小鼠的急性毒性試驗(yàn)

1、五種農(nóng)藥對小鼠的急性毒性試驗(yàn)緒論隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的飛速發(fā)展，農(nóng)藥的應(yīng)用越來越廣泛，在農(nóng)林作物的病蟲防治中,農(nóng)藥一直發(fā)揮著巨大作用,尤其是本世紀(jì)60-70年代,人們大量使用農(nóng)藥,幾乎使糧食產(chǎn)量增長一倍,但隨著農(nóng)藥長期的、大量的、不合理的使用,導(dǎo)致了對環(huán)境的嚴(yán)重污染并對人體健康產(chǎn)生極大的影響。它們對動、植物和人類的危害越來越嚴(yán)重。一方面它們可以直接進(jìn)入生物體內(nèi)引起急性、慢性中毒和畸變，同時還通過徑流、排污、揮發(fā)等途徑進(jìn)入土壤、大氣和水體，引起各種生態(tài)環(huán)境下生物的死亡，并通過食物鏈的富集影響人類的食品安全。 目前，因農(nóng)藥使用與管理失控而引發(fā)的一系列水域環(huán)境污染以及食品安全等問題，已引起政府相關(guān)部門和業(yè)內(nèi)

2、學(xué)者的廣泛重視。當(dāng)前，隨著有機(jī)氯農(nóng)藥的禁用，菊酯類和有機(jī)磷類等成為我國目前使用較廣泛的農(nóng)藥。中華人民共和國農(nóng)藥管理?xiàng)l例指明，農(nóng)藥是指用于預(yù)防、消滅或者控制危害農(nóng)業(yè)、林業(yè)的病、蟲、草和其他有害生物以及有目的地調(diào)節(jié)植物、昆蟲生長的化學(xué)合成物或者幾種物質(zhì)混合物及其制劑。農(nóng)藥殘留是指農(nóng)藥使用后殘存于環(huán)境、生物體和食品中的農(nóng)藥及其衍生物和雜質(zhì)的總稱。動植物在生長期間、食品在加工和流通中均可受到農(nóng)藥的污染，導(dǎo)致食品中農(nóng)藥殘留。相關(guān)報道表明，農(nóng)藥利用率一般為10%，約90%的殘留在環(huán)境中，過多地使用農(nóng)藥，大量未被利用的農(nóng)藥經(jīng)過降雨、農(nóng)田滲濾和水田排水等進(jìn)入水體，同時，還有大量散失的農(nóng)藥揮發(fā)到空氣中，最后匯入

3、水域，沉降積淀在土壤中，通過農(nóng)作物吸收和食物鏈進(jìn)入人體進(jìn)行累積，并對人體健康造成危害。目前中國一些食品，如茶葉、大米、肉、蛋等食品中農(nóng)藥殘留量常超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，過多的殘留量對人體健康會造成危害。為此，論述農(nóng)藥殘留對人體健康的危害效應(yīng)及其毒理機(jī)制和防治措施，以期對防治食品中農(nóng)藥殘留對人體健康的危害提供理論依據(jù)。在哺乳類實(shí)驗(yàn)動物中，由于小鼠個體小，飼養(yǎng)管理方便，生產(chǎn)繁殖快，質(zhì)量控制嚴(yán)格，價廉可以大量供應(yīng)，又有大量的具有各種不同特點(diǎn)的近交品系，突變品系，封閉群及雜交一代動物，小鼠實(shí)驗(yàn)研究資料豐富參考對比性強(qiáng)；更重要一點(diǎn)乃是全世界科研工作者均用國際公認(rèn)的品系和標(biāo)準(zhǔn)的條件進(jìn)行試驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性、可靠

4、性、重復(fù)性高，自然會得到國際認(rèn)可。本文以百草枯、甲氰菊酯、樂果、草甘膦和敵敵畏五種常用農(nóng)藥為實(shí)驗(yàn)材料, 檢測了它們對推薦精選小鼠的單一和聯(lián)合急性毒性效應(yīng)，來評價各種農(nóng)藥的的毒性強(qiáng)弱以及對環(huán)境的危害。1 材料與方法1.1動物SPF 級昆明小鼠， 雌雄各半，體重1822 g，通過腹腔注射藥物給藥，給藥后密切觀察小鼠的反應(yīng)，觀察4小時。給藥前禁食不禁水十二小時。小鼠按20g體重給藥0.4mL，用藥物水溶液灌胃。1.2試驗(yàn)藥物甲氰菊酯( 山東大成農(nóng)藥廠生產(chǎn)) 、百草枯( 山東濱農(nóng)科技有限公司生產(chǎn)) 、樂果( 杭州慶豐農(nóng)化有限公司生產(chǎn)) 、敵敵畏( 南通江山農(nóng)藥化工有限公司生產(chǎn)) 和草甘膦( 鎮(zhèn)江江南化

