實驗三顯微鏡油鏡的使用和細菌的革蘭氏染色

1、實驗三、細菌的革蘭氏染色和顯微鏡油鏡的使用一、實驗目的一、實驗目的 了解并掌握油鏡的原理和使用方法； 掌握細菌革蘭氏染色的原理和方法，學會在油鏡下觀察細胞和識別細菌的形態(tài)特征。二、實驗材料二、實驗材料 1、菌種：大腸桿菌、葡萄球菌、菌種：大腸桿菌、葡萄球菌 2、儀器：顯微鏡、儀器：顯微鏡 3、染色液：草酸銨結(jié)晶紫染色液、染色液：草酸銨結(jié)晶紫染色液、lugol碘液、碘液、95乙醇、乙醇、0.5%沙黃染色液沙黃染色液 4、材料：載玻片、香柏油、二甲苯、擦鏡、材料：載玻片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙紙三、實驗原理（一）普通光學顯微鏡（一）普通光學顯微鏡（p.21-23）1.光學部分光學部分: :接目鏡接

2、目鏡 、 接物接物鏡鏡 、 照明裝置照明裝置(聚光鏡、聚光鏡、 虹虹彩光圈、彩光圈、 反光鏡等反光鏡等)。 它使檢它使檢視物放大視物放大, ,造成物象。造成物象。2.機械部分機械部分: :鏡座、鏡臂、鏡筒、鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件。它起著支持、調(diào)節(jié)、等部件。它起著支持、調(diào)節(jié)、固定等作用。固定等作用。圖圖1-1-2 光學顯微鏡的成像原理光學顯微鏡的成像原理倒立的虛像倒立的虛像顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率d值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰（二）油鏡使用的原理（

3、二）油鏡使用的原理 油鏡，即油浸接物鏡。當光油鏡，即油浸接物鏡。當光線由反光鏡通過玻片與鏡頭線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于空氣與之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（質(zhì)是一層油（其折射率與玻其折射率與玻片的相近片的相近），則幾乎不發(fā)生），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。從而使物象更加清晰。u根據(jù)公式根據(jù)公式 ，增大分母，使得，增大分母，使得d值值減小，分辨率增大。減小，分辨率增大。1.不準擅

4、自拆卸顯微鏡的任何部件不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件, ,以免損壞。以免損壞。2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度以保證光潔度3.觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用最后用油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。片或損傷鏡面。4.拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。座，不可單手拿，更不可傾斜拿。5.顯微鏡應存放在陰

5、涼干燥處，以免鏡片滋生顯微鏡應存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片霉菌而腐蝕鏡片。（三）顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項1、實驗原理（、實驗原理（p.29）革蘭氏染色法是細菌學中重要的鑒別染色法。革蘭氏染色法是細菌學中重要的鑒別染色法。有芽孢的桿菌有芽孢的桿菌和和絕大多數(shù)球菌絕大多數(shù)球菌以及以及所有的放線所有的放線菌和真菌菌和真菌都呈革蘭氏都呈革蘭氏陽性陽性反應；反應；弧菌、螺旋體弧菌、螺旋體和和大多數(shù)致病性的無芽孢桿菌大多數(shù)致病性的無芽孢桿菌都都呈現(xiàn)呈現(xiàn)陰性陰性反應。反應。（四）、革蘭氏染色原理及操作經(jīng)典法，四步法經(jīng)典法，四步法（p.29-31）2、實驗操作vp.30，采用三區(qū)涂片法，采

6、用三區(qū)涂片法大腸桿菌大腸桿菌葡萄球菌葡萄球菌（1）涂片：）涂片：載玻片要潔凈無油跡；滴生理：載玻片要潔凈無油跡；滴生理鹽水和取菌不宜過多，涂片要均勻，不可鹽水和取菌不宜過多，涂片要均勻，不可過于濃厚過于濃厚（2 2）固定：）固定：染色前必須固定細菌，其目的是：染色前必須固定細菌，其目的是：一是殺死細菌并使菌體粘附于玻片上。一是殺死細菌并使菌體粘附于玻片上。二是增加其對染料的親和力。常用加熱固定二是增加其對染料的親和力。常用加熱固定法。固定時盡量維持細胞原有的形態(tài)。法。固定時盡量維持細胞原有的形態(tài)。 （3）染色（先閱讀）染色（先閱讀p.31的注意事項）的注意事項） 革蘭氏染色結(jié)果是否正確，乙醇脫

7、色革蘭氏染色結(jié)果是否正確，乙醇脫色是整個操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色不足，陰性是整個操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色不足，陰性菌被誤染成陽性菌，脫色過度，陽性菌被菌被誤染成陽性菌，脫色過度，陽性菌被誤染成陰性菌。誤染成陰性菌。 染色過程中勿使染色液干涸。用水沖染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應摔去細胞上的殘水，以免染色液洗后，應摔去細胞上的殘水，以免染色液被稀釋。被稀釋。（4）鏡檢）鏡檢(p.24，用低倍、高倍、油鏡，用低倍、高倍、油鏡分別觀察細菌分別觀察細菌)以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準，過以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準，過于密集的細菌，常常呈假陽性。于密集的細菌，常常呈假陽性。（5）顯微鏡用畢后的處理（）顯微鏡用畢后的處理（p.25） 油鏡使用完畢后一定要用二甲苯擦拭鏡油鏡使用完畢后一定要用二甲苯擦拭鏡頭，但二甲苯量不可過多頭，但二甲苯量不可過多！v本實驗每人做一張。本實驗每人做一張。v實驗報告中要畫圖表示結(jié)果（低倍、高倍、實驗報告中要畫圖表示結(jié)果（低倍、高倍、油鏡）。油鏡）。3、實驗報告實驗思考題（回答在實驗報告上）1.涂片為何要固定？固定加熱時間過長會怎樣涂片為何要固定？固定加熱時間過長會怎樣2.使用油鏡時，為什么必須用香柏油？使用油鏡時，為什么必須用香柏