新型防腐劑富馬酸乳糖甲酯的抑菌活性研究范文預(yù)覽

1、摘摘 要要富馬酸乳糖甲酯對混合菌群的生長具有良好的抑制作用，為考察富馬酸乳糖甲酯的抑菌能力，進行了富馬酸乳糖甲酯的抑菌譜試驗及其在不同 ph 介質(zhì)、不同濃度條件下的抑菌活性試驗，結(jié)果表明：富馬酸乳糖甲酯可延長微生物的生長適應(yīng)期、降低微生物生長量、延長抗菌衰期。對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、啤酒酵母、面包酵母、黑曲霉、米曲霉的最低抑菌濃度（mic%）分別為0.60、0.30、0.50、0.25、0.30、0.40、0.50；適當濃度的富馬酸乳糖甲酯可使上述菌種的生長適應(yīng)期由 4h 延長到 72h 以上，桿菌和酵母的抗菌衰期分別為 58h 和 72h。不同防腐劑濃度實驗結(jié)果表明富馬酸乳

2、糖甲酯對牛奶酸敗混合菌有較好的抑制作用。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：抗菌劑；富馬酸乳糖甲酯；抑菌活性abstractlactose methyl fumarate exhibited good antimicrobial activity for the grows of mixed culture, in order to study the inhibition of methyl fumarate capacity of lactose methyl fumarate, a antibacterial spectrum test about lactose methyl fumarate in dif

3、ferent ph media, different concentrations of the antimicrobial activity was taken.under the conditions of testing, the results showed that: lactose methyl fumarate can be extended to adapt to the growth of micro-organisms, reducing microbial growth and prolong the half-life of antibacterial. the min

4、imum inhibitory concentration (mic%) of e. coli、bacillus subtilis 、staphyloccocus aureus rosenbach、sac-charomyces cerevisiae、saccharomyces cerevisiae、aspergillus niger、aspergillus oryzae are 0.60、0.30、0.50、0.25、0.30、0.40 and 0.50; appropriate concentrations of lactose methyl fumarate can extend the

5、adaptation period of the growth of these bacteria from 4h to 65h or more, bacteria and yeast, respectively, for the half-life of antimicrobial is 48h and 72h. the experimental results of different concentration of preservatives show that lactose methyl fumarate had satisfied antimicrobial activity o

6、n mixture bacteria of milk. keywords: preservative; lactose methyl fumarate; antibacterial activity英文摘要的行間距要調(diào)整好 整篇論文的格式要重新審理較對目目 錄錄摘摘 要要.2abstract.3第一章第一章前前 言言.11.1 食品防腐劑的概念和分類.11.2 食品防腐劑的發(fā)展.21.3 食品防腐劑的作用機理.41.4 使用防腐劑的必要性.41.4.1 食品質(zhì)量安全問題.41.4.2 使用防腐劑的必要性.41.5 防腐劑的安全性.51.6 防腐劑使用注意事項.61.6.1 正確和合理使用防腐劑

7、.61.6.2 防腐劑與其他防腐方法相結(jié)合.61.7 本題選題依據(jù)及目的、意義.7第二章第二章 實驗部分實驗部分.82.1 實驗儀器和藥品.82.2 抗菌特性研究實驗.92.2.1 供試菌種及其活化.92.2.2 培養(yǎng)基的配制及其滅菌.92.2.3 最低抑菌濃度（mic）的測定 .92.2.4 生長抑制實驗.102.2.5 抗菌性能評價指標.112.3 不同濃度對富馬酸乳糖甲酯抗菌活性的影響的研究.122.3.1 供試菌種及其活化.122.3.2 培養(yǎng)基的配制及其滅菌.122.3.3 對牛奶酸敗混合菌的生長抑制實驗.122.3.4 不同濃度對防腐劑抗菌活性的影響實驗.12第三章第三章 結(jié)果與結(jié)

8、果與討討論論.143.1 富馬酸乳糖甲酯的抗菌特性.143.1.1 最低抑菌濃度（mic） .143.1.2 對細菌和酵母的生長抑制作用.143.1.3 與其他防腐劑的抗菌活性比較.193.2 不同濃度對富馬酸乳糖甲酯抗菌活性的影響.193.2.1 不同濃度對防腐劑抗菌性能的影響.19結(jié)結(jié) 論論.22收獲和收獲和體體會會.23致致 謝謝.24參考文獻參考文獻.25附附 錄錄.251.畢業(yè)論文選題表 2.畢業(yè)論文任務(wù)書 3.畢業(yè)論文開題報告4. 文獻綜述 5. 英文文獻翻譯（譯文/原文）第一章第一章 前前 言言食品是人類賴以生存的基本物質(zhì)，新鮮的食品則是保障人類健康的基本條件。食品中含有許多豐富

9、的蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂肪類營養(yǎng)物質(zhì)，在物理、生物化學和有害微生物等的作用下，可以失去原有的色、香、味、形而發(fā)生腐爛變質(zhì)。其中有害微生物的作用是導致食品腐爛變質(zhì)的主要原因1。當今，地方食品要在全國流通，一國的食品要在世界銷售，這必然要求食品密封包裝、耐貯、耐運，因而使用食品防止腐劑、抗氧劑來防止食品腐爛變質(zhì)是必要的2。食品的保鮮與防腐是食品加工生產(chǎn)的首要問題，而食品防腐劑的選擇和安全性的檢測與鑒定則是社會關(guān)注的熱點問題。微生物引起食品變質(zhì)可分為：細菌繁殖造成的食品腐敗，霉菌代謝導致的食品霉變和酵母菌分泌的氧化還原酶促使的食品發(fā)酵。微生物繁殖需要有適合的客觀條件，即適當?shù)乃?、溫度、氧、滲透壓、

