芹菜葉中黃酮類物質(zhì)提取工藝的研究

1、安徽工程科技學院優(yōu)秀畢業(yè)設計（論文）摘要樣式（標題上方空一行）芹菜葉中黃酮類物質(zhì)提取工藝的研究（加粗小2號黑體，居中）（空1行）食品科學與工程061班 陶然（5號仿宋體）（居中）指導教師: 黃曉東（5號仿宋體）（居中）（空1行）摘要（5號黑體加粗）:以芹菜葉為原料，,利用超聲波輔助提取芹菜中的總黃酮類成分。在單因素試驗的基礎(chǔ)上,采用正交試驗法,重點考察了乙醇濃度、超聲功率、超聲提取溫度、超聲提取時間和料液比五個單因素對總黃酮提取率的影響,并最終確定最佳工藝條件為:乙醇濃度為65%,超聲功率為55W,超聲提取溫度為50,料液比為180,超聲提取時間為10min,采用該最佳提取工藝,總黃酮的得率可

2、達0.221%。（5號宋體）關(guān)鍵詞（5號黑體加粗）: 芹菜葉；超聲波輔助提??；總黃酮 ；（5號宋體）（空1行）Abstract（5號Times New Roman，加粗）: The extraction of flavonoids from celery salt with ultrasonic wave was studied. On the basis of mono factor and orthogonal experimental design, the influence of several parameters on the extraction rate of total f

3、lavonoids were investigated importantly, including the ethanol concentration, ultrasonic power, ultrasonic extracted temperature, ultrasonic extracted time, and material/extraction solution ratio. And the optimum extraction conditions were as follows: ethanol concentration 65%, ultrasonic power 55W,

4、 ultrasonic extracted temperature 50, material/extraction solution ratio 180 and ultrasonic extracted time 15min. Under the above optimum conditions, the total flavonoids yielded 0.221%.Keywords: celery salt; ultrasonicwave assisted extraction; total flavonoids（5號）Keywords（5號Times New Roman，加粗）:；（5號

5、）（空2行）引 言芹菜(Apium graveolens L. )是一種二年生的傘形科芹菜屬的草本植物，是一種豐富的自然資源。芹菜中含有以芹菜素為主的黃酮類化合物，具有降壓安神、降血脂、鎮(zhèn)靜健胃、保護血管、增強免疫力，抗氧化、抗衰老，增強機體免疫力等功能，以及廣泛的生物活性和重要的藥用價值。作為天然抗氧化劑，黃酮類化合物一直受到人們的廣泛關(guān)注，因此研究提取和測定芹菜內(nèi)的黃酮類物質(zhì)，具有一定的實用價值。黃酮類化合物傳統(tǒng)的提取方法主要有煎煮法、回流提取法、索氏提取法、浸漬法、滲漉法、水蒸汽蒸餾法等。這些方法主要是基于天然產(chǎn)物的有效成分在一些極性或非極性溶劑中的溶解性來提取,存在著損失大、周期長、工

6、序多、提取率低等缺點?，F(xiàn)已逐步被一些安全、操作方便、快捷、高效的現(xiàn)代提取方法所取代?？紤]到經(jīng)濟、環(huán)境和安全等多方面的因素，超聲波輔助提取黃酮類化合物的技術(shù)應運而生。此方法具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。在較低溫度超聲作用下，對乙醇浸提芹菜葉中黃酮類化合物的工藝研究表明，超聲可以強化乙醇浸提法，達到省時、高效、節(jié)能的目的。用超聲技術(shù)提取，可提高提取率并縮短提取時間，而且可以提高原料的利用率。本實驗目的就是要找出用超聲波輔助提取中芹菜葉中黃酮類物質(zhì)的最佳提取條件，從而使的黃酮類化合物的提取效果最好，黃酮類化和物的得率達到最高。考察黃酮類化合物的活性和提取條件。實驗中，從芹菜葉提取黃酮類化

7、化合物。將芹菜與乙醇以一定的比例混合后，經(jīng)過超聲波清洗儀進行超聲，采用不同的加熱溫度，加熱時間，料液比、超聲波功率、乙醇濃度等條件等使黃酮從芹菜葉中分離，最終找出最佳的提取條件。本實驗研究的結(jié)果不僅可用于芹菜葉中黃酮類化合物的提取，在其它植物中黃酮類化合物的提取中也具有參考作用。所以，本實驗的研究有一定的實際意義。引言內(nèi)容引言內(nèi)容引言內(nèi)容引言內(nèi)容（用時請連此提示一起刪除） “引言”用小3號宋體字加粗、居中；引言內(nèi)容用小4號宋體。（用時請連此提示一起刪除紅色提示）第1章 緒論1.1 黃酮類化和物的特性1.1.1 物理特性 黃酮類化合物多為結(jié)晶性固體1，少數(shù)為無定型粉末。黃酮類化合物的顏色與分子中

