土壤中有機(jī)磷的測(cè)定

1、土壤中有機(jī)磷的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)土壤中磷知識(shí)總結(jié)、土壤中磷的來(lái)源及分布：土壤中的磷素來(lái)源于成土礦物、有機(jī)物質(zhì)和含磷化學(xué)肥料。土壤全磷量不能作為當(dāng)季作物的土壤供磷的水平指標(biāo)，但可作為表示土壤潛在肥力的一項(xiàng)指標(biāo)。土壤磷素分為無(wú)機(jī)形態(tài)和有機(jī)形態(tài)。無(wú)機(jī)形態(tài)的磷約占全磷的5090，主要包括磷酸鈣類(lèi)化合物（ca-p）、磷酸鐵類(lèi)化合物（fe-p）、磷酸鋁類(lèi)化合物（al-p）和表面為氧化鐵膠膜所封閉的閉蓄態(tài)磷（o-p）。風(fēng)化程度較高的土壤，如紅壤以o-p和fe-p為主，風(fēng)化程度較低的土壤以ca-p和al-p為主。有機(jī)形態(tài)的磷約占全磷1050，主要以磷脂、植素、核酸和核蛋白形式存在。土壤有機(jī)磷含量與土壤有機(jī)質(zhì)含

2、量密切相關(guān)。土壤有效磷是指當(dāng)季作物所能吸收的磷。土壤中磷移動(dòng)性很小。作物吸收的磷主要是土壤溶液中的h2po- 4和hpo2 4-。、磷的營(yíng)養(yǎng)功能：1、磷是植物體內(nèi)重要化合物的組成元素；2、磷能加強(qiáng)光合作用和碳水化合物的合成與運(yùn)轉(zhuǎn)；3、促進(jìn)氮素代謝；4、磷能促進(jìn)脂肪代謝；5、提高作物對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)性、作物磷素營(yíng)養(yǎng)失調(diào)的癥狀    缺磷時(shí)，各種代謝過(guò)程受到抑制，植株生長(zhǎng)遲緩、矮小、瘦弱、直立、根系不發(fā)達(dá)，成熟延遲、籽實(shí)細(xì)小、植株葉小、葉色暗綠或灰綠、缺乏光澤，主要是細(xì)胞發(fā)育不良致使葉綠素密度相對(duì)提高，同時(shí)，fe的吸收間接地促進(jìn)葉綠素合成，使葉色暗，嚴(yán)重缺磷時(shí)，在不少

3、作物莖葉上明顯地呈現(xiàn)紫紅色的條紋或斑點(diǎn)（花青苷）甚至葉片枯死脫落，癥狀一般從基部老葉開(kāi)始。逐漸向上部發(fā)展。    缺磷造成玉米果穗禿頂，油菜脫莢，棉花和果樹(shù)落蕾、落花，甘薯及馬鈴薯薯塊變小，耐貯性變差。 磷素過(guò)剩，谷類(lèi)無(wú)效分蘗，秕粒增加，葉肥厚而密，植株早衰。由于磷過(guò)多，而引起的病癥，通常以缺zn、fe、mg等的失綠癥表現(xiàn)出來(lái)。土壤中磷的測(cè)定方法: 測(cè)定土壤速效磷的方法選擇，酸性土壤一般采用鹽酸氟化銨或氫氧化鈉一草酸鈉法來(lái)提取，石灰性土壤或中性土壤采用碳酸氫鈉來(lái)提取。用 nahco 3 溶液 (ph8.5) 提取土壤速效磷，在石灰性土壤中提取液中的 hco 3 -

4、 可和土壤溶液中的 ca 2+ 形成 caco 3 沉淀，從而降低了 ca 2+ 的活度而使某些活性較大的 cap 被提取出來(lái)。在酸性土壤中因 ph 提高而使 fe-p ， a1-p 水解而部分被提取。實(shí)驗(yàn)部分一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解光度法測(cè)定土壤中有效磷的原理及方法2、熟悉分光光度計(jì)的使用二、實(shí)驗(yàn)原理1、土壤中的磷大部分不能被植物直接吸收利用，易被吸收利用的有效磷通常含量很低。土壤中的有效磷是指能為當(dāng)季作物吸收的磷量。2.土壤中有效磷的測(cè)定方法有：生物方法、同位素方法、陰離子交換樹(shù)脂方法及化學(xué)方法等。其中應(yīng)用最普遍的是化學(xué)方法。它是用浸取劑提取土壤中的一部分有效磷。浸取劑種類(lèi)很多，它的選擇主要根

