1-1 DNA重組技術(shù)的基本工具ppt課件

1、123 自然界是否存在一種生物的自然界是否存在一種生物的DNADNA進(jìn)入另一生物的情況？進(jìn)入另一生物的情況？噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)。噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)。思思 考：考：4567891011主要從原核生物中分離純化主要從原核生物中分離純化思考一、限制性核酸內(nèi)切酶一、限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”根據(jù)你所掌握的知識(shí)你能推測(cè)限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？根據(jù)你所掌握的知識(shí)你能推測(cè)限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？限制酶在原核生物中主要起到切割外源限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNADNA使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的。使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的。12 練習(xí)：流感嗜血桿

2、菌的練習(xí)：流感嗜血桿菌的d d菌株菌株( Haemophilus ( Haemophilus influenzae d )influenzae d )中先后分離到中先后分離到3 3種限制酶，則分別種限制酶，則分別命名為命名為: :Hind、Hind、 Hind一、限制性核酸內(nèi)切酶一、限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”粘質(zhì)沙雷氏桿菌粘質(zhì)沙雷氏桿菌（Serratia marcesens）Sma大腸桿菌大腸桿菌（Escherichia coli R）EcoR13（1 1）識(shí)別雙鏈）識(shí)別雙鏈DNADNA分子的某種特定的核苷酸序列分子的某種特定的核苷酸序列例如：例如：大腸桿菌的大腸桿菌的EcoEc

3、oRR限制酶只能識(shí)別限制酶只能識(shí)別GAATTCGAATTC序列，序列，一、限制性核酸內(nèi)切酶一、限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”（2 2）在特定的位點(diǎn)切割）在特定的位點(diǎn)切割DNADNA分子。分子。并在并在G G和和A A之間切開。之間切開。特異性特異性14 能被限制性內(nèi)切酶特異性識(shí)別的切能被限制性內(nèi)切酶特異性識(shí)別的切割部位都具有回文序列：在切割部位，割部位都具有回文序列：在切割部位，一條鏈正向讀的堿基順序與另一條鏈反一條鏈正向讀的堿基順序與另一條鏈反向讀的順序完全一致。向讀的順序完全一致。15切割切割DNADNA分子實(shí)質(zhì)是斷開兩個(gè)核苷酸之間的分子實(shí)質(zhì)是斷開兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯磷酸二酯

4、鍵鍵。16產(chǎn)生黏性末端或平末端產(chǎn)生黏性末端或平末端一、限制性核酸內(nèi)切酶一、限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”17平末端平末端平末端平末端181920脫氧核糖和磷酸脫氧核糖和磷酸催化磷酸二酯鍵形成催化磷酸二酯鍵形成二、二、DNADNA連接酶連接酶“分子縫合針分子縫合針”21恢復(fù)恢復(fù)磷酸磷酸二酯鍵二酯鍵只能連接黏性末端只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端能連接黏性末端和平末端( (效效率較低率較低) )二、二、DNADNA連接酶連接酶“分子縫合針分子縫合針”222324DNADNA聚合酶聚合酶DNADNA連接酶連接酶模板模板作用底物作用底物作用特點(diǎn)作用特點(diǎn)相同點(diǎn)相同點(diǎn)DNA連接酶與連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎聚合酶是一回事嗎?為什么為什么?形成磷酸二酯鍵形成磷酸二酯鍵以一條以一條DNADNA鏈為模板，鏈為模板，單個(gè)核苷單個(gè)核苷酸連接成一條互補(bǔ)的酸連接成一條互補(bǔ)的DNADNA鏈鏈將將DNADNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來，不需要模板起來，不需要模板需要需要不需要不需要單個(gè)脫氧核苷酸單個(gè)脫氧核苷酸DNADNA分子片段分子片段25三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 “ “分子運(yùn)輸車分子運(yùn)輸車”26 常存在于原核細(xì)胞中，是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于擬核之外能自我