(完整版)高效液相色譜儀使用注意事項(xiàng)[1]全解

1、島津液相色譜儀使用注意事項(xiàng)1.流動相必須用 HPLC 級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)（使用0.45um 或更細(xì)的膜過濾 ）。2.流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。3.不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。4.使用緩沖溶液時，做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇（或甲醇水溶液 ）沖洗 40 分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須 用去離子水沖洗 20ml 以上。5.長時間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng) 該用有機(jī)相 （如甲醇等 ），因?yàn)榧兯组L霉。6.每次做

2、完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。7.C18 柱絕對不能進(jìn)蛋白樣品，血樣、生物樣品。8堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱T混合器中的過濾器T管路過濾器T單向閥檢查并清洗。 清洗方法；以異丙醇作溶劑沖洗：放在異丙醇中間用超聲波清洗；用10%稀硝酸清洗。9. 氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。10. 如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進(jìn)行流動相的清洗。11. 要注意柱子的 pH 值范圍，不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。12. 更換流動相時應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相 中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一

3、下。液相色譜柱使用經(jīng)驗(yàn)談色譜柱在使用前， 最好進(jìn)行柱的性能測試， 并將結(jié)果保存起來， 作為今后評價柱性能變化的 參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同； 另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行 （出廠測試所使用的條件是最 佳條件 ），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。1 、樣品的前處理：a 最好使用流動相溶解樣品。b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。c、使用 0.45 m 的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。流動相的配制液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：a 流動

4、相對樣品具有一定的溶解能力， 保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱 中）。b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特殊情況除外）。c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低 柱壓降，延長液體泵的使用壽命 （可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度 ）。d、 流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV 檢測器，最好使用對紫外吸 收較低的溶劑配制。e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。f、 在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測， 還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。3、流動相流速

5、的選擇： 因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)， 使用不同的流速可得到不 同的柱效。 對于一根特定的色譜柱， 要追求最佳柱效， 最好使用最佳流速。 對內(nèi)徑為 4.6mm 的色譜柱，流速一般選擇 1ml min ，對于內(nèi)徑為 4.0mm 柱，流速 0.8ml min 為佳。 當(dāng)選 用最佳流速時， 分析時間可能延長。 可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間 （如 使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量 ）。 注意：a.由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系（必須使用乙腈的場合除外）。b.對于正相柱推薦使用沸程為 30-60C的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的 己烷不得使用。用水最好

6、使用超純水 （電阻率大于 18 兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類 雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。c.含水流動相最好在臨實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最 好加入疊氮化鈉，防止細(xì)菌生長。d.流動相要求使用 0.45 m 濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。e.使用 HPLC 級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱 性能常見故障的斷定及解決方法診狀可能的原因及解決方法（一）保留時間變化1. 柱溫變化 柱恒溫，必要時需配置恒溫箱2. 等度與梯度間未能充分平衡 至少用 10 倍柱體積的流動相平衡柱3. 緩沖液容量不夠用 25mmol/L 的緩沖液4. 柱污染 每天沖洗

7、柱5. 柱內(nèi)條件變化 穩(wěn)定進(jìn)樣條件 ,調(diào)節(jié)流動相6. 柱快達(dá)到壽命 采用保護(hù)柱（二）保留時間縮短1. 流速增加 檢查泵 ,重新設(shè)定流速2. 樣品超載 降低樣品量3. 鍵合相流失 流動相 pH 值保持在 37.5，檢查柱的方向4. 流動相組成變化 防止流動相蒸發(fā)或沉淀5. 溫度增加 柱恒溫（三）保留時間延長1. 流速下降 管路泄漏 ,更換泵密封圈 ,排除泵內(nèi)氣泡2. 硅膠柱上活性點(diǎn)變化 用流動相改性劑 ,如加三乙胺 ,或采用堿質(zhì)鈍化柱3. 鍵合相流失 同前（二）34. 流動相組成變化 同前（二）45. 溫度降低 同前（二）5（四）出現(xiàn)肩峰或分叉1.樣品體積過大 用流動相配樣 ,總的樣品體積小于第

