免疫標準操作程序SOP

1、72蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科標準操作文件標準操作程序項 目甲型肝炎病毒IgM檢測的標準操作程序方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號CHDEYY-JYK-MY-001文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室甲型肝炎病毒IgM檢測的標準操作程序WHDRYY-JYK-MY-001共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可

2、靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)專業(yè)主管、科主任批準簽字。標本的采取和保存采靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理采用兔抗-人IgMu鏈包被反應被，加入待測標本，同時加入HAVAg，抗HAV-HRP，如待測標本中含有抗-HAV-IgM時，就能與包被兔抗-人IgMu鏈結(jié)合，并且與HAVAg,抗-HAV-HRP結(jié)合成復合物，加TMB底物產(chǎn)生顯色反應，反之則無顯色反應。操作步驟1. 將待測標本用生理鹽水作（1：1000）稀釋，每孔加入稀釋標本100ul，設陰、

3、陽性對照各2空，每孔加入陰性對照（或陽性對照）100ul（或2滴），并設空白對照一孔，封板，置37度孵育20分鐘。2. 洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各空，靜置5秒，甩干，重復三次后拍干。3. 每孔加入HAVAg30ul（或一滴），酶結(jié)合物50ul（或一滴），（空白對照孔不加），充分混勻，封板，置37度孵育20分鐘。4. 洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各空，靜置5秒，甩干，重復三次后拍干。5. 每孔加顯色劑A液、B液各50ul（或一滴），充分混勻，封板，置37度孵育10分鐘。6. 每孔加入終止液50ul（或

4、一滴），混勻。7. 用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm），先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷樣品OD值除以陰性對照平均OD值大于或等于2.1判斷為陽性，否則為陰性陰性對照OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算臨床意義血清中HAVIgM在亞臨床期即已出現(xiàn)，其滴度在感染后3個月維持在1000以上，早被公認為早期診斷甲型肝炎的依據(jù)。注意事項1 試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3 洗板時所用的洗水紙請勿反復。

5、4 不同批號試劑請勿通用。5 結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室甲型肝炎病毒IgM檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-001共2頁 第2頁2005-01-016 封片不能重復使用。7 用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目乙肝表面抗原檢測的標準操作程序方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY

6、-002文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝表面抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理雙抗體夾心法測HBsAg：抗S包被反應板，加入待測血清后，再加入酶標抗S，加底物

7、顯色為陽性，證明樣本中含被測物，含量與顯色程度成正比。操作步驟1 實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升，并設陽性對照2孔，陰性對照2孔，空白對照1孔。3 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升，空白對照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。4 洗板：1） 手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置510秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復5次，拍干。2） 洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避

8、光孵育15分鐘。6 終止反應：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。7 測定：用酶標儀讀數(shù)，可選擇波長450nm（以空白孔校零）或雙波長450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值*2.1標本OD值大于COV為陽性，標本OD值小于COV為陰性注：陰性對照OD值低于0.05按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。臨床意義HbsAg在感染早期出現(xiàn)于患者血循環(huán)中，可持續(xù)數(shù)月，數(shù)年乃至終生，是診斷HBV感染最常用的指標。但所謂HBV感染的“窗口期”，HbsAg可以陰性，而抗HBc等其他HBV血清標志物則可陽性。注意事項1試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂

9、直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝表面抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2頁 第2頁2005-01-014不同批號試劑請勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目乙肝表面抗體檢測的標準操作程序方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/0

10、1/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-003文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝表面抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避

11、免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理雙抗原夾心一步法測HbsAb：S抗原反應包被板，加入待測血清后，再加入酶標抗S，加底物顯色為陽性，證明樣品中含被測物，含量與顯色程度成正比。操作步驟1 實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升，并設陽性對照2孔，陰性對照2孔，空白對照1孔。3 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升，空白對照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。4 洗板：a) 手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置510秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復5次，拍干。b) 洗板機洗

12、板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。6 終止反應：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。7 測定：用酶標儀讀數(shù)，可選擇波長450nm（以空白孔校零）或雙波長450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值*2.1標本OD值大于COV為陽性，標本OD值小于COV為陰性注：陰性對照OD值低于0.05按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。臨床意義抗HBs為HBV的中和抗體，有清除HBV，防止在感染的作用，抗HBs一般出現(xiàn)于乙肝患者恢復期，提

