天然藥化 槲皮素

1、 目 錄任務(wù)書 21 正文 31.1 文獻綜述 31.1.1 槐米的歷史背景 31.1.2 槐米的來源，性狀及產(chǎn)地 31.1.3 槐米中的主要化學(xué)成分 41.1.4 槐米的藥理作用 51.1.5 槐米的研究進展 51.2 實驗方案設(shè)計 61.2.1 實驗?zāi)康?71.2.2 實驗意義 81.2.3 實驗原理 81.2.4 實驗流程 91.2.5 實驗步驟 91.2.6 實驗安排101.2.7 實驗預(yù)算 11參考文獻 13天然藥物化學(xué)課程實驗任務(wù)書一、 題目：槐米中槲皮素的提取分離及結(jié)構(gòu)鑒定二、 實驗任務(wù)1. 查閱文獻資料并寫出槐米化學(xué)研究進展的文獻綜述2. 設(shè)計實驗方案并進行可行性分析（方案應(yīng)包

2、括目的意義，設(shè)計原理、流程、實驗方法、時間安排、需要的儀器與試劑）。3. 對實驗材料進行性狀、顯微和理化鑒定并將鑒定結(jié)果寫入實驗報告中。4. 完成槲皮素單體化合物的分離及結(jié)構(gòu)鑒定，鑒定數(shù)據(jù)應(yīng)包括熔點、旋光度、紫外圖譜。5. 對所得數(shù)據(jù)進行分析6. 完成實驗報告并提交少量槲皮素樣品。三、 實驗要求1. 實驗中要求學(xué)生不完全依賴現(xiàn)成條件，能在教師指導(dǎo)下自己創(chuàng)造一些條件完成實驗。2. 實驗方法應(yīng)有一定的創(chuàng)新性。3. 實驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，須注明實驗條件。4. 要求提供的樣品袋上注明樣品名稱、熔點、旋光度、制備者姓名、日期四、 實驗報告內(nèi)容1. 題目2. 實驗?zāi)康?. 基本原理4. 實驗所用試劑、儀器的型號及

3、生產(chǎn)廠家5. 分離方法創(chuàng)新之處6. 自制或創(chuàng)造了那些實驗條件條件7. 實驗流程及操作方法8. 結(jié)果與分析9. 結(jié)論10. 在所完成實驗的基礎(chǔ)上提出一個新的研究課題11. 合理化建議槲皮素提取及結(jié)構(gòu)鑒定一文獻綜述1. 槲皮素及其衍生物是植物界分布廣泛，具有多種生物活性的黃酮類化合物。他存在于許多植物的花、葉、果實中，多以苷的形勢存在，如蘆丁、槲皮苷等，經(jīng)酸水解可得槲皮素。蕎麥的桿和葉、沙棘、山楂、洋蔥中含量較高。許多中藥如槐米、側(cè)柏葉、三七、銀杏等均含此成分。槲皮素在槐花米中含量高達4%左右，而且提取分離方法也較簡單。2. 槲皮素(Quercetin)：又名櫟精，槲皮黃素，Meletin Sop

4、horetin。分子式 C15Hl007，分子量302.23。黃色結(jié)晶(C15Hl0072H20)，mp313314(分解)，無水物mp316。溶于熱乙醇、冷乙醇、甲醇、乙酸乙酯、吡啶等；不溶于石油醚、苯、乙醚和氯仿，幾乎不溶于水。蘆丁(Rutin)又名蕓香苷，紫槲皮苷，維生素P，Rmoside Vi01aquercitrin，是槲皮素的3-O-蕓香糖苷，屬黃酮類物質(zhì)。分子式C27H30O16，分子量610.51,本品黃色或淡黃、綠色、極細微的針狀結(jié)晶或粉末，無臭、無味或微帶原植物的特殊氣味。在空氣中色漸變深，加熱到185-192即變?yōu)樽厣哪z狀體，約在215分解。難溶于冷水(1：8000)，

5、略溶于熱水(1：200)和冷乙醇(1：600)，溶于熱甲醇(1：7)、冷甲醇(1：100)和熱乙醇(1：30)，難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等；易溶于堿中呈黃色，酸化后復(fù)析出，也可溶于濃硫酸或濃鹽酸呈棕黃色，加水稀釋后復(fù)析出。3. 槲皮素的藥理作用及研究進展 90年代以來，有關(guān)槲皮素抗腫瘤、抗炎、抗血小板聚集、抗氧自由基、擴血管等作用的研究取得了可喜的進展，近年來發(fā)現(xiàn)槲皮素有抗多種病毒的作用. 抗腫瘤作用：槲皮素能顯著抑制促癌劑的作用，抑制離體惡性細胞的生長，抑制艾氏腹水癌細胞DNA/RNA和蛋白質(zhì)合成。構(gòu)效關(guān)系研究表明槲皮素B環(huán)上的鄰苯二酚結(jié)構(gòu)和2、3位的雙鍵對其抗增殖

