醫(yī)用化學實驗PPT參考幻燈片

1、醫(yī)醫(yī) 用用 化化 學學 實實 驗驗生物化學教研室生物化學教研室張麗娜張麗娜1 實驗課注意事項：實驗課注意事項： 不遲到，不早退，做好課前預習工作不遲到，不早退，做好課前預習工作 穿好白大褂穿好白大褂 使用煤氣時注意安全使用煤氣時注意安全 試劑用后及時歸位試劑用后及時歸位保持嚴肅認真的實驗態(tài)度保持嚴肅認真的實驗態(tài)度 及時記錄實驗結果，按時完成實驗報告及時記錄實驗結果，按時完成實驗報告2 實驗報告格式：實驗報告格式：1 1、實驗目的、實驗目的2 2、實驗原理、實驗原理3 3、實驗操作、實驗操作4 4、實驗結果（真實、客觀）、實驗結果（真實、客觀）5 5、討論（實驗報告的核心）、討論（實驗報告的核心

2、）6 6、意見與建議（可選擇）、意見與建議（可選擇）3 實驗一實驗一 醫(yī)化實驗基本操作醫(yī)化實驗基本操作玻璃儀器的洗滌玻璃儀器的洗滌吸量管的使用吸量管的使用 注意：右手注意：右手食指食指按住吸量管口按住吸量管口溶液的混勻溶液的混勻 指彈混勻、攪拌混勻、倒轉混勻、旋渦混指彈混勻、攪拌混勻、倒轉混勻、旋渦混合器混勻等合器混勻等4 實驗二實驗二 電離平衡與緩沖溶液電離平衡與緩沖溶液q實驗目的實驗目的 1、掌握同離子效應的原理、掌握同離子效應的原理 2、學習通過韓、學習通過韓-哈方程式配制緩沖溶液哈方程式配制緩沖溶液 3、觀察稀釋對緩沖溶液、觀察稀釋對緩沖溶液pH值的影響值的影響 4、學習吸量管及、學習

3、吸量管及pH計的使用計的使用 5 1、同離子效應、同離子效應q實驗原理實驗原理HAcHAc H H+ + + Ac+ Ac- -NaAcNaAc Na Na+ + + + AcAc- -例：例： 同離子效應使得同離子效應使得HAc的電離度降低，溶液的的電離度降低，溶液的pH升高升高6 酸堿指示劑：酸堿指示劑：紅紅橙橙黃黃紅紅淡紅淡紅黃黃無色無色綠綠藍藍3.14.481067.6甲基橙甲基橙酚酞酚酞溴麝香草酚藍溴麝香草酚藍7 pH = pH = pKapKa + + lglg 鹽鹽 酸酸 韓韓-哈方程式哈方程式也可表示為：也可表示為：（鹽的摩爾數(shù)）（鹽的摩爾數(shù)） （酸的摩爾數(shù)）（酸的摩爾數(shù)）n鹽

4、鹽/V溶液溶液n酸酸/V溶液溶液當當酸酸與與鹽鹽混合前的濃度相等時：混合前的濃度相等時：= = pKapKa + + lglg V鹽鹽 V酸酸pHpH= = pKapKa + + lglg n鹽鹽 n酸酸pHpH2、緩沖溶液、緩沖溶液8 緩沖溶液加水緩沖溶液加水稀釋稀釋時，鹽濃度與酸濃度作相同時，鹽濃度與酸濃度作相同 比例稀釋，因此，緩沖溶液的比例稀釋，因此，緩沖溶液的pHpH幾乎不因稀釋幾乎不因稀釋 而改變。而改變。 緩沖溶液的緩沖能力有一定限度，超過該限度緩沖溶液的緩沖能力有一定限度，超過該限度 緩沖溶液的緩沖溶液的pH也會發(fā)生較大改變也會發(fā)生較大改變9 q實驗操作實驗操作1、同離子效應、

5、同離子效應（1）各各1支支 + NH3 . H2O 2ml+ 1滴酚酞滴酚酞 1滴滴NH4Cl 1滴滴H2O搖勻搖勻觀察結果觀察結果1ml=15滴滴（2） 各各1支支 + 醋酸醋酸 2ml+ 1滴甲基橙滴甲基橙 1滴滴NaAc 1滴滴H2O搖勻搖勻觀察結果觀察結果10 2、緩沖溶液、緩沖溶液（1）0.1mol/L KH2PO40.1mol/L Na2HPO4 8 ml 2 ml 5 ml 5 ml 2 ml 8 ml精密精密pH試紙檢測試紙檢測pH計檢測計檢測韓韓-哈方程式計算哈方程式計算測完測完pH值值后后2管保留管保留用吸量用吸量管進行管進行操作操作大大試管試管3支支11 另取另取2支小試

