雞白介素的進(jìn)展

1、技術(shù)研發(fā)工作匯報技術(shù)研發(fā)工作匯報 第一部分：第一部分：報告主要內(nèi)容第二部分第二部分: 第三部分：第三部分： 第四部分：第四部分： 第一部分第一部分白細(xì)胞介素白細(xì)胞介素( Interleukin , IL) 簡稱白介素簡稱白介素,是由白細(xì)胞產(chǎn)生的、是由白細(xì)胞產(chǎn)生的、介導(dǎo)細(xì)胞間相互作用的細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞間相互作用的細(xì)胞因子,在細(xì)胞的活化、增殖和分化中起調(diào)節(jié)在細(xì)胞的活化、增殖和分化中起調(diào)節(jié)作用作用,是是20 世紀(jì)世紀(jì)80 年代后才發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞因子。年代后才發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞因子。IL 與其他免疫系統(tǒng)與其他免疫系統(tǒng),通過作用于通過作用于T 細(xì)胞、細(xì)胞、B 細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞(N K)

2、等多種靶細(xì)胞來傳等多種靶細(xì)胞來傳遞免疫信息遞免疫信息,激活、調(diào)控血細(xì)胞的生長發(fā)育與分化成熟激活、調(diào)控血細(xì)胞的生長發(fā)育與分化成熟,參與機(jī)體的免參與機(jī)體的免疫應(yīng)答疫應(yīng)答,參與某些疾病的病理過程。參與某些疾病的病理過程。由于白介素具有廣泛的生物學(xué)功能，由于白介素具有廣泛的生物學(xué)功能，且用量極小就可以起到重要的介導(dǎo)效應(yīng)且用量極小就可以起到重要的介導(dǎo)效應(yīng)，因此，目前有多種經(jīng)基因工，因此，目前有多種經(jīng)基因工程生產(chǎn)的白介素已經(jīng)或?qū)⒁糜谂R床。程生產(chǎn)的白介素已經(jīng)或?qū)⒁糜谂R床。1.1 白介素的種類與生物學(xué)功能白介素的種類與生物學(xué)功能白介素是一類低相對分子質(zhì)量的蛋白多肽，白介素家族的大多白介素是一類低相對分子質(zhì)

3、量的蛋白多肽，白介素家族的大多數(shù)成員在氨基酸序列、結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能等方面均不相數(shù)成員在氨基酸序列、結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能等方面均不相同。同。人的白介素研究在近十幾年來發(fā)展很快人的白介素研究在近十幾年來發(fā)展很快,現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于疾病的治現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于疾病的治療和疫苗的免疫增強(qiáng)劑療和疫苗的免疫增強(qiáng)劑,但動物的白介素研究相對滯后但動物的白介素研究相對滯后,雞的白介素發(fā)展雞的白介素發(fā)展更加緩慢更加緩慢,但隨著分子生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展但隨著分子生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展,有關(guān)雞白細(xì)胞基因與功有關(guān)雞白細(xì)胞基因與功能的研究已逐漸成為熱點(diǎn)能的研究已逐漸成為熱點(diǎn),現(xiàn)在已經(jīng)克隆出的白介素有現(xiàn)在已經(jīng)克

4、隆出的白介素有IL-1 、IL-2 、IL-6 、IL-12 、IL-15 、IL-16 、IL-17 及及IL-18 等。等。 本文就目前雞白介素（本文就目前雞白介素（IL-2）分子生物學(xué)與應(yīng)用的研究進(jìn)展做一綜）分子生物學(xué)與應(yīng)用的研究進(jìn)展做一綜述。述。IL-2:白細(xì)胞介素白細(xì)胞介素-2（Interleukins-2，IL-2）是一類由活化的）是一類由活化的T 細(xì)胞分泌產(chǎn)生的細(xì)胞分泌產(chǎn)生的糖蛋白，具有抗感染、抗病毒等功效，能夠有效提高動物機(jī)體的免疫功能。糖蛋白，具有抗感染、抗病毒等功效，能夠有效提高動物機(jī)體的免疫功能。1976年年Morgan 等以等以T 細(xì)胞生長因子命名，在細(xì)胞生長因子命名，