5、據(jù)各種土壤的性質(zhì)而定。酸性土壤中磷酸鐵和磷酸鋁形態(tài)的有效磷可用酸性氟化銨提取，形成氟鋁化銨和氟鐵化銨配合物，少量的鈣離子形成氟化鈣沉淀，磷酸根離子被提取到溶液中來(lái)，石灰性土壤則采用碳酸氫鈉溶液浸取。3.在含磷的溶液中，加入鉬酸銨，在一定酸度條件下，溶液中的磷酸與鉬酸絡(luò)合形成黃色的磷鉬雜合酸磷鉬黃。h3po4+12h2moo4=h3pmo12o40+12h2o三、主要儀器和試劑 1、 儀器：723分光光度計(jì)，10ml吸量管，振蕩機(jī)，漏斗，濾紙。 2個(gè)滴瓶，50ml帶塞比色管4個(gè)，50ml三角瓶4個(gè)，50ml容量瓶6個(gè),25ml容量瓶4個(gè)。2、  試劑：（1）  &#

6、160;hcl溶液（0.5mol/l）50ml ：4.5ml濃鹽酸+100ml水（2）   nh4f溶液（1mol/l）30ml：稱(chēng)取3.7g氟化銨，溶于100ml蒸餾水中（3）  提取劑：分別移取15ml 1mol/lnh4f溶液和25ml 0.5mol/lhcl溶液，假如460ml蒸餾水中，配制成0.03mol/l nh4f-0.025mol/l hcl溶液（500ml）。（4）   h3bo3溶液（100g/l）100ml ：10g硼酸溶解于水中，稀釋至100ml.（5） 15g/l鉬酸銨-3.5mol/l鹽酸溶液：溶

7、解15g鉬酸銨于300ml蒸餾水中，加熱至60左右，如有沉淀，將溶液過(guò)濾，待溶液冷卻之后，慢慢加入350ml 10mol/l hcl溶液，并用玻璃棒迅速攪動(dòng)，待溶液冷卻至室溫，用蒸餾水稀釋至1l，充分搖勻，儲(chǔ)存于棕色瓶中。放置時(shí)間不得超過(guò)兩個(gè)月。（6）氯化亞錫溶液（25g/l）：稱(chēng)取氯化亞錫2.5 g溶于10ml濃鹽酸中，溶解后加入90ml蒸餾水，混合均勻置于棕色瓶中，此溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。（7）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（50g/ml）：準(zhǔn)確稱(chēng)取105烘干的kh2po4（a.r）0.2195g，溶解于400ml水中加濃h2so45ml(防止溶液長(zhǎng)霉菌)，轉(zhuǎn)入1l容量瓶中，加水稀釋至刻度，要?jiǎng)颉?zhǔn)確移取上述磷標(biāo)準(zhǔn)溶

8、液25.00ml于250ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即為5g·/m l-1（此溶液不宜久存）。 四、    實(shí)驗(yàn)步驟1、吸收池配套性檢驗(yàn) 用拇指和食指捏住洗手池毛面，分別在4個(gè)吸收池內(nèi)注入蒸餾水3/4，用濾紙吸干池外壁的水滴，再用擦鏡紙擦拭光面至無(wú)痕跡，垂直放在吸收池架上，蓋上樣品室蓋，將在參比位置上的吸收池推入光路調(diào)零調(diào)百。拉動(dòng)樣品槽拉桿，依次將被測(cè)溶液推入光路，讀取相應(yīng)的透射比或吸光度。若所測(cè)得各吸收池透射比偏差小于0.5%，則這些吸收池可以配套使用編號(hào)1234透射比2、在不同波長(zhǎng) 條件下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度：用吸量管吸取磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（5µ

9、;g·ml-1）5.0 ml分別放入25 ml容量瓶中，加入0.03mol·l-1nh4f-0.025mol·l-1hcl溶液5-10 ml（按所取濾液毫升數(shù)而定），用吸量管加鉬酸銨-鹽酸溶液5ml，加蒸餾水至瓶頸刻度，并滴加25g·l-1氯化亞錫3滴，搖動(dòng)后，至溶液有深藍(lán)色出現(xiàn)，用水稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，與土樣溶液同時(shí)顯色，用1cm比色皿，以試劑溶液為參比液，于722e型分光光度計(jì)中，在440700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別測(cè)定其吸光度a值。當(dāng)臨近最大吸收波長(zhǎng)附近時(shí)應(yīng)間隔波長(zhǎng)10nm測(cè)a值，其他各處可間隔波長(zhǎng)20nm測(cè)定。然后以波長(zhǎng)為橫坐 標(biāo)，所測(cè)a

10、值為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線，并找出最大吸收峰的波長(zhǎng)。波長(zhǎng)/nm440460480500520540a波長(zhǎng)/nm560580600620640660a波長(zhǎng)/nm680700670675685690a3、在不同顯色劑用量 條件下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度：按步驟2進(jìn)行操作，加入不同量的顯色劑0、1,00、3.0ml、4.0ml、5.0ml、7.0ml、9.00ml搖勻。用1cm吸收池，以試劑空白為參比溶液，在選定的波長(zhǎng)下測(cè)吸光度。記錄各吸光度。在最大吸光度附近每隔0.10ml測(cè)吸光度。氯化亞錫v/ml0.001.003.004.005.007.009.00a4、有色配合物穩(wěn)定性試驗(yàn) 取兩個(gè)潔凈的容量瓶，用