10、ph 值和光等3。通?？梢杂梦锢矸椒ɑ蚧瘜W方法來防止有害微生物的破壞，物理方法是通過低溫冷藏、隔絕空氣、干燥、高滲、高酸度、輻射等來殺菌或抑菌；化學方法就是利用防腐劑來殺菌或抑菌。防腐是針對有害微生物的，一是防止微生物造成食品的腐爛，二是防止產(chǎn)毒微生物（如黃曲霉等）的危害。防止微生物對食品的危害主要有以下幾種方法：首先，防止微生物污染食物；第二，滅活有害微生物；第三，降低或者抑制受污染食品中微生物的生長，或使之失活。食品防腐劑主要是通過第三種方法，即抑制食品中微生物的生長起到防腐作用，它可以保證食品有較長的貨架期3。食品添加劑多功能化將有助于生產(chǎn)工藝的優(yōu)化、產(chǎn)品質(zhì)量的控制以及新產(chǎn)品的開發(fā)4，5

11、。食品化學防腐劑由于使用方便、效果好且不耗能，是重要的食品添加劑之一，在食品工業(yè)中被廣泛應(yīng)用。1.1 食品防腐劑的概念和分類食品防腐劑是防止因微生物作用引起食品腐敗變質(zhì)，延長食品保存期的一類食品添加劑。其防腐機制主要是降低食品的水分活度和 ph 值，破壞微生物的生長或代謝系統(tǒng)的正常運行，起到抑制微生物生長、延長產(chǎn)品貨架期的作用。目前使用的防腐劑品種很多，美國有 50 多種，日本有 43 種，我國允許使用的超過 18 種，我國香港特區(qū)有 27 種。食品防腐劑分為化學防腐劑和天然防腐劑兩大類?；瘜W防腐劑又分為無機防腐劑和有機防腐劑。我國目前生產(chǎn)和使用的主要是有機酸及其鹽類，如丙酸及其鹽類、山梨酸及

12、其鹽類、苯甲酸類、對羥基苯甲酸酯類、乳酸和乳酸鈉、雙乙酸鈉、單辛酸甘油酯、脫氫醋酸鈉、焦亞硫酸鉀等6。近年隨著人們生活和消費水平的提高，對食品加工的要求向“綠色” 、 “天然” 、“安全”的方向轉(zhuǎn)變，因此，研制開發(fā)天然、安全的食品防腐劑已成為食品添加劑領(lǐng)域研究的熱點。天然食品防腐劑是一類高效、安全、無毒副作用的防腐劑，不但對人體健康無害，而且還具有一定的營養(yǎng)價值。目前市場上銷售及報道的天然防腐劑大致有以下幾類： 植物類防腐劑，如果膠分解物、茶多酚、芥子提取物、大蒜素、甘草等；動物類防腐劑，如殼聚糖、海藻糖、魚精蛋白、蜂膠、溶菌酶、抗菌肽類等；微生物類防腐劑，如乳酸鏈球菌素、納他霉素等。但由于天

13、然防腐劑生產(chǎn)、分離、提純等各項技術(shù)成本較高，使其應(yīng)用受到了極大限制7，8。1.2 食品防腐劑的發(fā)展防腐劑是用以保持食品原有品質(zhì)和營養(yǎng)價值為目的的食品添加劑，它能抑制微生物活動、防止食品腐敗變質(zhì)從而延長保質(zhì)期。不論人們持何種觀點，都得面對這樣一個事實：我們的生活已經(jīng)與食品防腐劑密不可分了。其實，人類和食品防腐劑的關(guān)系可以追溯到遠古，真正是“從手中到嘴里” ，無需保藏食品。因為大自然總能提供充分的新鮮食品。人類開始定居生活后，便開始儲藏食品。開始，保藏方法是干燥和腌制兩種，因此飲食受到限制。根據(jù)文獻記載，海員食品或鄉(xiāng)下人冬季食物，部分或全部地依賴腌制保藏。隨后使用的防腐劑品種增加了酒精、煙，co2

14、和許多有機酸（醋酸，乳酸）等。食品保藏隨著工業(yè)化開始發(fā)生了變化，食品防腐劑也開始活躍起來，化學上的成就也逐漸應(yīng)用于食品工業(yè)。k. reichenbach1對煙熏的研究中發(fā)現(xiàn)：山毛樣樹的焦木酸和焦油中一種雜酚油物質(zhì)，具有防止肉腐敗的能力。從 1884 年以來的食品化學書上可以看到，除了食鹽、干燥、熱處理、乳酸、發(fā)酵、糖、酒精、醋和煙外，雜酚油是另一種有一定用處的防腐劑。表 1-1 列出了食品化學防腐劑的發(fā)展概況。從下表可見人們對防腐劑認識的不斷探索。在遠古時代，人們使用高濃度的鹽、糖、醋等來保藏食品，隨著科技的進步，生活水平的提高，人們防止食品腐敗已不僅是采用簡單的方法，只要求不破壞組織結(jié)構(gòu)，而