5、工有限公司生產(chǎn))1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1預(yù)實(shí)驗(yàn)分別以組間劑量比值為3.0和1.5進(jìn)行預(yù)試驗(yàn),通過預(yù)試驗(yàn)初步觀察到小鼠的毒性反應(yīng)和死亡情況,分別找出五種農(nóng)藥對小鼠經(jīng)口染毒的大致致死劑量范圍(即死亡率0% 100%的劑量范圍) ,確定小鼠的正式試驗(yàn)劑量、組數(shù)和組間劑量比值，觀察小鼠反應(yīng)，統(tǒng)計小鼠死亡時間。1.3.2單一農(nóng)藥對小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)通過預(yù)實(shí)驗(yàn)求出小鼠都不死亡的最高濃度以及全部死亡的最低濃度，在這區(qū)間按等對數(shù)間距設(shè)置7個濃度組，和一個對照組（不含農(nóng)藥），每組做三個重復(fù)。試驗(yàn)前小鼠隔夜禁食、不禁水,分別對小鼠以單純隨機(jī)方法分配到各劑量組，每組10只小鼠。于第2天上午染毒,各實(shí)驗(yàn)組劑量由預(yù)試驗(yàn)

6、確定,同時設(shè)立對照組(生理鹽水) ,給藥體積0.2 ml·(10 g) - 1體重。給藥后觀察24h,記錄動物中毒表現(xiàn)和死亡情況以及體重變化情況。對死亡動物和試驗(yàn)結(jié)束時的存活動物處死解剖。用概率單位法計算PQ的LD50及其95%可信區(qū)間。表1 單一急性毒性實(shí)驗(yàn)中各農(nóng)藥的濃度設(shè)置農(nóng)藥濃度設(shè)置（mg/L）甲氰菊酯百草枯樂果敵敵畏推薦精選草甘膦1.3.3五種農(nóng)藥對小鼠的聯(lián)合急性毒性實(shí)驗(yàn)通過各種單一農(nóng)藥對小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)，計算出各種農(nóng)藥對小鼠的24h的半致死濃度（LC50），以加和等毒性強(qiáng)度方式設(shè)置兩種農(nóng)藥的聯(lián)合毒性濃度梯度， 共10種農(nóng)藥組合，每組再分為5 個處理組( 以單一農(nóng)藥24h

7、半致死濃度LC50作為1 個毒性強(qiáng)度單位) . 每次實(shí)驗(yàn)分別取相應(yīng)的2 種農(nóng)藥的單一對照組和5 個處理組, 每處理組設(shè)3 個重復(fù). 給藥后觀察24h,記錄動物中毒表現(xiàn)和死亡情況以及體重變化情況。對死亡動物和試驗(yàn)結(jié)束時的存活動物處死解剖。用概率單位法計算PQ的LD50及其95%可信區(qū)間。表2 聯(lián)合急性毒性實(shí)驗(yàn)中各組合農(nóng)藥的濃度設(shè)置農(nóng)藥組合濃度組合（mg/L）0.2+0.80.4+0.60.5+0.50.6+0.40.8+0.2甲氰菊酯+百草枯甲氰菊酯+樂果甲氰菊酯+敵敵畏甲氰菊酯+草甘膦百草枯+樂果百草枯+敵敵畏百草枯+草甘膦樂果+敵敵畏樂果+草甘膦敵敵畏+草甘膦1.4毒性評價標(biāo)準(zhǔn)表3農(nóng)藥急性經(jīng)

8、口毒性標(biāo)準(zhǔn)級別經(jīng)口LD50（mg/Kg）劇毒<5高毒550中毒50500低毒>5001.5觀察指標(biāo)全面觀察中毒的發(fā)生、發(fā)展過程和規(guī)律以及中毒特點(diǎn)和毒作用的靶器官。觀察的系統(tǒng)包括：1、 中樞神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)肌肉系統(tǒng)：體位異常、叫聲異常、不安、呆滯、痙攣、抽搐麻痹、運(yùn)動失調(diào)、對外反應(yīng)過敏或遲鈍推薦精選；2、 植物神經(jīng)系統(tǒng)：瞳孔擴(kuò)大或縮小、流涎或流淚；3、 呼吸系統(tǒng)：鼻孔流液、鼻翼煽動、呼吸深緩、呼吸過速、蜂腰；4、 泌尿生殖系統(tǒng)：會陰部污穢、有分泌物、陰道或乳房腫脹；5、 皮膚和毛：皮膚充血、紫紺、被毛蓬松、污穢；6、 眼：眼球突出、結(jié)膜充血、角膜混濁；消化系統(tǒng)：腹瀉、厭食。2結(jié)果與分析

