ATN-100型定氮儀-操作手冊(共4頁)

1、ATN-100型定氮儀（蛋白質(zhì)測定儀）操作說明手冊一、 概述蛋白質(zhì)的測定方法，目前仍以1883年凱達(dá)爾氏(Kiedahl)發(fā)明的定氮法為基礎(chǔ)，它根據(jù)各種蛋白質(zhì)都具有固定比數(shù)的氮這一事實(shí)，通過對氮的測定而推算出蛋白質(zhì)含量，此法所得的含氮量除了確定屬于蛋白質(zhì)組成成分的氮以外，還包括非蛋白質(zhì)組成的其他有機(jī)及無機(jī)態(tài)氮，所以換算所得的蛋白質(zhì)含量稱作為粗蛋白含量，一般蛋白質(zhì)中的含量為18%，換算后即每6.25克蛋白質(zhì)中含有1克氮，因此6.25成為換算系數(shù)K，但是不同的農(nóng)產(chǎn)品及其制品的實(shí)際含氮量有區(qū)別，所以不同農(nóng)產(chǎn)品必須采用不同的換算系數(shù)，如花生、大豆、蠶豆、大麥、小麥、燕麥、黑麥等含氮為17.6%，求得K

2、=5.7，蕎麥、葵花籽、亞麻籽、大麻籽、棉花籽、蓖麻籽等換算系數(shù)則為K=5.50，玉米、菜籽為6.00，水稻為5.95，上述以外的其他農(nóng)產(chǎn)品的換算系數(shù)均適用6.25。盡管如此，目前世界上還沒有直接分離測定含蛋白質(zhì)的可行方法。因此，迄今為止在國內(nèi)外凱氏定氮法仍然是測定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法。所得結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定。我公司研制生產(chǎn)的ATN-100型定氮儀（蛋白質(zhì)測定儀），是引進(jìn)消化吸收國內(nèi)外檢測新技術(shù)，結(jié)合我國國情，應(yīng)用凱氏定氮法原理，采用化學(xué)與物理學(xué)相結(jié)合完成的成套蛋白質(zhì)含量快速測定裝置。為糧食、食品、飼料、農(nóng)業(yè)、商檢等檢測部門提供了理想的檢測設(shè)備。二、 工作原理ATN-100型定氮儀檢測原理為：消化

3、取樣計(jì)算滴定蒸餾整套裝置，由電加熱消化器、蒸餾器兩部分組成。要提高蛋白質(zhì)含量測定的檢測速度，其關(guān)鍵是要加速樣品消化煮解的時(shí)間，KDN系列定氮儀消化裝置采用井式電加熱爐，增大了消化管受熱面，使消化管連同管內(nèi)所注入的10ml H2SO4及試樣置入消化管插入井式爐內(nèi)加熱取得更佳的熱效應(yīng)，在消化前置入硒片作為催化劑進(jìn)一步加速消化煮解，大大縮短消化時(shí)間。消化管內(nèi)溢出的SO2等有害氣體，通過消化管上的排污管經(jīng)抽吸泵由水帶入下水道，有效的抑制有害氣體的外逸，由省略了實(shí)驗(yàn)室中安裝毒氣通風(fēng)櫥，試樣經(jīng)40分鐘左右消化煮解，即可完全消化。消化的過程主要反應(yīng)如下：RCHNH2COOH + H2SO4 CO2 + SO

4、2 + NH3 + H2O2NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4蒸餾與吸收過程的主要反應(yīng)如下：(NH4)2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2NH3 + 2H2ONH3 + 4H3BO3 NH4HB3O7 + 5H2O然后經(jīng)滴定，計(jì)算蛋白質(zhì)含量，滴定的過程是鹽酸和硼酸氫銨反映的過程。NH4HB3O7 + HCl + 5H2O NH4Cl + 4 H3BO3三、 技術(shù)參數(shù)1 測定品種：糧食、食品、飼料、釀造、土壤、制糖、乳制品、藥物等物質(zhì)2 測定范圍：含氮量0.05%90% ( 0.1200mg)3 測定數(shù)量：消化：一次同時(shí)消化個(gè)數(shù)按爐孔數(shù)定；單個(gè)蒸餾4 測定時(shí)間：消化每批45mi

5、n；蒸餾每個(gè)6min5 測定重現(xiàn)性：平行試驗(yàn)結(jié)果符合GB/T 6432-946 電源：220V，50Hz四、 使用說明1 其他儀器和用具11分析天平：感量0.0001g12實(shí)驗(yàn)室用粉碎機(jī)或研缽13酸式滴定管：25ml或10ml14錐形瓶：容積250ml15分樣篩：孔徑0.45mm(40目)2試劑21鹽酸(HCl)：分析純(GB622) 0.05mol/L標(biāo)準(zhǔn)液，(4.2ml鹽酸，注入1000ml蒸餾水)碳酸鈉法標(biāo)定鹽酸。22氫氧化鈉(NaOH)：化學(xué)純或工業(yè)純(GB629)、40g溶于蒸餾水中溶成100ml，配成40%水溶液(m/v)。23硼酸(H3BO3)：分析純(GB628)2g，溶于蒸餾

6、水中配成100ml2%水溶液(m/v).24混合指示劑：甲基紅(G5H15N3O2)(HG3-958)溶于乙醇配成0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠(HG3-1220)溶于乙醇配成0.5%乙醇溶液，二種溶液等體積混合，陰涼處保存(保存期三個(gè)月以內(nèi))。25硫酸銅(CuSO45H2O)分析純(GB655)10g；硫酸鉀(K2SO4) (HG3-920)分析純150g，在研缽中研磨，仔細(xì)混勻后過40目篩(加速劑)。26濃硫酸(H2SO4)化學(xué)純(GB625)(含量98%、無氮)。3操作規(guī)程31樣品消化稱取經(jīng)粉碎通過40-60目/寸試樣0.5-1g(視含量而定)無損的置入已洗滌烘干的試管中加催化劑5g左右和1