15、是要求保留其營養(yǎng)價值和風味，因此所用的防腐劑也在不斷更新?lián)Q代。例如，19 世紀后葉，以甲酸作為防腐劑；20 世紀開始，首先使用苯甲酸及其衍生物，直至今天還被用于食品防腐；20 世紀 30 年代以后使用了丙酸鹽，以及近代的山梨酸、脂肪酸，是至今所知道的在所有防腐劑中最無害的，并且目前仍被廣泛使用著9。表 1-1 食品化學防腐劑的發(fā)展1年代防腐劑的發(fā)展史前時期食鹽，煙醋，食油，蜂蜜古代二氧化硫用于保存葡萄酒1400 年前beukels 發(fā)現(xiàn)酸漬保藏法1775 年hofer 推薦使用硼砂1810 年推薦用二氧化硫保藏肉1833 年reichenbach 推薦雜酚油用于肉的保藏1858 年jaques

16、 發(fā)現(xiàn)了硼酸的抗菌作用1859 年hofman 從花揪果漿果油中分離出山梨酸1865 年jodin 發(fā)現(xiàn)了甲酸的抗菌作用1874 年kolbe 和 thersch 發(fā)現(xiàn)了水楊酸的抗菌作用1875 年flock 發(fā)現(xiàn)苯甲酸的抗菌作用1903 年美國允許苯甲酸作為食品防腐劑1907 年von behring 推薦用甲醛和過氧化氫作為牛奶防腐劑1913 年margolius 發(fā)現(xiàn)了對氯苯甲酸的抗菌作用1923 年sabalitschka 發(fā)現(xiàn)了對羥基苯甲酸酷的抗菌作用1938 年hofman, dalby 和 schweitae:推薦用丙酸作面包防腐劑1940 年millerh 和 gooding

17、各自發(fā)現(xiàn)了山梨酸的抗菌作用1947 年caleman 和 wolf 發(fā)現(xiàn)了脫氫醋酸的抗菌作用1950 年開始全世界修訂了新防腐劑的批準法1954 年工業(yè)中大規(guī)模開始生產(chǎn)山梨酸1956 年bernhard,thoma 和 genth 發(fā)現(xiàn)了焦碳酸二乙酯的抗菌作用在食品中添加高濃度的食鹽、糖、醋及乙醇之類有防腐作用的物質(zhì)是人們保存食品的古老方法，可降低水分活度，使菌體蛋白變性而達到防腐目的10。一般地講，這類物質(zhì)是在正常使用的情況下對人體無害或毒性較小，目前在我國食品衛(wèi)生法規(guī)中不列為化學防腐劑來加以控制。此類物質(zhì)更主要的是作為調(diào)味料使用。由于防腐劑只能延長細菌生長滯后期，因而只有未遭細菌嚴重污染的

18、食品，利用化學防腐劑才有效。防腐劑并不能改善低質(zhì)食品的品質(zhì)，即如果食品腐敗變質(zhì)和氧化反應(yīng)已經(jīng)開始，則決不能利用防腐劑和抗氧化劑將已經(jīng)腐敗變質(zhì)的食品變成優(yōu)質(zhì)食品。1.3 食品防腐劑的作用機理防腐劑抑制與殺死微生物的機理是十分復(fù)雜的，目前使用的防腐劑一般認為對微生物具有以下幾方面的作用11，12：一、破壞微生物細胞膜的結(jié)構(gòu)或者改變細胞膜的滲透性，使微生物體內(nèi)的酶類和代謝產(chǎn)物逸出細胞外，導致結(jié)構(gòu)受損或削弱或影響與膜有關(guān)的呼吸鏈電子傳遞系統(tǒng)，導致微生物正常的生理平衡被破壞而失活。二、防腐劑與微生物的酶作用，如與酶的巰基作用，破壞多種含硫蛋白酶的活性，干擾微生物體的正常代謝，從而影響其生存和繁殖。通常防

19、腐劑作用于微生物的呼吸酶系，如乙酰輔酶 a 縮合酶、脫氫酶、電子轉(zhuǎn)遞酶系等。三、作用于遺傳物質(zhì)或遺傳微粒結(jié)構(gòu)，進而影響到遺傳物質(zhì)的復(fù)制轉(zhuǎn)錄，蛋白質(zhì)的翻譯等導致蛋白質(zhì)部分變性、蛋白質(zhì)交聯(lián)而導致其他的生理作用不能進行等。由于食品科學的發(fā)展，相對來說時間較短，因而對防腐劑作用機理的解釋還很不充分，還有待于進一步研究。1.4 使用防腐劑的必要性使用防腐劑的必要性1.4.1 食品質(zhì)量安全問題食品質(zhì)量安全問題衛(wèi)生部的專家多次指出，當今食品安全最嚴重的問題不是添加劑，也不是農(nóng)藥殘留，而是由致病性因素引起的食源性疾病。世界衛(wèi)生組織確定食源性疾病為：“凡通過攝入而進入人體的病原體使人體患感染性或中毒性疾病”。食

20、源性疾病的病因分3類：1)微生物性；2)化學性，如農(nóng)藥；3)有毒動、植物。據(jù)衛(wèi)生部對13個省市10年的監(jiān)測顯示：我國食物中毒事件中，微生物引起的食物中毒比例最大，達39.9%，而且大多發(fā)生在第2、3季度。這是因為第2、3季度氣溫高、濕度大，適合微生物生長繁殖。所以防止食品細菌腐敗，應(yīng)列入食品安全的重中之重13。1.4.2 使用防腐劑的必要性使用防腐劑的必要性防腐劑有利于食品加工與保存，在食品工業(yè)中有不可替代的重要作用，已成為現(xiàn)代工業(yè)食品的重要輔助材料。食品防腐劑應(yīng)食品生產(chǎn)的需要而生，伴隨現(xiàn)代食品工業(yè)的發(fā)展而長。幾乎所有食品都需要這些添加劑。當今，地方食品要在全國流通，一國的食品要在世界銷售，就