13、示感染已終止。此外，注射過乙肝疫苗的人，抗HBs陽性。注意事項1試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。4不同批號試劑請勿通用。實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝表面抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2頁 第2頁2005-01-015結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目乙肝E抗原檢測的標準操作程序方 法ELISA方法編

14、寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-004文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝E抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本

15、的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理雙抗體夾心法測HbeAg：抗e包被反應板，加入待測血清后，再加入酶標抗e，加底物顯色為陽性，證明樣本中含被測物，含量與顯色程度成正比。操作步驟1 實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升，并設陽性對照2孔，陰性對照2孔，空白對照1孔。3 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升空白對照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。4 洗板：a) 手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；

16、用洗滌液注滿每孔，靜置510秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復5次，拍干。b) 洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。6 終止反應：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。7 測定：用酶標儀讀數(shù)，可選擇波長450nm（以空白孔校零）或雙波長450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值*2.1標本OD值大于COV為陽性，標本OD值小于COV為陰性注：陰性對照OD值低于0.05按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。臨床意義HBeAg

17、是HBV的核心部分，故一般認為HBeAg陽性是具有傳染性的標志，在乙肝潛伏期乃至整個病程中，HBeAg均可檢出?？笻Be是HBeAg的相應抗體。一般認為HbeAg消失和抗HBe出現(xiàn)是病情趨向好轉(zhuǎn)的征象。但并不意味著HBV DNA停止復制，或傳染性消失。注意事項1試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝E抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2頁 第2頁2005-01-014不同批

18、號試劑請勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目乙肝E抗體檢測的標準操作程序方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-005文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪湖市第一人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝E抗體檢測的標準操作程序WDYYY-JYK

19、-MY-005共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理競爭抑制一步法測HBeAb：抗e包被反應板，加入待測血清后，加入中和e抗原，再加入酶標抗e，加底物不顯色的為陽性，證明樣本含被測物，含量與顯色程度成反比。操作步驟1 驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測

20、標本：加入待測標本每孔0.05毫升，并設陽性對照2孔，陰性對照2孔，空白對照1孔。3 加中和試劑：每孔0.05毫升，空白對照孔不加。4 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升空白對照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。5 洗板：a) 手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置510秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復5次，拍干。b) 洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。6 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。7 終止反應：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。8 測定：用酶標儀讀數(shù)，可選擇波長450nm（以空白

21、孔校零）或雙波長450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值*0.3標本OD值大于或等于COV為陰性，標本OD值小于COV為陽性注：非原倍血清樣品（稀釋血清、質(zhì)控血清）COV=陰性對照*0.5臨床意義抗HBe是HBeAg的相應抗體。一般認為HbeAg消失和抗HBe出現(xiàn)是病情趨向好轉(zhuǎn)的征象。但并不意味著HBV DNA停止復制，或傳染性消失。注意事項1試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。實驗室名稱項目編號制定日期

22、蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝E抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-005共2頁 第2頁2005-01-014不同批號試劑請勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目乙肝核心抗體檢測的標準操作程序方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-006文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦

23、公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝核心抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理競爭抑制一步法測HBcAb：抗c包被反應板，加入待測血清后，加入中和c抗原，再加入酶標抗抗c，加底物不顯色的為陽性，證明樣本含

24、被測物，含量與顯色程度成反比。操作步驟1 實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升，并設陽性對照2孔，陰性對照2孔，空白對照1孔。1）1：30稀釋血清（血漿）檢測結(jié)果代表臨床意義，待檢標本可用稀釋后的洗滌液加以稀釋2）原倍血清（血漿）檢測結(jié)果代表流行病學意義。3 酶結(jié)合物：每孔0.05毫升（抗HBc1：30稀釋血清代表臨床意義，可用稀釋后的洗滌液加以稀釋；原倍血清代表流行病學意義），空白對照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。4 洗板：a) 手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置5

25、10秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復5次，拍干。b) 洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。6 終止反應：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。7 測定：用酶標儀讀數(shù)，可選擇波長450nm（以空白孔校零）或雙波長450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計算：原倍血清COV=陰性對照平均OD值*0.31：30稀釋血清COV=陰性對照平均OD值*0.5標本OD值大于或等于COV為陰性，標本OD值小于COV為陽性。臨床意義抗HBc是HBeAg的相應抗體，也是HBV感

