HIV 檢 測(cè) 技 術(shù)

1、艾滋病檢測(cè)技術(shù)艾滋病檢測(cè)技術(shù) 嘉興市疾控中心 葛志堅(jiān) 檢測(cè)的重要性n任何錯(cuò)誤的診斷，包括假陽(yáng)性或假陰性，都會(huì)對(duì)被檢者甚至對(duì)家庭和社會(huì)都產(chǎn)生十分重要的影響 n艾滋病診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo)，也是控制HIV傳播和控制艾滋病流行的重要手段 檢測(cè)的目的檢測(cè)的目的 n診斷診斷 為確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測(cè)和自愿咨詢檢測(cè)、術(shù)前檢測(cè)、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。n監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè) 為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)，檢測(cè)的人群包括各類高危人群和一般人群n血液篩查血液篩查 為防止輸血傳播HIV而進(jìn)行的檢測(cè)，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。n臨床治療和預(yù)后的判斷臨床治療和預(yù)后的判斷 療效觀察和耐藥性監(jiān)測(cè) HIVHI

2、V感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)n常用常用HIVHIV病原學(xué)檢測(cè)方法病原學(xué)檢測(cè)方法: :n 病毒分離病毒分離n 抗原檢測(cè)抗原檢測(cè)n 核酸檢測(cè)（核酸檢測(cè)（ HIV核酸定性檢測(cè)、HIV- RNA定量測(cè)定）n常用常用HIV抗體檢測(cè)方法（均未能檢測(cè)抗體檢測(cè)方法（均未能檢測(cè)N型）型）n 篩查實(shí)驗(yàn)方法篩查實(shí)驗(yàn)方法 ELISA，膠體金（硒），膠體金（硒）， PA 法，法，斑點(diǎn)斑點(diǎn)EIA ，唾液、尿液檢測(cè)唾液、尿液檢測(cè)卡卡 ，化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析 確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方法確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方法 免疫印跡法，條帶免疫法，免疫印跡法，條帶免疫法， 放免法放免法,間接免疫熒光試驗(yàn)n其他其他 CD4+/CD8+ T cell

3、 計(jì)數(shù)等計(jì)數(shù)等病毒感染后病毒RNA和血清標(biāo)記水平1020304050607080900病毒病毒RNA,抗原或抗體水平抗原或抗體水平HIV-1RNAAb to HIV-1p24 AgHIV HIV 抗抗 體體 檢檢 測(cè)測(cè) 方方 法法 酶聯(lián)免疫吸附法酶聯(lián)免疫吸附法 （ELISAELISA）最早出現(xiàn)、發(fā)展最快、至今仍普遍使用最早出現(xiàn)、發(fā)展最快、至今仍普遍使用 很高的靈敏度和特異性很高的靈敏度和特異性 適合對(duì)大量樣品的檢測(cè)適合對(duì)大量樣品的檢測(cè) 可以進(jìn)行很方便的質(zhì)控工作，因此是目前臨床最常用的篩查可以進(jìn)行很方便的質(zhì)控工作，因此是目前臨床最常用的篩查檢測(cè)方法檢測(cè)方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（E

4、LISAELISA） 目前主要使用第三代抗HIV抗體1/2試劑（即雙抗原夾心法） 第四代ELISA試劑可同時(shí)檢測(cè)P24抗原和抗HIV-1/2抗體。與第三代抗HIV-1/2試劑相比，檢出時(shí)間提前了49d。HIV ELISAHIV ELISA試劑的發(fā)展過(guò)程試劑的發(fā)展過(guò)程第四代ELISA試劑n優(yōu)點(diǎn)：縮短了窗口期n缺點(diǎn)：同時(shí)把抗原和抗體包被在反應(yīng)板上，存在互相干擾的可能，檢測(cè)的敏感性和特異性可能都會(huì)受到影響。第四代試劑檢測(cè)p24抗原的敏感度(20100pg/m1)，單獨(dú)檢測(cè)p24抗原試劑的敏感度 (3.510pg/m1)。HIV感染窗口期1st-2nd 代代3rd 代代=Detection limit