5、在1979 年年5 月正式命名為白細(xì)胞介月正式命名為白細(xì)胞介素素-2。醫(yī)學(xué)上已經(jīng)用于預(yù)防和治療一些常規(guī)方法難以治療的疾病如癌癥、艾滋。醫(yī)學(xué)上已經(jīng)用于預(yù)防和治療一些常規(guī)方法難以治療的疾病如癌癥、艾滋病等。對于家禽類，病等。對于家禽類，IL-2 主要作為免疫佐劑配合疫苗使用，以提高疫苗的免疫主要作為免疫佐劑配合疫苗使用，以提高疫苗的免疫效果，降低副反應(yīng)，同時還具有免疫增強(qiáng)、免疫治療等功能。由于效果，降低副反應(yīng)，同時還具有免疫增強(qiáng)、免疫治療等功能。由于IL-2 是天然是天然的細(xì)胞因子，不會造成體內(nèi)的殘留問題，對動物產(chǎn)品安全生產(chǎn)等方面具有廣闊的細(xì)胞因子，不會造成體內(nèi)的殘留問題，對動物產(chǎn)品安全生產(chǎn)等方面

6、具有廣闊的應(yīng)用前景。的應(yīng)用前景。人類人類IL-2 基因于基因于1983 年被成功克隆后年被成功克隆后,30 多個物種的多個物種的IL-2 基因被相繼發(fā)基因被相繼發(fā)現(xiàn)現(xiàn),雞雞IL-2 直到直到1997 年才被年才被Sundick R S 等克隆出來。雞等克隆出來。雞IL-2 是雞的白介素中是雞的白介素中研究最為深入的。研究最為深入的。LillehojJ W 等發(fā)現(xiàn)雞等發(fā)現(xiàn)雞IL-2 真核表達(dá)質(zhì)粒可增強(qiáng)艾美耳球蟲真核表達(dá)質(zhì)粒可增強(qiáng)艾美耳球蟲基因免疫的效果基因免疫的效果,抑制球蟲的復(fù)制。姜永厚等將含雞抑制球蟲的復(fù)制。姜永厚等將含雞IL-2 基因的真核表達(dá)質(zhì)?；虻恼婧吮磉_(dá)質(zhì)粒作為佐劑與作為佐劑與ND

7、F基因疫苗混合免疫接種雛雞基因疫苗混合免疫接種雛雞,用標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒攻擊用標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒攻擊,結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),添加添加IL-2 質(zhì)粒試驗(yàn)組免疫保護(hù)率明顯高于單獨(dú)接種質(zhì)粒試驗(yàn)組免疫保護(hù)率明顯高于單獨(dú)接種NDF 基因疫苗試驗(yàn)組?；蛞呙缭囼?yàn)組。Lowent hal J W 等研究發(fā)現(xiàn)雛雞注射雞等研究發(fā)現(xiàn)雛雞注射雞IL-2 等細(xì)胞因子能增加等細(xì)胞因子能增加Ig A 抗體抗體的分泌水平和對疾病的抵抗力。于鏈等研究了的分泌水平和對疾病的抵抗力。于鏈等研究了IL-2 質(zhì)粒對傳染性法氏囊病病質(zhì)粒對傳染性法氏囊病病毒的免疫增強(qiáng)作用。毒的免疫增強(qiáng)作用。第二部分第二部分Sundick等（等（1997）用）用ConA刺激雞脾

8、淋巴細(xì)胞構(gòu)建了一個刺激雞脾淋巴細(xì)胞構(gòu)建了一個cDNA 文庫，文庫，轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，通過瞬時表達(dá)，首次克隆出了雞的細(xì)胞，通過瞬時表達(dá)，首次克隆出了雞的IL-2基因。所克隆的雞基因。所克隆的雞IL-2 mRNA 全長全長747 bp，結(jié)構(gòu)基因長，結(jié)構(gòu)基因長343 bp，根據(jù)氨基酸序列所推測的蛋，根據(jù)氨基酸序列所推測的蛋白質(zhì)長白質(zhì)長143個氨基酸。通過序列分析，該基因個氨基酸。通過序列分析，該基因mRNA具有短的具有短的端非翻譯區(qū)端非翻譯區(qū)（），且該（），且該mRNA 僅在激活的細(xì)胞中表達(dá)。根據(jù)核苷酸序列所推導(dǎo)僅在激活的細(xì)胞中表達(dá)。根據(jù)核苷酸序列所推導(dǎo)的蛋白質(zhì)含有一個短的信號序列，長的蛋白質(zhì)