8、一峰的 15%2. 樣品溶劑過強(qiáng) 采用較弱的樣品溶劑3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱 , 采用較弱腐蝕性條件4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 更換燒結(jié)不銹鋼 , 加在線過濾器 ,過濾樣品5. 進(jìn)樣器損壞 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子（五）鬼峰1. 進(jìn)樣閥殘余峰 每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥 ,改進(jìn)閥和樣品的清洗2. 樣品中未知物 處理樣品3. 柱未平衡 重新平衡柱 ,用流 動相作樣品溶劑 （尤其是離子對色譜 ）4.三氟乙酸 （TFA） 氧化 （肽譜 ） 每天新配 ,用抗氧化劑5. 水污染 （反相 ） 通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用 HPLC 級的水（六 ） 基線噪聲1.氣泡 （尖銳峰 ） 流動相脫氣 , 加柱后背壓2.

9、 污染 （隨機(jī)噪聲 ） 清洗柱 ,凈化樣品 ,用 HPLC 級試劑3. 檢測器燈連續(xù)噪聲 更換氘燈4.電干擾 （偶然噪聲 ） 采用穩(wěn)壓電源 ,檢查干擾的來源 （ 如水浴等 ）5. 檢測器中有氣泡 流動相脫氣 ,加柱后背壓（七）峰拖尾1.柱超載 降低樣品量 , 增加柱直徑采用較高容量的固定相2. 峰干擾 清潔樣品 ,調(diào)整流動相3. 硅羥基作用 加三乙胺 ,用堿質(zhì)鈍化柱，增加緩沖液或鹽的濃度，降低流動相pH 值，鈍化樣品4.同前 （四）4 同前 （四 ）45.同前 （四）3 5.同前 （四 ）36.死體積或柱外體積過大 連接點(diǎn)降至最低 ,對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整 , 盡可能采用細(xì)內(nèi) 徑的連接管7.柱

10、效下降 用較低腐蝕條件 ,更換柱 , 采用保護(hù)柱（八 ）峰展寬1.進(jìn)樣體積過大 同（四 ）12. 在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散3. 數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于 10 點(diǎn)4. 檢測器時間常數(shù)過大 設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的 10%5. 流動相粘度過高 增加柱溫 ,采用低粘度流動相6. 檢測池體積過大 用小體積池 ,卸下熱交換器7. 保留時間過長 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫8. 柱外體積過大 將連接管徑和連接管長度降至最小9. 樣品過載 進(jìn)小濃度小體積樣品液相色譜儀使用操作規(guī)程液相色譜儀使用操作規(guī)程總流程：超純水沖洗柱 流動相分離樣品 超純水沖洗

11、柱 純乙睛保存柱 1 電源準(zhǔn)備打開穩(wěn)壓器電源開關(guān)，須待電壓指示至 220V 后，才能開啟其他有關(guān)設(shè)備。2 HP1100 高效液相色譜儀的準(zhǔn)備試劑：三氟乙酸乙腈 （Fisher 公司產(chǎn)品色譜純 ）超純水 （Millipore 超純水 ）冰乙酸溶液配置：貯液瓶與流動相的準(zhǔn)備A 液 0.1%三氟乙酸 （三氟乙酸 1ml，超純水 999ml ）室溫保存B 液 60%乙腈 （乙腈 600ml， 超純水 400 m l ）室溫保存樣品液 0.01%乙酸 （冰乙酸 0.01ml，超純水 100ml ）室溫保存泵頭沖洗液：精濾后超純水或者是1%色譜純甲醇 室溫保存注：貯液瓶應(yīng)用超純水清洗干凈，備用。流動相溶劑

12、用潔凈硼砂漏斗精濾除去微小顆粒。操作者必須清楚并注明A、 B 貯液瓶盛裝為何種溶劑。沖 洗 泵 頭 ： 用 注 射 管 于 軟 塑 料 管 末 端 抽 吸 至 有 水 流 出 ， 調(diào) 節(jié) 流速開關(guān)控制流速為 20-30drop/mi n.。1流動相管道排氣如果管道中氣泡較多，可通過彈擊管道，排除氣泡，并逆時針旋轉(zhuǎn)脫氣泵活塞使其松動， 用注射管于流動相出口的塑料管末端抽吸至管道內(nèi)氣泡排除完全。操作時， 我們通常已經(jīng)打開了脫氣機(jī)（氣泡嚴(yán)重影響分離效果，所以觀察管道中液體是否有氣泡非常重要。）2開機(jī)3進(jìn)入 HP1100 操作系統(tǒng)a 雙擊 WIN-95 操作界面中左下角Instrument 1 onl