6、管，以上面試管支小試管，以上面試管2里的緩沖液進行實驗里的緩沖液進行實驗2號緩沖液號緩沖液2 ml1 ml蒸餾水蒸餾水0 ml1 ml溴麝香草酚溴麝香草酚 藍各藍各1滴滴（2）12 （3）另取）另取3支小試管，以上面試管支小試管，以上面試管2里的緩沖液進行實驗里的緩沖液進行實驗2號緩沖液號緩沖液2 ml2 ml2 ml溴麝香草酚藍溴麝香草酚藍各各2滴，混勻滴，混勻NaOH 3滴，滴，搖勻，觀察結果搖勻，觀察結果繼續(xù)滴加，記錄變色時繼續(xù)滴加，記錄變色時所加所加NaOH滴數(shù)滴數(shù)HCl 3滴，滴，搖勻，觀察結果搖勻，觀察結果繼續(xù)滴加，記錄變色時所繼續(xù)滴加，記錄變色時所加加HCl滴數(shù)滴數(shù)13 2號管緩

7、沖液測好號管緩沖液測好pH后切勿立即倒去后切勿立即倒去吸量管的使用吸量管的使用pH計的使用計的使用 注意事項：注意事項：14 1、看清刻度，選擇適當容量的吸量管、看清刻度，選擇適當容量的吸量管2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管 口，穩(wěn)住液面口，穩(wěn)住液面3、拿吸量管的時候，刻度面向自己、拿吸量管的時候，刻度面向自己4、讀刻度時，眼睛與刻度線同一水平，以、讀刻度時，眼睛與刻度線同一水平，以 下凹面為準下凹面為準5、吸取另外一種試劑時，要潤洗、吸取另外一種試劑時，要潤洗q 吸量管的使用吸量管的使用15 實驗三實驗三 功能基反應功能基反應q實驗目的實驗目的1、掌

8、握幾功能基的主要化學性質、掌握幾功能基的主要化學性質2、了解乙酰乙酸乙酯的酮、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互變異構現(xiàn)象烯醇互變異構現(xiàn)象16 1、雙鍵與鹵素的加成反應、雙鍵與鹵素的加成反應q實驗原理實驗原理C=C + Br2 -CH-CH- BrBr 紅棕色的溴褪色，可用于鑒定有機物中紅棕色的溴褪色，可用于鑒定有機物中 是否存在不飽和鍵是否存在不飽和鍵17 2、酚性羥基的反應、酚性羥基的反應OHONaNaOH+混 濁澄 清（1）苯酚的弱酸性）苯酚的弱酸性（2）酚性羥基與）酚性羥基與FeCl3的顯色反應的顯色反應苯酚苯酚FeCl3紫色絡合物紫色絡合物 可用于鑒別酚和醇可用于鑒別酚和醇18 3、醛基的

9、反應、醛基的反應 O | R-C-H + 2Cu（OH）2 O | R-C-OH + Cu2O + 2H2O磚紅色沉淀磚紅色沉淀（班氏試劑）（班氏試劑） 酮無此反應，故可用于鑒別醛和酮酮無此反應，故可用于鑒別醛和酮19 OCH2OHHHOHHOHHOHHOCHOHO -C - HCH2OHHOHCH2OHHOH -C - OH H -C - OHH -C - OHCH - C -OHH - C -HO - C - HCH2OHH - COHOHOHHHHHOHOH123456OHHHOHOHHOHOHCH2OHOCH2OHHOHHHOHOHCH2OHHO - C - HCH2OHOHCH2OH

10、H - C - OH H - C - OHCH - C - OHHO - C - HH - CO123456*CH2OHHOHCH - C - OHHO - C - HOCH2OHH - C - OHCH2C = OCH2OH20 4、乙酰乙酸乙酯的酮、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互變異構現(xiàn)象烯醇互變異構現(xiàn)象 使三氯化鐵溶液呈使三氯化鐵溶液呈紫紅色紫紅色反應反應具有烯醇式結構具有烯醇式結構 與苯肼反應生成苯腙，顏色？與苯肼反應生成苯腙，顏色？ 使使紅棕色紅棕色溴的四氯化碳溶液褪色溴的四氯化碳溶液褪色具有雙鍵結構具有雙鍵結構 O O | |CH3-C-CH2- C-O-C2H521 說明乙酰乙酸乙酯是