9、含有一個短的信號序列，長22個氨基酸，該基因所編碼的蛋白質(zhì)含個氨基酸，該基因所編碼的蛋白質(zhì)含有個保守的半胱氨酸，可形成個鏈內(nèi)二硫鍵，而哺乳動物只含有個半有個保守的半胱氨酸，可形成個鏈內(nèi)二硫鍵，而哺乳動物只含有個半胱氨酸，形成個鏈內(nèi)二硫鍵。胱氨酸，形成個鏈內(nèi)二硫鍵。研究還發(fā)現(xiàn)，該基因靠近開放閱讀框架的研究還發(fā)現(xiàn)，該基因靠近開放閱讀框架的端有重復(fù)的端有重復(fù)的 序列。序列。 等（）采用技術(shù)獲得了雞等（）采用技術(shù)獲得了雞IL-2基因全序列，基因全序列，對其基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該基因外含子和內(nèi)含子結(jié)構(gòu)與哺乳動物的極為對其基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該基因外含子和內(nèi)含子結(jié)構(gòu)與哺乳動物的極為相似，但前者的外

10、含子及內(nèi)含子和更短一些。在該基因外含子的相似，但前者的外含子及內(nèi)含子和更短一些。在該基因外含子的端端未翻譯區(qū)有個重復(fù)的未翻譯區(qū)有個重復(fù)的“不穩(wěn)定不穩(wěn)定”的重復(fù)序列。該基因是一個既無的重復(fù)序列。該基因是一個既無結(jié)構(gòu)（氨基酸）又無啟動子序列多態(tài)性的單拷貝基因，在該基因的啟動子上發(fā)結(jié)構(gòu)（氨基酸）又無啟動子序列多態(tài)性的單拷貝基因，在該基因的啟動子上發(fā)現(xiàn)有許多潛在的調(diào)節(jié)序列，序列比較還表明該基因上存在其他潛在的轉(zhuǎn)錄因子現(xiàn)有許多潛在的調(diào)節(jié)序列，序列比較還表明該基因上存在其他潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，這在哺乳動物結(jié)合位點(diǎn)，這在哺乳動物IL-2啟動子上至今未見報道，并在研究雞啟動子上至今未見報道，并在研究雞IL

11、-2基因結(jié)基因結(jié)構(gòu)的過程中，意外地發(fā)現(xiàn)了個多態(tài)現(xiàn)象，這可將該基因定位于雞第構(gòu)的過程中，意外地發(fā)現(xiàn)了個多態(tài)現(xiàn)象，這可將該基因定位于雞第號染色體上與相連，根據(jù)核苷酸序列所推導(dǎo)的氨基酸序列分析表明，號染色體上與相連，根據(jù)核苷酸序列所推導(dǎo)的氨基酸序列分析表明，該蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是保守的，但是其受體結(jié)合位點(diǎn)并不保守該蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是保守的，但是其受體結(jié)合位點(diǎn)并不保守.李祥瑞（李祥瑞（1995）利用雞脾臟細(xì)胞，體外誘生利用雞脾臟細(xì)胞，體外誘生IL-2，提取誘導(dǎo)過的，提取誘導(dǎo)過的脾單核細(xì)胞總，反轉(zhuǎn)錄合成，將核酸片段與質(zhì)粒載體連接，脾單核細(xì)胞總，反轉(zhuǎn)錄合成，將核酸片段與質(zhì)粒載體連接，質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌，建立質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌，

12、建立 文庫。經(jīng)過兩輪篩選，成功克隆文庫。經(jīng)過兩輪篩選，成功克隆了雞了雞IL-2，經(jīng)序列分析表明，雞，經(jīng)序列分析表明，雞IL-2與人和其他哺乳動物與人和其他哺乳動物IL-2同源性同源性在左右。在左右。李建榮等（李建榮等（2001）則是采用刺激體外培養(yǎng)的雞淋巴細(xì)胞，應(yīng)用則是采用刺激體外培養(yǎng)的雞淋巴細(xì)胞，應(yīng)用方法得到地方品種蕭山雞方法得到地方品種蕭山雞IL-2，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，其全長為，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，其全長為737，編碼，編碼143個氨基酸，其與火雞個氨基酸，其與火雞IL-2有有69.4的同源性，與哺乳動物的的同源性，與哺乳動物的IL-2有有21.229.4的同源性。所編碼的蛋白質(zhì)預(yù)計包括的同源性。所編碼