5、2%。另外，文獻(xiàn)報(bào)道大約4%20%的樣品經(jīng)過(guò)HIV初篩復(fù)檢陽(yáng)性后，WB結(jié)果為“不確定”。nWB不確定結(jié)果的出現(xiàn)確實(shí)給臨床診斷帶來(lái)困難，需要更多的時(shí)間和實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)，也會(huì)對(duì)受試者造成額外的心理負(fù)擔(dān)。從另一方面而言，WB不確定結(jié)果確是受試者真實(shí)的血清學(xué)反應(yīng)。HIV抗體不確定n對(duì)于符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體不確定（）”，在備注中應(yīng)注明“3個(gè)月后復(fù)檢”，同時(shí)進(jìn)行以下處理：n(1) 隨訪復(fù)檢：每3個(gè)月隨訪復(fù)檢1次，連續(xù)2次，共6個(gè)月。如果檢測(cè)時(shí)暴露時(shí)間已超過(guò)3個(gè)月，則在3個(gè)月后隨訪1次即可。將前后2份樣品同時(shí)檢測(cè)，仍呈不確定或陰性則報(bào)告HIV抗體陰性，如果在隨訪期間發(fā)生帶型進(jìn)展，符

6、合HIV抗體陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告HIV-1或HIV-2抗體陽(yáng)性。n(2) 必要時(shí)可做HIV-1 P24抗原或HIV核酸測(cè)定，但檢測(cè)結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認(rèn)報(bào)告要依據(jù)血清學(xué)隨訪結(jié)果。HIV抗體不確定n當(dāng)出現(xiàn)任何HIV病毒特異條帶，但不足以被判斷為陽(yáng)性則判定為不確定結(jié)果。不僅初篩陽(yáng)性的標(biāo)本可以出現(xiàn)不確定的結(jié)果，初篩陰性的標(biāo)本經(jīng)WB檢測(cè)也有大約15%出現(xiàn)針對(duì)一個(gè)或幾個(gè)抗原的不確定結(jié)果。WB不確定結(jié)果中p24條帶最常出現(xiàn)（60%91.6%），gp120/gp160出現(xiàn)的頻率其次。WB不確定結(jié)果出現(xiàn)原因比較復(fù)雜，與檢測(cè)對(duì)象、檢測(cè)試劑和實(shí)驗(yàn)操作有關(guān)，詳見(jiàn)下表。WB不確定出現(xiàn)的原因不確定出現(xiàn)的原因 nH

7、IV及相關(guān)感染 ：早期血清學(xué)轉(zhuǎn)換 、AIDS晚期 、早產(chǎn)感染 、HIV缺失株感染 、免疫靜止型AIDS 、HIV-2感染 、散發(fā) HIV/SIV(猴免疫缺陷病毒) 。n其它逆轉(zhuǎn)錄病毒感染 ：山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒n其它臨床狀態(tài) ：自身免疫疾病（系統(tǒng)性紅斑狼瘡，原發(fā)性干燥綜合征）、麻風(fēng)病、惡性腫瘤、高膽紅素、高核蛋白、高類風(fēng)濕因子n無(wú)感染 ：HIV陽(yáng)性母親所生的正常嬰兒、未篩查血液制品的接受者、疫苗試驗(yàn)志愿者、保持WB結(jié)果不變的供者WB不確定出現(xiàn)的原因不確定出現(xiàn)的原因n檢測(cè)試劑 ：宿主細(xì)胞蛋白殘留、判斷準(zhǔn)則、試劑盒的條件優(yōu)化/穩(wěn)定性n實(shí)驗(yàn)操作 ：交叉污染、試驗(yàn)程序、儀器設(shè)備、樣本處理及溶血其它確認(rèn)

8、試驗(yàn)其它確認(rèn)試驗(yàn)線性免疫試驗(yàn)：線性免疫試驗(yàn)：將HIV的重組和合成多肽抗原包被在硝酸纖維素膜條上，用于檢測(cè)樣本中的HIV-1和（或）HIV-2抗體。該法可降低來(lái)自細(xì)胞培養(yǎng)的雜質(zhì)蛋白污染而引起非特異反應(yīng)，在歐洲應(yīng)用廣泛，大量研究報(bào)道稱它的準(zhǔn)確性與免疫印跡法相當(dāng)。其它確認(rèn)試驗(yàn)其它確認(rèn)試驗(yàn)n放射免疫沉淀試驗(yàn)：n用同位素標(biāo)記的HIV蛋白與待檢血清反應(yīng)，若血清中含有HIV抗體即可與HIV蛋白抗原結(jié)合，再加入葡萄球菌蛋白A，經(jīng)低速離心，然后將沉淀復(fù)合物分離后電泳，放射自顯影觀察同位素標(biāo)記蛋白帶即可判定。本法靈敏度和特異度均好，但因試劑制備復(fù)雜，成本高，且同位素操作需要嚴(yán)格防護(hù)而限制其應(yīng)用。其它確認(rèn)試驗(yàn)其它確