26、染后血清中最早出現(xiàn)的HBV的標志性抗體。持續(xù)時間長，甚至終生存在。幾乎所有個體在感染HBV后都能產(chǎn)生抗HBc，故它是乙肝流行病學調(diào)查的良好指標。在HBV感染的“窗口期”抗HBc常是唯一可測出的HBV血清標志物。注意事項實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝核心抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2頁 第2頁2005-01-011試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。4不同批號試劑請勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成

27、。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目乙肝病毒Pre-S1抗原檢測的標準操作程序 方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-007文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝病毒Pre-S1抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-007共

28、1頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理用乙肝病毒Pre S1蛋白抗體和抗HBS分別用作酶標記抗體和包被抗體。采用ELISA雙抗體夾心一步法檢測標本中的乙肝病毒Pre S1蛋白。操作步驟1 將包被條固定于支架并編上序號。2 設陽性對照2孔，每孔加入陽性對照50微升，陰性對照2孔，每孔加入陰性對照50微升，空白對照一孔

29、，加入生理鹽水100微升。然后，依次在反應孔內(nèi)加入待測樣品50微升，除空白孔外，每孔再加酶結(jié)合物50微升，置微型震蕩器混勻5秒后，蓋好封片放37孵育60分鐘。3 棄去反應孔內(nèi)液體并拍干，用工作洗滌液（濃縮洗滌液1毫升加19毫升蒸餾水稀釋后即為工作洗滌液）注滿各孔，靜置30秒，再拍干，重復洗滌5次。4 每孔加入TMB顯色劑A50微升，在加入TMB顯色劑B50微升，37中顯色1015分鐘。5 每孔加入終止液50微升。6 用酶標儀波長450nm讀數(shù)，先用空白孔調(diào)零，然后讀取各測定孔OD值。結(jié)果判斷陰性對照A值*2.5=臨界值陰性對照小于0.05時，按0.05計算，高于0.05時按實際OD值計算。待測

30、樣本大于臨界值即為陽性，待測樣本小于臨界值即為陰性。臨床意義乙肝病毒PreS1抗原（前s1抗原）主要存在于病毒完整顆粒中，表示病毒具有復制功能和傳染性。其敏感性好于HBeAg，可彌補由于HBeAg變異等造成的HBeAg陰性的臨床“誤導”。在早期診斷上早于乙肝兩對半和ALT。可與HBvDNA取得幾乎同樣的敏感性。注意事項1 包被條需密封防潮，從冰箱取出后，在室溫中平衡不少于15分鐘。2 保存在28度，在有效期內(nèi)使用。3 終止液終止后，需在30分鐘內(nèi)測定結(jié)果。4 不同批號試劑請勿通用。5用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目丙型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序

31、方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-008文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丙型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字

32、：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理采用ELISA間接抗體兩步法測抗HCV，用HCV抗原包被反應板加入待測標本后再加入酶標記第二抗體，加底物顯色為陽性，證明樣本中含丙肝抗體，含量與顯色程度成正比。操作步驟1 每次試驗設陰性、陽性對照各兩孔，分別加入陰、陽性對照血清100ul，再設一孔空白對照，加入樣品稀釋液100ul。其余孔加100ul樣品稀釋液，再加待測血清10ul。充分混勻后，置37溫育30分鐘。2 洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。3 每孔加酶結(jié)

33、合物100ul，（空白對照除外），置37溫育20分鐘。4 洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 每孔加顯色劑A、B各50ul，輕輕震蕩后，37避光靜置10分鐘。6 每孔加入終止液50ul終止反應，用酶標儀讀數(shù)，可選擇波長450nm（以空白調(diào)零），讀取各孔OD值。結(jié)果判斷1 陽性對照平均值大于1.20，實驗結(jié)果有效。2 實驗設計要求陽性、陰性對照OD值之差應大于1.20，否則本次實驗無效。3 若陰性對照值小于0.050時，按0.050計算。4 臨界值=陰性對照平均值+0.15 測試標本的計算值小于臨界值則為HCV抗體陰性。6 測試標本的計算值等于或大于臨界值則為HCV抗體陽性。臨床意

