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文檔簡介

1、1 什么是質粒1.1 定義和命名質粒是染色體以外能自主復制的遺傳因子，不具有胞外期，對寄主細胞來說是非必需的，符合這三條標準的染色體外DNA或RNA分子都可以稱為質粒。狹義的質粒一般是指細菌染色體外的環(huán)狀DNA分子。質粒的命名：一個小寫字母 p 加 2-3 個大寫字母和數字，如 pJP4，pDTG1。2 質粒的復制、分配和不相容性2.1 復制 (Replication) 質粒的復制起始和拷貝數是由質粒DNA序列控制的。質粒分子中為質粒復制所必需的最小區(qū)段稱為基本復制子，它由兩部分組成，一是復制原點(ori)，二是調節(jié)復制起始的基因（編碼蛋白質或RNA)。圖圖2-10 阿特拉津氯水解酶基因阿特拉

2、津氯水解酶基因atzA的定位的定位7 質粒測序和基因注釋(annotation) 質粒測序：用鳥槍克隆法，將純化的質粒用超聲波打碎，用瓊脂糖凝膠電泳分離 1-kb片段，補平片段末端，與平末端pUC18連接，電轉化 E. coli DH5，篩選有插入片段的轉化子，測定克隆片段的序列，根據測序結果拼接質粒序列，空缺部分用PCR方法補齊并測序。 質?；蜃⑨專合騁enBank注冊質粒序列，報告每個編碼序列（CDS，或稱ORF）的基因名稱、位置、功能和翻譯產物。圖圖2-21 瞬時表達載體瞬時表達載體pMSG圖圖2-22 制備等基因表達的制備等基因表達的 Flp-InTM 寄主細胞系寄主細胞系 (invitrogen 公司公司) 圖圖2-23 制備制備 Flp-

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