中藥感舒體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)研究

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減中藥感舒體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)研究(作者：?jiǎn)挝唬亨]編：)作者：林彥君，繆舒益李佳川張彥燕【摘要】 目的通過(guò)感舒的體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)，觀察其抗菌作用，為其治 療上呼吸道感染性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法金黃色葡萄球菌和肺炎鏈 球菌分別培養(yǎng)18h增殖后，用5%干酵母溶液稀釋成不同濃度，分別 對(duì)小鼠體內(nèi)腹腔注射，選用80%100%致死率的金黃色葡萄球菌和 肺炎鏈球菌的5%干酵母溶液，感染給藥小鼠，觀測(cè)給藥小鼠在染菌 后7 d內(nèi)的平均存活天數(shù)和死亡率。結(jié)果中藥感舒的1.00，0.50，0.25 g/kg劑量均能不同程度的抑制金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌感染小 鼠的死亡率并延長(zhǎng)平均存活天數(shù)。

2、結(jié)論中藥感舒具有一定的體內(nèi)抗菌 作用，與臨床治療上呼吸道感染效果相符?！娟P(guān)鍵詞】 感舒；體內(nèi)抗菌； 金黃色葡萄球菌； 肺炎鏈球菌Abstract : ObjectiveThe antibacterial effect of Ganshu in infected mice was studied in order to provide experime ntal evide nee for its cli nical applicati on. MethodsStaphylococcusaureus (SA) andStreptococcus pneumoniae (SP) were cultu

3、red for 18 hours, and then 5% yeast liquor was added each of them to a suitable level which made 80% 100% in fected mice death. Then each of the suitable bacterial liquor were inocutated into the abdominal cauity of mice who had give n corresp onding medic ines for 3 days. Death rate and average sur

4、vival time were both observed and an alyzed within 7 days after in efected. ResultsGanshu high dose , middle dose and low dose could all depress the death rate and len gthe n the average survival time of mice in fected by SA and in fected by SP. Con clusi on The 3 doses of Gan shu have remarkable ef

5、fect on mice infected by SA and SP, showing its antibacterial effect in vivo.Key words : Traditional Chinese medicine; Antibacterial effect in vivo; Staphylococcus aureus; Streptococcus pn eum oniae感舒主要由魚腥草、麻黃、甘草等組成，具有清熱解毒之功效，臨 床上主要用于外感風(fēng)熱所致發(fā)熱、咽喉腫痛、咳嗽等上呼吸道感染。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，上呼吸道細(xì)菌感染以肺炎球菌、溶血性鏈球菌、 葡萄球菌和流感嗜血桿

6、菌等為多見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中藥感舒對(duì)金黃色葡 萄球菌和肺炎鏈球菌進(jìn)行了體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)。1材料1.1藥物中藥感舒由成都中醫(yī)藥大學(xué)提供，臨床成人每日用量為 3g。雙黃連口服液，由哈藥集團(tuán)三精制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào) 07031324。頭孢拉定膠囊，由江蘇亞邦強(qiáng)生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：0612261.2動(dòng)物KM小鼠，體重為（20i2） g，雌雄各半，由四川省醫(yī)學(xué) 科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)合格證號(hào)為SCXK （川） 2004-15。1.3菌株金黃色葡萄球菌臨床分離株 MSSA05-4，肺炎鏈球菌S-1， 由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院提供。1.4試劑與設(shè)備干酵母（上海長(zhǎng)琪貿(mào)易有限公司，批號(hào)2006012