8、存在的交叉共軛體系及助色團（-OH、-CH3）等的類型、數(shù)目及取代位置有關(guān)。黃酮一般易溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、吡啶等溶劑，難溶于乙醚、三氯甲烷、苯等有機溶劑。黃酮類化合物因分子中多有酚羥基而呈酸性，故可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。1.1.2 化學特性生物類黃酮結(jié)構(gòu)是兩個苯環(huán)(A-與B-環(huán))通過中央碳鏈相互聯(lián)結(jié)而成的一系列C6-C3-C6化合物,主要指以2-苯基色原酮為母核的化合物,其基本結(jié)構(gòu)2為: 1.1.3 光譜特性 以乙醇為提取溶劑提取黃酮類化合物，取提取液以溶劑定容測得在510.0nm處的吸光度值最大3，因此確定510.0nm為最大吸收波長。1.1.4 穩(wěn)定性（1

9、）對光照的穩(wěn)定性日光對黃酮穩(wěn)定性有一定影響4,自然光對生姜黃酮的穩(wěn)定性影響不大,避光條件下黃酮的穩(wěn)定性較好,紫外光照射4 min以下對黃酮的穩(wěn)定性幾乎沒有影響?？傊?短時間里光照對生姜黃酮的穩(wěn)定性影響不大。（2）對熱的穩(wěn)定性50以下,黃酮溶液的吸光度變化很小,當溫度超過50時吸光度呈明顯下降趨勢,溶液顏色由黃色逐漸變?yōu)榈S色,表明,在50以上的溫度范圍內(nèi)黃酮的熱穩(wěn)定性較差,應盡量在50以下制備和保存。（3）對pH的穩(wěn)定性pH為36時黃酮溶液的吸光度變化不大5，穩(wěn)定性較好。當pH小于3或大于6時,吸光度明顯下降,說明溶液過酸或過堿時,黃酮的穩(wěn)定性較差,可見酸堿對其影響都比較大。（4）氧化劑對黃酮

10、的影響隨著氧化劑質(zhì)量分數(shù)的增加，黃酮溶液的吸光度略有增加，但上升幅度不大，說明氧化劑對黃酮的穩(wěn)定性的影響不大，所以可認為黃酮具有抗氧化做用。1.2 黃酮類化合物的生理功能1.2.1 抗腫瘤、抗癌作用黃酮類化合物6是通過促進腫瘤壞死因子，抑制致癌劑及抗氧化等多途徑發(fā)揮療效的。如大豆異黃酮的A環(huán)5、7位及B環(huán)的4位的羥基是抑制乳腺癌和前列腺癌的主要基團，在前列腺細胞增殖階段大豆蛋白對其有抑制作用，因此，可減少前列腺腫瘤的發(fā)生。Kenneth研究表明，大豆異黃酮能降低乳腺癌、前列腺癌。趙秀蘭等的研究表明麥胚黃酮類粗提取物具有抑制乳腺腫瘤的作用。1.2.2 對心血管系統(tǒng)的作用對血壓的影響：黃酮類化合物

11、7對高血壓引起的頭痛、項強、頭暈、耳鳴等癥狀有明顯的療效，尤以緩解頭痛、項強為顯著。葛根素對正常和高血壓動物都有一定的降壓作用，靜注葛根素能使正常麻醉犬的血壓短暫而明顯地降低，也能顯著降低清醒自發(fā)性高血壓大鼠血壓。抑制血小板凝集作用：黃酮類化合物對凝血因子具有較強的抑制作用，故表現(xiàn)出較好的抗凝血作用。試驗表明，不同濃度的黃酮類化合物可以不同程度地抑制二磷酸腺苷誘導的大鼠血小板凝集，對5羥色胺和ADP聯(lián)合誘導的家兔和綿羊血小板凝集也有同樣的抑制作用。黃酮類化合物還可降低血管內(nèi)皮細胞羥脯酸代謝，使內(nèi)壁的膠原或膠原纖維含量相對減少，利于防止血小板粘附凝集和血栓形成，有利于防治動脈粥樣硬化。大豆異黃酮

12、能抑制凝血酶和血小板活化因子誘導的血小板聚集，高濃度抑制血管滲透性因子誘導的冠狀動脈舒張。對外周血管8的影響：靜注黃酮類化合物于麻醉犬后，全部動物的腦血流量增加且血管阻力相應降低，還能使乙酸膽堿引起的腦內(nèi)動脈擴張和去甲腎上腺素引起的收縮減弱，使處于異常狀態(tài)下的血管功能恢復正常水平。還可改善異丙腎上腺素引起的小鼠微循環(huán)障礙，使毛細血管前小動脈管徑增加，流速加快。1.2.3抗氧化及抗自由基作用自由基性質(zhì)活潑，有極強的氧化反應能力9，對人體有很大的危害性，在體內(nèi)自由基和脂質(zhì)過氧化作用導致細胞結(jié)構(gòu)改變和功能破壞，而引起癌癥、衰老及心血管等退變性疾病。在黃酮提取物的抗氧化性研究方面，國外曾有人利用DPP

13、H法研究羥基黃酮以及單寧和類黃酮的抗氧化能力。徐雅琴研究了黑穗栗葉片黃酮提取物的抗氧化性，結(jié)果表明，葉片黃酮提取物具有一定抗氧化效果，且其抗氧化性隨天加量的增加而增強。于長青等研究表明，麥胚黃酮可顯著增強大鼠血液中和活性，提示麥胚黃酮可能通過提高機體抗氧化酶類的生物合成而增強機體抗氧化能力。1.2.4抗炎、抗微生物及提高免疫功能的作用黃酮類化合物主要通過影響細胞的分泌過程，有絲分裂及細胞間的相互作用而起抗炎及提高免疫功能10。多數(shù)黃酮類化合物能抑制大鼠肥大細胞和嗜堿性細胞對多種刺激引起的組胺及慢反應物質(zhì)的釋放，抑制PGE2、白三烯的合成和釋放，抑制透明質(zhì)酸酶的活性，抑制大鼠中性粒細胞溶酶體酶的