13、的蛋白質(zhì)預(yù)計包括22個氨基酸的前導(dǎo)個氨基酸的前導(dǎo)序列和形成兩個鏈內(nèi)二硫鍵的個半胱氨酸。序列和形成兩個鏈內(nèi)二硫鍵的個半胱氨酸。陳吉剛等（陳吉剛等（2003）克隆了地方品種絲羽烏骨雞克隆了地方品種絲羽烏骨雞IL-2，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，絲羽烏骨雞絲羽烏骨雞IL-2基因由基因由734堿基組成，編碼一由堿基組成，編碼一由143個氨基酸組成的前體蛋白。個氨基酸組成的前體蛋白?；蚧蚨撕袀€核苷酸和端含有個核苷酸和端含有個核苷酸組成的非編碼區(qū)，端含有個核苷酸組成的非編碼區(qū)， 中含有個重復(fù)的中含有個重復(fù)的“”序列。序列。張春杰張春杰等利用雞新城疫等利用雞新城疫系疫苗接種雞胚，直接從雞胚脾淋巴細(xì)胞中分離

14、系疫苗接種雞胚，直接從雞胚脾淋巴細(xì)胞中分離 進(jìn)行擴(kuò)增得到了洛陽土種雞進(jìn)行擴(kuò)增得到了洛陽土種雞IL-2。序列分析表明，洛陽。序列分析表明，洛陽土種雞與中公布的雞土種雞與中公布的雞IL-2基因基因 序列有個氨基酸的序列有個氨基酸的差異，尤其是、和個位點(diǎn)的氨基酸變異是其差異，尤其是、和個位點(diǎn)的氨基酸變異是其他品系雞沒有出現(xiàn)過的。他品系雞沒有出現(xiàn)過的。第三部分第三部分1 免疫治療劑免疫治療劑雞雞IL-2 作為免疫治療劑應(yīng)用于作為免疫治療劑應(yīng)用于禽細(xì)菌性傳染病禽細(xì)菌性傳染病和一些和一些寄生蟲病寄生蟲病的的報道不斷出現(xiàn)。報道不斷出現(xiàn)。Tellez 等使用由雞等使用由雞ConA 活化活化T 細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)

15、胞因子，可以使雞細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子，可以使雞腸炎沙門氏菌器官侵入率降低腸炎沙門氏菌器官侵入率降低51%60%，此種細(xì)胞因子注入雞胚，同樣可以顯著，此種細(xì)胞因子注入雞胚，同樣可以顯著降低孵化期雞胚降低孵化期雞胚沙門氏菌沙門氏菌器官侵入率。在寄生蟲方面，器官侵入率。在寄生蟲方面，Lillehoj等，在等，在Eimeria tenella（柔嫩艾美球蟲（柔嫩艾美球蟲)感染雞的前感染雞的前1 d 或感染后的第或感染后的第1 天，用天，用ConA 活化雞淋巴細(xì)胞活化雞淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子處理雞，謝昆等對產(chǎn)生的細(xì)胞因子處理雞，謝昆等對ChIL-2 的的抗球蟲抗球蟲作用做了初步研究，分別在作用做了初步

16、研究，分別在14 日齡和日齡和21 日齡給試可以明顯降低球蟲感染雞卵囊的排出量。驗(yàn)雛雞胸部肌肉注射不日齡給試可以明顯降低球蟲感染雞卵囊的排出量。驗(yàn)雛雞胸部肌肉注射不同劑量的重組同劑量的重組ChIL-2 蛋白，蛋白，28 d 齡口服接種齡口服接種1105 個活球蟲卵囊，結(jié)果表明，重個活球蟲卵囊，結(jié)果表明，重組組ChIL-2 蛋白能降低相對卵囊產(chǎn)量、減少盲腸病變、提高相對增重。蛋白能降低相對卵囊產(chǎn)量、減少盲腸病變、提高相對增重。Lowenthal 等等研究發(fā)現(xiàn)，剛孵化出的小雞的研究發(fā)現(xiàn)，剛孵化出的小雞的T 淋巴細(xì)胞未發(fā)育成熟，在抗原的刺激下不能分化增淋巴細(xì)胞未發(fā)育成熟，在抗原的刺激下不能分化增殖和

