CD147和VEGF―C在肺鱗癌、腺癌中的表達與臨床意義.doc

1、CD147 和 VEGF C 在肺鱗癌、腺癌中的表達與臨床意義摘要 目的本研究旨在探討CDl47 和 VEGF-C在肺鱗癌、腺癌中的表達水平與臨床病理之間的聯(lián)系以及相互關系。方法運用免疫組化的方法對57 例肺癌組織標本進行CDl47 和VEGF-C檢測。結果（1）57 例肺鱗癌、 腺癌中 CDl47 和 VEGF-C的陽性表達率分別為63.16%、66.67%。肺鱗癌組和腺癌組CDl47 和 VEGF-C表達無差異（ P0.05）。（ 2）肺鱗癌、腺癌中CDl47 和 VEGF-C表達與腫瘤淋巴結轉移有關（P0.05）。（ 3）CDl47 與 VEGF C 的表達呈正相關 （ x2=12.21

2、4，P400） 34 例。1.3 試劑兔抗人 CDl47 多克隆抗體， 兔抗人 VEGF-C多克隆抗體及PV-9000 二步法即用型試劑盒均從北京中杉金橋生物技術有限公司購買。1.4 方法免疫組化染色采用PV-9000 二步法，按照說明書操作步驟如下：（ 1）石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化。（ 2）用 3%H2O2 去離子水孵育10min ，阻斷內源性過氧化物酶。（ 3）根據(jù)一抗要求用微波加熱抗原修復。 （ 4）滴加一抗，濕盒中37兩小時，PBS沖洗，2min 3 次。（ 5）滴加試劑 1，室溫孵育 20min ，PBS沖洗 2min 3 次。（ 6）滴加試劑 2，室溫孵育 30min ，PBS沖洗

3、2min 3 次。（ 7）用 DAB 溶液顯色。（8）蘇木精復染后，脫水，透明，封片。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，用已知陽性對照片作陽性對照。1.5CD147 和 VEGF-C結果判定CDl47 以細胞膜和（或）細胞質呈黃色為陽性，VEGF-C陽性染色主要為細胞質內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。每張切片隨機觀察 5 個高倍視野（400 倍），每個視野計數(shù)100 個細胞，計算陽性細胞數(shù)。CDl47 綜合染色強度和陽性染色細胞占癌細胞總數(shù)的比例進行判斷。 （ 1）按切片中細胞著色深淺評分：0 分細胞無著色；1 分為黃色； 2 分棕黃色； 3 分為棕褐色。（2）按陽性細胞數(shù)占癌細胞總數(shù)的比例評分：1

4、分為 50%且75%；4 分為 75%。?。?1）、（ 2）兩項的乘積為總積分： 0 3 分為陰性； 3 分且 6 分為（+）；6 分且 9 分為（ +）；9分為（ +）。VEGF-C陽性強度判斷標準：癌細胞，脈管內皮細胞質呈棕黃色為染色陽性細胞。肺癌細胞VEGF-C表達強度：按癌細胞免疫組化染色著色深淺計分：0 分為無色， 1分為淡黃色， 2 分為棕黃色， 3 分為棕褐色。按陽性細胞所占百分比打分：陰性為0 分、陽性細胞51%為 3 分；染色強度與 -陽性細胞分比的乘積：02 分為， 3 4 分為 +、 5 7分+、 8 9 分+。染色結果有兩名病理醫(yī)師采用雙盲法評定，（ -/+ ）為低表達

5、，（ +/+）為高表達。1.6 統(tǒng)計學方法應用 SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用x2 檢驗和相關分析，并計算Pearson 列聯(lián)系數(shù)， P0.05）。在不同的細胞分化程度之間CDl47 和 VEGF-C的表達差異均無統(tǒng)計學意義（ P0.05）。CDl47 和 VEGF-C在有淋巴結轉移組的陽性率分別為（24/29 ） 82.76%、 82.76%（24/29 ），顯著高于無淋巴結轉移組42.86%（12/28 ）、50.00%（ 14/28 ）（ P 2.2CD147 與 VEGF-C在肺鱗癌、腺癌中的表達與臨床特征的關系CD147 和 VEGF-C在肺癌中的陽性表達與患者的年齡

6、、 性別及有無吸煙（吸煙指數(shù) 400）均無明顯地相關性。在 I+期組 CDl47和 VEGF-C的陽性率分別為 48.72%（19/39 ）、53.85%（21/39 ）；在 +期組分別為 94.44%（ 17/18 ）、 94.44%（ 17/18 ）。CDl47 和 VEGF-C在肺鱗癌、腺癌中的表達與腫瘤的臨床分期有密切關系（ P0.01）。見表 2。2.3CD147 和 VEGF-C在肺鱗癌、腺癌中的表達的相互關系57 例患者中， 36 例 CDl47 陽性表達中同時有 VEGF-C陽性表達 30 例；21 例 CDl47 陰性患者中，有 8 例 VEGF-C陽性表達。CDl47與 V