6、活性具有重要作用?？佃F邦等報導(dǎo)槲皮素可抑制白血病細胞中的PKC及TPK而產(chǎn)生抗癌作用?？寡“寰奂饔茫侯櫿窬]等采用體外試驗觀察了槲皮素對血小板的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)槲皮素可顯著抑制二磷酸腺苷、膠原、鈣離子載體和花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集及血小板5-羥色胺的釋放反應(yīng)，并探討了有關(guān)作用機理。抗氧化作用：通過槲皮素的抗超陰離子作用的實驗研究，結(jié)果表明槲皮素的有抑制黃嘌呤氧化酶的活性而減少超氧陰離子的產(chǎn)生及其超氧陰離子的作用。其他作用：槲皮素還對糖尿病的腎臟、腸粘膜具有保護作用；同時還有抗憂郁、抗心胸肥大、降壓等作用。二實驗階段槲皮素及其糖苷的提取方法槲皮素及其糖苷常用的提取方法有浸漬法、堿提酸沉法、回流

7、法和超聲法等（1）浸漬法 浸漬法是最簡單的提取方法，即選用一定量的溶劑，將被提取物浸漬一定時間，過濾除去濾渣，濃縮濾液即可。該方法耗時長且得率較低, 故近年來很少用于化合物的提取, 但在比較不同提取方法的優(yōu)劣時可用作對照。王文清等以 70% 乙醇作為溶劑, 分別采用超聲提取30min, 加熱回流1h, 浸漬12h 三種方法提取20g細梗胡枝子藥材, 得到槲皮素的含量分別為4. 89、5.39 和 4.71g/ g, 蘆丁的含量分別為36.70、37.53和 34.68g/ g。結(jié)果顯示, 采用加熱回流法提取槲皮素和蘆丁的提取率均較高, 浸漬法提取率最低。（2）堿提酸沉法 堿提酸沉法是提取植物中

8、槲皮素及其糖苷的傳統(tǒng)方法之一, 該方法主要是利用黃酮苷類化合物易溶于堿性水溶液, 難溶于酸性水溶液的性質(zhì)。趙希等提取槐米中蘆丁和槲皮素時, 20g的槐米粗粉加入0.4%的硼酸水溶液200ml,用石灰乳調(diào)節(jié)pH值89。在微沸條件下攪拌提取30min, 將濾液用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值23, 靜置12h后離心處理, 沉淀用pH值12的濃鹽酸洗滌一次, 蒸餾水洗滌至中性, 沉淀物經(jīng)65真空干燥得到蘆丁粗品。精制蘆丁后取1g, 用2%的H2SO4溶液80ml, 加熱回流90 min 轉(zhuǎn)化得到槲皮素。（3）回流法 回流法也是提取槲皮素及其糖苷常用的方法之一, 通常是將藥材加入到一定溶劑中進行回流, 采用正交試驗

9、法考察提取時間、溶劑用量和 濃度等因素的影響。吳杰等分別用回流法與浸漬法提取仙人掌中的槲皮素, 結(jié)果得到提取物中槲皮 素的含量分別0. 2423、0. 2018 mg / g,可見回流法的提取率比浸漬法更高。該研究還用正交試驗法 考察了溶劑、溶劑濃度、回流時間、仙人掌粉末粒度四個因素對提取效率的影響, 確定最佳回流提取條件為過60目篩的干燥仙人掌粉末10g ,加95%甲醇 200ml, 回流3 h。用回流法提取槲皮素及其糖苷操作簡單, 提取率高, 但存在溶劑有毒以及加熱時易發(fā)生危險等缺點。（4）超聲提取法 近年來, 超聲提取法得到了廣泛的應(yīng)用, 它具有時間短、得率高、安全、可靠、無毒等 優(yōu)點。

10、吳景林以不同提取試劑分別用回流法和超 聲提取兩種方式提取魚腥草中的槲皮素, 并對提取率進行了比較。結(jié)果表明, 超聲提取的提取率稍低于回流提取, 差異不顯著, 但超聲提取更簡捷、快速。 因此, 考慮到經(jīng)濟性, 超聲提取法優(yōu)于回流提取。本試驗用法提取蘆丁的方法有很多，簡便的超聲法，高效率的回流法，但這兩種方法在生藥學(xué)實驗中都已經(jīng)做過，所以這次實驗我想用對于我來說比較陌生的堿提酸沉法，并以實驗室常用的槐米作為提取槲皮素的實驗材料,而且槐米中蘆丁的含量也比較高。實驗原理利用蘆丁中含有較多的酚羥基，可溶于堿中，加酸酸化后又可析出蘆丁結(jié)晶的性質(zhì)，采用堿溶酸沉法提取，并用蘆丁對冷、熱水的溶解度相差懸殊的特性