17、分泌殖和分泌IL-2，因此在小雞，因此在小雞2 周齡注射周齡注射IL-2 可以提供一定的保護(hù)力。作為免疫治療可以提供一定的保護(hù)力。作為免疫治療劑，劑，IL-2 還可以克服免疫抑制以及預(yù)防某些疾病感染，合理使用還可以克服免疫抑制以及預(yù)防某些疾病感染，合理使用IL-2 還可以克服飼還可以克服飼料中的霉菌毒素等原因引起的免疫抑制。料中的霉菌毒素等原因引起的免疫抑制。2 免疫增強(qiáng)劑免疫增強(qiáng)劑將將I L-2 與免疫源性弱的亞單位疫苗聯(lián)合使用與免疫源性弱的亞單位疫苗聯(lián)合使用, 可提高機(jī)體保護(hù)性免疫反應(yīng)的水可提高機(jī)體保護(hù)性免疫反應(yīng)的水平。持續(xù)低劑量注射平。持續(xù)低劑量注射I L-2 , 有介導(dǎo)有介導(dǎo)T 細(xì)胞的

18、作用細(xì)胞的作用, 促進(jìn)促進(jìn)T 細(xì)胞分裂、增殖。可增加細(xì)胞分裂、增殖?？稍黾油庵苎褐型庵苎褐蠧D4 T 細(xì)胞數(shù)量細(xì)胞數(shù)量, 提高機(jī)體對抗原性的免疫應(yīng)答能力。國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行提高機(jī)體對抗原性的免疫應(yīng)答能力。國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了許多此方面的研究。了許多此方面的研究。Neil 等等(2000)采用采用IL-2 與培養(yǎng)物過濾蛋白聯(lián)合使用對牛的結(jié)與培養(yǎng)物過濾蛋白聯(lián)合使用對牛的結(jié)核病進(jìn)行免疫試驗(yàn)核病進(jìn)行免疫試驗(yàn), 結(jié)果顯示結(jié)果顯示, IL-2 能作為一種佐劑提高亞單位苗的細(xì)胞免疫。并能作為一種佐劑提高亞單位苗的細(xì)胞免疫。并且且, CFP-IL-2苗能減少肺部的損傷苗能減少肺部的損傷, 相比之下相比之下, BC

19、G 疫苗就有較多的肺部壞死疫苗就有較多的肺部壞死(Weinberg 等等, 1988)。Numberg 等等(1989)報道報道, 以以IL-2 和狂犬病滅活苗一起使用和狂犬病滅活苗一起使用, 攻攻毒后毒后, 疫苗對試驗(yàn)鼠的保護(hù)作用最少提高疫苗對試驗(yàn)鼠的保護(hù)作用最少提高25 倍倍, 表明表明IL-2 具有明顯的佐劑效應(yīng)具有明顯的佐劑效應(yīng)(adjuvantici ty)。家禽類家禽類IL-2 作為免疫增強(qiáng)劑已被許多學(xué)者所證實(shí)。作為免疫增強(qiáng)劑已被許多學(xué)者所證實(shí)。杜明華杜明華利用畢赤酵母表達(dá)利用畢赤酵母表達(dá)了重組了重組ChIL-2，將純化的，將純化的ChIL-2 與疫苗聯(lián)合免疫雞群，研究其作為免疫增

20、強(qiáng)劑對與疫苗聯(lián)合免疫雞群，研究其作為免疫增強(qiáng)劑對禽流感病毒疫苗和新城疫病毒疫苗的免疫增強(qiáng)效果。實(shí)驗(yàn)表明，禽流感病毒疫苗和新城疫病毒疫苗的免疫增強(qiáng)效果。實(shí)驗(yàn)表明，ChIL-2 與禽流感與禽流感或新城疫疫苗聯(lián)合免疫均具有良好的免疫增強(qiáng)作用，能有效提高雞體抗體滴度，或新城疫疫苗聯(lián)合免疫均具有良好的免疫增強(qiáng)作用，能有效提高雞體抗體滴度，提高存活率，其使用劑量約提高存活率，其使用劑量約8. 35 g 只。只。王彥彬王彥彬等也研究了重組雞等也研究了重組雞IL-2 對新城對新城疫滅活疫苗的免疫增強(qiáng)效果，發(fā)現(xiàn)將重組疫滅活疫苗的免疫增強(qiáng)效果，發(fā)現(xiàn)將重組IL-2和雞新城疫滅活苗聯(lián)合免疫和雞新城疫滅活苗聯(lián)合免疫8

