緒論臨床免疫學和病原學檢查

1、實驗診斷學概論 福建醫(yī)科大學附屬協(xié) 和醫(yī)院 實驗診斷學的概念 以臨床檢驗學為基礎，將檢驗學提供的結果或數(shù)據(jù)， 由醫(yī)師結合臨床病史/家族史、癥狀/體征、影像資料/ 病例檢查等，應用于臨床診斷、鑒別診斷、療效觀察 和預后判斷；也可以為科學研究、預防疾病、健康普 查和遺傳咨詢等提供實驗依據(jù)。 基礎醫(yī)學向臨床醫(yī)學過度的橋梁課程 實驗診斷學的應用范圍和局限性 應用范圍：隨著醫(yī)學模式由疾病診治單一模式向多方 向轉化而逐漸拓寬和不斷充實 1.為臨床醫(yī)學服務： （1）確定診斷：白血病的血細胞和骨髓象檢查 病毒的核酸和某些抗體的檢查 寄生蟲查到蟲卵/成蟲 （2）鑒別診斷：細菌和病毒感染的鑒別等 （3）輔助診斷：

2、肝、腎、內分泌功能的檢查 （4）療效觀察、預后判斷和復發(fā)監(jiān)測等 實驗診斷學的應用范圍和局限性 應用范圍： 2. 為預防醫(yī)學服務：通過流行病學調查、及時發(fā)現(xiàn)傳 染源，制定預防和控制措施 3. 為健康普查服務：早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療 4. 為遺傳咨詢服務：優(yōu)生優(yōu)育、杜絕遺傳性疾病 實驗診斷的影響因素 實驗診斷學的影響因素 1. 實驗（分析）前的影響因素（75%以上） 生理因素：人種、民族、性別、年齡等 生活狀態(tài)：運動、體位、進食等 環(huán)境因素：居住條件、地區(qū)和海拔高度等 標本的采集、保存和運送 藥物的影響 2. 實驗（分析）中的影響因素 3. 實驗（分析）后的影響因素 實驗診斷學的質量管理 室

3、內質量控制： 控制精密度， 由實驗室自己實施 針對實驗室內部影響質量的所有環(huán)節(jié) 室間質量評估 控制準確性、可比性，由權威機構組織 全面質量控制 就建立全面的質量管理體系 參加實驗室認可：15189，CAP 分析前的質量管理 患者的準備 標本的控制 標本因素對檢驗質量的影響 標本的類別 1. 血標本：全血、血漿和血清等。 全血：臨床血液學檢查 血漿：血栓和止血檢查 血清：生化和免疫檢查 靜脈血、動脈血和毛細血管血，分別適合不同的檢測 真空采血管 標本因素對檢驗質量的影響 標本的類別 2. 尿液標本：尿液檢驗的檢查結果是否準確與標本正 確收集直接相關 隨機尿：門急診患者的常規(guī)檢驗 首次晨尿：濃縮尿

4、，細胞和管型等形態(tài)完整，適合有形成分的檢測 24小時尿：定量分析 中段尿：培養(yǎng)用的尿液 3. 糞便：應新鮮、干凈的容器以免污染，常規(guī)510g， 寄生蟲留取全部或24小時糞便，培養(yǎng)應留取可疑陽性 部分 標本因素對檢驗質量的影響 標本的類別 4. 腦脊液：收集三份于無菌小瓶中，每瓶12ml 第一瓶常混有血液：培養(yǎng) 第二瓶做化學檢查 第三瓶做細胞檢查 5. 漿膜腔液：胸腔、腹腔、心包腔和關節(jié)腔等 6. 羊水：不同的檢查目的采取不同的穿刺時間和量 診斷胎兒性別和遺傳?。?620周，2030ml 了解胎兒成熟度：晚期妊娠，1020ml 標本因素對檢驗質量的影響 標本的類別 7. 前列腺和精液： 8. 痰

5、液和支氣管灌洗液 9. 其他：胃及十二指腸液等 標本因素對檢驗質量的影響 標本的采集 1. 患者的準備及患者身份識別： 飲食狀態(tài)，精神狀態(tài)，運動狀態(tài)等 條形碼，身份證等 2. 采集時間 清晨空腹標本：受各種因素影響小，減少晝夜節(jié)律影響，重復性好 隨機或急診標本：無法限定時間；體內代謝比較穩(wěn)定、影響因素少 指定時間標本：糖耐量、培養(yǎng)等 標本因素對檢驗質量的影響 標本的采集 3. 采血的體位：當人體從臥位到直立或者坐位時會導 致液體從血管內向組織間隙擴散約12%，許多指標影 響較大 4. 止血帶的使用 標本因素對檢驗質量的影響 標本的采集 5. 正確使用添加劑 6. 采集標本的順序：通常血常規(guī)的管