13、ine 圖標(biāo)，進(jìn)入 HP1100 工作站軟件操作界面。單擊工作站操作界面上方 Run control 菜單，在下拉菜單中找到 Sample Info 子 菜單，單擊。在 Sample Info 信息框內(nèi)定義操作者、樣品前綴及編號、保存路徑等參數(shù)。在 保存路徑項(xiàng)下，將可定義子目錄分別輸入操作者拼音縮寫，以方便檢索時互不干擾。b.等待工作站操作界面中泵、柱溫箱、檢測器各指示圖標(biāo)由灰色轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色后，單擊泵、 檢測器各圖標(biāo)可從其各自彈出的菜單中設(shè)定流動相各溶劑比例、流速等。（ 1 ） 流速通常為 1ml/min 。檢測波長通常為 280，或者 254nm。（2）A 液設(shè)置為 100%，運(yùn)行 15-30

14、 分鐘（目的是色譜柱的預(yù)平衡） ，觀察基線走勢，基線應(yīng)為直線，通過單擊“ Bala nee 鍵可將基線調(diào)至零點(diǎn)。待基線平穩(wěn)后可進(jìn)樣。（3）調(diào)整 A 液為 0， B 液為 100%再運(yùn)行 60 分鐘（此時乙腈實(shí)際濃度為 60%）（4） 在 A 液沖洗同時進(jìn)行進(jìn)樣環(huán)的沖洗：用 500 卩 l 的針樣注射器，在 load 狀態(tài)， 注入超純水 500卩 l。（反復(fù)三次，若是 20 卩 l 進(jìn)樣環(huán)，則加入 20 卩 l 以上，多余的水可廢 液管流出。 通常同一樣品上樣 30 次后應(yīng)沖洗進(jìn)樣環(huán)，如果不同樣品， 最好， 每次上樣前均 進(jìn)行沖洗。）（ 5） 吸取一定量可直接進(jìn)樣的樣品溶液（上樣液最好用濾器濾過

15、），將進(jìn)樣閥逆時針旋至 Load 檔，將進(jìn)樣針從進(jìn)樣孔處水平推入，按進(jìn)樣器活塞將樣品溶液注射入進(jìn)樣環(huán)后，立 即將進(jìn)樣閥順時針方向旋至 Injeet 檔，與此同時，數(shù)據(jù)開始自動收集。（6） 此時樣品分析已經(jīng)完成。在 HP1100 主操作界面的檢測器圖標(biāo)，關(guān)閉檢測器，然后關(guān)閉色譜儀主機(jī)檢測器開關(guān)（目的是延長檢測器壽命）。將 B 通道調(diào)為 0， A 通道調(diào)為100%，即 A 液沖洗色譜柱約10-30min。用 A 液續(xù)沖洗色譜柱約 10-30m （目的是沖出柱內(nèi)殘留的雜質(zhì)）（7） A 通道換為 C 通道（ 100%乙腈）續(xù)沖洗色柱約10-30min。 （目的主要為保護(hù)柱）4數(shù)據(jù)記錄的終止與保存 電腦

16、將自動收集并保存數(shù)據(jù)，終止運(yùn)行后，將自動彈出數(shù)據(jù)框，或者可通過DATAANAL YSIS 菜單，調(diào)出資料。3 圖譜處理4 關(guān)機(jī)1 ） HP1100 的關(guān)閉在 HP1100 的主操作界面上分別單擊關(guān)閉泵、檢測器圖標(biāo)，或通過菜單關(guān)閉 。然后， 單擊 HP1100的主操作界面右上方“X”退出 Instrument 1 online 程序，返回至 WIN-95 操作界面。單擊左下角“ Start 菜單，單擊“ Shut down 等待關(guān)機(jī)，待出現(xiàn) “ Restart 提示后，按電腦主機(jī)電源鍵， 關(guān)閉電腦主機(jī)及顯示器。 將所有使用儀器用布蓋好。關(guān)閉排氣扇、 空調(diào)與穩(wěn) 壓器開關(guān)。2） 清潔衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)完畢后，