14、釋放及其脫顆粒。白鳳梅等研究表明，天然黃酮對小鼠急性胃潰瘍有明顯的消退作用。甘草第2期王長遠等：黃酮類化合物研究進展 黃酮化合物中抗菌成分較多，其黃酮單體化合物licochalconeA，licochalconeB，glabridin，glabrene等對金黃色葡萄球菌，枯草桿菌，大腸桿菌，綠膿桿菌，白色念珠菌等均有抑制作用。Neobavai isolavone亦能明顯抑制煙曲霉菌和新型隱球菌的生長。翟愛華等采用二倍稀釋法和管碟法對麥胚黃酮進行體外抑菌試驗，結(jié)果表明，對灰葡萄孢、白色念珠菌、黑根霉、意大利青霉等真菌具有較好的抑菌效果。1.2.5類黃酮對脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用有關(guān)對類黃酮作用的大量研

15、究表明，類黃酮物質(zhì)對動物的脂質(zhì)代謝具有調(diào)節(jié)作用11。Lichtenstein認為，大豆產(chǎn)品預防動脈粥樣硬化、冠心病的作用歸因于大豆類黃酮的降血膽固醇、抗氧化和保護動脈完整的作用。Balmir等在大鼠試驗中發(fā)現(xiàn)，大鼠日糧中添加大豆異黃酮可顯著降低血清總膽固醇和LDL膽固醇濃度12。于長青等試驗研究表明麥胚黃酮可明顯地降低大鼠血清和肝臟中的膽固醇、甘油三酯的含量。1.3 黃酮類化合物的提取及影響因素黃酮類化合物分布范圍廣、種類多、生物活性廣泛，而且毒性小，使其分離提純技術(shù)得以快速發(fā)展。目前在黃酮類化合物的提取方法中13，溶劑提取法、熱水提取法等傳統(tǒng)方法仍占主導地位，但與一些新興的提取分離技術(shù)相比，

16、逐漸暴露了許多問題，如能量消耗大，提取溫度高，時間長，不利于黃酮類化合物母核活性的保護，產(chǎn)品中黃酮類化合物得率和含量低，尤其是存在溶劑殘留。相反一些新興技術(shù)如超聲波輔助提取技術(shù)、微波技術(shù)等具有物耗能耗少，提取速度快，產(chǎn)率和純度高，提取條件溫和，有利于黃酮類化合物母核活性的保護等特點。今后的黃酮類化合物提取的發(fā)展方向應該是優(yōu)化現(xiàn)有的傳統(tǒng)提取工藝的同時，著手新興技術(shù)的完善和普及。1.4 黃酮類化合物在食品業(yè)的應用1.4.1 天然甜味劑柚皮苷屬二氫黃酮，經(jīng)過氫化處理可以轉(zhuǎn)變?yōu)槎洳闋柾?具有甜味14,甜度是蔗糖的100倍。柚皮苷與異香蘭素作用得新橙皮苷,新橙皮苷經(jīng)過氫化轉(zhuǎn)變?yōu)樾鲁绕ぼ斩洳闋柾?其甜

17、度為蔗糖的950倍,而且此兩種甜味劑回味均無苦味,可直接用于各種食品中,并具保健作用。1.4.2 天然抗氧化劑研究表明,生物類黃酮均具有較強的抗氧化能力。SatuS Pekkarinen等人發(fā)現(xiàn)在亞油酸甲脂體系中,楊梅酮(myricetin)與槲皮素(Quercetin)的抗氧化效果優(yōu)于維生素E。Susana Nieto等人發(fā)現(xiàn)在魚油體系中,槲皮素與5 ,3,4-三羥基-7-甲氧基黃烷酮( 5 ,3,4-trihydroxy-7-methoxyflavanone)的混合物的抗氧化能力15高于人工合成的抗氧化劑丁基羥基茴香醚(BHA)及丁基羥基甲苯(BHT)。1.4.3 天然色素生物類黃酮多呈黃

18、色，同時又具有很寬的溶解性16，既具有水溶性的生物類黃酮,又有脂溶性的生物類黃酮,所以完全可以根據(jù)食品加工的需要來選擇合適的生物類黃酮作為著色劑。蕭偉祥等人利用低檔的綠茶或茶末制取了純天然的茶黃色素和茶綠色素，并確定主要成分是黃酮類化合物。1.3.4 保健食品由于生物類黃酮所具有的保健功能,人們又開發(fā)出多種保健食品。以富含生物類黃酮的蕎麥為例,就有苦蕎米、苦蕎營養(yǎng)粉、苦蕎療效粉、糖尿病食療粉、胃病食療粉、高血脂食療粉、苦蕎顆粒粉、苦蕎餅干、苦蕎掛面、苦蕎通心粉、苦蕎食療酒、苦蕎醋、苦蕎茶等產(chǎn)品。1.5 超聲波輔助萃取的基本原理1.5.1超聲波輔助提取技術(shù) 超聲波是指頻率為20千赫50兆赫左右的