21、日齡固日齡固始雞，能增強(qiáng)新城疫疫苗的免疫效果，提高血清中抗體的水平。此外，始雞，能增強(qiáng)新城疫疫苗的免疫效果，提高血清中抗體的水平。此外，Tarpey 等等在雞胚胎接種低劑量傳染性法氏囊病和傳染性支氣管炎病毒疫苗時加入了重組火在雞胚胎接種低劑量傳染性法氏囊病和傳染性支氣管炎病毒疫苗時加入了重組火雞皰疹病毒表達(dá)的雞雞皰疹病毒表達(dá)的雞IL-2，結(jié)果顯示，抗體對病毒的抑制作用明顯增強(qiáng)，并且抵，結(jié)果顯示，抗體對病毒的抑制作用明顯增強(qiáng)，并且抵抗病毒的自我保護(hù)作用明顯增加。表明，抗病毒的自我保護(hù)作用明顯增加。表明，IL-2 和低劑量疫苗聯(lián)合免疫是增強(qiáng)卵內(nèi)和低劑量疫苗聯(lián)合免疫是增強(qiáng)卵內(nèi)接種疫苗效果的有效、安全

22、的方法。以上試驗(yàn)研究均表明了接種疫苗效果的有效、安全的方法。以上試驗(yàn)研究均表明了IL-2 可以作為一種安可以作為一種安全高效的免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于禽類養(yǎng)殖業(yè)中。全高效的免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于禽類養(yǎng)殖業(yè)中。3構(gòu)建新型基因工程疫苗構(gòu)建新型基因工程疫苗早在早在DNA 疫苗產(chǎn)生以前就有人把細(xì)胞因子作為佐劑與疫苗聯(lián)用疫苗產(chǎn)生以前就有人把細(xì)胞因子作為佐劑與疫苗聯(lián)用, 但由于細(xì)胞但由于細(xì)胞因子在體內(nèi)半衰期太短且造價昂貴因子在體內(nèi)半衰期太短且造價昂貴, 未能在傳統(tǒng)疫苗中廣泛應(yīng)用。受未能在傳統(tǒng)疫苗中廣泛應(yīng)用。受DNA 疫苗以疫苗以質(zhì)粒作為抗原載體的啟發(fā)質(zhì)粒作為抗原載體的啟發(fā), 以重組質(zhì)粒表達(dá)的細(xì)胞因子克服了原有的弱點(diǎn)以重

23、組質(zhì)粒表達(dá)的細(xì)胞因子克服了原有的弱點(diǎn), 而得以而得以在在DNA 疫苗這個領(lǐng)域中得到更多的重視和研究疫苗這個領(lǐng)域中得到更多的重視和研究, 其中其中, 以對以對I L-2 的研究最為活躍。的研究最為活躍。姜永厚等首次克隆得到的雞姜永厚等首次克隆得到的雞IL-2 與新城疫弱毒與新城疫弱毒D26 株株F 基因基因, 經(jīng)載體構(gòu)建經(jīng)載體構(gòu)建, 將兩者將兩者以非融合蛋白形式共同克隆于真核表達(dá)質(zhì)粒以非融合蛋白形式共同克隆于真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA 上上, 成功構(gòu)建了表達(dá)雞成功構(gòu)建了表達(dá)雞I L-2 與與新城疫新城疫F 蛋白的重組質(zhì)粒蛋白的重組質(zhì)粒(pcDNA-F-IL-2), 用此重組質(zhì)粒免疫雞用此重組質(zhì)粒免疫

24、雞, 試驗(yàn)結(jié)果表明其試驗(yàn)結(jié)果表明其表達(dá)表達(dá)IL-2 可提高新城疫可提高新城疫DNA 疫苗的效力。疫苗的效力。Hazama 等將等將IL-2 基因與牛單純性皰疹基因與牛單純性皰疹病毒糖蛋白病毒糖蛋白D 基因融合基因融合, 真核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)融合蛋白真核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)融合蛋白, 免疫小鼠后攻毒。結(jié)果該融合免疫小鼠后攻毒。結(jié)果該融合蛋白可完全保護(hù)小鼠免受病毒攻擊蛋白可完全保護(hù)小鼠免受病毒攻擊, 而以氫氧化鋁為佐劑但不含而以氫氧化鋁為佐劑但不含IL-2 的重組糖蛋白的重組糖蛋白只產(chǎn)生部分保護(hù)只產(chǎn)生部分保護(hù), I L-2 在體內(nèi)的半衰期也因此延長大約在體內(nèi)的半衰期也因此延長大約4 倍。表明采用此種方式獲倍。表明