7、0ml左右硫酸。將消化管分別放入消化架各個(gè)孔內(nèi)，然后置于消化爐上，開啟抽氣三通上連接的自來水龍頭，使抽氣三通處于吸氣狀態(tài)。接通電源，在加熱初始階段需注意觀測，防止試樣因急沸而飛濺。(初化時(shí)，選用電壓型控溫消化爐起初控制在150V左右，15分鐘左右后可滿電壓工作；選用數(shù)顯型消化爐起初控制在200度左右，20分鐘左右后再設(shè)定所需溫度。)消化結(jié)束后（消化液呈澄清透明狀），將消化管架移至冷卻架冷卻至40-50度左右。然后進(jìn)行下一步的蒸餾。32蒸餾ATN-100型定氮儀蒸餾器，堿液及蒸餾水采用內(nèi)置的電磁泵加入，NaOH、H2O注入接口用橡膠管套入后分別置入裝有NaOH、H2O的容器（自備）內(nèi)，加液時(shí)按面

8、板上相應(yīng)開關(guān)，液體經(jīng)電磁泵自動(dòng)流入消化管內(nèi)，加入毫升數(shù)視標(biāo)尺所注位置而定（一般堿液加入量是硫酸用量的5倍）。1打開電源，打開自來水龍頭，接冷卻水的龍頭不必開得過大，出水口有水流出即可，用排水管上的夾子夾緊排水管。打開面板上蒸汽開關(guān)，蒸餾水即自動(dòng)進(jìn)入蒸汽爐內(nèi)，達(dá)到一定液位后自動(dòng)停止進(jìn)水，進(jìn)入加熱狀態(tài)，待蒸汽管噴出蒸汽后關(guān)閉蒸汽開關(guān)。2在250ml三角接收瓶中加入50ml 2%H3BO3和2-3滴混合指示劑，并使接收瓶托盤往上移動(dòng)，使滴管浸入液面下。3向上扳動(dòng)蒸餾器側(cè)面紅色手柄把消化管固定在左邊的托架上，打開面板上H2O開關(guān)，向消化管內(nèi)注入蒸餾水；再打開NaOH開關(guān)，向消化管內(nèi)注入氫氧化鈉溶液，然

9、后開啟蒸氣開關(guān)，向試管內(nèi)注入蒸汽，進(jìn)行蒸餾，在接收瓶內(nèi)接收液達(dá)150ml左右時(shí)移下接收瓶，用蒸餾水沖洗滴管口繼續(xù)蒸餾半分鐘，然后關(guān)閉蒸氣開關(guān)等消化管內(nèi)停止冒泡時(shí)，取下接收瓶，待滴定用。4更換消化管，進(jìn)行下一個(gè)樣品的蒸餾。（執(zhí)行第2和第3步）5關(guān)機(jī)，所有的樣品蒸餾結(jié)束后關(guān)閉電源、水龍頭；打開排水夾子，蒸汽開關(guān)和進(jìn)水開關(guān)都打開，擦干凈機(jī)器。33滴定用標(biāo)定后的鹽酸溶液進(jìn)行滴定接收瓶內(nèi)的溶液，滴定溶液由綠色變?yōu)榈仙珵榻K點(diǎn)，記下消耗鹽酸溶液的毫升數(shù)，按下式計(jì)算蛋白含量：(V2-V1)C0.014KW 蛋白含量(%)=式中：V2滴定試樣時(shí)消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積 (ml) V1滴定空白時(shí)消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積

10、 (ml) C標(biāo)準(zhǔn)酸溶液的摩爾濃度 0.014氮的毫克當(dāng)量數(shù) K氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù) W試樣重量 (g)(空白測定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品做空白測定)平行測定的結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)后二位。34 換算系數(shù)結(jié)果報(bào)告中必須注明氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)，換算系數(shù)見下表。樣品名稱換算系數(shù)數(shù)據(jù)來源小麥5.70GB2905大麥5.70GB2905釀酒大麥6.25TOCT10846面粉5.70GB5009.5面包5.70AOAC14.103大豆6.25GB29055.71GB5009.5玉米6.25食品常用數(shù)據(jù)手冊6.24GB5009.5飼料6.25GB6432肉制品6.25GB5009.5乳制品6.38GB5009.5牛奶6.38ACAC16.036芝麻5.30GB5009.5油菜5.53油菜籽綜合利用35注意事項(xiàng)1消化時(shí)若有氣體外溢，加大抽氣三通連接的自來頭的壓力。消化密封圈每次試驗(yàn)結(jié)束后清洗一遍延長使用壽命。2每天工作完，把NaOH溶液外接的皮管移入蒸餾水瓶內(nèi)，前面套好消化管抽洗幾次，防止堿液殘留在堿泵內(nèi)而影響使用壽命，也可防止單向閥粘連，待下次使用時(shí)，在蒸餾樣品前需先排出100mlNaOH，以防稀釋NaOH，造成第一個(gè)樣品加入的堿液濃度不夠。3每次試樣蒸餾結(jié)束，必須迅速取下消化管，防止消化管液體倒吸至蒸發(fā)爐內(nèi)腐蝕電熱管。4用戶在遵守