按照臨床應(yīng)用分類2二、反響速度特性2一終點(diǎn)法試劑2二動(dòng)力學(xué)法試劑3三、顯色原理4一NAD-NADH 和 NADP-NADPH 系統(tǒng)5二p-NP 和 p-NA 系統(tǒng)5三H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)5四抗原抗體反響指示系統(tǒng)5五其它顯色反響6四、性能評(píng)價(jià)方法6一主要性能指標(biāo)：6二性能評(píng)價(jià)方法6一、生化試劑的分類一按照化學(xué)性質(zhì)分類1. 酶類：包括 ALT,AST,ALP,ACP,r-Gl a -HBDH丄DH,CK,CK-MB, a -AM%MSO,ADA,ChE 等。2. 底物/代謝產(chǎn)物類：包括 TG,TC,HDLCLDLC,UA,UREA,Cr

2、,Glu,TBAIb,T-Bil,TBA,NH4+,CO2 等。3. 無機(jī)離子類：包括Ca,P,Mg,CI等。4. 特種蛋白類：包括 apoAI,apoB,Lpa,C3,C4,PFBB 因子，lgG,lgA，lgM 等。二按照臨床應(yīng)用分類1. 無機(jī)離子：包ISCa, P, Mg, Cl等。2. 肝功能：包扌iSALT, AST, r-GT, ALP, MSO, T-BiL D-Bil, TBA. TP, Alb 等。3. 腎功能：UA, UREA, Cr等。4. 心肌酶譜：CK, CK-MB, LDH, a-HBDH, AST, MSOo5. 糖尿?。篏LU等。6. 前列腺疾?。篈CP, p-

3、ACP等。7. 胰腺炎：a -AMYo8. 血脂：TC» TG, HDL-C, LDL-C, apoAl, apoB» Lpa。9. 痛風(fēng)：UAo10. 有機(jī)磷中毒:ChEo11. 免疫性疾病:C3, C4. PFBB 因子,IgG, IgA, IgM, Kappa 鏈,Lambda 鏈。二、反響速度特性按照反響速度，町以分為終點(diǎn)法試劑和動(dòng)力學(xué)試劑。而動(dòng)力學(xué)試劑又可再分為零級(jí)動(dòng)力 學(xué)扛和一級(jí)動(dòng)力學(xué)法。一終點(diǎn)法試劑終點(diǎn)法，指經(jīng)過一段時(shí)間一般為幾分鐘的反響，反響進(jìn)行到完全，使全部底物被測物 轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物，稱終點(diǎn)法，更確切地說應(yīng)稱平衡法，這是最理想的分析類型。如圖1。幣個(gè)反響到達(dá)平

4、衡，由于正向反響的平衡常數(shù)很人，町認(rèn)為所白的被測定物已轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn) 物，反響液的吸光度不再増加或降低，吸光度的增加或降低程度與被測定物的濃度成正 比。終點(diǎn)法對反響條件如酶最、pH、溫度小的改變不敏感，只要這種改變不影響在一定時(shí) 間內(nèi)反響到達(dá)平衡即町，是最理想的反響模型。圖(1)屬于終點(diǎn)法的試劑主要有：TG. TC, HDL-C LDL-C, UA. Glu, TP. Alb. T-Bil. D-Bil, Cr (氧化酶法)，NHZ C02 , Ca, P, Mg, Cl , apoAl, apoB, Lp(a), C3, C4. PFB(B 因子)，IgG, IgA, IgM 等。(二)動(dòng)力學(xué)法試

5、劑1. 零級(jí)動(dòng)力學(xué)法零級(jí)動(dòng)力學(xué)法，指反響過程中反響速度維持不變，到達(dá)最大，與底物濃度無關(guān)，因此, 在整個(gè)反響過程中，反響物可以勻速地牛成某個(gè)產(chǎn)物，導(dǎo)致被測定溶液在某一波長卜吸光度 均勻地減小或增加，減小或增加的速度(AA/min)與被測物的活性或濃度成正比，主要用 于酶活性的測定。如圖(2)o實(shí)際上，由于底物濃度不町能足夠人，隨著反響的進(jìn)行，底物消耗到一定程度后，反響 速度不再維持不變，同樣從啟動(dòng)反響到到達(dá)最人速度需要-定時(shí)間。因此，零級(jí)動(dòng)力學(xué)法是 針對特定時(shí)間而言的，各試劑商對這段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定。tl t2 t3tn屬于零級(jí)動(dòng)力學(xué)法的試劑主要有：ALT, AST, ALP, ACP, r-G