6、子是最后采集的 排除EDTAK2對生化檢查的污染 7. 充分混勻 8. 避免溶血 標本因素對檢驗質量的影響 標本的運送 盡早送檢，特殊樣本還需冰浴， 不能及時檢測應妥善 保存 標本的保存 不同的檢測項目采用不同的保存條件 大多項目在4 可可保存三天，20 可保存1個月， 80 或液氮可保存3個月以上，甚至長期保存 標本的及時分離和檢測 分析中的質量控制 方法的選擇 標準操作規(guī)程的的制定和執(zhí)行 室內質控 室間質評 分析后的質量控制 分析后的質量管理是檢驗全面質量管理的最終環(huán)節(jié)， 是檢驗結果轉化為臨床診療信息的過程 數(shù)據(jù)的處理：制式的改變，圖形的處理等 檢驗結果的審核：復查、危急值的處理等 報告單

7、的發(fā)放：應注意疫情、患者的隱私 臨床咨詢、報告解釋和抱怨處理等，持續(xù)改進的輸入 實驗診斷的臨床應用和評價 正確選擇實驗室檢查項目 1. 滿足臨床診斷、治療和預防的需求（篩選、診斷、鑒 別診斷、特異性、敏感性） 2. 符合詢證醫(yī)學和實驗項目優(yōu)化組合的要求 3. 減輕患者的負擔和痛苦 4. 必須在詳細詢問病史、全面的體格檢查的基礎上 實驗診斷的臨床應用和評價 診斷性實驗的評價指標（如定性和細菌培養(yǎng)等） 金標準 疾病 非疾病 a（真陽性） b（假陽性） a+b 診斷性實驗 c（假陰性） d（真陰性） c+d 總數(shù) a+c=n1 b+d=n2 n 1. 敏感度或者真陽性率：金標準診斷為有病的人中，診斷

8、性試驗陽性者的比例：a/(a+c) 2.特異度或者真陰性率：金標準診斷為無病的人中，診斷性試驗陰性者的比例：d/(b+d) 3. 陽性預測值：診斷性試驗陽性者中有病者所占的比例，即患者診斷性試驗陽性，其患病 的可能性。a/(a+b) 4. 陰性預測值：診斷性試驗陰性者中，無病者所占的比例，即診斷性試驗為陰性時，不患 病的可能性。d/(d+c) 實驗診斷的臨床應用和評價 常用診斷性實驗的評價指標 1. 診斷靈敏度 指某檢驗項目對某種疾病具有鑒別、確認的能力， 為所有病人中獲得真陽性結果的百分數(shù)。 2. 診斷特異性 指某檢驗項目確認無某種疾病的能力，為非病人中 獲得真陰性結果的百分數(shù) 實驗診斷的臨

9、床應用和評價 常用診斷性實驗的評價指標 3. 診斷準確度 指某檢驗項目在實際使用中，所有檢驗結果中診斷 準確結果的百分比。 4. 使用檢驗項目臨床性能評價的ROC曲線尋找最佳判 斷限界及其診斷靈敏度和特異性 實驗診斷的臨床應用和評價 ROC曲線的臨床應用 ROC為“信號接受特性圖”（receiving operating charateristics )，是最常用有效的對檢驗項目臨床性能 評價的定量資料進行歸納分析的統(tǒng)計學方法。 1. 病人和非病人的定量數(shù)據(jù)以分布圖形式表示 2. 所有數(shù)據(jù)列表以不同的的限值為判斷限，計算各組數(shù)據(jù)的真陽性率 和假陽性率。 3. 假陽性率為橫坐標、真陽性率為縱坐標

10、，將數(shù)據(jù)點于圖上并連接各 點，繪制ROC曲線。 4. 常用于兩種以上診斷性檢驗的診斷價值比較和尋找界點。 實驗診斷的參考值范圍與醫(yī)學決定水平 參考范圍 參考值：是指在特定條件下（健康人群）抽樣的個體進行某項目檢 測所測得的值 參考范圍：95%抽樣所測值的平均值 （ x ）加減其標準差（s）而構 成，影響因素多，應建立自己的參考值，或進行驗證 醫(yī)學決定水平 指不同于參考值的另一些限值，通過觀察測定值是否高于或者低于這 些限值，可在疾病診斷中起排除或確認的作用 危急值： 是指某些結果出現(xiàn)異常，超過這一界定值可危及患者生 命，醫(yī)生必須 緊急處理（報告） 實驗診斷學的學習重點和方法 以常見病為基礎，以

11、重點器官為中心，重點抓住反映 他們的實驗診斷項目 學習以檢驗項目為中心，深入聯(lián)系理論基礎、廣泛聯(lián) 系臨床疾?。ㄔ?、機制、臨床意義和一些重要的概 念） 臨床免疫學測定 前言 生活水平提高改變生活方式 兩大新興產(chǎn)業(yè)：保健（提高免疫力）和美容 如何評判免疫力：太低感染、腫瘤 太高自身免疫性疾病 最主要的因素：機體的免疫系統(tǒng) 怎樣從實驗室的角度來衡量？ 臨床常用免疫學和病原學檢 查 福建醫(yī)科大學附屬協(xié) 和醫(yī)院 隨著現(xiàn)代免疫學理論和技術的飛速發(fā)展，臨 床免疫學的檢測項目也日趨增多。某些檢測項目可 為臨床診斷、鑒別診斷、療效觀察和預后判斷提供 特異的和敏感的信息，以下就一些常用的免疫學檢 查作一些介紹。