11、步驟（2）方法配制氯化亞錫有色溶液和試劑空白溶液，放置約2min，立即用1cm吸收池，以試劑空白溶液為參比溶液，在選定的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。以后隔10min、20min、30min、60min、120min測(cè)定一次吸光度，并記錄吸光度和時(shí)間。t/min210203060120a5、工作曲線的制作     分別準(zhǔn)確移取5µg·ml-1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于6個(gè)25ml容量瓶中，加入0.03mol·l-1nh4f-0.025mol·l-1hcl溶液5-10 ml（按所取濾液毫升數(shù)而定）

12、，用吸量管加鉬酸銨-鹽酸溶液5ml，加蒸餾水至瓶頸刻度，并滴加25g·l-1氯化亞錫3滴，搖動(dòng)后，至溶液有深藍(lán)色出現(xiàn)，用水稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，與土樣溶液同時(shí)顯色，測(cè)其吸光度。v/ml0.001.002.03.004.005.00ac ug/ml 以磷的微克數(shù)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，6、土壤樣品預(yù)處理  稱(chēng)取風(fēng)干土壤樣品1g（精確至0.01g）,放入50100ml小塑料瓶（或50ml帶塞比色管）中，加入0.03mol·l-1nh4f-0.25mol·l-1hcl溶液20ml，稍搖勻，立即放在振蕩機(jī)上，振蕩30分鐘。用無(wú)磷干

13、濾紙過(guò)濾，濾紙承接于盛有100g·l-1h3bo3溶液15滴的50ml 三角瓶中，搖動(dòng)瓶?jī)?nèi)溶液（加h3bo3防止f-1對(duì)顯色的干擾和腐蝕玻璃儀器）。 7、土壤中有效磷的測(cè)定     準(zhǔn)確移取上述土壤濾液510ml容量瓶中，用吸量管加入15g·l-1鉬酸銨-鹽酸溶液5ml，搖勻，加入蒸餾水至瓶頸刻度，滴加25g·l-1.氯化亞錫3滴后，再用水稀釋至刻度，充分搖勻。顯色15min后，再分光光度計(jì)上，以試劑為空白，用1cm比色皿在680nm處測(cè)其吸光度值。 測(cè)定次數(shù)123吸光度a質(zhì)量濃度g/ml平均質(zhì)量濃度g/ml相對(duì)極差%五、注

14、意事項(xiàng) 用氯化亞錫作還原劑作還原劑生成磷鉬鹽，溶液的顏色不夠穩(wěn)定，必須嚴(yán)格控制比色時(shí)間，一般在顯色后的15-20分鐘內(nèi)顏色較為穩(wěn)定，顯色后應(yīng)準(zhǔn)確放置15min后，立即比色，并在5min內(nèi)完成比色操作。  六、數(shù)據(jù)處理 七、實(shí)驗(yàn)評(píng)議與討論所需儀器與試劑清單1、 儀器723分光光度計(jì)，10ml吸量管，振蕩機(jī)，漏斗濾紙。2個(gè)滴瓶，50ml帶塞比色管4個(gè)，50ml三角瓶4個(gè)，50ml容量瓶6個(gè),25ml25ml容量瓶4個(gè)。2、 試劑（1）   hcl溶液（0.5mol/l）：4.2ml濃鹽酸+100ml水（2）   nh4

15、f溶液（1mol/l）： 稱(chēng)取3.7g氟化銨，溶于100ml蒸餾水中（3）  提取劑：分別移取15ml 1mol/lnh4f溶液和25ml 0.5mol/lhcl溶液，假如460ml蒸餾水中，配制成0.03mol/l nh4f-0.025mol/l hcl溶液（500ml）。（4）   h3bo3溶液（100g/l）100ml ：10g硼酸溶解于水中，稀釋至100ml.（5） 15g/l鉬酸銨-3.5mol/l鹽酸溶液：溶解15g鉬酸銨于300ml蒸餾水中，加熱至60左右，如有沉淀，將溶液過(guò)濾，待溶液冷卻之后，慢慢加入350ml 10mol/l hcl溶液，并用玻璃棒迅速攪動(dòng)，待溶液冷卻至室溫，用蒸餾水稀釋至1l，充分搖勻，儲(chǔ)存于棕色瓶中。放置時(shí)間不得超過(guò)兩個(gè)月。（6）氯化亞錫溶液（25g/l）：稱(chēng)取氯化亞錫2.5 g溶于10ml濃鹽酸中，溶解后加入90ml蒸餾水，混合均勻置于棕色瓶中，此溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。（7）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（50g/ml）：準(zhǔn)確稱(chēng)取105烘干的kh2po4（a.r）0.2195g，溶解于400ml水中加濃h2so45ml(防止溶液長(zhǎng)霉菌)，轉(zhuǎn)入1l容量瓶中，加水稀釋至