19、電磁波17，它是一種機械波，需要能量載體介質(zhì)來進行傳播。超聲波在傳遞過程中存在著的正負壓強交變周期，在正相位時，對介質(zhì)分子產(chǎn)生擠壓，增加介質(zhì)原來的密度；負相位時，介質(zhì)分子稀疏、離散，介質(zhì)密度減小。也就是說，超聲波并不能使樣品內(nèi)的分子產(chǎn)生極化，而是在溶劑和樣品之間產(chǎn)生聲波空化作用，導致溶液內(nèi)氣泡的形成、增長和爆破壓縮，從而使固體樣品分散，增大樣品與萃取溶劑之間的接觸面積，提高目標物從固相轉(zhuǎn)移到液相的傳質(zhì)速率。利用超聲波進行清洗、干燥、殺菌、提取及無損檢測等，是一種非常成熟且有廣泛應用的技術(shù)。1.5.2超聲波輔助提取的原理超聲波萃取中的優(yōu)越性，是基于超聲波的特殊物理性質(zhì)。主要是主要通過壓電換能器產(chǎn)

20、生的快速機械振動波19來減少目標萃取物與樣品基體之間的作用力從而實現(xiàn)固-液萃取分離。 （1）加速介質(zhì)質(zhì)點運動。高于20 KHz聲波頻率的超聲波的連續(xù)介質(zhì)（例如水）中傳播時，根據(jù)惠更斯波動原理，在其傳播的波陣面上將引起介質(zhì)質(zhì)點的運動，使介質(zhì)質(zhì)點運動獲行巨大的加速度和動能。質(zhì)點的加速度經(jīng)計算一般可達重力加速度的二千倍以上。由于介質(zhì)質(zhì)點將超聲波能量作用于有效成分質(zhì)點上而使之獲得巨大的加速度和動能，迅速逸出基體而游離于水中。 （2）空化作用。超聲波在液體介質(zhì)中傳播產(chǎn)生特殊的“空化效應”，“空化效應”不斷產(chǎn)生無數(shù)內(nèi)部壓力達到上千個大氣壓的微氣穴，并不斷“爆破”產(chǎn)生微觀上的強大沖擊波作用在被提取物上，使其

21、中所需提取的成分物質(zhì)被“轟擊”逸出，并使得基體被不斷剝蝕，其中不屬于植物結(jié)構(gòu)的所需提取的成分不斷被分離出來。加速植物有效成份的浸出提取。 （3）超聲波的振動勻化（Sanitation）使樣品介質(zhì)內(nèi)各點受到的作用一致，使整個樣品萃取更均勻。 綜上所述，一般所需提取的物質(zhì)在超聲波場作用下不但作為介質(zhì)質(zhì)點獲得自身的巨大加速度和動能，而且通過“空化效應”獲得強大的外力沖擊，所以能高效率并充分分離出來。1.5.3超聲波萃取的特點 相比較傳統(tǒng)的提取方法20，超聲波萃取具有如下突出特點：（1）無需高溫。在4050水中超聲波強化萃取，無水煮高溫，不破壞物質(zhì)的某些具有熱不穩(wěn)定，易水解或氧化特性的有效成份。超聲波

22、能促使植物細胞地破壁，提高提取效率。（2）常壓萃取，安全性好，操作簡單易行，維護保養(yǎng)方便。（3）萃取效率高。超聲波強化萃取2040分鐘即可獲最佳提取率，萃取時間僅為水煮、醇沉法的三分之一或更少。萃取充分，萃取量是傳統(tǒng)方法的二倍以上。據(jù)統(tǒng)計，超聲波在6570時工作效率非常高。而溫度在65C度內(nèi)各種植物的有效成份基本沒有受到破壞。加入超聲波后（在65條件下），植物有效成份提取時間約40分鐘。而蒸煮法的蒸煮時間往往需要兩到三小時，是超聲波提取時間的3倍以上時間。（4）具有廣譜性。適用性廣，絕大多數(shù)的植物各類成份均可超聲萃取。（5）超聲波萃取對溶劑和目標萃取物的性質(zhì)（如極性）關(guān)系不大。因此，可供選擇的

23、萃取溶劑種類多、目標萃取物范圍廣泛。（6）減少能耗。由于超聲萃取無需加熱或加熱溫度低，萃取時間短，因此大大降低能耗。（7）藥材原料處理量大，成倍或數(shù)倍提高，且雜質(zhì)少，有效成分易于分離、凈化。（8）萃取工藝成本低，綜合經(jīng)濟效益顯著。1.6 本課題的目的意義和研究內(nèi)容本課題所介紹的超聲波提取黃酮類化合物的方法與常規(guī)提取方法比：(1)超聲波提取具有提取溫度低等特點，可以避免高溫對有效成分的破壞，適合于熱敏性物料的提取。(2)提取物的有效成分含量高，有利于進一步的精制。(3)溶媒用量少，可有效降低成本。(4)有效成分的提取率高，原料利用充分，提高經(jīng)濟效益。(5)對大多數(shù)有效成分的生理活性基本無影響。黃