21、要求食品密封包裝、耐貯、耐運，因而使用食品防腐劑來防止食品腐爛變質(zhì)、保持食品品質(zhì)是必要的。在食品中會因微生物的活動，引起食品腐敗變質(zhì)。食品的腐敗變質(zhì)就是以微生物的作用為主而導致食品質(zhì)量下降或失去食用價值的一切變化。據(jù)fda的估算，世界上每年約有20%以上的糧油及食品因腐敗變質(zhì)而造成巨大浪費和經(jīng)濟損失，由此引起的經(jīng)濟損失高達170億美元。從2004年10月16日17日商務(wù)部召開的“農(nóng)產(chǎn)品流通安全國際研討會”上獲悉，中國有近90%的食品、土畜產(chǎn)品出口企業(yè)受技術(shù)性貿(mào)易壁壘的限制，其中，中國農(nóng)產(chǎn)品倉儲運輸設(shè)施和防腐保鮮技術(shù)落后引起的腐敗變質(zhì)是中國的食品安全得不到認可的重要原因。因此，使用食品防腐劑是很

22、必要的，它不僅可以防止食品因微生物引起的變質(zhì)，提高食品保存性能，延長食品保質(zhì)期，同時還可以減少食品在儲藏保鮮中的損失14。1.5 防腐劑的安全性防腐劑的安全性到目前為止，我國只批準了32種允許使用的食品防腐劑，且都為低毒、安全性較高的品種。它們在被批準使用前都經(jīng)過了大量的科學實驗，有動物飼養(yǎng)和毒性毒理試驗和鑒定，只要食品生產(chǎn)廠商所使用的食品防腐劑品種、數(shù)量和范圍，嚴格控制在國家標準食品添加劑使用衛(wèi)生標準規(guī)定的范圍之內(nèi)，是絕對不會對人體健康造成損害，可放心食用。表 1.1幾種常用防腐劑的評價指標指標adi 值mgkg-1ld50(大鼠,經(jīng)口)gkg-1中國規(guī)定最大使用量 gkg-1苯甲酸0-52

23、.7-4.440.2-1苯甲酸鈉0-52.70.2-1山梨酸0-2510.50.2-2山梨酸鉀0-254.2-6.170.2-2丙酸不限制5.63（fao）丙酸鈣0-105.162.5丙酸鈉0-105.1（小鼠）2.5脫氫乙酸-1.000.3脫氫乙酸鈉-0.570.61（日本）尼泊金甲酯0-10-1（fao）尼泊金乙酯0-108（小鼠）0.1-0.25尼泊金丙酯0-103.7（小鼠）0.012-0.2尼泊金異丙酯0-107.17（小鼠）-尼泊金丁酯0-1016（小鼠，皮下）0.25（日本）尼泊金異丁酯0-108.390.25（日本）表1.1中列出了一些常用防腐劑的各項指標情況。adi(每日允許

24、攝入量)值是jecfa(聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織的食品添加劑聯(lián)合專家委員會)規(guī)定的，用于評價食品添加劑安全性的首要和最終依據(jù)，adi值越大,說明該種防腐添加劑的毒性就越低。因此，食品添加劑的使用應(yīng)在嚴格控制下進行1。1.6 防腐劑使用注意事項防腐劑使用注意事項1.6.1 正確和合理使用防腐劑正確和合理使用防腐劑目前使用的防腐劑大多是人工合成的，超過標準使用會對人體造成一定損害。因此，我國對防腐劑的使用有著嚴格的規(guī)定，明確防腐劑應(yīng)該符合以下標準：1）合理使用對人體健康無害；2）不影響消化道菌群；3）在消化道內(nèi)可降解為食物的正常成分；4）不影響藥物抗菌素的使用；5）對食品熱處理時不產(chǎn)生有害成分

25、15。使用防腐劑時，首先應(yīng)對不同類型的食品的性質(zhì)、不同保藏條件的要求等有全方位的了解，才能正確的去選擇和使用有效的防腐劑。1) 首先要全面了解所用防腐劑的抑菌譜，使用的最低抑菌濃度和該食品可能帶的腐敗菌種類及其性質(zhì)等，以便做到有針對性地使用。2) 要全面了解所用防腐劑本身的性狀，其中包括溶解性、ph、對光和熱的穩(wěn)定性等，以便做到正確和合理地使用。3) 要了解食品本身的性質(zhì)、食品加工條件、儲藏的環(huán)境、期限等對防腐劑效果的影響，以便使所用的食品防腐劑能起到最有效的作用。1.6.2 防腐劑與其他防腐方法相結(jié)合防腐劑與其他防腐方法相結(jié)合為了提高食品防腐的效果，在添加防腐劑的同時，可以采用適當?shù)钠渌胧?/p>

26、來提高食品防腐的效果，這對工業(yè)生產(chǎn)是非常重要的。目前主要可以采取以下幾項措施：1) 防腐劑的使用與加熱方式相結(jié)合在食品中添加防腐劑之后，滅菌的溫度在某些情況下比沒有添加防腐劑的低得多，且滅菌時間也短，如將山梨酸或苯甲酸等防腐劑與加熱方式相結(jié)合，可使酵母菌失活的時間縮短30%80%。2) 防腐劑的使用與冷凍方式相結(jié)合通常采用冷凍的方式可以直接限制微生物的增殖。在適當添加防腐劑和結(jié)合冷凍的條件下，能起到溫室下添加大劑量的防腐劑才能起防腐作用的效果。3) 防腐劑的使用與輻照方式相結(jié)合在食品的輻照保藏中，防腐劑的使用與輻照之間存在著增效作用。如在水果、蔬菜、乳制品等產(chǎn)品中，在使用山梨酸防腐劑的同時可以