25、采用此種方式獲得得I L-2 抗原重組蛋白抗原重組蛋白, 是研制新一代基因工程苗的另一途徑。是研制新一代基因工程苗的另一途徑?；蚬こ桃呙绯０鸭?xì)胞因子基因與保護(hù)性抗原基因連接在一起，構(gòu)成融合蛋基因工程疫苗常把細(xì)胞因子基因與保護(hù)性抗原基因連接在一起，構(gòu)成融合蛋白來增強(qiáng)疫苗的體液和細(xì)胞免疫水平。而禽類白來增強(qiáng)疫苗的體液和細(xì)胞免疫水平。而禽類IL-2 基因可以作為一個良好的細(xì)胞基因可以作為一個良好的細(xì)胞因子基因與保護(hù)抗原的基因連接在一起。前面提到了一些因子基因與保護(hù)抗原的基因連接在一起。前面提到了一些IL-2 和和IBDV 的疫苗聯(lián)的疫苗聯(lián)合使用能提高合使用能提高IBDV 疫苗的免疫原性的研究情況，

26、而疫苗的免疫原性的研究情況，而Wang 等通過基因工程技術(shù)將等通過基因工程技術(shù)將IBDV 病毒的病毒的VP2 基因和雞基因和雞IL-2 基因構(gòu)建重組融合蛋白基因構(gòu)建重組融合蛋白rVP2-IL-2，實(shí)驗(yàn)證實(shí)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)，rVP2-IL-2 融合蛋白也能通過體液及細(xì)胞免疫來增強(qiáng)雞體抵抗融合蛋白也能通過體液及細(xì)胞免疫來增強(qiáng)雞體抵抗IBDV 病毒的能力。病毒的能力。Liu 等也做了相關(guān)的研究，通過構(gòu)建等也做了相關(guān)的研究，通過構(gòu)建pBacPakVP2-IL-2 質(zhì)粒獲得了融合蛋白質(zhì)粒獲得了融合蛋白VP2-IL-2。Shah 等將堆形艾美球蟲的等將堆形艾美球蟲的cSZ-2 基因和基因和chIL-2基因以及基

27、因以及chIFN- 基因分別導(dǎo)基因分別導(dǎo)入真核表達(dá)載體入真核表達(dá)載體pVAX1中，構(gòu)建了中，構(gòu)建了pVAX1-cSZ2-chIL-2、pVAX1-cSZ2-chIFN-、pVAX1-cSZ2、pVAX1-chIL-2 以及以及pVAX1-chIFN-重組基因工程疫苗，并發(fā)現(xiàn)重組基因工程疫苗，并發(fā)現(xiàn)pVAX1-cSZ2-chIL-2 重組基因工程疫苗能使雞體有較其他重組基因工程疫苗能使雞體有較其他4 個基因工程疫苗更強(qiáng)個基因工程疫苗更強(qiáng)的免疫球蟲病的能力，并能降低免疫應(yīng)答過程中產(chǎn)生的對雞腸組織損傷的程度。的免疫球蟲病的能力，并能降低免疫應(yīng)答過程中產(chǎn)生的對雞腸組織損傷的程度。Song 等優(yōu)化了等優(yōu)

28、化了DNA 疫苗疫苗pcDNA-TA4-IL-2 的劑量及給藥途徑，采用肌肉注射的劑量及給藥途徑，采用肌肉注射25 ug 只時具有最好的免疫效果。閆若潛等研究了雞基因工程重組復(fù)合抗病毒制只時具有最好的免疫效果。閆若潛等研究了雞基因工程重組復(fù)合抗病毒制劑對雞病毒性疾病的作用，構(gòu)建了劑對雞病毒性疾病的作用，構(gòu)建了ChIFN-linker-ChIL-2 嵌合基因，其在大腸嵌合基因，其在大腸桿菌中表達(dá)的蛋白相對分子質(zhì)量大小約桿菌中表達(dá)的蛋白相對分子質(zhì)量大小約35900，測定發(fā)現(xiàn)該重組蛋白在雞胚成纖，測定發(fā)現(xiàn)該重組蛋白在雞胚成纖維細(xì)胞中具有明顯抗病毒活性。免疫增強(qiáng)劑維細(xì)胞中具有明顯抗病毒活性。免疫增強(qiáng)劑