17、打掃儀器室桌面與地面清潔，保持桌面整潔。3） 儀器使用記錄記錄當(dāng)天的儀器使用情況于指定記錄本上，包括儀器使用起止時間與出現(xiàn)問題的解決方 案，并簽上操作者的名字 .液相色譜儀使用及維護(hù)方法液相色譜儀使用時要非常注意。 使用卡套柱時，兩端的卡套應(yīng)時刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何 時候都不能將卡套取下來，否則會造成填料的流失。液相色譜柱使用注意： 卡套柱的安裝（加預(yù)柱）1 將卡套架套入柱芯2將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯（見下圖） 3將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片 4將 子彈頭 預(yù)柱放入卡套片內(nèi)5將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊 6然后依同樣的順序連

18、接好柱子的另一端平衡色譜柱反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈 /水中的。請一定確保您所使用的流動相和 乙腈 /水互溶。由于色譜柱在儲存或運(yùn)輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析樣品之前， 應(yīng)使用 1020 倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽， 應(yīng)注意用純水 過渡 。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請?jiān)谑褂昧鲃酉嘀坝靡掖蓟虍惐计胶馊绾纹胶馍V柱？ 平衡過程中， 將流速緩慢地提高用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線 （緩沖鹽或離子 對試劑度如果較低，則需要較長的時間來平衡）色譜柱的再生 進(jìn)行色譜柱再生時，

19、 應(yīng)使用一個廉價的泵， 我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上 的泵。注意：在對 NH2 改性的色譜柱進(jìn)行再生時， 由于 NH2 可能成銨根離子的形式存在， 因此應(yīng)該 在水洗后用 0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。 如果簡單的有機(jī)溶劑 / 水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用 0.05M 稀硫酸沖洗非常有效。1使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）2大多數(shù)反相色譜柱的 pH 穩(wěn)定范圍是 2 7.5，盡量不超過該色譜柱的 pH 范圍 3避免流動相組成及極性的劇烈變化 4流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理5如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相

20、，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈， 并保存于甲醇 /乙腈中6壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號液相色譜的常用術(shù)語1、色譜曲線 chromatogram ）：在色譜法中，當(dāng)樣品加入后，樣品中各組分隨著流動相 的不斷向前移動而在兩相間反復(fù)進(jìn)行溶解、揮發(fā)，或 吸附、解吸的過程。如果各組分在固 定相中的分配系數(shù)（表示溶解或吸附的能力）不同，就有可能達(dá)到分離。 分配系數(shù)小的組分滯留在固定相中的時間短， 在柱內(nèi)移動的速度快， 先流出柱子； 分配系數(shù) 大的組分滯留在固定相中的時間長， 在柱內(nèi)移動的速度慢， 后流出柱子； 分離后的各組分經(jīng) 檢測器轉(zhuǎn)換成電信號而記錄下來，得到一條信號隨時間變化的曲線，稱為色譜流出曲線或 “

21、色譜峰 ”，理想的色譜流出曲線應(yīng)該是正態(tài)分布曲線。2、（色譜）峰（chromatographic peak）:色譜柱流出組分通過檢測器系統(tǒng)時所產(chǎn)生的 響應(yīng)信號的微分曲線。3、峰底（peak base）：峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間的連接的直線。4、峰高（h ， peak height）：色譜峰最大值點(diǎn)到峰底的距離。5、峰寬（ W ， peak width） ：在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)的距離。6、半高峰寬（ W h/2 ， peak withd at half height ）：通過峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線， 此直線與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)之間的距離（圖 1 中的 HJ）。7、峰面積（A ，pea

22、k area）：峰與峰底之間的面積（圖 1 中的 CHEJDC ）。8、拖尾峰（tailing peak）:后沿較前沿平緩的不對稱的峰。9、 前伸峰（leadi ng peak）：前沿較后沿平緩的不對稱的峰。（又叫伸舌峰、前延峰）10、 假峰（ghost peak）:除組分正常產(chǎn)生的色譜峰外，由于儀器條件的變化等原因而在譜 圖上出現(xiàn)的色譜峰， 即并非由試樣所產(chǎn)生的峰。 這種色譜峰并不代表具體某一組分， 容易給 定性、定量帶來誤差。（又叫鬼峰）11、 畸峰（ distrorted peak） ：形狀不對稱的色譜峰， 前伸峰、拖尾峰都屬于這類。12、 反峰（ negative peak） ：也稱倒