9、認(rèn)試驗(yàn)n間接免疫熒光試驗(yàn)：n將HIV感染的細(xì)胞作為抗原固定在玻片上，再在其上滴加待檢血清，若含有HIV 抗體，則與細(xì)胞膜上的病毒抗原結(jié)合，清洗后加熒光標(biāo)記的抗人IgG，洗去未結(jié)合的熒光抗體，在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果，胞漿內(nèi)出現(xiàn)特異性熒光，而對(duì)照孔沒(méi)有特異性熒光，就可診斷為HIV抗體陽(yáng)性。此法操作簡(jiǎn)便，敏感性及特異性均較ELISA法高，但存在對(duì)某些血清非特異性熒光難以去除，結(jié)果判斷需要熒光顯微鏡，需要受過(guò)良好訓(xùn)練的技術(shù)人員，對(duì)結(jié)果的觀察和解釋易受主觀因素的影響，結(jié)果也不宜長(zhǎng)期保存。HIV抗原的檢測(cè)抗原的檢測(cè) n窗口期 ：HIV 感染人體后有一段窗口期，在這段時(shí)期病毒抗體不能被檢出，但可以檢測(cè)到病毒

10、相關(guān)抗原或分離病毒。HIV-1感染機(jī)體后, 感染者血液中最早出現(xiàn)的是病毒gag基因表達(dá)產(chǎn)物p24抗原, 然后才出現(xiàn)相應(yīng)的特異性抗HIV抗體, 以后隨抗體滴度的升高p24抗原含量呈逐漸下降的趨勢(shì)以至檢測(cè)不出。在病情發(fā)展到AIDS期，病毒大量復(fù)制，機(jī)體免疫力下降，所產(chǎn)生的抗體不足以中和病毒抗原時(shí)，p24抗原在血中又可檢測(cè)出。 HIV抗原的檢測(cè)抗原的檢測(cè)n陽(yáng)性母親所生育嬰兒檢測(cè)：HIV陽(yáng)性母親所生育的嬰兒30%可能已受到感染，但由于嬰兒體內(nèi)母源性抗HIV抗體可持續(xù)18個(gè)月之久，常規(guī)檢測(cè)抗HIV抗體須要在嬰兒18個(gè)月以后才能確定嬰兒體內(nèi)的HIV抗體是來(lái)自母體，還是自身產(chǎn)生，而HIV抗原的檢測(cè)則可彌補(bǔ)這

11、一不足。 HIV抗原的檢測(cè)抗原的檢測(cè)nHIV-1抗體不確定n第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，但HIV-1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷。n監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展和抗病毒治療效果n針對(duì)HIV抗體產(chǎn)生前的血液產(chǎn)品進(jìn)行篩查 n對(duì)HIV病毒暴露但血清學(xué)陰性的個(gè)人進(jìn)行早期感染的檢測(cè) HIV抗原的檢測(cè)抗原的檢測(cè)n聯(lián)免疫分析（ELISA）n放射免疫分析（RIA）n免疫熒光技術(shù)（IFA）n免疫吸附電鏡法（Immunosorbent Electron Microscopical method，ISEM） ELISA檢測(cè)P24抗原技術(shù) n檢測(cè)HIV感染敏感的常規(guī)方法 n雙夾心抗體法（原理同雙夾心抗原法）n