24、酮類化和物用傳統(tǒng)的有機溶劑加熱浸提，時間較長，能源消耗大。采用超聲波輔助提取可以加速提取成分的擴散釋放，充分與溶劑混合，提高提取效率，且與超臨界CO2萃取相比，成本低、投資少、提取效率高。所以研究此種方法對尋求更加有效的黃酮類化和物提取法有較大的幫助。第2章 材料與方法2.1 試驗原料、藥品及器材2.1.1 試驗原料 芹菜葉：購買與安徽省蕪湖市鳩江區(qū)農(nóng)貿(mào)市場2.1.2 試驗藥品 蘆?。褐袊t(yī)藥(集團)上海化學試劑公司(生化試劑)；無水乙醚，乙醇，NaOH, NaNO2， Al(NO3)3等均為國產(chǎn)分析純;蒸餾水。2.1.3 試驗器材 FC104型電子分析天平；101A-2E型數(shù)顯電熱鼓風干燥箱

25、；FW-100型高速萬能粉碎機；KQ-250E超聲波清洗器；L-550型臺式大容量離心機；分光光度計。2.2 實驗步驟2.2.1 芹菜葉的預處理 芹菜葉粉碎按120料液比加無水乙醚40冷凝回流2小時脫脂過濾濾渣干燥后備用。2.2.2 標準曲線的制備及回歸方程的建立準確稱取蘆丁20mg(120烘至恒重),加95%乙醇水溶液50 mL。準確吸取0、1、2、4、6、8、10、12mL于50mL容量瓶中,加12mL 95%的乙醇,加含5% NaNO2水溶液2mL,搖勻靜置6min,再加含10% Al(NO3)3水溶液2mL,搖勻靜置6min,再加含5% NaOH水溶液20mL,用95%乙醇水溶液稀釋至

26、刻度,搖勻,在490510 nm波長范圍內(nèi)掃描,確定最大吸收波長;在最大吸收波長(510nm)處測定吸光值。以吸收度Y為縱坐標,濃度x為橫坐標,進行回歸分析,繪制回歸曲線。濃度與吸光度有良好的線性關(guān)系。得出回歸方程:Y=6.363x-0.0119（R2=0.9980）（1）2.2.3 樣品總黃酮得率的確定以芹菜葉為原料,經(jīng)乙醇浸提總黃酮,提取液過濾離心后定容至50mL,每次準確量取1.0mL。代入回歸方程(1)中計算,得出提取液中總黃酮含量?？傸S酮的得率=C*50/(w*1000)*100 （2）式中：w為樣品的質(zhì)量，單位g；C為提取液中總黃酮的含量，單位mg/mL。2.2.4 單因素試驗 選

27、擇提取乙醇濃度、超聲功率、超聲提取溫度、料液比、超聲提取時間進行單因素試驗,考察其對提取率的影響。2.2.5 正交試驗根據(jù)單因素試驗結(jié)果,選擇超聲功率、超聲提取溫度、料液比、超聲提取做4因素3水平正交試驗,確定最佳提取條件。正交試驗因素和水平見表1。表1正交試驗因素和水平表水平A超聲波功率/WB提取溫度/C料液比/g：mLD超聲波時間/min150501:705255601:8010360701:90152.3 穩(wěn)定性試驗 分別取少量芹菜葉黃酮的提取液進行日光、自然光、避光、加熱時間、加熱溫度、pH、Vc的穩(wěn)定性實驗,在510 nm處測其吸光度,根據(jù)蘆丁標準曲線的回歸方程計算總黃酮含量,由此判

28、斷芹菜葉黃酮的光及熱穩(wěn)定性。芹菜葉總黃酮保存率(%)(處理后溶液中總黃酮含量/處理前溶液中總黃酮含量)1002.4 提取物中黃酮類物質(zhì)的鑒定2.4.1 紅外光譜掃描 取少量蘆丁粉末與少量在最佳提取條件下干燥后的粉末進行壓片，進行紅外掃描。2.4.2 紫外可見光譜掃描第3章 結(jié)果與討論3.1 單因素試驗3.1.1 乙醇濃度對得率的影響準確稱取脫脂后的芹菜葉粉末0.5 g,分別加入50mL的水以及不同濃度的乙醇在60下浸提2h過濾,濾液按方程(2)測定總黃酮提取率。實驗結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明,在較低濃度條件下,隨著乙醇濃度的增加,芹菜葉總黃酮的提取率逐漸提升,到65%的乙醇為溶劑時,總黃酮的提取率

29、達到峰值,之后,總黃酮的得率隨著乙醇濃度的增加而降低。因此,選擇65%乙醇為最佳溶劑濃度。3.1.2 超聲波功率對得率的影響準確稱取脫脂后的芹菜葉粉末0. 5g，加入40mL65%乙醇,在60下超聲功率分別為0、50W、60W、70W、80W、90W和100W時超聲提取10min，過濾，濾液按方程(2)測定總黃酮提取率。實驗結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明隨著使用超聲波輔助提取,總黃酮的提取率在增加，而到50W之后，總黃酮提取率隨著超聲功率的增大而降低。因此50W為最佳提取功率。由于試驗儀器的影響，最低的超聲波提取功率只能設定在50W。3.1.3 超聲波時間對得率的影響準確稱取脫脂后的芹菜葉粉末0. 5