34、義抗HCV陽性僅提示已被HCV感染，不是獲得免疫力的標志。急性期多為IgM型，慢性期多為IgG型，兩者均為非保護性抗體，是具有傳染性的標志。注意事項1 試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3 洗板時所用的洗水紙請勿反復。4 不同批號試劑請勿通用。5 結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6 封片不能重復使用。實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丙型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2頁 第1頁2005-01-017用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，

35、請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgG）方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-009文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-009共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確

36、可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理采用丁型肝炎病毒特異性抗原成分作為包被抗原，采用ELISA法檢測丁型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應孔，在隨后的溫育過程中，若樣品中含特異性抗體，則該抗體與包被抗原形成抗原抗體復合物被吸附到固相上，再加上酶標記的第二抗體，最終形成抗原抗體酶標二抗復合物，洗滌除去未結(jié)合的游離酶，加入顯色劑后顯色，反之若樣品中不含

37、特異性抗體，則加入顯色劑后不顯色。操作步驟1 配洗液：將洗滌液（20倍）與蒸餾水按1：19的比例稀釋，充分搖勻后備用。2 加樣品稀釋液：用加樣器在微孔反應條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul，空下四孔準備加對照。3 加標本和留空白：將每份待檢標本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中，留下一孔不加標本做空白對照，標好位置。4 加對照：在預先空下的4孔分別加入陰性對照兩孔，陽性對照兩孔每孔100ul，標好位置，陰、陽對照應在所有待測標本加完后再加，以保證閾值計算的準確性。5 溫育（一）：充分混勻，37溫育20分鐘。6 洗板（一）：洗板機洗板：洗板次數(shù)為5次，每次洗液在孔中滯留時間為1530秒，洗液

38、應注滿反應孔，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。7 加酶標二抗：各孔中加入酶標二抗100ul。8 溫育（二）：37溫育20分鐘。9 洗板（二）：方法同洗板（一）。10 加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后，再次每孔加入顯色劑B50ul，混勻。11 溫育（三）：37顯色10分鐘。12 終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液，混勻。13 判斷：終止后應在10分鐘內(nèi)完成判讀，用空白對照調(diào)零，用酶標儀在450nm波長處測定吸光值。結(jié)果判斷1 對空白對照調(diào)零后，兩孔陽性對照OD平均值大于兩孔陰性對照OD平均值0.5以上，陰性對照OD平均值小于0.10時，方可認為試劑盒

39、有效并且用戶操作無誤。2 閾值的計算：1）兩孔陰性對照平均值小于0.06按0.06計算 2）閾值=2.1乘以陰性對照OD平均值臨床意義實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-009共2頁 第1頁2005-01-01HDV是一種有缺陷的病毒，表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依賴于HBV，可與HBV重疊感染或共同感染，HDV感染與暴發(fā)型肝炎重癥肝炎及肝硬變密切相關。HDV感染的血清學檢測測定抗HDVIgG，一般認為是即往感染。注意事項1 試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2 從冷藏環(huán)境

40、中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3 洗板時所用的洗水紙請勿反復。4 不同批號試劑請勿通用。5 結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6 封片不能重復使用。7 用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgM）方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-010文件版本號第1版醫(yī)務科保管

41、者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgM）WHDEYY-JYK-MY-010共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理采用丁型肝炎病毒特異性抗原成分作為包被抗原，采用ELISA法檢測丁型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液

42、的包被抗原反應孔，在隨后的溫育過程中，若樣品中含特異性抗體，則該抗體與包被抗原形成抗原抗體復合物被吸附到固相上，再加上酶標記的第二抗體，最終形成抗原抗體酶標二抗復合物，洗滌除去未結(jié)合的游離酶，加入顯色劑后顯色，反之若樣品中不含特異性抗體，則加入顯色劑后不顯色。操作步驟1 配洗液：將洗滌液（20倍）與蒸餾水按1：19的比例稀釋，充分搖勻后備用。2 加樣品稀釋液：用加樣器在微孔反應條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul，空下四孔準備加對照。3 加標本和留空白：將每份待檢標本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中，留下一孔不加標本做空白對照，標好位置。4 加對照：在預先空下的4孔分別加入陰性對照兩孔，陽