12、 第一節(jié) 體液免疫檢查 一、免疫球蛋白的檢測 （一）概念：免疫球蛋白是指具有抗體活性和/或抗體樣結構的球蛋 白，由漿細胞產(chǎn)生，存在于機體的血液、體液、外分泌液和 某些細胞的膜上。按其重鏈性質分為IgG、A、M、D和E五大 類，在血清中IgG、A、M的含量為g/L水平，而IgD、IgE和血 清以外的IgG、A、M僅為mg/L，因此不同類的免疫球蛋白需 要選擇不同敏感度的方法。 （二）常用的檢測方法 1單向瓊脂擴散法： 2免疫比濁法： 3酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）： （三）免疫球蛋白的分類 IgG: 為人體中含量最多和最主要的免疫球蛋白，占總免 疫球蛋白的7080，屬再次免疫應答抗體；也是唯一

13、 能通過胎盤的Ig，新生兒可被動獲得免疫。 IgA:分為血清型和分泌型。分泌型的IgA（S IgA）由呼 吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴樣組織合成，參與這 些部位的局部免疫。 IgM：初次免疫應答反應中的Ig，最早出現(xiàn)的抗體，也是 分子量最大的Ig。 （三）免疫球蛋白的分類 IgE：是血清中含量最少的一種Ig，與變態(tài)反應、寄生 蟲感染及皮膚過敏等有關。 IgD ：妊娠末期和吸煙者含量升高 6. M蛋白：或稱單克隆免疫球蛋白，是一種單克隆B細 胞增殖產(chǎn)生的具有相同結構和電泳遷移率的免疫球蛋 白分子及其分子片斷，見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白 血癥、重鏈病和輕鏈病等 （三）、檢測的臨床意義 1低Ig血

14、癥 （1）先天性低Ig血癥 見于體液免疫缺陷和聯(lián)合免疫缺陷。如先 天 性無丙種球蛋白血癥，IgG1g/L，A和M僅為正常值的 1%。先天性IgA缺乏癥患者容易反復呼吸道感染、IgG缺乏 易患化膿性感染，而IgM缺乏易引起革蘭氏陰性桿菌敗血癥 （2） 獲得性低Ig血癥 淋巴肉瘤、腎病綜合征、中毒性骨髓瘤等 可造成血清中Ig明顯降低。 2高Ig血癥 （1）非特異性多株峰免疫球蛋白增高癥 慢性細菌感染、結核、 慢性支氣管炎、風濕時IgG升高，急性感染早期可IgM升高， 自身免疫性疾病、膠原病、類風濕、關節(jié)炎、SLE可見IgG、 A、M升高，肝病和肝硬化時可呈現(xiàn)IgG、A升高。 （2）特異性單株峰免疫

15、球蛋白增高癥(巨球蛋白血癥IgM升高） 3IgD 妊娠末期和吸煙者含量升高。IgD骨髓瘤 患者血清IgD水平比正常人高10000倍，是唯 一明確可作為確診的證據(jù)。 4血清總IgE 對特異性疾病的診斷、治療和探 索發(fā)病機制有重要意義。寄生蟲感染時IgE升 高。特異性哮喘、過敏性鼻炎等患者血清中 IgE含量升高與發(fā)病和緩解呈平行關系。 二、補體的檢測 （一）概念：補體是人或動物血清中的一組具有酶活性 的蛋白質，在機體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮抗感染和免疫 調節(jié)的作用，也參與免疫病理反應。 （二）常用的檢測方法和臨床意義 1血清總補體溶血活性（血清總補體溶血活性（CH50）測定：）測定： 主要反應補體經(jīng)典激活途

16、徑的溶血功能，其結果與 C1-C9各組分的量和活性均有關，但并非完全相關，一 般以50溶血作為檢測終點，因此又稱為CH50。此方 法不能測定補體蛋白的絕對值，也不能測定備解素系 統(tǒng)中的成分。 臨床意義：臨床意義： CH50增高見于急性腎炎、組織損傷、惡性腫瘤 等；而降低見于急性腎小球腎炎、SLE活動期、類風 關、 亞急性細菌性心內膜炎、嚴重肝病尤其是肝壞死 CH50降低甚至測不出來，有助于判斷肝受損的程度。 2補體成分C3、C4的測定 C3、C4是補體級聯(lián)反應的關鍵成分，其中C3是補體系統(tǒng) 中含量最高的 （1）C3、C4的含量測定：單向瓊脂擴散法和免疫比濁法 （2）C3、C4的活性測定：免疫溶

17、血法 （3）臨床意義：補體 C3 、C4 減低常見于： 補體合成能力下降：慢性活動性肝炎、肝硬化、肝壞死等； 消耗或丟失過多：大多數(shù)急性腎小球腎炎、鏈球菌感染后腎炎、狼 瘡性腎炎患者，還見于大面積燒傷、活動性SLE和類風濕關節(jié)炎活動 期等； 合成原料不足，如兒童營養(yǎng)不良性疾?。?先天性補體缺乏。 第二節(jié) 細胞免疫檢查 人體的淋巴細胞分為T、B和NK等細胞群，它 們又可以分為若干個亞群，各有其特異的表面標志 和功能。臨床上各種免疫疾病均可出現(xiàn)不同群淋巴 細胞數(shù)量和功能上的變化，對它們進行檢測可以判 斷細胞免疫功能。 一、T淋巴細胞的檢測 （一）數(shù)量的檢測： 1花環(huán)形成實驗 2T細胞分化抗原測定：