27、減少輻照的劑量，從而減少和防止食品因輻照而產(chǎn)生的副作用，提高食品的品質(zhì)，降低加工的能耗等16。1.7 本題選題依據(jù)及目的、意義在通過好幾十種防腐劑的量子化學參數(shù)與抗菌活性間的關(guān)系進行了比較系統(tǒng)的研究后，發(fā)現(xiàn) ,-不飽和羰基結(jié)構(gòu)是食品防腐劑抗菌活性的高效功能性結(jié)構(gòu)，具有相距約 0.25nm 的電子容納中心和電子供給中心組成的電子中繼系統(tǒng)是食品防腐劑具有較強抗菌活性的反應(yīng)中心的必備條件?？咕钚灾行逆I鏈基團的空間位阻效應(yīng)是抗菌活性發(fā)揮的第一限制因子。而防腐劑分子中疏水基團的結(jié)構(gòu)特征和疏水能力則對防腐劑抗微生物代謝性起決定作用。由于富馬酸含有 2 個不飽和羰基結(jié)構(gòu)，因此在富馬酸衍生物中開發(fā)新的防霉防

28、腐劑具有一定的可能性。因此，如何利用富馬酸分子中的高效抗菌母體結(jié)構(gòu)而又不產(chǎn)生毒副作用，具有重要意義17，18。根據(jù)此理論,研究開發(fā)天然活性成分的改性產(chǎn)物仍是尋求防腐劑等食品防腐劑的一個重要途徑。,-不飽和羰基結(jié)構(gòu)是食品防腐劑抗菌活性的高效結(jié)構(gòu)，富馬酸二甲酯是具有 ,-不飽和羰基結(jié)構(gòu)的食品防腐劑代表物，能夠抑制多種霉菌、酵母菌和細菌，且抗菌性不受 ph 值的影響，具有高效、廣譜、價格低廉、穩(wěn)定性高、耐熱性好、毒性小等優(yōu)點，同時它還具有接觸和薰蒸雙重殺菌作用。然而，富馬酸二甲酯的升華特性使其易沉積于接觸部位的細胞間隙中，抑制細胞呼吸而產(chǎn)生瘙癢過敏反應(yīng)，頻繁大劑量接觸時，對皮膚及粘膜有強烈的刺激作用

29、，會引起過敏，因而限制了其進一步應(yīng)用。富馬酸單甲酯具有富馬酸二甲酯的優(yōu)點，且抑菌能力更強，刺激性和毒性遠比富馬酸二甲酯小得多。其抑菌效果是目前已知的防腐劑中比較好的，是一種較理想的糧食、食品和飼料的防霉殺菌防腐劑，但富馬酸單甲酯同樣存在易升華的不足。 ，以富馬酸分子為母體，將分子的一端甲酯化來保證合成產(chǎn)物的親脂性，另一端引入糖基，合成的富馬酸糖酯化合物具有良好的抗菌活性，試驗以馬來酸酐和甲醇為原料，經(jīng)酯化及異構(gòu)化得到富馬酸單甲酯，再經(jīng)酰氯化得到富馬酸單甲酯單酰氯，富馬酸單甲酯單酰氯與乳糖反應(yīng)，采用相轉(zhuǎn)移催化法合成具有 、-不飽和羰基結(jié)構(gòu)的富馬酸乳糖甲酯。近年來，已經(jīng)有人合成了反丁烯二酸葡萄糖甲

30、酯19，20、反丁烯二酸蔗糖甲酯21 、 丁烯二酸桂醇甲酯22等。以馬來酸酐和甲醇為原料，經(jīng)酯化及異構(gòu)化得到富馬酸單甲酯，再經(jīng)酰氯化得到富馬酸單甲酯單酰氯。富馬酸單甲酯單酰氯與乳糖反應(yīng)，在相轉(zhuǎn)移催化劑四丁基溴化銨的作用下，得到具有 、-不飽和羰基結(jié)構(gòu)的富馬酸乳糖甲酯。其抑菌效果是目前已知的防腐劑中比較好的，是一種較理想的糧食、食品和飼料的防霉殺菌防腐劑，因此富馬酸乳糖甲酯的合成研究具有重大意義第二章第二章 實驗部分實驗部分2.1 實驗儀器和藥品實驗所需主要儀器及試劑分別見表 2-1 和表 2-2 所示。表 2-1 主要儀器儀器名稱型號生產(chǎn)廠家可見分光光度計722n 型上海精密科學儀器有限公司立

31、式壓力蒸汽滅菌器yxq-ls-30s11上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠氣浴恒溫振蕩器thz-92b上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠顯數(shù)鼓風干燥箱gzx-9240mbe上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠潔凈工作臺sw-cj01bu上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠電熱恒溫鼓風干燥箱dhg-9246a上海精宏實驗設(shè)備有限公司電子天平j(luò)y2502上海精密科學儀器有限公司電子萬用爐200v ac 1000w天津市泰斯特儀器有限公司冰箱bcd-231e伊萊克斯表 2-2 實驗主要試劑及生產(chǎn)廠家試劑名稱純度生產(chǎn)廠家無水葡萄糖分析純湖南湘中化學試劑有限公司氫氧化鈉分析純天津市大茂化學試劑廠氯化鈉分析純洛陽市化學試劑廠