11、酮式和烯醇式兩種異構體的說明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式兩種異構體的混合物，兩者之間相互轉變，處于混合物，兩者之間相互轉變，處于動態(tài)平衡動態(tài)平衡。 O O | |CH3-C-CH2-C-O-C2H5 OH O | |CH3-C = CH-C-O-C2H5室溫時室溫時 酮型（酮型（93%） 烯醇型（烯醇型（7%） 凡兩種或兩種以上的異構體能互相轉變，并以凡兩種或兩種以上的異構體能互相轉變，并以 動態(tài)平衡存在的現(xiàn)象動態(tài)平衡存在的現(xiàn)象互變異構現(xiàn)象互變異構現(xiàn)象22 5、尿素的化學性質、尿素的化學性質H2N - C - NH2H2N - C - NH - C - NH2+ NH3CuSO4OOOH2N -

12、 C - NH2O+OCH2N - C - NH - C - NH2OO150160紫紅色縮二脲（縮二脲反應）堿性OH-紫紅色物質紫紅色物質縮二脲反應：縮二脲反應：縮二脲縮二脲 + CuSO4（少量）（少量）23 1、烯基的反應、烯基的反應q實驗操作實驗操作+ 硬脂酸硬脂酸10滴滴+ 油酸油酸10滴滴+ 植物油植物油10滴滴逐滴加入逐滴加入5%Br2的的CCl4溶溶液，不斷振蕩試管，記錄液，不斷振蕩試管，記錄結果結果 不是溴水不是溴水24 2、酚性羥基的反應、酚性羥基的反應（1）+ 液體苯酚液體苯酚2滴滴 水水5滴，搖勻滴，搖勻+ 10%NaOH 2 滴滴 搖勻，觀察搖勻，觀察（2）+ 0.5

13、%苯酚溶液苯酚溶液10滴滴+ 0.5%水楊酸溶液水楊酸溶液10滴滴+ 苯甲醇苯甲醇10滴滴各加入各加入1%FeCl31滴，觀察結果滴，觀察結果25 3、醛基反應、醛基反應（大試管（大試管6支）支）試劑（滴）試劑（滴） 1 2 3 4 5 640%乙醛液乙醛液 5 10%NaOH 5 丙酮液丙酮液 4 1%葡萄糖葡萄糖 4 1%果糖果糖 4 1%蔗糖蔗糖 4 42mol/L鹽酸鹽酸 10班氏試劑班氏試劑 10 10 10 10 10 1-5管于沸水中加熱管于沸水中加熱3分鐘，觀察結果；分鐘，觀察結果；6號管加蒸餾水號管加蒸餾水10滴，于沸滴，于沸水中加熱水中加熱10分鐘，不時振蕩，再加分鐘，不時

14、振蕩，再加10%NaOH10滴滴，班氏試劑，班氏試劑10滴滴混勻，于沸水中再加熱混勻，于沸水中再加熱3分鐘，與分鐘，與5號管比較，記錄結果號管比較，記錄結果26 4、乙酰乙酸乙酯的酮、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互變異構現(xiàn)象烯醇互變異構現(xiàn)象（1）+ 10%乙酰乙酸乙酰乙酸 乙酯乙酯2滴滴+ 2，4-二硝基苯肼二硝基苯肼10 滴，振蕩，觀察結滴，振蕩，觀察結 果，寫出反應式果，寫出反應式（2）+ 10%乙酰乙酸乙酰乙酸 乙酯乙酯10滴滴+ 1%FeCl31滴，觀察結果滴，觀察結果再加溴水再加溴水1滴，觀察變化，滴，觀察變化，并加以解釋并加以解釋27 5、尿素的化學性質、尿素的化學性質+ 尿素尿素1匙匙

15、小火加熱，待尿素熔化小火加熱，待尿素熔化紅色石蕊試紙放置管口，觀察變化紅色石蕊試紙放置管口，觀察變化繼續(xù)加熱繼續(xù)加熱待管內物質凝固后待管內物質凝固后冷卻冷卻試管，加水試管，加水2ml玻棒攪動促溶，吸取上層溶液于另一試管中玻棒攪動促溶，吸取上層溶液于另一試管中再加入再加入10%NaOH 、1%CuSO4各各1滴，觀察變化滴，觀察變化28 q注意事項注意事項1、注意區(qū)分以下試劑：、注意區(qū)分以下試劑： 液體苯酚液體苯酚5%苯酚溶液苯酚溶液 5%Br2的的CCl4溶液溶液溴水溴水2 、液體苯酚預先加熱，盛放其的試管也要預熱、液體苯酚預先加熱，盛放其的試管也要預熱3、縮二脲反應中試管冷卻后再加水，并用玻