18、 CD3：總T細胞； CD4：輔助性T細胞 CD8：抑制性T細胞 檢測方法：免疫熒光法和流式細胞檢測法 （二）功能的檢測：淋巴細胞轉化試驗 1 形態(tài)學方法 23H-TdR摻入法 （三）臨床意義 1降低：見于免疫缺陷性疾病，如惡性腫瘤、免疫 性疾病、某些病毒感染、大面積燒傷等。 2升高：見于甲亢、甲炎、重癥肌無力、慢活肝、 SLE活動期和器官移植排斥反應等。 3CD3降低：見于自身免疫性疾病如SLE、類風濕 關節(jié)炎等； CD4降低：見于惡性腫瘤、愛滋病、遺傳性免疫 缺陷癥、應用免疫抑制劑等。 CD4/CD8減低常見于愛滋病，而在器官移植時 CD4/CD8增高預示可能發(fā)生排斥反應。 二、B淋巴細胞

19、的檢測 （一）數(shù)量的檢測 1B細胞膜表面免疫球蛋白測定： 免疫熒光法和 (SmIg) 流式細胞檢測法 2B細胞分化抗原檢測：CD19/20/22 （二）功能的檢測 1溶血空斑試驗 2抗體的檢測 （三）臨床意義 1降低見于各種原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病 2升高見于淋巴增殖性疾病如慢粒和多毛細 胞白血病等。 三、自然殺傷（NK）細胞免疫檢測 NK細胞是一種異質性、多功能的T細胞亞群，NK細胞 介導天然免疫應答，并不依賴抗體和補體，是人體抵御 外來侵略的第一道防線。 NK細胞的測定包括活性測定和抗體依賴性細胞介導的 細胞毒測定 NK細胞活性可作為判斷機體抗腫瘤和抗病毒感染的指 標之一，減低見于腫瘤、免

20、疫缺陷病、艾滋病和某些病 毒感染；增高見于宿主抗移植物反應。 四、細胞因子檢測 細胞因子是一類由免疫細胞和相關細胞產(chǎn)生的具有調節(jié)細胞功能的 高活性、多功能和低分子的分泌性蛋白質，細胞因子的檢測是判斷機 體免疫功能的一個重要指標。 1. IL-2：由活化T細胞產(chǎn)生，是具有多向性作用的細胞因子，在機體 的免疫應答和抗病毒感染中起重要作用。 2. TNF：分為TNF和TNF 兩型，前者來源于單核細胞和吞噬細胞， 后者來源于T淋巴細胞。兩型的結構雖然不同，但生物活性類似，都 具有引起腫瘤組織出血、壞死和殺傷作用，都可引起抗感染的炎癥反 應效應，并對免疫細胞具有調節(jié)誘生作用。 3. IFN-：具有抗病毒

21、、抗腫瘤、控制細胞增殖和免疫調節(jié)作用，增 高見于SLE、急性病毒感染、非活動性類風濕性關節(jié)炎；減低見于乙 肝及攜帶者、活動性類風濕性關節(jié)炎。 第三節(jié) 感染免疫檢測 病原體（細菌、病毒、立克次體、寄生蟲等） 及其代謝產(chǎn)物刺激人體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生相應的 免疫產(chǎn)物，后者進入血液或其他體液當中，這 些產(chǎn)物可利用凝集試驗、補體結合試驗、 ELISA、免疫熒光和放射免疫法等免疫學手段 進行檢測，從而輔助疾病的診斷和判斷機體的 免疫狀態(tài)。 一、肝炎標志物的檢測： 1甲型肝炎病毒標志物的檢測 （1）甲型肝炎病毒抗原和RNA測定： ELISA和RT-PCR法 （2）甲型肝炎病毒抗體測定：ELISA （3）甲型肝炎

22、病毒抗體IgM陽性表明機體 正在感染甲肝，它是早期診斷甲肝的 特異性指標。而IgG陽性提示既望感 染，可作為流行病學調查的指標。 2乙型肝炎病毒標志物的檢測 （1）乙肝兩對半的檢查：ELISA （2）乙肝病毒DNA的測定：PCR法和斑 點雜交試驗 （3）臨床意義：乙肝兩對半的檢測反應 機體對乙肝病毒的免疫 狀態(tài)，而乙肝病毒DNA 是診斷乙型肝炎的佐證。 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb 1 + - - - - 攜帶者 2 + - + - - 急性感染早期急性感染早期,HBV復制活躍復制活躍 3 + - + - + 急性或慢性感染急性或慢性感染,復制活躍復制活躍 4 +

23、 - - + + 急性或慢性感染,復制減弱或停止 5 - - - + + 既往感染,未出現(xiàn)表抗,窗口期 6 - - - - + 既往感染,未出現(xiàn)表抗,窗口期 7 - + - + + 恢復期 8 - + - - + 恢復期 9 - + - - - 病后或接種疫苗后獲得性免疫 10 + + + - + 不同亞型的感染不同亞型的感染 3丙型肝炎病毒標志物的檢測 （1）丙型肝炎病毒RNA測定：斑點雜交法和 RT-PCR法 （2）丙型肝炎病毒抗體測定：ELISA和RIA法 （3）急性丙肝患者，發(fā)病后1-4周丙型肝炎病 毒抗體IgM即可陽性，可持續(xù)1-4周。6個 月痊愈者，抗-HCVIgM轉陰，反之將轉