30、g，加入40mL 65%乙醇,在60、超聲功率為60W時分別超聲提取5min、10min、20min、30min和40min，過濾，濾液按方程(2)測定總黃酮得率。實驗結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明，隨著時間的增加,總黃酮提取率增加,但在10min時候達到峰值，之后隨著時間的增加,總黃酮提取率降低。所以選擇10min為最佳的提取時間。3.1.4 提取溫度對得率的影響準確稱取脫脂后的芹菜葉粉末0. 5 g，加入40mL 65%乙醇,分別在20、40、50、60、70和78下，超聲功率為60W時超聲提取10min,過濾,濾液按方程(2)測定總黃酮得率。實驗結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明,超聲提取溫度為20至60時

31、,總黃酮得率隨著溫度的升高而增加,而60之后隨著溫度的升高,總黃酮提取率降低。因此,選擇60為最佳的超聲提取溫度。3.1.5 料液比對得率的影響準確稱取脫脂后的芹菜葉粉末0. 5g，分別加入65%乙醇10mL、20mL、30mL、40mL和50mL，在60、超聲功率為60W時超聲提取10min,過濾,濾液按方程(2)測定總黃酮得率。實驗結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明,總黃酮提取率隨料液比增大而增大,在料液比為180時為最大值,隨后減小。3.2 正交試驗為了全面考察超聲波輔助提取的最佳工藝參數(shù)，在單因素實驗的基礎(chǔ)上,選擇65%乙醇為最佳提取溶劑,以超聲功率,超聲提取溫度,料液比和超聲提取時間這4種因素進

32、行L9(34)正交試驗，確定最優(yōu)方案，結(jié)果見表。從表中極差數(shù)據(jù)可知,超聲功率,超聲提取溫度,料液比和超聲提取時間這4種因素對總黃酮提取率影響的主次順序為：料液比超聲波提取溫度超聲提取時間超聲提取功率，最佳的提取條件為65%乙醇濃度，超聲功率為55W，超聲提取溫度為50，料液比為180，超聲提取時間為10min，最佳提取條件下所得的黃酮類化合物的得率為0.221%。試驗號ABCD黃酮得率111110.212220.31 3330.421230.522310.623120.731320.832130.933210.K10.0.0.0.K20.0.0.0.K30.0.0.0.k10.0.0.0.k2

33、0.0.0.0.k30.0.0.0.極差R0.0.0.0.因素主 次料液比提取溫度超聲波提取時間超聲波功率最優(yōu)方案55W50度8010min來源: 虛構(gòu)數(shù)據(jù)，僅用作圖表示例3.3 穩(wěn)定性的研究3.3.1 光照對芹菜葉黃酮穩(wěn)定性的影響分別準確稱取3份芹菜葉粉末0.5g，于正交試驗最佳提取條件下進行提取，定容后按標準方程測其初始吸光度，并將裝有提取液的3支容量瓶，1支置于日光下照射，另2支分別在室內(nèi)自然光下和暗箱藥品柜中放置,每隔1d測其吸光度，共測定4次，并將每天測得的吸光度值與初始吸光度對比分別計算，得出黃酮的保存率含量。由圖可知，黃酮提取液在日光、自然光、避光下放置2d，其黃酮提取液保存率分

34、別為93.6%，94.3%，94.3%，放置4d，其黃酮保存率分別為81.5%，87.2%，91.5%?？梢?，日光對芹菜黃酮穩(wěn)定性有一定影響,自然光對芹菜黃酮的穩(wěn)定性影響不大,避光條件下芹菜黃酮的穩(wěn)定性較好。3.3.2 加熱時間對芹菜葉黃酮穩(wěn)定性的影響準確稱取芹菜葉粉末0.5g，于正交試驗最佳提取條件下進行提取，定容后按標準方程測其初始吸光度，并將裝有提取液容量瓶放在水浴鍋中進行加熱，分別在20、30、40、50、60、70、80、90測量其吸光度，與初始吸光度對比分別計算，得出黃酮的保存率含量。 由圖可知，在2060下，熱對芹菜黃酮的穩(wěn)定性幾乎沒有影響，在70是保存率為78.3%，在70以上

35、時分解加速，90時保存率為58.9%。說明高溫對芹菜黃酮穩(wěn)定性具有影響。3.3.3 pH對芹菜葉黃酮穩(wěn)定性的影響以檸檬酸-檸檬酸鈉為緩沖體系，研究了不同pH值對芹菜總黃酮熱穩(wěn)定性的影響。實驗結(jié)果見圖。由圖可見，芹菜總黃酮的熱穩(wěn)定性隨pH值增大而減弱。因此，在利用芹菜總黃酮加工保藏食品時，在食品感官品質(zhì)允許的情況下，應盡量采用較低的pH值。3.4 黃酮類化合物的鑒定3.4.1 紅外掃描光譜蘆丁的結(jié)構(gòu)中含有各種具有紅外吸收的官能團，其中-OH基團在36503500cm-1處峰形尖，吸收強。當-OH基團濃度大時，波峰移至35003200處，峰形較寬。其中的芳環(huán)在16201480cm-1處具有4個波峰