11、進行精制。蘆丁可被稀酸水解生成槲皮素。實驗?zāi)康恼莆栈泵字虚纹に氐奶崛『图兓椒ㄕ莆臻纹に氐募兌葯z測及結(jié)構(gòu)鑒定的方法實驗材料槐米（100g）、石灰乳、硼砂5g、2的硫酸溶液、95乙醇、濃鹽酸、氯仿，甲醇，甲酸，1的三氯化鋁乙醇溶液、1%蘆丁乙醇溶液、1槲皮素乙醇溶液、廣泛pH試紙實驗器材 1000ml燒杯兩個，500ml燒杯一個，250ml燒杯兩個，電熱套一個，攪拌器一臺，棉花少許（過濾用），玻璃棒一根，長勁漏斗一個 ，布氏漏斗一個，抽濾瓶一個，真空泵一臺，濾紙一張，250ml三口圓底燒瓶一個，溫度計一個，球形冷凝管一個，玻璃板一塊，量筒10ml一個，量筒100ml一個實驗流程 槐米粗粉（150

12、g） 800ml水 5g硼砂 加熱煮沸30min 趁熱過濾 濾液 濾餅 500ml水 煮沸30min 維持PH 89 趁熱過濾 濾液 濾餅 合并 在6070下用濃鹽酸調(diào)PH至45 靜置 抽濾 沉淀 蒸餾水洗至中性，抽濾 蘆丁 10倍量的2%硫酸溶液，加熱微沸回流90min 冷卻 靜置 過濾 沉淀水洗至中性 抽干 60干燥槲皮素粗品 95%乙醇回流30min 趁熱過濾 濾液 大量蒸餾水稀釋 靜置24h 過濾槲皮素精品（黃色針形結(jié)晶） 實驗藥材的鑒定 槐米的鑒定可以通過性狀鑒定，對槐米的性狀、大小、顏色、質(zhì)地、氣味來識別是否是槐米藥材。槐米為花蕾卵形或橢圓形，長26mm，直徑約2mm。花萼黃綠色，

13、下部有數(shù)條縱紋。萼的上方為黃白色未開放的花瓣?；ü＜毿?。體輕，手捻即碎。無臭，味微苦澀。槲皮素的鑒定 槲皮素的理化鑒定槲皮素為黃綠色結(jié)晶，熔點為315317，紫外燈下顯藍色熒光，加AlCl3乙醇溶液螢光變黃綠色，鹽酸鎂粉反應(yīng)顯紅色。薄層鑒定用薄層色譜將槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品和制得的槲皮素分別點樣比較，吸附劑為硅膠G，105下活化2h，展開劑為氯仿：甲醇：甲酸（15：5：1）溶液，顯色劑為三氯化鋁試劑（顯黃色斑點）。紫外鑒定紫外光譜（UV）槲皮素在375nm和255nm有兩個吸收峰，分別屬(A環(huán))電子躍遷和(B環(huán))電子躍遷，分別對應(yīng)兩個生色團組成：375nm吸收帶由肉桂酰生色團產(chǎn)生，為I帶；250nm吸收

14、帶由苯甲酰生色團產(chǎn)生，為I帶。將紫外光下的圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照，基本相同。實驗安排3月14日 蘆丁的提取 稱取槐米100g，在乳缽中研碎后，投入500ml硼砂溶液的沸水溶液中煮沸2-3分鐘，在攪拌下加入石灰乳調(diào)pH89，煮沸40分鐘（注意添加水，保持原有體積，保持pH89），趁熱傾出上清液,用棉花過濾。殘渣加100ml水，加石灰乳調(diào)pH9，煮沸20分鐘，趁熱用棉花過濾，二次濾液合并。濾液保持在60，加濃HCl，調(diào)pH3-4，放置過夜，則析出蘆丁沉淀。3月15日 蘆丁的水解在析出的蘆丁中加入10倍量的2%的硫酸溶液，加熱微沸回流90min之后加入適量的水稀釋，靜置，過濾。用水洗濾渣至無酸性，至80

15、干燥，得槲皮素粗品。3月16日 槲皮素的精制置槲皮素粗品于燒瓶中，加入20倍量95%乙醇，加熱回流，使其溶解，趁熱過濾，取濾液用20倍量蒸餾水稀釋，靜置24 h，濾過。得槲皮素精品3月17號 槲皮素的結(jié)構(gòu)鑒定和純度分析制做薄層板，活化，將自制的蘆丁、胡樸素與標(biāo)準(zhǔn)蘆丁、槲皮素點樣對照，并用三氯化鋁試劑顯色，在紫外燈下進行觀察。取制得的槲皮素少許，進行熔點的測試。實驗預(yù)算材料規(guī)格數(shù)量槐米100g濃硫酸20ml無水乙醇100ml硼砂5g濃鹽酸50ml氯仿80ml甲醇30ml甲酸10ml硅膠G50g三氯化鋁5g蘆丁2ml槲皮素2ml儀器規(guī)格數(shù)量燒杯1000ml2燒杯500ml1燒杯250ml2電熱套1攪拌器1玻璃棒1長勁漏斗1布氏漏斗1抽濾瓶1真空泵1三口圓底燒瓶250ml1溫度計1玻璃塞1膠頭滴管1乳缽1量筒10ml1量筒100ml1玻璃板1參考文獻【1】惠秋沙，槲皮素及其