32、鹽酸分析純廣州東紅化工廠無水乙醇分析純廣州東紅化工廠富馬酸乳糖單甲酯自制牛肉膏生化試劑廣東環(huán)凱微生物科技有限公司蛋白胨生化試劑廣東環(huán)凱微生物科技有限公司瓊脂生化試劑廣東環(huán)凱微生物科技有限公司牛奶市售馬鈴薯市售2.2 抗菌特性研究實驗抗菌特性研究實驗供試糖酯（富馬酸乳糖甲酯）抗菌特性研究實驗方案供試糖酯（富馬酸乳糖甲酯）抗菌特性研究實驗方案一一 供試糖酯抑菌譜研究供試糖酯抑菌譜研究2.2.1 供試菌種及其活化供試菌種及其活化a) 供試菌種細菌: 大腸桿菌、 金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌；酵母：啤酒酵母、面包酵母霉菌：黑曲霉、米曲霉抑菌實驗開始前，需將菌種活化。b) 菌種活化1) 細菌的活化方法

33、無菌操作從細菌菌種管中挑取一環(huán)菌苔，接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，并在37搖床培養(yǎng)至a560nm值約為0.4，菌體數(shù)約為105個/ml106個/ml。2）酵母接種麥芽汁培養(yǎng)基并在28培養(yǎng)至菌體細胞約為105個/ml106個/ml。3）霉菌菌種接種到馬鈴薯培養(yǎng)基中，在28c恒溫箱中培養(yǎng)72h，可見培養(yǎng)基中有菌苔漂浮，搖動使霉菌的抱子進入到清液中，取培養(yǎng)基清液1ml，用約50ml的馬鈴薯培養(yǎng)基稀釋，用細胞計數(shù)器測定其中的霉菌抱子數(shù)，最后調(diào)整懸浮液中抱子數(shù)約為1000個/ml。2.2.2 培養(yǎng)基的配制及其滅菌培養(yǎng)基的配制及其滅菌a) 培養(yǎng)基配制1) 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，氯

34、化鈉5g，加水煮沸使各成分充分溶解，并定容至1000ml。冷卻至常溫后，用一定濃度的氫氧化鈉調(diào)ph為7.67.8。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基用于細菌的培養(yǎng)。2）馬鈴薯培養(yǎng)基：取去皮馬鈴薯200g切成小塊加1000ml水煮沸20min，雙層紗布過濾取汁，加葡萄糖15g，補足水至1000ml，自然ph值。若需要制成瓊脂培養(yǎng)基，加入瓊脂18 g，煮沸使瓊脂充分溶解。用于霉菌培養(yǎng)。b) 培養(yǎng)基滅菌所用培養(yǎng)基均放在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)0.1mpa，121保持30min進行滅菌。2.2.3 最低抑菌濃度（最低抑菌濃度（mic）的測定）的測定a) 實驗原理實驗原理最低抑菌濃度（minimum inhibition conc

35、entration, mic）是指在體外試驗中能抑制培養(yǎng)基內(nèi)微生物生長的最低濃度。mic越小，抗菌活性越大，也就是說防腐劑具有較強的抗菌效能。mic常用來表示防腐劑抑菌效果的指標，幫助確定防腐劑的大約有效抑菌濃度。b) 實驗方法實驗方法1) 細菌的mic測定試管稀釋法用無菌移液管將已活化的菌種1ml接種至1000ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，然后分裝到大小一致的帶有棉塞的無菌試管中，每試管10ml。分別加入0.1g/l、0.2g/l、0.3 g/l、0.4g/l、0.5 g/l、0.6 g/l、0.7g/l、0.8 g/l、0.9g/l、1.0g/l 10個濃度梯度（做預(yù)實驗確定濃度梯度，上述濃度梯度

36、值僅供參考）的供試糖酯，充分搖勻，置30（實驗條件限制）搖床培養(yǎng)。72h后觀察培養(yǎng)液的渾濁度，從無菌生長的培養(yǎng)管中找出最低防腐劑濃度的培養(yǎng)管，此培養(yǎng)管中防腐劑的濃度即為供試糖酯的mic值。2) 酵母和霉菌的mic測定平板涂布法將不同濃度的防腐劑溶液的n（此次實驗n=10）個濃度梯度（n在1015間較佳，預(yù)實驗決定n值）的培養(yǎng)基用無菌吸管定量地加入已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中，然后加入一定體積的融化的麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基(霉菌用馬鈴薯培養(yǎng)基)，充分混合均勻。待培養(yǎng)基冷卻后，用無菌吸管接種菌液0.2ml至培養(yǎng)基上，用三角耙涂布均勻。在28恒溫下培養(yǎng)72h，觀察菌體的生長情況，從無菌生長的培養(yǎng)皿中找出最低防腐劑濃