12、假陽(yáng)性高需用中和試驗(yàn)加以鑒別 ELISA檢測(cè)P24抗原改進(jìn)技術(shù)n超敏感酶免疫測(cè)定法(Ultrasensitive enzyme immunoassay，UEI)又稱雙位點(diǎn)免疫復(fù)合物轉(zhuǎn)移酶免疫測(cè)定，基本技術(shù)路線是利用高親和力抗體濃縮富集血清中的P24抗原，然后進(jìn)檢測(cè)。該法可將下限延伸至0.2pgmln線性免疫酶測(cè)定(1ineal immunoenzymatic assy，LIA)和Cobas Core HIVCombi EIA是新近發(fā)展起來(lái)的第四代HIV檢測(cè)技術(shù)。目前最敏感的抗原試劑盒的檢測(cè)閥值為0.01pgml。 HIV抗原檢測(cè)局限性 p24蛋白只是個(gè)臨時(shí)標(biāo)志，急性感染期之后就很快降低到無(wú)法檢

13、測(cè)的水平，只有在病人的AIDS階段才重新出現(xiàn) HIV-1 P24 抗原的陽(yáng)性結(jié)果必須經(jīng)過(guò)中和試驗(yàn)確認(rèn)，該結(jié)果僅作為 HIV 感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診 HIV-1 P24 抗原檢測(cè)陰性只表示在本試驗(yàn)中無(wú)反應(yīng)，不能排除HIV感染 HIV核酸測(cè)定HIV核酸定性檢測(cè)：是否存在病毒核酸HIV核酸定量檢測(cè)：血液中病毒復(fù)制水平HIV核酸定性檢測(cè) 血漿、血清或全血中 HIV-1 RNA & DNA PCR & RT-PCR 方法HIV PCR檢測(cè)的主要用途嬰兒HIV感染的診斷 檢測(cè)HIV前病毒 DNA是嬰兒HIV感染診斷首選的方法，與病毒培養(yǎng)和隨訪的符合率達(dá)到95-100%。HIV感染

14、的早期診斷 感染以后1-2周就可用PCR方法檢測(cè)出HIV 基因，比抗體出現(xiàn)的時(shí)間提前，使窗口期大大縮短，有利于早期診斷。HIV抗體檢測(cè)不確定結(jié)果的診斷 有助于及時(shí)闡明HIV抗體的不確定結(jié)果是早期HIV感染還是非特異性反應(yīng)，在迫切需要診斷結(jié)果的時(shí)候很有用處。 HIV DNA PCR實(shí)驗(yàn)是嬰兒HIV感染診斷首選的方法 HIV DNA PCR方法是在新生兒期診斷HIV感染的一種敏感的方法 38感染的孩子在出生后48小時(shí)HIV DNA PCR就可呈現(xiàn)陽(yáng)性 在出生后第二周，檢測(cè)的敏感性大幅度上升，14天時(shí)陽(yáng)性率達(dá)到93 28天時(shí)陽(yáng)性率是96，并且具有很高的特異性（大約99） 一次檢測(cè)呈陽(yáng)性提示可能存在H

15、IV感染，應(yīng)采集第二份標(biāo)本重復(fù)病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)以便進(jìn)行確認(rèn)。兩次不同時(shí)間采集的標(biāo)本HIV病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)均為陽(yáng)性即可得出HIV陽(yáng)性的診斷 對(duì)HIV陽(yáng)性母親所生新生兒的檢測(cè)程序是： 出生后48小時(shí)進(jìn)行第一次檢測(cè)，大約38感染的嬰兒可以在這個(gè)時(shí)期得出診斷 出生時(shí)檢測(cè)為陰性的嬰兒應(yīng)在14天進(jìn)行一次重復(fù)檢測(cè)，因?yàn)椴《緦W(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的敏感性在2周時(shí)大幅度增加了 仍然陰性的嬰兒應(yīng)該在12個(gè)月時(shí)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè) 出生時(shí)和12個(gè)月時(shí)病毒學(xué)檢測(cè)為陰性的孩子應(yīng)該在36個(gè)月時(shí)再次進(jìn)行檢測(cè) HIV核酸定量測(cè)定n輔助診斷:n在一般情況下，HIV抗體檢測(cè)足以對(duì)HIV感染與否做出正確診斷，但在特殊情況下，單純抗體檢測(cè)不足以完成明確的判定，如出