24、為慢性丙型肝炎； 而IgG陽性表明已有 HCV感染，輸血后肝炎有80%-90%患者 抗-HCVIgG陽性。 4丁型肝炎病毒標志物的檢測(缺陷RNA病毒） （1）丁型肝炎病毒抗原和RNA測定：ELISA和RT- PCR法 （2）丁型肝炎病毒抗體測定：ELISA （3）抗-HDVIgG只能在HBsAg陽性的血清中檢測 到，是診斷丁型肝炎的可靠指標，抗-HDV IgM出現(xiàn)較早，可用于早期診斷。 5戊型肝炎病毒標志物的檢測：ELISA檢測抗體 6庚型肝炎病毒標志物的檢測：ELISA檢測抗體， 也多見于輸血后感染 小結 肝炎病毒的檢測方法: 抗原的檢測: ELISA法或免疫熒光法 抗體的檢測: ELIS

25、A法或免疫熒光法 基因的檢測: DNA病毒用PCR法 RNA病毒用RT-PCR法 二、細菌感染的免疫檢測 （一）血清抗鏈球菌溶血素“O”試驗 溶血素“O” 是一種A群溶血性鏈球菌的毒素， 屬蛋白質，能溶解紅細胞，殺傷白細胞和血小板， 它具有抗原性，可使人產(chǎn)生相應抗體，稱抗鏈球 菌溶血素“O”，也叫抗O或 ASO。一般當機體受 到A群溶血性鏈球菌感染2-3周， 血清中出現(xiàn)抗O， 這種抗體滴度直至病愈后數(shù)月到半年才下降至正 常水平。 檢測方法： 膠乳凝集法和ELISA 臨床意義： 1. 抗O升高（滴度大于1：400）表示近期內有A 群溶血性鏈球菌感染，常見于活動性風濕熱、 風濕性心臟病、風濕性關節(jié)

26、炎、急性腎小球腎 炎、急性上感、皮膚和軟組織感染等。 2.抗體有高滴度逐漸下降時，可認為疾 病緩解， 抗體恒定在高水平時，多為活動期。 （二）傷寒和副傷寒沙門菌免疫測定 人體被傷寒沙門菌感染后，該菌體“O”抗原和 鞭毛“H”抗原，刺激人體產(chǎn)生相應抗體。副傷 寒分為甲（A）乙（B）丙（C）三型，它們均 有各自的菌體抗原和鞭毛抗原，這些抗原也可 在人體內刺激機體產(chǎn)生各自相應的抗體。 1肥達氏反應（Widal reaction，WR） WR是利用傷寒和副傷寒沙門菌液為抗原，檢測病人血 清中有無相應抗體的一種凝集試驗。 參考值 :直接凝集法 傷寒WR“H”低于1：160；“O”低 于1：80。副傷寒W

27、R 甲（A）乙 （B）丙（C）都低于1：80。 臨床意義：WR陽性一般出現(xiàn)在傷寒發(fā)病后一周，陽性 率10%；第二周上升為60-70%；第四周可達90%以上。 單份血清抗體效價“O”大于1：80及“H”大于1：160者 有診斷意義；若動態(tài)觀察，WR持續(xù)超過參考值或較原 效價升高4倍以上者更有價值。 2傷寒和副傷寒沙門菌抗體IgM測定 參考值: ELISA法正常人為陰性或滴度1：20 臨床意義：發(fā)病后一周即可出現(xiàn)升高，有早期診斷價 值若其滴度1：20對診斷傷寒帶菌者也 有意義。本測定的敏感性和特異性均優(yōu)于 肥達氏反應。 3傷寒和副傷寒沙門菌可溶性抗原測定 傷寒沙門菌在體 內繁殖、破裂， 患者血及尿

28、液內出現(xiàn)傷寒沙門菌抗 原。用相應的抗血清致敏膠乳，與患者血及尿液中傷 寒沙門菌可溶性抗原反應，可產(chǎn)生凝集。 參考值 ： 膠乳凝集法為陰性 臨床意義：陽性對確診沙門菌感染更有重要意義 三、其他病毒感染免疫檢測 （一）巨細胞病毒的檢測：巨細胞病毒是一種皰疹病毒， 核酸呈雙鏈DNA，由于它能使感染的細胞變大，故稱 巨細胞病毒。 1檢測方法 抗體：IFA（免疫熒光法）和ELISA DNA：分子雜交或PCR法 2臨床意義 IgM陽性提示現(xiàn)癥感染或處于病毒活動期； IgG陽性則提示既往感染或潛伏感染，人群中有90%以 上可呈陽性反應；若雙份血清效價有4倍以上增長則提 示近期有感染活動，DNA陽性提示現(xiàn)癥感