29、第四部分第四部分1 雞雞IL-2基因的發(fā)現(xiàn)及克隆基因的發(fā)現(xiàn)及克隆1975年年Morgan等用等用PHA刺激正常淋巴細(xì)胞刺激正常淋巴細(xì)胞,收集的細(xì)胞上清加入普通培養(yǎng)基用收集的細(xì)胞上清加入普通培養(yǎng)基用以培養(yǎng)正常骨髓細(xì)胞以培養(yǎng)正常骨髓細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)這種培養(yǎng)基中含有一種具有維持骨髓發(fā)現(xiàn)這種培養(yǎng)基中含有一種具有維持骨髓T淋巴細(xì)胞在體外長淋巴細(xì)胞在體外長期生長的物質(zhì)期生長的物質(zhì),并把它命名為并把它命名為T細(xì)胞生長因子細(xì)胞生長因子(TcGF)。1979年年,瑞士國際淋巴因子會議瑞士國際淋巴因子會議統(tǒng)一把它命名為白細(xì)胞介素統(tǒng)一把它命名為白細(xì)胞介素-2(IL-2)。雖然眾多實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示。雖然眾多實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示IL-2

30、可以對多種細(xì)胞發(fā)可以對多種細(xì)胞發(fā)揮顯著的免疫作用揮顯著的免疫作用,但是這種條件培養(yǎng)基中包含有其他的細(xì)胞因子但是這種條件培養(yǎng)基中包含有其他的細(xì)胞因子,這就需要從這種這就需要從這種培養(yǎng)基中分離出到單一的培養(yǎng)基中分離出到單一的IL-2蛋白。為此研究人員嘗試了多種純化方法獲得了純度蛋白。為此研究人員嘗試了多種純化方法獲得了純度不一的天然不一的天然IL-2蛋白。但這些純化步驟只是相對的地提高了蛋白。但這些純化步驟只是相對的地提高了IL-2的純度的純度,并沒有完全并沒有完全解決實(shí)驗(yàn)中其他因子污染的問題解決實(shí)驗(yàn)中其他因子污染的問題,而且純化過程中外界因素也不可避免地對而且純化過程中外界因素也不可避免地對IL

31、-2產(chǎn)生產(chǎn)生了影響。直到在了影響。直到在1983年年,日本人日本研究者口日本人日本研究者口taniguchi和比利時研究者和比利時研究者Devos在體外在體外克隆和表達(dá)了人克隆和表達(dá)了人IL-2基因基因,這才使獲得單一這才使獲得單一IL-2蛋白成為可能。蛋白成為可能。隨后隨后,研究人員分別克隆了鼠、牛和豬的研究人員分別克隆了鼠、牛和豬的IL一一2基因。與人和哺乳動物相比基因。與人和哺乳動物相比,禽禽IL-2的研究相對滯后。直到的研究相對滯后。直到1997年年,Sundick等用構(gòu)建等用構(gòu)建cDNA文庫的方法文庫的方法,才將雞才將雞IL-2基因克隆成功。迄今基因克隆成功。迄今,己有多種禽己有多種禽IL-2cDNA被成功克隆。被成功克隆。IL-2根據(jù)來源不同可以分為根據(jù)來源不同可以分為內(nèi)源性內(nèi)源性IL-2和和重組表達(dá)重組表達(dá)IL-2。前者生要。前者生要來自新鮮的組織細(xì)胞來自新鮮的組織細(xì)胞,包括外周血淋巴細(xì)胞脾淋巴細(xì)胞和扁桃體淋巴細(xì)包括外周血淋巴細(xì)胞脾淋巴細(xì)胞和扁桃體淋巴細(xì)胞胞,這些細(xì)胞誘導(dǎo)后均可產(chǎn)生這些細(xì)胞誘導(dǎo)后均可產(chǎn)生IL-2。迄今。迄今,人和鼠都建立了多個可以分泌人和鼠都建立了多個可以分泌IL-2的細(xì)胞系