37、度的培養(yǎng)皿，此培養(yǎng)皿的防腐劑濃度即為供試糖酯的mic值 。4 抑菌圈直徑的測定抑菌圈直徑的測定濾紙圓片法：用打孔器將定性濾紙制成6mm的小圓片，置于小培養(yǎng)皿中，160干熱滅菌0.5h備用；將供試糖酯用95%乙醇溶解，配制成一定濃度的溶液；無菌操作下將滅菌后濾紙片浸在供試糖酯配成的溶液里，取出后貼在含菌平板上。每皿均勻分貼同種藥液的紙片3片，相應(yīng)溶劑空白對應(yīng)的濾紙片2片；貼好濾紙片的培養(yǎng)皿置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細菌于30恒溫培養(yǎng)2436h，酵母菌和霉菌于28恒溫培養(yǎng)4872h。取出后測定抑菌圈直徑。2.2.4 生長抑制實驗生長抑制實驗 實驗方法實驗方法1) 標記在無菌培養(yǎng)管上，分別標明接種菌液、

38、供試防腐劑及其濃度和培養(yǎng)時間。2) 接種在無菌培養(yǎng)管中，用無菌移液管吸取一定量的0.2g/l供試糖酯，再用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基將其稀釋成為某一濃度。最后接入濃度為104個/ml的細菌或酵母菌菌液1ml。以不加防腐劑的培養(yǎng)基作為空白對照。3) 培養(yǎng)將已接種的培養(yǎng)管置恒溫搖床振蕩培養(yǎng)。其中，細菌培養(yǎng)溫度為30，分別培養(yǎng)時間為0h、2h、4h、8h、16h、20h、24h、30h、36h、42h、48h、58h和74h；酵母培養(yǎng)溫度為28，分別培養(yǎng)時間為0h、2h、4h、8h、12h、16h、20h、24h、30h、36h、42h、48h、52h、58h、64h和74h，將標有相應(yīng)時間的培養(yǎng)管取出，立即放

39、冰箱中貯存。4) 測定最后一同測定其吸光度值，用560nm處吸光值的變化反映濁度的變化，即細菌或酵母生長量的變化。2.2.5 抗菌性能評價指標抗菌性能評價指標a) 生長適應(yīng)期生長適應(yīng)期當微生物接種到新的培養(yǎng)基中后，最初并不立即開始繁殖，表現(xiàn)出培養(yǎng)基吸光值沒有明顯的增加。此階段主要是調(diào)節(jié)體內(nèi)代謝酶系以適應(yīng)新的環(huán)境，變化主要發(fā)生在微生物個體內(nèi)，是微生物生理生化狀態(tài)的變化，而不是量的變化，不能從宏觀上表現(xiàn)出來。所以，在微生物生長曲線上有一段時間吸光度一直維持在最初的水平，這段時間常被稱為生長適應(yīng)期14。生長適應(yīng)期（t）為細菌和酵母從接種到 a560nm值增加 5%所需要的培養(yǎng)時間。b) 半衰期和抑菌

40、率半衰期和抑菌率由于微生物適應(yīng)性強，易于產(chǎn)生抗藥性，所以一般情況下防腐劑的抑菌效果均為時間的衰減函數(shù)：i=ae-t。式中：i 時刻 t（h）的抑菌率(%)；a 防腐劑在供試濃度下對目標菌種的最高理論抑菌率，反應(yīng)了防腐劑的抑菌強度； 衰減系數(shù)。從衰減函數(shù)方程可求得防腐劑抗菌作用的最高理論抑菌率 a， 衰減系數(shù) ，半衰期 t 0.5值。抑菌率計算式 : 100(%),cktttcktaaai式中：空白在 t 時刻的 a560nm值和接種時（t=0）a560nm值相比的增量；ckta,處理樣品在 t 時刻的 a560nm值和接種時（t=0）a560nm值相比的增tta,量。其中，防腐劑的抗菌半衰期(

41、t0.5)為防腐劑的抑菌率衰減到初始抑菌率一半時的時間。可由實驗數(shù)據(jù)通過衰減函數(shù)求得，也可由抑菌率曲線直接粗略讀出。其反映了防腐劑抗菌作用的持久性和穩(wěn)定性，可作為判斷抗菌劑是否具有實際開發(fā)應(yīng)用價值的一項重要參數(shù)。2.3 不同濃度對富馬酸乳糖單甲酯抗菌活性的影響的研究不同濃度對富馬酸乳糖單甲酯抗菌活性的影響的研究2.3.1 供試菌種及其活化供試菌種及其活化a) 供試菌種供試菌種牛奶酸敗混合菌群，從酸敗的純牛奶中分離得到。d) 牛奶酸敗混合菌的自然發(fā)酵培養(yǎng)方法牛奶酸敗混合菌的自然發(fā)酵培養(yǎng)方法將新鮮的牛奶倒入燒杯中靜置，使其在室溫的條件下自然酸敗。用濾紙將酸敗產(chǎn)生的固體除去，所得澄清濾液即為牛奶酸敗

42、混合微生物菌群。使用時培養(yǎng)基中菌液添加量控制在560nm吸光值凈增加0.05左右。2.3.2 培養(yǎng)基的配制及其滅菌培養(yǎng)基的配制及其滅菌a) 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，氯化鈉5g，加水煮沸使各成分充分溶解，并定容至1000ml。冷卻至常溫后，用一定濃度的鹽酸或氫氧化鈉將其ph值調(diào)至7.27.4。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基用于牛奶酸敗混合菌的培養(yǎng)。b) 培養(yǎng)基滅菌所用培養(yǎng)基均放在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)0.1mpa，121保持20min進行滅菌。2.3.3 抑菌率計算抑菌率計算時刻t時的抑菌率pi（%）采用下式計算：pi（%）=（1-a處理，t/a空白，t）*100式中a處理，t和a空白，