29、染。先天性 感染一般由母嬰通過胎盤或產(chǎn)道感染，后天性則主要通 過接觸傳播。巨細胞病毒的檢測一般對孕婦或新生兒比 較有意義。因為巨細胞病毒感染易導致流產(chǎn)、畸胎和死 胎，對嬰幼兒來說易導致發(fā)育不良或弱智。 （二）柯薩奇病毒的檢測： 柯薩奇病毒是一種單鏈的小RNA病毒，可分為A、B兩 群，A群又有24個血清型，B群則有6個血清型。 1檢測方法 抗體：間接血凝法、IFA法或ELISA法 RNA：用RT-PCR法 2臨床意義 IgM陽性提示現(xiàn)癥感染，IgG則為既往感 染，RNA陽性對柯薩奇病毒感染的診斷更有意義，也提 示現(xiàn)癥感染。A群主要引起無菌性腦膜炎、新生兒肺炎、 皮疹和普通的感冒；B群則主要引起心

30、肌炎、無菌性腦膜 炎、上感和成人的肺炎。 （三）輪狀病毒的檢測： 輪狀病毒屬胃腸病毒科，是雙鏈RNA病毒，是 引起人病毒性胃腸炎最常見的病原體，嬰幼兒腹瀉 50%是由輪狀病毒所致。檢測的方法基本和柯薩奇 病毒相似，這里就不再祥述了。 四、寄生蟲感染免疫的檢測 弓形蟲的檢測：弓形蟲感染為人畜共患疾病，可引 起中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼的疾病，也可以引起流產(chǎn)、先天 畸形等。 1檢測方法 抗體：間接血凝法、IFA法或 ELISA法 DNA：用PCR法 2臨床意義 IgM陽性是近期感染的指標，IgG則提 示既往感染，雙份血清抗體滴度4倍以上增高或單份抗 體滴度大于1：512時，提示近期感染可能性大。DNA 陽性

31、對弓形蟲病的診斷有重要意義。 五、性傳播疾病免疫檢測 （）人類獲得性免疫缺陷病毒抗體及RNA測定 人類 獲得性免疫缺陷病毒是愛滋?。ˋIDS）的病原體，它 是一種逆轉錄病毒，是一種單鏈RNA病毒，可分為 HIV-1和HIV-2型，當機體感染HIV數(shù)周到半年后絕大多 數(shù)患者體內可出現(xiàn)抗HIV抗體。 參考值： （1）篩選試驗：ELISA法和快速蛋白印跡法 均為陰性 （2）確認試驗：蛋白印跡試驗和RT-PCR檢 HIV-RNA均為陰性 臨床意義： 篩選試驗敏感性高，但特異性不高，故有 假陽性，所以篩選試驗陽性時需用確診試驗證實。確診 試驗陽性，特別是RT-PCR法檢測HIV-RNA陽性，對肯 定診斷

32、和早期診斷頗有價值。 （二）梅毒螺旋體抗體檢測 人體感染梅毒螺旋體后，血清中可出現(xiàn)特異性抗體 （針對密螺旋體抗原），還出現(xiàn)非特異性抗體（反應素） （針對類脂抗原） 1初篩試驗 即檢測非特異性抗體（反應素）的試驗 （1）檢測方法：快速血漿反應素試驗（RPR） 不加熱血清反應素試驗（USR） 美國性病研究實驗室實驗（VDRL） （2）臨床意義 初篩試驗適用于梅毒的篩選。這些試驗 一般在感染梅毒螺旋體后1-2周為76，二期梅毒為95- 100%，晚期梅毒為70-95%，隱性感染期為70-80%，但 定性試驗易出現(xiàn)假陽性反應，見于SLE、瘧疾、結核、 瘤型麻風病等。初篩實驗可定量，用于療效觀察。 2確

33、認試驗 即檢測梅毒螺旋體的特異性抗體的 試驗 （1）檢測方法： 梅毒螺旋體血凝試驗（TPHA） 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） （2）臨床意義 篩選試驗陽性的情況下必須做確 認試驗，陽性可肯定梅毒的診斷。確認試驗靈試驗靈 敏度高，特異性強，不受藥物治療的影響，特敏度高，特異性強，不受藥物治療的影響，特 異性抗體可持續(xù)數(shù)年甚至終身。不能用于療效異性抗體可持續(xù)數(shù)年甚至終身。不能用于療效 觀察。觀察。 六、TORCH感染免疫檢測 TORCH是指一組病原微生物的英文名稱縮寫。T即剛地 弓形蟲或弓形蟲 (toxoplasma gondii)，O即其它病原微 生物 (others)，R即風疹病毒

34、(rubella virus)，C即巨細胞 病毒(cytomegalovirus)，H即單純皰疹病毒 (herpes simplex virus)。這組病原體?？赏ㄟ^胎盤傳給胎兒，引 起圍生期感染，導致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、先天畸形和智 力障礙等各種異常結果，因此受到廣泛關注。TORCH 感染的抗體檢查在許多地區(qū)已作為孕期檢查的常規(guī)項目。 風疹病毒抗體測定 風疹病毒(rubella virus)直徑為60nm，具單股RNA。是兒童風疹的 病原體，一般癥狀較輕。但孕婦若在妊娠頭3個月內感染風疹病 毒，易引起胎兒畸形， 因此， 對早孕婦女進行風疹病毒特異性 IgM、IgG抗體監(jiān)測有重要意義。 參考值參