7、EGF-C的表達呈正相關 （ X2=12.214，P0.01）。見表 3。3.討論肺癌與其他實體腫瘤一樣具有侵襲和遠處轉移的生物學特性，而惡性腫瘤細胞的侵襲、轉移是多因素參與的交聯(lián)式多步驟反應的復雜過程。包括原發(fā)腫瘤浸潤、 基底膜降解、腫瘤細胞進出血管和腫瘤細胞對靶組織侵襲等環(huán)節(jié)。在這一復雜的過程中，細胞外基質的降解、腫瘤血管及淋巴管的生成對腫瘤細胞的侵襲轉移起著至關重要的作用。近年來對CDl47 與腫瘤的關系研究發(fā)現(xiàn)，CDl47 廣泛表達于人體多種細胞，在膀胱癌、肺癌、神經(jīng)膠質瘤、黑色素瘤、淋巴瘤，結直腸癌，子宮內膜癌等多種腫瘤細胞中表達增加。CDl47 可調節(jié)血管內皮生長因子而對腫瘤的血管

8、生成有促進作用，也可以刺激成纖維細胞產生金屬基質蛋白酶（MMP2 、 MMP9等），其通過水解型膠原破壞腫瘤細胞周圍的基底膜和調節(jié) VEGF而影響腫瘤細胞的生長、 浸潤和轉移。 Zheng 等在對胃癌的研究中發(fā)現(xiàn)， CD147 表達增強具有促進血管生成及VEGF表達的作用。黎明等在對膀胱移行細胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)患者都存在CD147 和 VEGF共同表達，且兩者呈正相關（ r=0.406 ，P0.01）。Tang 等在共培養(yǎng)的乳腺癌細胞和成纖維細胞中， CD147 過表達時 VEGF的表達上調；抑制 CD147的表達、中和CD147 蛋白的活性或抑制MMP 的活性，都會使 VEGF的表達受到

9、抑制。 Tang 等還對 VEGF產生過程中可能的信號通路如 P13K-Akt、MAPK、JUN、p38 激酶進行了研究。發(fā)現(xiàn)在 MDA-MB-231 乳腺癌細胞系中，過表達的CDl47 只能刺激 Akt 和 MAPK 的磷酸化，而不能刺激JUN 和 p38 激酶的磷酸化。而抑制 CDl47 的表達會抑制Akt 和 MAPK 的磷酸化。這些結果表明在腫瘤細胞和成纖維細胞中，CDl47 是通過P13K-Akt 途徑調節(jié)VEGF的表達。VEGF-C是 VEGF家族成員之一，是特異的促淋巴管內皮生長因子和腫瘤血管生成標志物，在促進腫瘤淋巴管和血管生成以及腫瘤轉移起重要作用。其受體有VEGFR-2（

10、FLK-1）和 VGEFR-3（fit-4 ）。 VEGF-C對 VEGFR-3（ fit-4 ）有更高的親和力，與之優(yōu)先結合， VEGF-C與 VEGFR-3結合后通過 MEK/ERK和 P13K-Akt 途徑引起淋巴管內皮細胞增生， VEGF-C蛋白水解后的成熟形式還可結合并激活 VEGFR-2，作用于血管、淋巴管內皮細胞。 近年來許多研究表明多種人類腫瘤表達VEGF-C，大部分中 VEGF-C表達上調，且與局部淋巴結轉移有關。本研究運用免疫組織化學方法對CDl47 在 57 例肺鱗癌、腺癌中的表達進行了分析。結果顯示 CDl47 和 VEGF-C在肺鱗癌和腺癌中高表達，陽性率分別為58.

11、70%（ 27/46 ）、81.82%（ 9/11 ）和 60.87%（28/46 ）、 90.91%（ 10/11 ），二者之間無顯著統(tǒng)計學差異。 CDl47 和 VEGF-C在有淋巴結轉移組的陽性率分別為 82.76%（ 24/29 ）、82.76%（24/29 ），顯著高于無淋巴結轉移組 42.86%（ 12/28 ）、50.00%（ 14/28 ）（ P0.05）；TNM分期 +期組的陽性率分別為 94.44%（17/18 ）、 94.44% （17/18 ）顯著高于 I+期組的 48.72%（ 19/39 ）、 53.85%（ 21/39 ）。 CDl47 和 VEGF-C的高表達與

12、有無淋巴結轉移及TNM 分期密切相關，而與患者年齡、性別、吸煙等臨床因素及腫瘤組織類型、細胞分化程度無明顯的相關性。本研究結果顯示有淋巴結轉移的患者和腫瘤后期的患者CDl47 和VEGF-C的陽性表達率明顯增高，說明CDl47 和 VEGF-C與肺鱗癌、腺癌的侵襲和轉移能力正相關。與王莉等對CDl47 的研究及陳蘇娟等對VEGF-C的研究結果一致。目前國內對CDl47和 VEGF-C的相互作用尚未見文獻報道。黎明等在對膀胱移行細胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)患者都存在CD147 和 VEGF共同表達，且兩者呈正相關。Tang 等試驗表明， CDl47 通過 P13K-AKT途徑調節(jié) VEGF的表達，從而加速腫瘤血管的生成。 VEGF-C是 VEGF家族成員之一，可以調節(jié)腫瘤血管及淋巴管的生成，其主要作用是促進腫瘤淋巴管的生成。在本研究中，筆者發(fā)現(xiàn)在肺鱗癌、腺癌中出現(xiàn)CDl47和 VEGF-C聯(lián)合表達的比例較高，在36 例 CDl47 陽性的病例中有 30 例 VEGF-C表達陽性，二者表現(xiàn)出明顯的正相關（ P0.01）