GB 乳酸菌檢驗(yàn)PPT課件

1、定義定義乳酸菌是指一群通過發(fā)酵糖類產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌通稱。乳桿菌屬雙歧桿菌屬鏈球菌屬的嗜熱鏈球菌第1頁/共30頁本標(biāo)準(zhǔn)與本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 4789.35-2008GB/T 4789.35-2008相比，主要相比，主要變化如下：變化如下： 修改了乳酸菌總數(shù)、乳桿菌、雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌的計(jì)數(shù)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB 4789.35-1996、GB/T 4789.35-2003、GB/T 4789.35-2008。第2頁/共30頁GB/T 4789.352003乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗(yàn)流程第3頁/共30頁 SN/TSN/T 1941.1-20

2、07:檢驗(yàn)方法有三部分：第1部分：分離與計(jì)數(shù)方法；第2部分：PetrifilmTM測試片法；第3部分：乳桿菌的PCR法第4頁/共30頁SN標(biāo)準(zhǔn)第5頁/共30頁GB/T 4789.35GB/T 4789.3520082008乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗(yàn)修訂乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗(yàn)修訂本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 4789.352003相比主要修改如下：將選擇性分離培養(yǎng)基由改良TJA 培養(yǎng)基（改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基）改為MRS培養(yǎng)基；增加API 50CH 診斷試劑條；乳酸菌計(jì)數(shù)由傾注法改為涂布法。第6頁/共30頁 2010版第7頁/共30頁樣品制備樣品制備 7.1.3 固體和半固體食品：以無菌操作稱取25 g 樣品，置

3、于裝有225 mL 生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000 r/min10000 r/min 均質(zhì)1 min2 min，制成1:10 樣品勻液；或置于225 mL 生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min 制成1:10 的樣品勻液。 7.1.4 液體樣品：液體樣品應(yīng)先將其充分搖勻后以無菌吸管吸取樣品25 mL 放入裝有225 mL 生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分振搖，制成1:10 的樣品勻液。第8頁/共30頁乳酸菌計(jì)數(shù)乳酸菌計(jì)數(shù) 乳酸菌總數(shù)乳酸菌總數(shù) 根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計(jì)，選擇2 個(gè)3 個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1 mL 樣品勻

4、液分別置于2 個(gè)MRS瓊脂平板，使用L 形棒進(jìn)行表面涂布。361，厭氧培養(yǎng)48 h2 h后計(jì)數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。從樣品稀釋到平板涂布要求在15min 內(nèi)完成。第9頁/共30頁乳酸菌計(jì)數(shù)乳酸菌計(jì)數(shù) 雙歧桿菌計(jì)數(shù)雙歧桿菌計(jì)數(shù) 根據(jù)對待檢樣品雙歧桿菌含量的估計(jì)，選擇2 個(gè)3 個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1 mL樣品勻液于莫匹羅星鋰鹽（Li-Mupirocin）改良MRS 瓊脂平板，使用滅菌L 形棒進(jìn)行表面涂布，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平板。361，厭氧培養(yǎng)48 h2 h 后計(jì)數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。第10頁/共30頁乳酸菌計(jì)數(shù)乳酸菌計(jì)數(shù) 嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù) 根據(jù)待檢樣品嗜熱鏈球菌活菌數(shù)的

5、估計(jì)，選擇2 個(gè)3 個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1 mL樣品勻液分別置于2 個(gè)MC 瓊脂平板，使用L 形棒進(jìn)行表面涂布。361，需氧培養(yǎng)48 h2 h后計(jì)數(shù)。嗜熱鏈球菌在MC 瓊脂平板上的菌落特征為：菌落中等偏小，邊緣整齊光滑的紅色菌落，直徑2 mm1mm，菌落背面為粉紅色。第11頁/共30頁乳酸菌計(jì)數(shù)乳酸菌計(jì)數(shù) 乳桿菌計(jì)數(shù)乳桿菌計(jì)數(shù) 乳酸菌總數(shù)結(jié)果減去 雙歧桿菌與 嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)結(jié)果之和即得乳桿菌計(jì)數(shù)。第12頁/共30頁報(bào)告（報(bào)告（GB/T4789.35-2008） 根據(jù)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果出具檢測報(bào)告。最終確定的乳酸菌菌落在根據(jù)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果出具檢測報(bào)告。最終確定的乳酸菌菌落在303030

6、0300之間的平板計(jì)數(shù)，再乘以相應(yīng)的稀釋之間的平板計(jì)數(shù)，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，修約保留兩位有效數(shù)字，之后的數(shù)字，采用倍數(shù)，修約保留兩位有效數(shù)字，之后的數(shù)字，采用1010的指數(shù)表示。參照的指數(shù)表示。參照GB/T 4789.2GB/T 4789.2規(guī)定。每克（或毫升）規(guī)定。每克（或毫升）食品中所含有的乳酸菌數(shù)以食品中所含有的乳酸菌數(shù)以CFU/CFU/g g（mLmL）表示。表示。 第13頁/共30頁報(bào)告（報(bào)告（GB4789.35-2010） 7.3.1 選取菌落數(shù)在30 CFU300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU 的可記

7、錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。 7.3.2 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。 7.3.3 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。第14頁/共30頁結(jié)果的表述結(jié)果的表述 7.4.1 若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）中菌落總數(shù)結(jié)果。 7.4.2 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)

8、時(shí)，按公式（1）計(jì)算：第15頁/共30頁第16頁/共30頁 7.4.3 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300 CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。 7.4.4 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 7.4.5 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。 7.4.6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30 CFU300 CFU 之間，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 時(shí)，則以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落數(shù)

9、乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。第17頁/共30頁菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)的報(bào)告 7.5.1 菌落數(shù)小于100 CFU 時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。 7.5.2 菌落數(shù)大于或等于100 CFU 時(shí)，第3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2 位數(shù)字，后面用0 代替位數(shù)；也可用10 的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。 7.5.3 稱重取樣以CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL 為單位報(bào)告。第18頁/共30頁第19頁/共30頁第20頁/共30頁第21頁/共30頁3M petrifilm第22頁/共30頁乳酸菌的鑒定 純培養(yǎng) 挑取3個(gè)或以上的可疑菌落，嗜熱鏈球菌接種于MCMC瓊脂平板，乳桿菌屬接種于MRSMRS瓊脂平板，兼性厭氧，置36 36 11恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 48 h h2 h2 h。雙歧桿菌屬鑒定按照GB/T 4789.34GB/T 4789.34。第23頁/共30頁涂片鏡檢 乳桿菌屬細(xì)胞形態(tài)多樣，從長的桿狀和細(xì)長桿狀到彎曲桿狀及短桿狀，一般形成鏈。通常不運(yùn)動。無芽胞，革蘭氏染色陽性。嗜熱鏈球菌形態(tài)為球形或球桿狀，直徑為0.5 0.5 mm2.0 2.0 mm，細(xì)胞成對或成鏈排列，無芽胞，革蘭氏染色陽性。第24頁