7、5 ）。 超凈工作臺(tái)（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司，N0.20010406）,WH-2微型 旋渦混合儀（上海瀘西分析儀器廠），立式自動(dòng)電熱壓力蒸氣滅菌器 （LDZX-40BI型，上海申安醫(yī)療器械廠）。1.5統(tǒng)計(jì)方法死亡數(shù)據(jù)為分類資料，用 SPSS13.0 for windows 統(tǒng) 計(jì)軟件的fisher exact test檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2方法與結(jié)果2.1中藥感舒對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護(hù)作用2.1.1預(yù)試驗(yàn)將金黃色葡萄球菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng) 18 h 后1，進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)2，計(jì)數(shù)結(jié)果為9.2 X109 CFU/ml，4C冷 臧待用。選取小鼠36只，隨機(jī)分為6組，每組6只，雌雄各半，

8、分別為5 個(gè)菌液稀釋組和一個(gè)對(duì)照組。每組分別腹腔注射以5%干酵母3 生理鹽水溶液稀釋的菌溶液（稀釋度分別為10-1，10-2，10-3，10-4， 10-5） （0.5ml/只）以及5%干酵母生理鹽水溶液（0.5 ml/只）作為對(duì)照， 觀察染菌后2 d內(nèi)動(dòng)物的死亡率，并選取感染死亡率為在80%100%的稀釋濃度作為正式實(shí)驗(yàn)的感染菌液濃度4。預(yù)試結(jié)果：5%干酵母對(duì)照組無(wú)動(dòng)物死亡，10-4稀釋濃度的菌液（即 菌落濃度為9.2 X105 CFU/ml）致死率為83.33%，確定為本次實(shí)驗(yàn) 感染的菌液濃度。2.1.2正式實(shí)驗(yàn)選取健康小鼠140只，體重為1822 g , 雌雄各半，隨機(jī)分為7組，即空白對(duì)

9、照組、模型對(duì)照組、雙黃連對(duì)照 組、頭孢拉定對(duì)照組，感舒高劑量組、感舒中劑量組和感舒低劑量組。 各組動(dòng)物按劑量連續(xù)灌胃給藥 3d （空白對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等 量蒸餾水，頭孢拉定對(duì)照組在感染菌前1 d開(kāi)始給藥1次），1次/d。感染前小鼠禁食12 h，第3天，給藥后30 min，根據(jù)菌株毒力的預(yù) 試情況選用使80%100%小鼠死亡的金黃色葡萄球菌的干酵母懸 液（9.2 X105 CFU/ml） 0.5 ml/只，給小鼠腹腔注射造成感染（空白 對(duì)照組注射等量干酵母生理鹽水溶液）。感染后6h再給藥1次，繼 續(xù)給藥1 d :5，觀察和記錄各組動(dòng)物感染后 7d內(nèi)的反應(yīng)情況以及 死亡數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1。2.1

10、.3結(jié)果結(jié)果表明，與空白組對(duì)照比較，模型對(duì)照組的動(dòng)物死亡 率為83.3% （P0.01 ），表明濃度為9.2 X105 CFU/ml金黃色葡萄球菌 的干酵母懸液能明顯引起小鼠死亡，造模成功。與模型對(duì)照組比較， 兩個(gè)陽(yáng)性藥組，即雙黃連口服液組與頭孢拉定組死亡率明顯降低（P0.05或P0.01 ），且平均存活天數(shù)要明顯增加；感舒高、中、低 各劑量組死亡率明顯降低（P0.05或P0.01 ），且平均存活天數(shù)較模 型組小鼠要明顯增加。提示感舒具有對(duì)抗金黃色葡萄球菌對(duì)小鼠感染 致死的作用，顯示了其一定的體內(nèi)抗菌作用。表1感舒對(duì)金葡菌感染小鼠的保護(hù)作用與空白對(duì)照組比較，D0.05 ,0.01 ;與模型對(duì)照