43、性對照兩孔每孔100ul，標好位置，陰、陽對照應在所有待測標本加完后再加，以保證閾值計算的準確性。5 溫育（一）：充分混勻，37溫育20分鐘。6 洗板（一）：洗板機洗板：洗板次數(shù)為5次，每次洗液在孔中滯留時間為1530秒，洗液應注滿反應孔，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。7 加酶標二抗：各孔中加入酶標二抗100ul。8 溫育（二）：37溫育20分鐘。9 洗板（二）：方法同洗板（一）。10 加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后，再次每孔加入顯色劑B50ul，混勻。11 溫育（三）：37顯色10分鐘。12 終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液，混勻。13 判

44、斷：終止后應在10分鐘內(nèi)完成判讀，用空白對照調(diào)零，用酶標儀在450nm波長處測定吸光值。結(jié)果判斷1 對空白對照調(diào)零后，兩孔陽性對照OD平均值大于兩孔陰性對照OD平均值0.5以上，陰性對照OD平均值小于0.10時，方可認為試劑盒有效并且用戶操作無誤。2 閾值的計算：1）兩孔陰性對照平均值小于0.06按0.06計算 2）閾值=2.1乘以陰性對照OD平均值臨床意義實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgM）WHDEYY-JYK-MY-010共2頁 第2頁2005-01-01HDV是一種有缺陷的病毒，表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依賴于HB

45、V，可與HBV重疊感染或共同感染，HDV感染與暴發(fā)型肝炎重癥肝炎及肝硬變密切相關。HDV感染的血清學檢測測定抗HDVIgM。陽性一般認為是近期感染。注意事項1 試劑使用前應搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內(nèi)儲藏備用。3 洗板時所用的洗水紙請勿反復。4 不同批號試劑請勿通用。5 結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6 封片不能重復使用。7 用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項 目戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgG）方 法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/0

46、1審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室，醫(yī)務科本規(guī)程自2005年01月01日起實施，每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-011文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-011共2頁 第1頁2005-01-01目的保證檢測結(jié)果準確可靠。該SOP變動程序本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。標本的采取和保存隨機靜

47、脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。測定原理采用戊型肝炎病毒（HEV）特異性抗原成分作為包被抗原，采用ELISA法檢測戊型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應孔，在隨后的溫育過程中，若樣品中含特異性抗體，則該抗體與包被抗原形成抗原抗體復合物被吸附到固相上，再加上酶標記的第二抗體，最終形成抗原抗體酶標二抗復合物，洗滌除去未結(jié)合的游離酶，加入顯色劑后顯色，反之若樣品中不含特異性抗體，則加入顯色劑后不顯色。操作步驟1 配洗液：將洗滌液（20倍）與蒸餾水按1：19的比例稀釋，充分搖勻后備用。2 加樣品稀釋液

48、：用加樣器在微孔反應條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul，空下四孔準備加對照。3 加標本和留空白：將每份待檢標本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中，留下一孔不加標本做空白對照，標好位置。4 加對照：在預先空下的4孔分別加入陰性對照兩孔，陽性對照兩孔每孔100ul，標好位置，陰、陽對照應在所有待測標本加完后再加，以保證閾值計算的準確性。5 溫育（一）：充分混勻，37溫育20分鐘。6 洗板（一）：洗板機洗板：洗板次數(shù)為5次，每次洗液在孔中滯留時間為1530秒，洗液應注滿反應孔，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。7 加酶標二抗：各孔中加入酶標二抗100ul。8 溫育（二）：3

49、7溫育20分鐘。9 洗板（二）：方法同洗板（一）。10 加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后，再次每孔加入顯色劑B50ul，混勻。11 溫育（三）：37顯色10分鐘。12 終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液，混勻。13 判斷：終止后應在10分鐘內(nèi)完成判讀，用空白對照調(diào)零，用酶標儀在450nm波長 處測定吸光值。結(jié)果判斷1 對空白對照調(diào)零后，兩孔陽性對照OD平均值大于兩孔陰性對照OD平均值0.5以上，陰性對照OD平均值小于0.10時，方可認為試劑盒有效并且用戶操作無誤。2 閾值的計算：1）兩孔陰性對照平均值小于0.06按0.06計算 2）閾值=2.1乘以陰性對照OD平均值臨床意義實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-011共2頁 第2