16、現(xiàn)某些非典型的抗體反應(yīng)形式，特別是不確定反應(yīng)時(shí)，RNA的測(cè)定可提供非常有用的證據(jù)。雖然單純使用RNA測(cè)定不能完全確定感染與否，但當(dāng)RNA測(cè)定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽(yáng)性結(jié)果時(shí)（3，000c/ml），感染發(fā)生的可能性非常大。n每一種RNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測(cè)限，即可以測(cè)出的最低拷貝數(shù)，通常在50100c/ml以上，RNA定量檢測(cè)時(shí)未測(cè)出不等于樣品中不含有病毒RNA。另外，許多AIDS病人/HIV感染者在接受抗病毒治療后其病毒載量可降至非常低的水平，還有少數(shù)HIV感染者在感染后長(zhǎng)期處于病毒水平非常低的狀態(tài)，進(jìn)行RNA測(cè)定時(shí)往往測(cè)不出來(lái)。因此，使用此指標(biāo)應(yīng)綜合其它檢測(cè)數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合判斷。HIV

17、核酸定量測(cè)定n早期診斷n在HIV感染的窗口期無(wú)法使用抗體檢測(cè)進(jìn)行診斷。而在感染早期，在抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個(gè)病毒載量的高峰，此高峰通常高于發(fā)病時(shí)的血漿病毒水平，并且有證據(jù)表明這個(gè)時(shí)期的病毒具有很高的感染能力。這個(gè)高峰在免疫系統(tǒng)產(chǎn)生反應(yīng)后，尤其是在細(xì)胞免疫出現(xiàn)后開(kāi)始下降。因此早期病毒RNA測(cè)定具有特殊的意義。該方法也可用于HIV感染孕婦所生嬰兒的早期輔助診斷。n目前國(guó)際上正在嘗試使用這種檢測(cè)對(duì)采供血樣品進(jìn)行多個(gè)樣品混合后的RNA檢測(cè)以減少窗口期危險(xiǎn)（降低“殘余危險(xiǎn)度”）。HIV核酸定量測(cè)定n病程監(jiān)控n根據(jù)HIV感染發(fā)生后病毒載量具有一定的變化規(guī)律，并且這種變化與疾病的進(jìn)程有著密切的相關(guān)性。因

18、此定期進(jìn)行病毒載量的檢測(cè)有助于確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應(yīng)的治療方案。n通常在HIV感染后無(wú)癥狀期內(nèi)發(fā)生的感染或其它臨床癥狀很難與AIDS發(fā)病時(shí)的癥狀區(qū)別，為確定一個(gè)剛發(fā)生的癥狀是否與HIV的感染有關(guān)，醫(yī)生往往需要觀察病人的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，病毒載量就是一個(gè)非常重要的指標(biāo)。HIV核酸定量測(cè)定n指導(dǎo)治療方案及療效判定n臨床實(shí)踐證明，并非在任何情況下HIV感染者都應(yīng)該進(jìn)行抗病毒治療。這不單是經(jīng)濟(jì)上的原因，更重要的是由于抗病毒藥物的副作用和療效原因。通常在病毒載量達(dá)到一定水平后（如35，00050，000c/ml）抗病毒治療才具有良好的效果。在進(jìn)行治療后，通過(guò)病毒水平的檢測(cè)才能確定治療是否有效，通常在治

19、療前后病毒水平降低0.5 log以上才被認(rèn)為臨床有效。HIV核酸定量測(cè)定n預(yù)測(cè)疾病進(jìn)程nHIV感染后疾病進(jìn)程與病毒載量的關(guān)系十分密切，觀察HIV感染者病毒RNA水平可大致預(yù)測(cè)其發(fā)病的可能。病毒載量與6年發(fā)病率的關(guān)系為：30，000c/ml時(shí)則為80%。當(dāng)HIV感染者CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)200/l時(shí)，病毒載量與36個(gè)月發(fā)展至AIDS的危險(xiǎn)為：10，000c/ml為4.9%;10，00029，999c/ml為12.7%;30，00099，990c/ml為17.7%;100，000c/ml為22.4%。在CD4+ 細(xì)胞數(shù)相同的情況下，年紀(jì)大的比年輕患者發(fā)展至AIDS的危險(xiǎn)更大（AIDS 2004；18