35、考值 ELISA：陰性 RT-PCR法：陰性 臨床意義臨床意義 風疹病毒易感人群為1一5歲的兒童及孕婦，據(jù)統(tǒng)計，孕婦在懷孕 1一6周時感染風疹者約50%可致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)；若胎兒存活 出生，也可能發(fā)生先天性風疹綜合征，表現(xiàn)為先天性白內障，先 天性心臟病， 神經(jīng)性耳聾， 小頭崎形和智力障礙等。 風疹病毒 IgM抗體陽性，提示有近期感染，必要時應終止妊娠。風疹病毒 IgG抗體陽性，表示機體已受過風疹病毒感染，具有免疫力。 單純皰疹病毒抗體測定 單純皰疹病毒(herpes simplex virus，HSV)為雙鏈DNA，根據(jù)限制 性內切酶切點不同，分HSV-I和HSV-II二型。HSV原發(fā)感染后

36、， 機體最先出現(xiàn)IgM，隨后出現(xiàn)IgA及IgG，抗體能防止病毒播散， 但不能阻止復發(fā)。臨床上常用間接血凝試驗和ELISA等進行輔助 診斷。檢出特異性IgM陽性或雙份血清特異性IgG抗體效價上升4 倍或4倍以上，可提示HSV近期感染。 參考值參考值 間接血凝試驗，ELISA：陰性 臨床意義臨床意義 HSV主要引起皰疹性口腔炎，皰疹性角膜結膜炎，皰 疹性腦膜炎， 皰疹性外陰陰道炎，濕疹性皰疹，新生兒皰疹等。 生殖器官以外部位的HSV感染多由 HSV-I型引起 (占95%)，而生殖 器官的HSV感染主要由HSV-II型引起 (占78%)。 IgM抗體陽性提示 近期有HSV感染。孕早期感染HSV者可導

37、致流產(chǎn)，妊娠中、晚期 感染者，可引起胎兒和新生兒發(fā)病。 七、其他免疫檢測 C反應蛋白檢測：是一種由肝臟合成的、能與肺炎雙 球菌細胞壁C多糖起反應的急性時相反應蛋白。 臨床意義： 1. 升高見于：化膿性感染、組織壞死（特別是手術和 創(chuàng)傷）、惡性腫瘤、器官移植排斥反應等 2. 鑒別細菌性和非細菌性感染 3. 鑒別風濕熱活動期和穩(wěn)定期 4. 鑒別器質性和功能性疾病 第四節(jié)、腫瘤標志物的檢測 概念：概念：腫瘤標志物是指在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由 腫瘤細胞本身合成、釋放或者是由機體對腫瘤細胞反應 而產(chǎn)生的一類物質。它能反應腫瘤的存在和生長，對腫 瘤的診斷、療效和復發(fā)的監(jiān)測、預后的判斷具有一定的 價值。與

38、正常組織相比，標志物明顯增高，并存在于血 液、細胞、組織或體液中。 主要檢測方法：主要檢測方法：放射免疫法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附法 （ELISA）和化學發(fā)光法 腫瘤標志物檢測的意義：腫瘤標志物檢測的意義：腫瘤普查、輔助診斷、觀察 療效和判斷預后。 早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療 最主要的是早期發(fā)現(xiàn)：腫瘤特異性標志物 高危人群 標本 DNA PCR 基因 檢測 變異基因分析 特異性蛋白 表達 單抗 檢測試劑盒或檢測芯片 常用的腫瘤標志物及其主要的臨床意義： 1甲胎蛋白（AFP）：是一種胎兒早期由肝臟合成的糖蛋白原發(fā)性 肝癌時可明顯升高，在病毒性肝炎、肝硬化時AFP也有不同程度 的升高，但升高的程

39、度不如原發(fā)性肝癌明顯。 2癌胚抗原（CEA）：是一種含多糖的蛋白復合物，胎兒早期的消 化管及某些組織均有合成CEA的能力，但孕后6個月以后含量減 少，出生后含量極底。胰腺癌、結腸癌 3前列腺特異抗原（PSA）：PSA是一種由前列腺細胞分泌的單鏈 糖蛋白，它具有前列腺特異性，但不具前列腺癌特異性，一般前 列腺癌時，血清PSA水平明顯升高，但一部分前列腺增生的病人 也會增高，所以這時就應該注意鑒別診斷，于是人們又發(fā)現(xiàn)游離 PSA百分比可在診斷灰區(qū)發(fā)揮較好的鑒別診斷作用。 常用的腫瘤標志物及其主要的臨床意義： 4糖鏈抗原19-9（CA19-9）：也是一種糖蛋白，對消化系 腫瘤，特別是胰腺癌的診斷比較