36、，15001480 cm-1最強，16201590 cm-1其次，1580 cm-1較弱，450 cm-1常觀測不到。-C=O基團在16001850 cm-1具有吸收峰。-CH基團在27003000 cm-1具有吸收峰。由圖像可知，在32003500 cm-1處，具有較強的吸收值且波形較寬，說明有大量-OH基團存在。在14711519 cm-1處具有一個明顯的吸收峰，說明物質(zhì)中含有芳環(huán)。在18562956 cm-1處有一個較小的吸收峰，說明有-CH鍵的存在。在1647 cm-1處具有一個吸收峰，說明有-C=O基團存在。圖中粗品的曲線的吸收峰在32003500 cm-1處、14711519 cm

37、-1處、18562956 cm-1處、1647 cm-1處同樣出現(xiàn)，但峰形并沒有蘆丁曲線尖，說明次樣品中含有黃酮類物質(zhì)。由圖像可知，圖中正交后的曲線在32003500 cm-1處、14711519 cm-1處、18562956 cm-1處、1647 cm-1處仍然出現(xiàn)波峰，說明正交后樣品中含有黃酮類物質(zhì)，并且在正交干燥后的樣品中的黃酮已經(jīng)被提取走，較原先的含量已明顯減少，證明超聲波輔助提取技術(shù)有效的增加的黃酮類物質(zhì)的提取含量。1、標題層次畢業(yè)設計（論文）的全部標題層次應有條不紊，整齊清晰。相同的層次應采用統(tǒng)一的表示體例。章節(jié)編號方法應采用分級阿拉伯數(shù)字編號方法，第一級為“第1章”、“第2章”、

38、“第3章”等，第二級為“2.1”、“2.2”、“2.3”等，第三級為“2.2.1”、“2.2.2”、“2.2.3”等，兩級之間用下角圓點隔開，每一級的末尾不加標點，后空一格書寫標題。分級以少為宜，根據(jù)實際需要選擇。層次要求統(tǒng)一，但若節(jié)下內(nèi)容無需列條的，可直列款、項。層次用到哪一層次視需要而定。標題書寫：各層標題均單獨占行書寫。第一級標題（章）用小3號宋體字加粗、居中；第二級標題（節(jié)）用小4號黑體字、居左頂格書寫；第三級標題用小4號宋體字、居左頂格書寫。正文與參考文獻正文用小4號宋體字；圖表字號采用5號宋體字。2、標點符號畢業(yè)設計（論文）中的標點符號應按新聞出版署公布的“標點符號用法”使用。3、

39、引用文獻引用文獻標示方式應全文統(tǒng)一，并采用所在學科領(lǐng)域內(nèi)通用的方式，置于所引內(nèi)容最末句的右上角，用小5號宋體字。所引文獻編號用阿拉伯數(shù)字置于方括號中，如：“成果1”。當提及的參考文獻為文中直接說明時，其序號應該用小4號字與正文排齊，如“由文獻2,68可知”。不得將引用文獻標示置于各級標題處。4、名詞、名稱科技名詞術(shù)語及設備、元件的名稱，應采用國家標準或部頒標準中規(guī)定的術(shù)語或名稱。標準中未規(guī)定的術(shù)語要采用行業(yè)通用術(shù)語或名稱。全文名詞術(shù)語必須統(tǒng)一。一些特殊名詞或新名詞應在適當位置加以說明或注解。采用英語縮寫詞時，除本行業(yè)廣泛應用的通用縮寫詞外，文中第一次出現(xiàn)的縮寫詞應該用括號注明英文全文。外國人名

40、一般采用英文原名，按名前姓后的原則書寫。一般很熟知的外國人名（如牛頓、達爾文、馬克思等）可按通常標準譯法寫譯名。5、量和單位量和單位必須采用中華人民共和國的國家標準GB3100GB3102-93。非物理量的單位，如件、臺、人、元等，可用漢字與符號構(gòu)成組合形式的單位，例如：件/臺、萬元/km、萬tkm等。6、外文字母的正、斜體用法按照GB3100GB3102-86及GB7159-87的規(guī)定，即物理量符號、物理常量、變量符號用斜體。計量單位等符號均用正體。7、數(shù)字畢業(yè)設計（論文）中的測量統(tǒng)計數(shù)據(jù)一律用阿拉伯數(shù)字，但在敘述不很大的數(shù)目時，一般不用阿拉伯數(shù)字，如“八顆小行星”、“三力作用于一點”，不宜

41、寫成“8顆小行星”、“3力作用于1點”。大約的數(shù)字可以用中文數(shù)字，也可以用阿拉伯數(shù)字，如“約一百二十人”，也可寫成“約120人”。8、注解畢業(yè)設計（論文）中有個別名詞或情況需要解釋時，可加注說明，注解可用頁末注（將注文放在加注頁的下端）或篇末注（將全部注文集中在文章末尾），而不可行中注（夾在正文中的注）。9、公式公式應居中書寫，公式的編號按章編排，用圓括號括起放在公式右邊行末，公式和編號之間不加虛線。10、插表插表的表序一般按章編排，如第一章第一個插表的序號為“表1-1”等。表序與表名之間空一格，表名中不允許使用標點符號，表名后不加標點。表序與表名置于表上，表序、表名、表格內(nèi)容均用5號宋體字居