20、：51-58.）。HIV核酸定量測(cè)定 常用的常用的HIV RNAHIV RNA定量測(cè)定方法定量測(cè)定方法 核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn)（NASBA） 逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗(yàn)（RT-PCR） 分支DNA雜交試驗(yàn)（bDNA） 熒光定量PCR試驗(yàn)核酸測(cè)定注意事項(xiàng)n標(biāo)本類型 n血漿和血清標(biāo)本都可用來(lái)測(cè)定病毒載量，用三種測(cè)定方法進(jìn)行比較都發(fā)現(xiàn)血清和血漿測(cè)定的結(jié)果有高度相關(guān)性。但是血清的檢測(cè)結(jié)果大約是血漿的50%（30-80%），可能是因?yàn)檠耗痰倪^(guò)程中HIV顆粒被包裹在纖維蛋白網(wǎng)絡(luò)中，導(dǎo)致血清中病毒的濃度下降。因此，測(cè)定病毒載量應(yīng)該首選血漿標(biāo)本，血漿也是臨床使用的唯一標(biāo)本。血清標(biāo)本對(duì)于研究也是可以接受的，重要的是每位病人

21、使用的標(biāo)本類型應(yīng)始終保持一致。 核酸測(cè)定注意事項(xiàng)n抗凝劑 n抗凝劑能夠顯著影響測(cè)定的結(jié)果。肝素鈉處理的血漿不適合做Amplicor HIV-1 Monitor試驗(yàn)，因?yàn)楦嗡厥荘CR反應(yīng)的一個(gè)潛在的抑制劑。如果必須用RT-PCR方法測(cè)量肝素處理的血漿，可以向標(biāo)本中加入肝素酶以分解肝素。另外，肝素處理的血漿中病毒顆粒降解的速率顯著高于EDTA鈉鹽和枸櫞酸鈉處理的血漿，一般情況下不同抗凝劑處理的血液6小時(shí)之內(nèi)HIV RNA的降解速率分別是1.8%/小時(shí)（EDTA）、3.3%/小時(shí)（枸櫞酸鈉）和5.0%/小時(shí)（肝素）。在血液處理方法相同的條件下，用EDTA鈉鹽抗凝的血漿結(jié)果顯著優(yōu)于枸櫞酸鈉和肝素，因此

22、EDTA鈉鹽是首選的抗凝劑。 核酸測(cè)定注意事項(xiàng)n標(biāo)本處理時(shí)間和溫度 nHIV-1在體內(nèi)進(jìn)行快速轉(zhuǎn)換，平均半衰期是大約6個(gè)小時(shí)。HIV-1在體外未處理的全血中也快速降解，全血中HIV RNA的降解速率在6小時(shí)之內(nèi)平均是9%（0.04log）,最大的降解速率是在采血以后6-8小時(shí)，采血以后30小時(shí)內(nèi)可能減少0.5log。因此為了減少病毒顆粒降解對(duì)檢測(cè)的影響，應(yīng)該在采血以后6小時(shí)之內(nèi)分離血球和血漿，如果做不到就應(yīng)該使用血漿分離管，立即離心4存放，需要保存30小時(shí)以上就應(yīng)該放在-70。 n溫度對(duì)HIV RNA的影響不顯著。-70室溫反復(fù)凍融3次，HIV RNA變化的幅度小于0.2log。-70保存5個(gè)

23、月，HIV RNA減少0.3-0.5log，-70保存12個(gè)月，HIV RNA減少一般不超過(guò)0.4log。血漿在室溫或4 保存3天，HIV RNA減少不超過(guò)0.5log。 CD4細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定的主要意義 用于HIV感染者的疾病分期： CD4+T淋巴細(xì)胞0/mm3 艾滋病期判斷HIV感染者的臨床合并癥 各種機(jī)會(huì)性感染與CD4+T淋巴細(xì)胞的相關(guān)性。 幫助確定抗HIV藥物治療及機(jī)會(huì)性感染預(yù)防性治療 的適應(yīng)癥 抗HIV藥物療效的重要判斷指標(biāo)。（周后上升）與艾滋病相關(guān)的免疫細(xì)胞檢測(cè)與艾滋病相關(guān)的免疫細(xì)胞檢測(cè)n艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合癥，主要表現(xiàn)為患者免疫功能低下。對(duì)HIV