23、峰、負(fù)峰，即出峰的方向與通常的方向相反的色譜峰。柱的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)（推薦）色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要， 稍有不慎就會降低柱效、 縮短使用壽命甚至損壞。 在色 譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。1避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。 溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下 都會影響柱內(nèi)的填充狀況； 柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料， 因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng) 該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。2應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?一般說來色譜柱不能反沖， 只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時， 才可以反沖除去留在柱頭

24、 的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。4選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱， 分析柱是鍵合硅膠時， 預(yù)柱為硅膠， 可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠 飽和 ，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。6經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱， 清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。 在進(jìn)行清洗時， 對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20 倍左右，即常規(guī)分析需要 5075ml 。下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷 和甲醇依次沖洗， 然后再以相反順序依次沖洗， 所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。 甲醇能洗去殘留

25、的強(qiáng)極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿） 依次沖洗， 再以相反順序依次沖洗。 如果下一步分析用的流動相不含緩沖液， 那么可以省略 最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇（乙腈）沖洗時重復(fù)注射100200四氫呋喃數(shù)次有助于除去強(qiáng)疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除 去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗， 除去交換性能強(qiáng)的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機(jī)物）、甲 醇、水依次沖洗。7保

26、存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇， 柱接頭要擰緊， 防止溶劑揮發(fā)干燥。 絕對禁止 將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。8色譜柱使用過程中， 如果壓力升高， 一種可能是 燒結(jié)濾片 被堵塞， 這時應(yīng)更換濾片或?qū)?其取出進(jìn)行清洗； 另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)， 使柱頭被污染； 如果柱效降低或色譜峰變 形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。在后兩種情況發(fā)生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小 鋼勺將柱頭填料取出 12mm 高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適 當(dāng)溶劑濕潤的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能 得到改善， 但是很難恢復(fù)到新柱的水平。 柱子失效通常

27、是柱端部分， 在分析柱前裝一根與分 析柱相同固定相的短柱（530mm），可以起到保護(hù)、延長柱壽命的作用。采用保護(hù)柱會損 失一定的柱效，這是值得的。 通常色譜柱壽命在正確使用時可達(dá) 2 年以上 。以硅膠為基質(zhì) 的填料，只能在 pH29 范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì) 保留于柱頂， 特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?新的色譜柱在使用一段 時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降， 這時也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。每次工作完后，最 好用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如 ODS 柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液 作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素

28、（氟、氯、溴）的化合物可能會腐 蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在 HPLC 儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔 45 天開 機(jī)沖洗 15 分鐘。6.1 如有要刪除的程序步驟，就按En ter 鍵查找需要刪除的程序，然后按del 鍵即可。島津液相操作規(guī)程一、開機(jī)操作規(guī)程1. 開機(jī)按 Power 鍵，按以下順序依次開啟 HPLC 系統(tǒng)各設(shè)備的電源：總電源 宀泵宀柱溫箱2. 脫氣將吸濾頭分別放入流動相中， 旋轉(zhuǎn)排液閥至 180 度，啟動鍵板上的 Purge 鍵，排液 12min ；再按一次 Purge 鍵停止沖洗操作，關(guān)緊排液閥。3. 設(shè)定參數(shù)按 Func 鍵依次設(shè)定儀器參數(shù)：流速（或壓力）、壓力最大限、壓力最小限。當(dāng)屏幕顯示 區(qū)閃爍時，提示可以輸入數(shù)值，按Enter 鍵確認(rèn)。在 A 泵面板上，按 Cone 鍵，根據(jù)流動相比例，設(shè)置B 泵比例。4. 啟動流速先按 CE 鍵顯示初始屏幕，然后按一下 Fune 鍵，屏幕顯示區(qū)閃爍，提示可以輸入數(shù)值，按 Enter 鍵確認(rèn)。以 0.2ml/min 的梯度逐步升至所需流速（一般為1.0ml/min ）。按 Enter 鍵之前，按 CE 鍵可以刪除新設(shè)定的數(shù)值。5. 準(zhǔn)備進(jìn)樣平衡 10min 后，開啟檢測器、計(jì)算機(jī)以及信號