第18章 經(jīng)典液相色譜法

1、 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述經(jīng)典液相色譜法經(jīng)典液相色譜法：采用普通規(guī)格的固定相，常壓輸送 流動相的液相色譜法稱。（如M. Tsweet法）（一）分離原理（二）常用吸附劑（三）色譜條件的選擇（二）常用吸附劑（二）常用吸附劑：多孔、微粒狀物質(zhì) 1. 硅膠 2. 氧化鋁 3. 聚酰胺吸附能力大小取決于吸附中心的多少吸附中心的多少和吸附中心與被吸附組分形成氫鍵能力的大小氫鍵能力的大小結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：內(nèi)部硅氧交聯(lián)結(jié)構(gòu)多孔結(jié)構(gòu) 表面有硅醇基氫鍵作用吸附活性中心表面硅醇基存在形式：SiOH游離羥基吸附特性吸附特性1：易吸水失活 105110烘干 0.51h(可逆失水)吸附力最大 活化（活化（P469）：）：鋪好的硅膠

2、板自然晾干后，在烘箱中于 105110烘干0.51h的過程 500 烘干(不可逆失水)活性喪失，無吸附力表表18-1 硅膠和氧化鋁的含水量與活性的關(guān)系硅膠和氧化鋁的含水量與活性的關(guān)系活性級越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小活性級越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小 活性 活性級 吸附能力 吸水量與極性物質(zhì)形成氫鍵物質(zhì)極性，吸附能力，k ，tR 分析具有酸性或中性物質(zhì) 2. 氧化鋁氧化鋁 堿性氧化鋁 pH 910 適于分析堿性、中性物質(zhì) 中性氧化鋁 pH7.5 適于分析酸性堿性和中性物質(zhì) 酸性氧化鋁 pH 45 適于分析酸性、中性物質(zhì)3. 聚酰胺聚酰胺 氫鍵作用 氫鍵能力強(qiáng)，組分越后出

3、柱 1. 被測組分性質(zhì)（極性大?。罕粶y組分性質(zhì)（極性大?。?烴 - - - - - - - - 羧酸，醇 判斷物質(zhì)極性大小的規(guī)律：判斷物質(zhì)極性大小的規(guī)律： 基本母核相同，基團(tuán)極性， 分子極性，吸附能力 極性基團(tuán)數(shù)，分子極性，吸附能力 分子中雙鍵越多，極性， ，吸附能力取代基空間排列：形成分子內(nèi)氫鍵極性不形成OHOHOHOHOH2. 吸附劑的活性：吸附劑的活性： 吸附劑的活性大，對被測組分的吸附能力強(qiáng) 強(qiáng)極性物質(zhì)強(qiáng)極性物質(zhì)選擇弱吸附劑選擇弱吸附劑 弱極性物質(zhì)弱極性物質(zhì)選擇強(qiáng)吸附劑選擇強(qiáng)吸附劑3. 流動相的極性：流動相的極性： 流動相極性大，對被測組分的洗脫能力大 “相似相溶相似相溶”原則原則

4、 ：根據(jù)組分性質(zhì)、吸附劑的活性，：根據(jù)組分性質(zhì)、吸附劑的活性， 選擇適當(dāng)極性的流動相選擇適當(dāng)極性的流動相 常用的流動相極性遞增的次序是： 石油醚環(huán)已烷四氯化碳苯甲苯乙醚氯仿 醋酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水。4. 4. 三者關(guān)系圖示：三者關(guān)系圖示： 組分 吸附劑 流動相 極性 活性小 極性 非(弱)極性 活性大 非極性或弱極性第三節(jié)平面色譜法的分類和參數(shù)第三節(jié)平面色譜法的分類和參數(shù) 分類分類薄層色譜法TLC： 紙色譜法PC：分配色譜法 平面色譜參數(shù)平面色譜參數(shù) 定性參數(shù)比移值Rf 相平衡參數(shù)K、k 分離參數(shù)分離度R吸附薄層色譜法分配薄層色譜法1、定性參數(shù)、定性參數(shù) 比移值比移值(Rf值值)溶質(zhì)移動

5、距離與展開劑移動距離之比 Rf =L/L0 （定時(shí)展開）（定時(shí)展開）L為原點(diǎn)（origin）至斑點(diǎn)中心（質(zhì)量重心）的距離L0為原點(diǎn)至溶劑前沿（solvent front）的距離 類似保留時(shí)間（定距展開） 與組分及色譜條件有關(guān)與組分及色譜條件有關(guān) 2、相平衡參數(shù)、相平衡參數(shù) 分配系數(shù)分配系數(shù)K= Cs/Cm 容量因子容量因子 k= CsVs/CmVm K、k與與Rf值的關(guān)系：值的關(guān)系：kR11fff1RRk或smmmsKVVVVKVR/11f討論討論 Rf與K有關(guān)，即與組分性質(zhì)（極性）以及吸附劑 和展開劑的性質(zhì)有關(guān)；色譜條件一定，Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)，是薄層色譜基本定性參數(shù)，說明組分的色譜保留行