40、有意義。 5癌抗原242（CA242）：是一種唾液酸化的鞘糖脂抗原， 是胰腺癌和結腸癌的標志物，常和CEA、CA19-9聯(lián)合檢 測提高胰腺癌的檢出率。 6-L-巖藻糖苷酶（AFU）：是一種溶酶體酸性水解酶，在 原發(fā)性肝癌患者血清中增高，常與AFP聯(lián)合檢測，提高肝 癌的檢出率。 常用的腫瘤標志物及其主要的臨床意義： 7神經(jīng)元特異烯醇化酶（NSE）：神經(jīng)母細胞瘤的的特異標 志物，也是小細胞肺癌高特異性和高敏感性的標志物。 8癌抗原125（CA125）：卵巢癌病人血清CA125水平明顯 升高，常與CA72-4聯(lián)合檢測。 9癌抗原15-3（CA15-3）：對乳腺癌的診斷有重要的輔助 作用。 10前列腺

41、酸性磷酸酶（PAP）：可輔助診斷前列腺癌，但 敏感性和特異性皆不如PSA。 腫瘤標志物的選用原則 （1）選擇特異性高的標志物； （2）組合檢測有利于提高腫瘤診斷的陽性率； （3）有利于鑒別良性和惡性腫瘤； （4）動態(tài)檢測有利于判斷腫瘤的復發(fā)、轉移和預后。 第五節(jié) 自身免疫檢測 在正常情況下，機體的免疫系統(tǒng)對自身抗原表現(xiàn) 為不應答，即自身免疫耐受，當某些原因消弱或破壞正 常的自身耐受時，免疫系統(tǒng)即會對自身組織或成分產(chǎn)生 免疫應答，由此而產(chǎn)生的疾病稱為自身免疫病。因此診 斷自身免疫疾病的重要方法是做自身免疫檢測。一種自 身免疫病可檢出多種抗體，而檢出一種自身抗體可涉及 多種相關自身免疫病，因此，臨

42、床往往參考多種免疫指 標做出診斷。 自身免疫性疾病的共同特征 可以有誘因，也可以無誘因，但多數(shù)病因不清 患者多以女性居多，病隨年齡的增加發(fā)病率有所增加 有遺傳趨向，一般病程較長，多遷延為慢性 血清中有高滴度的自身抗體或體內有針對自身組織的 致敏的T淋巴細胞 自身免疫性疾病的共同特征 自身抗體在不同的自身免疫疾病中有交叉和重疊現(xiàn)象 疾病也有重疊現(xiàn)象，即一個病人可同時患一種以上的 自身免疫病 免疫抑制劑治療多可取得較好的效果 一、類風濕因子（RF）測定： RF是由變性IgG刺激機體產(chǎn)生的一種自身抗體，主要 存在于類風濕性疾病患者的血清或關節(jié)液內。它有IgM型， 也有IgG、IgA、IgD和IgE型

43、。 1檢測方法： 免疫比濁法、RIA和ELISA法 2臨床意義 ： 在一些類風濕性疾病如類風關時，它的陽性 率比較高。但其他自身免疫性疾病如SLE、多發(fā)性硬化、 干燥綜合征時，也可見RF陽性，一些感染性疾病，如結 核、傳染性單核細胞增多癥患者血清當中RF也常呈陽性 反應。 二、抗核抗體檢測 （一）概念 ： 抗核抗體（ANA）泛指抗各種核成分脫氧核糖核蛋白 （DNP）、DNA、和可提取的核抗原（ENA）等的抗 體，是一種廣泛存在的自身抗體。在某些因素如細菌、 病毒、藥物等的作用下，細胞核內某些成分的性質發(fā) 生改變，激發(fā)機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗不同核成分的抗體， ANA的性質主要是IgG，也有IgM、I

44、gA，它們沒有器官 和種族的特異性，因此可以和不同來源的細胞核反應。 ANA主要存在于血清中，也可以存在于其他體液如滑 膜液、胸水和尿液中。 （二）檢測方法 1總ANA 目前廣泛采用間接免疫熒光法進行總ANA的 篩查，也可以采用ELISA的方法。間接熒光免疫法中多 用小鼠肝切片或印片作為細胞基質，在熒光顯微鏡下觀 察細胞有熒光著色者為陽性反應。 2各種核成分抗體的檢測： （1）抗DNA抗體 間接免疫熒光法、ELISA法和RIA法 （2）抗DNP抗體 間接免疫熒光法、ELISA法 （3）抗ENA抗體 ELISA的方法和Western blot （三）臨床意義 1ANA陽性的疾病很多，最多見于SL

45、E（95%），也可 見于藥物引起的狼瘡、重疊綜合征、RA、混合性結締 組織?。∕CTD）、干燥綜合征（SS）、多發(fā)性肌炎 （PM）、皮肌炎（DM）、進行性全身性硬化、自身 免疫性肝炎和橋本甲狀腺炎等。 如將患者血清進行稀釋，可以做大致的定量試驗，在1： 80稀釋依然陽性時，對SLE的診斷有較大的參考價值。 在熒光顯微鏡下觀察結果，可以出現(xiàn)不同的熒光核型， 核型的確定對臨床診斷有進一步的參考價值。 ANA核型與相關疾病 ANA核型 抗體 相關疾病 周邊型（核膜型） 抗DNA抗體 主要見于SLE 均質型 抗DNP抗體 SLE、RA、慢性活 動性肝炎、PSS等 斑點型 抗ENA抗體 SLE、PSS、SS、 PM/DM、MCTD 核仁型