6、T, a -HBDH, LDH, CK, CK-MB, a -AMY, MSO, ADA, ChE , TBA 等。2. 一級(jí)動(dòng)力學(xué)法在一定的反響時(shí)間內(nèi)，反響速度與底物濃度的一次方成正比，由于底物在不斷的消耗, 因此幣個(gè)反響的速度在不斷的減少，表現(xiàn)為吸光度的増加或降低速度越來越小，這類反 應(yīng)到達(dá)平衡的時(shí)間很長，理論上可以在任總時(shí)間段進(jìn)行監(jiān)測，但由于血清成份復(fù)雜，反響剛 啟動(dòng)時(shí)反響較復(fù)雜，雜反響較多，經(jīng)過一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定反響期，必需在特定時(shí)間 段內(nèi)進(jìn)行監(jiān)測，備試劑商対這段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定。如圖3。在一固定時(shí)間間隔中，底物濃度的變化量正比于底物的初濃度，這是一級(jí)反響的同性。 該段時(shí)間內(nèi)吸光度

7、的增加或降低與被測物的濃度成止比。屬于一級(jí)動(dòng)力學(xué)法的試劑主要有：Cr 苦味酸法,UREA 紫外監(jiān)測法三、顯色原理顯色系統(tǒng)主要有以卜幾種：> NAD-NADH 和 NADP-NADPH 系統(tǒng)> p-NP和p-NA系統(tǒng)> H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)>抗原抗體反響指示系統(tǒng)>其它顯色反響NAD-NADH 和 NADP-NADPH 系統(tǒng)NADH和NADPH在340nm右特征性吸收峰，而NAD和NADP在340nm無特征性吸收 峰，利用其偶聯(lián)的脫氫酶工具酶反響，根據(jù)340nm吸光度的變化，町以測定物質(zhì)的濃度或 活性。作為該指示系統(tǒng)常用的工只酶有LDH、MDH、GLDH和G6PDH

8、目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測定的臨床工程有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、a -HBDH、Glu、UREA、NH4+、C02 等。二pNP和pNA系統(tǒng)p-NP和p-NA在405nm冇特征性吸收峰，根據(jù)405nm吸光度的變化，町以測定物質(zhì)的 濃度或活性。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測定的臨床工程有ALP、ACP、r-GT、AMY等。三H2O2偶聯(lián)的指不系統(tǒng)H2O2在過氧化物酶的作用下，町使單一個(gè)或成對的無色的色素原氧化成有色的色素， 導(dǎo)致某一波長吸光度的增加，肉此可用來測定物質(zhì)的濃度或活性用于此指示系統(tǒng)的單一色素原冇TMB、ABTS等：成對色素原冇酚和4AA、M盯H和DMA 等。目前利用此指示

9、系統(tǒng)進(jìn)行測定的臨床工程有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu、Cr、UA等。四抗原抗體反響指示系統(tǒng)特異性抗體與抗原待測物質(zhì)在相應(yīng)的緩沖壞境下反響生成抗原抗體復(fù)合物，形成一定 的濁度，導(dǎo)致特定波長透光率的改變。在抗體過剩的前捉卜，改變程度與抗原濃度成正比。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測定的臨床工程有apoAk apoB、Lp、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP 等。五其它顯色反響蛋白質(zhì)中的肽鍵在堿性溶液中能與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，在一定濃度范闈內(nèi)顏 色反響強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的濃度成正比。用于TP的測定。漠甲酚綠BCG在非離子去污劑Brij-35的存在卜，町與白蛋白形成緊密結(jié)合的綠色復(fù) 合

10、物。用于Alb的測定。重氮苯碳酸鹽與膽紅素生成紅紫色偶氮膽紅素。用于總膽紅素和II接膽紅素的測定。甲基麝香草酚蘭MTB在堿性條件卜FJ與Ca、Mg形成有色絡(luò)合物。用于Ca、Mg的測 定。四、性能評(píng)價(jià)方法一主要性能指標(biāo)：1. 穩(wěn)定性：指在規(guī)定條件下經(jīng)過一段時(shí)間的保存，刃能到達(dá)相應(yīng)的性能指標(biāo)，如試劑空白 吸光度、線性范闌、靈敏度等。2. 反響靈敏度：指單位濃度或活性的測定物反響所產(chǎn)生的反響度，反響度越高，靈敏度 越大。3. 精密度：結(jié)果間相互符合的一致程度4. 準(zhǔn)確度：與參考測定程序結(jié)果的一致性5. 線性范圍；在規(guī)定的重復(fù)性和線性偏差下，測得的濃度或活性值與設(shè)定的濃度或活性值 Z間的比例關(guān)系的范用。6. 基質(zhì)效應(yīng)：基質(zhì)指的是樣品中被分析物以外的組分?；|(zhì)常常對分析物的分析過程有顯 著的干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如，溶液的離子強(qiáng)度會(huì)對分析物活度系數(shù)有影 響，這些影響和干擾被稱為基質(zhì)效應(yīng)matrixeffect。7. 抗干擾性：8. 其它：試劑/樣本比例、反響時(shí)間、價(jià)格等。二性能評(píng)價(jià)方法