24、感染者與艾滋病患者進(jìn)行免疫學(xué)功能檢測(cè)感染者免疫狀況，有助于預(yù)測(cè)判斷疾病進(jìn)程、評(píng)價(jià)抗病毒藥物治療效果和估測(cè)預(yù)后。與艾滋病相關(guān)的免疫細(xì)胞檢測(cè)指標(biāo)主要CD4+ T淋巴細(xì)胞數(shù)目、CD8+ T淋巴細(xì)胞數(shù)目以及CD4+/CD8+的比例，更為精細(xì)的指標(biāo)還包括NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、HIV特異性T細(xì)胞等。其中最重要的指標(biāo)為CD4+ T淋巴細(xì)胞數(shù)目。nAIDS是由HIV引起的一組綜合征，HIV主要侵犯人CD4+ T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致其數(shù)量上的減少和功能缺陷，使機(jī)體免疫平衡被打破造成免疫功能低下，最終導(dǎo)致各種機(jī)會(huì)感染和腫瘤。因而，對(duì)HIV感染者和AIDS病人定期進(jìn)行CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞 檢測(cè)具有十分重要的意義。

25、 CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)意義 n了解機(jī)體的免疫狀態(tài)以進(jìn)行疾病分期，以如美國(guó)CDC就是以此為基礎(chǔ)制訂了HIV感染者/AIDS病人的診斷和分類標(biāo)準(zhǔn)（見(jiàn)表1），目前國(guó)內(nèi)外仍被采納應(yīng)用。我國(guó)國(guó)家免費(fèi)艾滋病抗病毒藥物治療手冊(cè)中將CD4+T淋巴細(xì)胞CD4350/ l作為開(kāi)始抗病毒治療的標(biāo)準(zhǔn)。CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)意義n長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)CD4+ T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)的變化，有助于了解患者的病情發(fā)展，決定正確的治療方案，并觀察對(duì)治療的反應(yīng)。如判斷HIV感染者的臨床合并癥（如當(dāng)CD4+ T淋巴細(xì)胞細(xì)胞200/l時(shí)，很容易發(fā)生卡氏肺孢子蟲(chóng)肺炎）。CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)意義n幫助確定抗HIV藥物治

26、療及預(yù)防機(jī)會(huì)性感染治療的適應(yīng)癥，如當(dāng)CD4+ T淋巴細(xì)胞200/l時(shí)，應(yīng)給予抗卡氏肺孢子蟲(chóng)肺炎的預(yù)防性治療。CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)意義n是用來(lái)評(píng)價(jià)一些新的、針對(duì)HIV的治療方法和治療藥物療效的重要指標(biāo)。（周后上升）CD4檢測(cè)注意事項(xiàng)n抗凝管 ：K3EDTA n采血時(shí)間：某個(gè)相同的時(shí)段。如：每次采樣時(shí)間均在上午或均在下午。n溫度：18-25保存和運(yùn)輸樣品n運(yùn)送時(shí)間：樣品應(yīng)在48小時(shí)之內(nèi)送達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室 HIVHIV診斷試劑臨床質(zhì)量評(píng)估方案診斷試劑臨床質(zhì)量評(píng)估方案評(píng)估目的評(píng)估目的 對(duì)國(guó)內(nèi)市場(chǎng)銷售的國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口的HIV診斷試劑的敏感性、特異性、批間差異和適用性進(jìn)行綜合質(zhì)量評(píng)估，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和解決試劑質(zhì)量問(wèn)題； 為中央和地方衛(wèi)生行政部門提供有關(guān)的決策依據(jù)，并作為艾滋病實(shí)驗(yàn)室選擇試劑的依據(jù)。 評(píng)估組織形式評(píng)估組織形式 國(guó)家級(jí)評(píng)估國(guó)家級(jí)評(píng)估 國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室（簡(jiǎn)稱參比實(shí)驗(yàn)室）負(fù)責(zé)組織全國(guó)的HIV診斷試劑臨床質(zhì)量評(píng)估，選擇部分具備資質(zhì)的艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室參與評(píng)估。每年至少組織1次。評(píng)估組織形式評(píng)估組織形式 省級(jí)評(píng)估省級(jí)評(píng)估 省艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室為各省HIV診斷試劑臨床評(píng)估的主要職能單位。由省艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室組織評(píng)估本省使用的HIV診斷試劑質(zhì)量，選擇省內(nèi)艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室或具備資質(zhì)的艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室參與評(píng)估，每年至