6、為fRK, 1）K大，Rf小 2）薄層板一定，對于極性組分 展開劑極性大，Rf大（容易洗脫） 展開劑極性小，Rf小 （不容易洗脫） 3）Rf范圍：0 Rf 苯極性 根據(jù)“相似相溶”原則，B極性大 組分 吸附劑 流動相 極性 活性小 極性 非(弱)極性 活性大 非極性或弱極性（四）操作方法（四）操作方法1.制板（軟板；制板（軟板；硬板硬板）活化：活化：105烘箱活化烘箱活化1h，以提高吸附劑的吸附活性，以提高吸附劑的吸附活性2 2、點(diǎn)樣、點(diǎn)樣: : 用微量注射器或玻璃毛細(xì)管吸取一定量試樣點(diǎn)在原點(diǎn)上。試樣點(diǎn)的直徑一般應(yīng)小于5mm。可并排點(diǎn)多個(gè)試樣同時(shí)展開3 3、展開：、展開：由一種或多種溶劑按一定

7、比例組成。注意克服邊緣效應(yīng)(預(yù)飽和)4.顯色顯色 A. 日光下有色 B. 紫外燈下（254nm或365nm）觀察暗斑或熒光斑點(diǎn) C. 熒光薄層板上檢測 UV吸收 硅膠GF254 錳激活的硅酸鋅錳 D. 顯色劑顯色 硫酸乙醇液 大部分有機(jī)物顯色 碘蒸氣 大部分有機(jī)物顯色 茚三酮 氨基酸 溴甲酚綠 羧酸 0.05%熒光黃甲醇液 芳香族化合物 三氯化鐵鐵氰化鉀 還原性物質(zhì)5.定性：定性：同一薄板上，Rf相同，可能同一物質(zhì) Rf不同，一定不是同一物質(zhì)6.定量：定量：要標(biāo)準(zhǔn)品 a、目視比較法，半定量方法，精密度10% 應(yīng)用：原料藥中雜質(zhì)的限度檢查 b、洗脫法 c、薄層掃描法：日本島津cs-9000雙波長

8、薄層掃描儀總結(jié)：總結(jié)：制板均勻點(diǎn)樣集中展開預(yù)飽和顯色 將固定相放在紙上，以紙做載體進(jìn)行點(diǎn)樣、展開、定性和定量的液-液分配色譜法 固定相：紙纖維吸附的水 流動相：與水不互溶的有機(jī)溶劑（飽和正丁醇） 分離機(jī)制：液-液分配色譜 定性參數(shù)：mSfVVKR11紙色譜法的實(shí)驗(yàn)條件紙色譜法的實(shí)驗(yàn)條件 色譜紙的選擇色譜紙的選擇 對Rf值相差很小的化合物，宜采用慢速濾紙 對Rf值相差較大的化合物，則可用快速濾紙 固定相：固定相：紙纖維吸附的水 展開劑的選擇展開劑的選擇 增加展開劑中極性溶劑的比例量，可以增大Rf值 增加展開劑中非極性溶劑的比例量，可以減少Rf值 常用的展開劑常用的展開劑 水飽和的有機(jī)溶劑，如水飽

9、和的正丁醇等 操作步驟操作步驟 點(diǎn)樣、展開、顯色、定性定量分析 Rf值與化學(xué)結(jié)構(gòu)的關(guān)系：值與化學(xué)結(jié)構(gòu)的關(guān)系：化合物極性越大 或親水性強(qiáng)，在 水中分配量多， Rf值小例如：含羥基越 多，親水性越 強(qiáng)， Rf值越小 主要色譜類型色譜類型色譜類型分離原理分離原理載體載體固定相固定相流動相流動相流出順序流出順序分配柱色譜分配柱色譜（正相）（正相）分配分配硅膠硅膠水或緩沖液水或緩沖液有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑極性小的組分先流出極性小的組分先流出吸附柱色譜吸附柱色譜吸附吸附/硅膠硅膠有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑同上同上薄層色譜薄層色譜吸附吸附/硅膠硅膠有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑極性小的組分極性小的組分Rf值大值大紙色譜紙色譜分配分配濾紙濾紙水水有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑同上同上離子交換色譜離子交換色譜離子交換離子交換/離子交換樹脂離子交換樹脂水溶液水溶液與樹脂親和力小的先流出與樹脂親和力小的先流出分子排阻色譜分子排阻色譜按分子大小按分子大小/葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠水或有機(jī)水或有機(jī)溶劑溶劑大