9、2.1單一農(nóng)藥對小鼠急性毒性2.1.1中毒癥狀2.1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析表4單一急性毒性實(shí)驗(yàn)前后小鼠體重變化農(nóng)藥濃度設(shè)置（mg/L）實(shí)驗(yàn)前體重（g）實(shí)驗(yàn)h后體重（g）甲氰菊酯百草枯樂果敵敵畏草甘膦推薦精選表5 單一急性毒性實(shí)驗(yàn)中小鼠死亡情況農(nóng)藥濃度設(shè)置（mg/L）死亡數(shù)量死亡概率（x%）甲氰菊酯百草枯樂果敵敵畏草甘膦2.2五種農(nóng)藥對小鼠的聯(lián)合急性毒性2.2.1中毒癥狀2.2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析表6 聯(lián)合急性毒性實(shí)驗(yàn)中小鼠死亡情況農(nóng)藥組合濃度組合（mg/L）0.2+0.80.4+0.60.5+0.50.6+0.40.8+0.2甲氰菊酯+百草枯甲氰菊酯+樂果甲氰菊酯+敵敵畏甲氰菊酯+草甘膦百草枯+樂果

10、百草枯+敵敵畏百草枯+草甘膦樂果+敵敵畏樂果+草甘膦敵敵畏+草甘膦推薦精選表7 聯(lián)合急性毒性實(shí)驗(yàn)前小鼠體重農(nóng)藥組合小鼠體重（g）濃度組合（mg/L）0.2+0.80.4+0.60.5+0.50.6+0.40.8+0.2甲氰菊酯+百草枯甲氰菊酯+樂果甲氰菊酯+敵敵畏甲氰菊酯+草甘膦百草枯+樂果百草枯+敵敵畏百草枯+草甘膦樂果+敵敵畏樂果+草甘膦敵敵畏+草甘膦表8 聯(lián)合急性毒性實(shí)驗(yàn)后小鼠體重農(nóng)藥組合小鼠體重（g）濃度組合（mg/L）0.2+0.80.4+0.60.5+0.50.6+0.40.8+0.2甲氰菊酯+百草枯甲氰菊酯+樂果甲氰菊酯+敵敵畏甲氰菊酯+草甘膦百草枯+樂果百草枯+敵敵畏百草枯+草

11、甘膦樂果+敵敵畏樂果+草甘膦敵敵畏+草甘膦3.討論甲氰菊酯屬于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥, 一般認(rèn)為, 擬除蟲菊酯類農(nóng)藥能延遲軸突神經(jīng)細(xì)胞膜鈉離子通道的關(guān)閉, 影響神經(jīng)傳導(dǎo)和突觸傳遞, 從而導(dǎo)致一系列的中樞神經(jīng)和末梢神經(jīng)反應(yīng). 而有機(jī)磷農(nóng)藥的毒害作用, 主要是抑制體內(nèi)的膽堿酯酶, 使其丟失活性, 因而失去分解乙酰膽堿的作用, 最終產(chǎn)生一系列的毒害作用草甘膦和百草枯屬于除草劑, 草甘膦為廣譜性內(nèi)吸傳導(dǎo)型除草劑, 主要抑制植物體內(nèi)烯醇丙酮基莽草酸磷酸合成酶, 從而抑制莽草酸向苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸的轉(zhuǎn)化, 使蛋白質(zhì)的合成過程受到干擾. 百草枯進(jìn)入細(xì)胞后, 會引發(fā)一系列氧化還原反應(yīng), 最終形成多種過氧化物,

12、 過氧化物通過脂質(zhì)過氧化反應(yīng)直接造成細(xì)胞膜的損害, 還可以通過消耗體內(nèi)還原物質(zhì)( 如NADPH) 而干擾多種重要的生化反應(yīng), 間接造成損害推薦精選4.結(jié)論5.參考文獻(xiàn)鐘子期聽懂了俞伯牙的琴音“巍巍乎若高山，蕩蕩乎若流水”,俞伯牙視其為知音。鐘子期死后，面對江邊一抔黃土，俞伯牙發(fā)出“此曲終兮不復(fù)彈，三尺瑤琴為君死”的感慨，摔琴而去，從此，高山流水，知音難覓。紅樓里，寶釵與黛玉皆愛寶玉，寶釵看重功名，常拿一些倫理綱常來壓制他的不羈與頑劣，黛玉卻從未提及這些，因她懂得他的心性，她說“ 你既為我之知己，自然我亦是你之知己”,造化弄人，木石前緣雖是虛空一場，卻懷金悼玉，夢縈千古，今日讀來依然蕩氣回腸！不是所有的相遇都可以相知，不是所有的相知都可以永恒。生命里，我們只愿結(jié)交那些心性相宜的人，統(tǒng)一的語言，相同的志趣，將彼此的心靈拉近，一份懂得，不言不語，卻在默契里滋生。懂得，是兩顆心的對望，潛生一種心靈感應(yīng)，不發(fā)一言，便可知會。一聲懂得，沒有千言萬語，卻可以令人眸中含淚，心中蘊(yùn)暖。這世間太多人情薄涼，你是否覺得，有一個真正懂你的人，是一種幸福與慰藉呢？茫茫人海，你不孤單，有人愿與你同運(yùn)命，共風(fēng)雨，如此，多好！風(fēng)懂云的情懷，它，輕輕的吹送，云姿更加漫妙；雪懂梅的寒傲，它，悄悄的綻放，梅骨愈加清奇；泉懂山的偉岸，它，靜靜的流淌，山林更為蔥茂；雨懂