16、棒、縮二脲反應中試管冷卻后再加水，并用玻棒 輕輕攪動輕輕攪動 4、揮發(fā)性試劑全部擺放在邊臺上，用后及時歸位揮發(fā)性試劑全部擺放在邊臺上，用后及時歸位 29 實驗三 動物組織中核酸的提取與鑒定 實驗目的： 1、掌握組織中的核酸的提取與鑒定 2、掌握離心機的使用 3、熟悉加樣器的使用30 實驗原理 1、提取原理： a: DNA和RNA大部分與Pro結合成核蛋白。 b: 核蛋白可被三氯醋酸沉淀下來。 c: 10%NaCl溶液從沉淀中提取核酸，生成核酸 的鈉鹽 d: 乙醇把核酸鈉沉淀下來 31 核苷核苷B-R）磷酸（磷酸（P）2、鑒定原理核酸核酸核苷酸核苷酸基堿（基堿（B）戊糖（戊糖（R）核酸的基本組成

17、單位核酸的基本組成單位嘌呤（嘌呤（A G）嘧啶嘧啶核糖（核糖（C U）脫氧核糖（脫氧核糖（C T）32 a:磷酸磷酸+鉬酸銨鉬酸銨 磷鉬酸磷鉬酸 鉬藍鉬藍 b:嘌呤嘌呤+AgNO3 絮狀嘌呤銀絮狀嘌呤銀 c:核糖核糖 糠醛糠醛 綠色化合物綠色化合物 d: 脫氧核糖脫氧核糖 -羥基羥基-酮基戊醛酮基戊醛 藍色化合物藍色化合物氨基萘酚磺酸氨基萘酚磺酸H+3，5-二羥基甲苯H+二苯銨33 操作步驟 1、提取步驟 制備肝組織勻漿： 脫臼處死或斷頭處死 剖腹取全部肝組織 生理鹽水沖洗血污，吸干凈 三氯醋酸2ml 分散勻漿機勻漿34 分離提取于全部勻漿內加入生理鹽水2ml，玻棒混勻靜置3min， 3000

18、rpm 3min, 棄上清沉淀加入10%NaCl 2ml，沸水浴3min,玻棒攪拌取出冷卻，3000rpm 3min取上清，逐滴95%酒精2管，混勻靜置5min，3000rpm 5min棄上清，得白色核酸鈉35 核酸的水解： 短試管內加入5%H2SO4 3.5ml 玻棒攪勻 沸水浴中10min36 成分的鑒定管號水解液5%H2SO4濃氨水5%AgNO3測定管 20d 23d 10d對照管 20d23d 10d沸水浴35min，觀察結果，靜置15min,觀察結果嘌呤的鑒定嘌呤的鑒定37 磷酸的鑒定磷酸的鑒定管號水解液5%H2SO4鉬酸銨試劑氨基萘酚磺酸測定管 10d 5d 20d對照管 10d5

19、d 20d放置3min，沸水浴35min，觀察顏色差異38 核糖的鑒定核糖的鑒定管號水解液5%H2SO43，5-二羥基甲苯測定管 4d 6d對照管 4d6d沸水浴510min，觀察顏色差異39 脫氧核糖的鑒定脫氧核糖的鑒定管號水解液5%H2SO4二苯胺試劑測定管 20d 30d對照管 20d30d沸水浴510min，觀察顏色差異40 注意事項 1、做鑒定部分時盡量用大試管，所有標 號朝試管上方 2、玻璃棒攪拌要輕柔 3、膠頭滴管使用要注意順序，避免污染41 移液槍的使用移液槍的使用1、看清最大刻度，選擇適當容量的移液槍、看清最大刻度，選擇適當容量的移液槍（最大刻度和讀數(shù)的關系）（最大刻度和讀數(shù)

20、的關系）2、先調好刻度、先調好刻度3、打至第一檔吸入試劑、打至第一檔吸入試劑4、打出試劑時要按至第二檔、打出試劑時要按至第二檔5、使用加樣器時要慢、穩(wěn)，不要有氣泡出、使用加樣器時要慢、穩(wěn)，不要有氣泡出 現(xiàn)現(xiàn)42 離心機的使用離心機的使用 臺秤平衡臺秤平衡 對稱插入對稱插入 定時定速定時定速43 實驗四 蛋白質呈色反應、沉淀反應及等電點的測定 實驗目的： 1、掌握雙縮脲法、茚三酮法、Folin法定性檢查蛋白質的方法 2、驗證幾種蛋白質沉淀反應的現(xiàn)象及酸堿性環(huán)境的影響 3、了解蛋白質等電點測定 44 一、蛋白質的呈色反應 實驗原理： 雙縮脲反應：含有CONH 、 CSNH、CH2NH等基團的化合物在濃堿液中與硫酸銅生成紫紅色復合物。 茚三