11、組比較，*P0.05 ,*P0.01 ; n=182.2中藥感舒對(duì)肺炎鏈球菌感染小鼠的保護(hù)作用2.2.1預(yù)試驗(yàn)方法同“2.1.1 ”項(xiàng)下。預(yù)試結(jié)果：5%干酵母對(duì)照組無(wú)動(dòng) 物死亡，10-4稀釋濃度的菌液(即菌落濃度為 6.3 X106 CFU/ml )致 死率為85.7%，符合致死率在80%100%之間試驗(yàn)菌液感染要求， 確定為本次實(shí)驗(yàn)感染的菌落濃度。2.2.2正式實(shí)驗(yàn)方法同“2.1.2 ”項(xiàng)下。見(jiàn)表2。2.2.3結(jié)果表2結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組的動(dòng)物死亡率為90.0% (P0.01 )，表明濃度為6.3 X106 CFU/ml肺炎鏈球菌 的干酵母懸液能明顯引起小鼠死亡，造模成功。

12、與模型對(duì)照組比較， 雙黃連對(duì)照組和頭孢拉定對(duì)照組小鼠的死亡率明顯降低(P0.01 )，且平均存活天數(shù)增加；感舒3個(gè)劑量組的小鼠死亡率均明顯降低(P0.01 )，且平均存活天數(shù)均增加。提示感舒對(duì)肺炎鏈球菌致小鼠感 染死亡具有明顯的保護(hù)作用，顯示了感舒具有一定的體內(nèi)抗菌作用。 表2感舒對(duì)肺炎鏈球菌感染小鼠的保護(hù)作用與空白對(duì)照組比較，P0.05，/P0.01 ;與模型對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01 ; n=203討論體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)2，也即藥物對(duì)感染動(dòng)物的預(yù)防和保護(hù)作用研究， 不僅能反映藥物對(duì)細(xì)菌固有的直接作用，還能反映藥物對(duì)機(jī)體反應(yīng)性 的影響，特別是非特異抵抗力的影響、藥物達(dá)到感染部位的能力、

13、機(jī) 體對(duì)藥物的滅活和代謝等，因此體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)是最重要的抗菌作用的 研究方法，很多情況下是判定藥物有無(wú)臨床價(jià)值的抗菌作用的最主要 的指標(biāo)，故體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)對(duì)于研究中藥的抗微生物作用有重要的意 義。我們經(jīng)過(guò)多次預(yù)實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)小鼠體內(nèi)感染金黃色葡萄球菌和肺 炎鏈球菌的急性死亡期主要集中在 48h之內(nèi)，之后存活小鼠可逐漸 恢復(fù)健康，在正式實(shí)驗(yàn)前，可提前2天進(jìn)行細(xì)菌致死濃度的預(yù)試，過(guò) 早預(yù)試會(huì)導(dǎo)致菌液放置過(guò)久而毒力改變，同時(shí)動(dòng)物飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而導(dǎo) 致動(dòng)物個(gè)體差異過(guò)大；過(guò)晚預(yù)試則來(lái)不及觀察細(xì)菌的毒力情況。因此， 選擇正式實(shí)驗(yàn)前兩天進(jìn)行預(yù)試比較合適。另外，死亡動(dòng)物尸解發(fā)現(xiàn)， 金黃色葡萄球菌還可以引起明顯的小鼠小腸炎性壞死，肺炎鏈球菌可引起肺部感染壞死，但此2項(xiàng)指標(biāo)是否能作為今后體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)的客 觀指標(biāo)有待進(jìn)一步研究。感舒為純中藥復(fù)方制劑，實(shí)驗(yàn)表明該藥對(duì)金黃色葡萄球菌和肺炎鏈 球菌感染均具有不同程度的保護(hù)作用，顯示了其具有一定的體內(nèi)抗菌 作用。同時(shí)，在另一實(shí)驗(yàn)中，觀察了該藥對(duì)鼠流感病毒FM1株感染小鼠肺指數(shù)的影響，結(jié)果顯示給藥組小鼠肺充血水腫等炎性病變減 輕，肺指數(shù)明顯降低，顯示了其一定的體內(nèi)抗病毒作用，均與其臨床 上治療上呼吸道感染性疾病效果相符?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】:1錢存柔，黃儀秀微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程M 北京:北京大學(xué)出版社，1999.