42、中書寫。表頭設計應簡單明了，盡量不用斜線。全表如用同一單位，將單位符號移至表頭右上角，加圓括號。表中數(shù)據(jù)應正確無誤，書寫清楚。數(shù)字空缺的格內(nèi)加“”字線（占2個數(shù)字），不允許用“”、“同上”之類的寫法。表內(nèi)文字說明，起行空一格、轉(zhuǎn)行頂格、句末不加標點。表格位于正文中引用該表格字段的后面。11、插圖插圖應與文字緊密配合，文圖相符，內(nèi)容正確。選圖要力求精練。每個圖均應有圖題（由圖號和圖名組成）。圖號按章編排，如第一章第一圖的圖號為“圖1-1”等。圖號和圖題應放在圖位下方居中處。圖題和圖內(nèi)均用5號宋體字書寫。圖名在圖號之后空一格排寫。引用圖應說明出處，在圖題右上角加引用文獻號。圖中若有分圖時，分圖號用

43、a)、b)等置于分圖之下。插圖與其圖題為個整體，不得拆開排寫于兩頁。插圖處的該頁空白不夠排寫該圖整體時，可將其后文字部分提前排寫，將圖移至次頁最前面。有數(shù)字標注的坐標圖，必須注明坐標單位。照片圖均應是原版照片粘貼，不得采用復印方式。照片可為黑白或彩色，應主題突出、層次分明。清晰整潔。反差適中。照片采用光面相紙，不宜用布紋相紙。插圖不得采用復印件，不得徒手畫。對于復雜的引用圖，可采用數(shù)字化儀輸入計算機打印出來的圖稿。12、頁眉頁腳設置頁眉：奇數(shù)頁書寫“安徽工程科技學院畢業(yè)設計（論文）”，用宋體小五號書寫；偶數(shù)頁書寫“學生姓名：課題題目”，用宋體小五號書寫。頁腳：頁碼居中，形式為“-1-”，用Ti

44、mes New Roman字體小五號書寫。（用時請連此提示一起刪除紅色提示）結(jié)論與展望結(jié)論本實驗獲得了超聲波法提取芹菜葉中黃酮類化合物的最優(yōu)預處理及提取條件。回顧近兩個月的實驗工作，從把新鮮的芹菜葉制成粉末，再經(jīng)進一步提取得到黃酮類物質(zhì)，從單因素實驗一直到正交實驗，這其中的每一步都是至關(guān)重要的，來不得半點虛假?，F(xiàn)在實驗已經(jīng)結(jié)束了，實驗結(jié)果是最能證明實驗效果的。在本次研究中，綜合上述實驗結(jié)果及圖表分析可知，超聲波輔助提取芹菜葉中黃酮類化合物的最優(yōu)工藝條件并最終確定最佳工藝條件為:乙醇濃度為65%,超聲功率為55W,超聲提取溫度為50,料液比為180,超聲提取時間為10min,采用該最佳提取工藝,

45、總黃酮的得率可達0.221%。各種因素對提取效果影響的主要順序依次為：料液比提取溫度超聲波時間超聲波功率。通過方差分析檢驗可知，料液比對黃酮類化合物的提取影響最為顯著。采用超聲波輔助提取芹菜葉中黃酮類化合物，可大大縮短提取時間，避免因提取時間過長而造成的黃酮氧化損失，提取率較高、成本低、投資少、適宜大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。展望目前，人們越來越重視保健食品，注重天然植物的活性成分對疾病的預防作用，更注重飲食對健康的重要性。鑒于黃酮類化合物對人體具有重要的生理功能，黃酮的提取就顯得日益重要。黃酮類化合物作為非常有前途的功能性天然抗氧化劑，加上其具有資源豐富，安全無毒等優(yōu)點，對人體保健有十分重要的意義，其

46、價值也在不斷受到人們的關(guān)注，無論是作為醫(yī)藥產(chǎn)品還是食品添加劑，都具有很大的市場潛力。但是如將其作為人體食用的物質(zhì)，提取出的黃酮類化合物的安全性必須引起人們的注意。目前，有機溶劑提取難免會在成品黃酮類化合物中有殘留，大多有機溶劑都是對人體有害的。因此，在成品的最后精致過程中要制定標準的測定方法，保證它的安全性。要求作者根據(jù)設計實驗過程中所獲得全部材料，經(jīng)過分析、判斷、歸納等邏輯處理，得出正確的學術(shù)觀點、總的見解，結(jié)論必須準確、完整、扼要地表明以下內(nèi)容：1）通過本課題找到了什么規(guī)律，解決了什么理論和實際工程上技術(shù)問題；2）對前人相關(guān)的看法和做法作了何修正、補充、創(chuàng)新、證實與否定；3）本課題存在的不足及其完善的可能方向；4）本課題繼續(xù)開展工作的價值。論文的結(jié)論與展望應單獨作為一章排寫，但不加章號。內(nèi)容一般在2000字以內(nèi)。（用時請連此提示一起刪除紅色提示）致 謝本實驗是在黃曉東導師的悉心指導下完成的。在此論文完成之際，首先致以最誠摯的謝意！大學四年來，黃老師淵博的專業(yè)知識、嚴謹?shù)闹螌W態(tài)度、開朗的性格以及和藹友善的待人深深的影響著我，這將是一筆精神財富讓我終身受益。在論文的選題、試驗方案的設計、試驗結(jié)果的分析討論、論文的撰寫、審閱和定稿都傾注了導師的大量心血和時間，并指出很多錯誤之處，提出了具體的改進意見。特別是在論文審