43、t分別為添加供試糖酯和空白培養(yǎng)基在t時刻和0時刻a560nm值相比的增量。2.3.4 不同濃度對防腐劑抗菌活性的影響實驗不同濃度對防腐劑抗菌活性的影響實驗實驗方法先用150ml的錐形瓶裝好50mlph值為7.2的肉湯培養(yǎng)基，再分別加入0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%（參考濃度梯度，需要預(yù)實驗）的供試糖酯，培養(yǎng)時間為111h，應(yīng)用比濁法測定不同濃度供試糖酯在指定觀察時間的a560nm值，并以不加防腐劑的培養(yǎng)基作為空白對照。第三章第三章 結(jié)果與討論結(jié)果與討論3.1 富馬酸乳糖甲酯的抗菌特性富馬酸乳糖甲酯的抗菌特性3.1.1 最低抑菌濃度（最低抑菌濃度（micmic）表 3.1 富馬

44、酸乳糖甲酯對供試菌種的最低抑菌濃度（mic） 。菌種富馬酸乳糖甲酯大腸桿菌0.60枯草芽孢桿菌0.30金黃色葡萄球菌0.50釀酒酵母0.25面包酵母0.30黑曲霉0.40米曲霉0.50在試驗條件下，富馬酸乳糖甲酯對革蘭氏陰性菌大腸桿菌的最低抑菌濃度為0.6，對革蘭氏陽性菌枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度為 0.5，其抗細菌效果不及山梨酸，丁二酸蔗糖甲酯和富馬酸二甲酯，說明富馬酸乳糖甲酯對不同細胞壁的細菌均有一般抑制作用。富馬酸乳糖甲酯對釀酒酵母的最低抑菌濃度為 0.25，富馬酸乳糖甲酯對面包酵母的最低抑菌濃度為 0.30，其抗酵母效果不及山梨酸，反丁二酸蔗糖甲酯和富馬酸二甲酯。試驗結(jié)果表明，富馬酸乳

45、糖甲酯對供試的細菌和酵母均有抗菌效果。但效果不顯注，可能是由于合成的富馬酸乳糖甲酯不純導致。結(jié)果分析：由于供試防腐劑中所含的抗菌活性官能團（也就是 ，-不飽和羰基結(jié)構(gòu)） 。，-不飽和羰基結(jié)構(gòu)是防腐劑發(fā)揮抑菌作用的有效功能結(jié)構(gòu)。由于富馬酸含有 2 個不飽和羰基結(jié)構(gòu)，以富馬酸分子為母體，將分子的一端甲酯化來保證合成產(chǎn)物的親脂性，另一端引入糖基，所以富馬酸乳糖甲酯有抗菌母體結(jié)構(gòu)而又不產(chǎn)生毒副作用。3.1.2 對細菌和酵母的生長抑制作用對細菌和酵母的生長抑制作用3.1.2.1 對細菌的生長抑制作用對細菌的生長抑制作用富馬酸乳糖單甲酯對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的生長有較好抑制作用，影響結(jié)果

46、見圖 3.1、圖 3.2 和圖 3.3富馬酸乳糖單甲酯對大腸桿菌的生長抑制曲線00.20.40.60.811.21.41.601020304050607080時間（h)a560nm0.40.50.60.7空白富馬酸乳糖單甲酯對枯草芽孢桿菌的生長抑制曲線00.20.40.60.811.201020304050607080時間（h)a560nm0.20.30.4空白 圖 3.3 從圖 3.1、圖 3.2 和圖 3.3 上得到富馬酸乳糖單甲酯對細菌的抗菌性能評價：1) 生長適應(yīng)期添加 0.4%的富馬酸乳糖單甲酯后可有效延長細菌的生長適應(yīng)期?？莶菅挎邨U菌由空白對照的 4h 延長至 42h，是空白的 9

47、 倍。大腸桿菌和金黃色葡萄球菌被殺滅了。添加 0.5%、0.6%、0.7%的富馬酸乳糖甲酯后，對大腸桿菌的生長適應(yīng)期分別為24h、72h、72h；添加 0.3%、0.4%、0.5%的富馬酸乳糖甲酯后，對枯草芽孢桿菌的生長適應(yīng)期分別為 6h、24h、44h；添加 0.4%、0.5%、0.6%的富馬酸乳糖甲酯后，對蘇云金芽孢桿菌的生長適應(yīng)期分別為 16h；72h；72h。2) 衰期由試驗數(shù)據(jù)通過衰減函數(shù)求得結(jié)果，填于表 3.4,為富馬酸乳糖甲酯對供試細菌的抗菌衰期。富馬酸乳糖單甲酯對金黃色葡萄球菌的生長抑制曲線00.20.40.60.811.21.41.601020304050607080時間（h

48、)a560nm0.30.40.50.6空白表 3.4 防腐劑濃度對細菌的抗菌衰期的影響防腐劑濃度號數(shù) 濃度菌種123大腸桿菌247272枯草芽孢桿菌62444金黃色葡萄球菌1672723.1.2.2 對酵母的生長抑制作用對酵母的生長抑制作用富馬酸乳糖甲酯對釀酒酵母和面包酵母的生長有較好抑制作用，影響結(jié)果見圖 3.5和圖 3.6。富馬酸乳糖單甲酯對釀酒酵母的生長抑制曲線00.20.40.60.811.21.41.601020304050607080時間（h)a560nm0.20.250.3空白從圖 3.5 和圖 3.6 上得到富馬酸乳糖甲酯對酵母的抗菌性能評價：1) 生長適應(yīng)期添加 0.25%的

49、富馬酸乳糖甲酯后可顯著延長酵母的生長適應(yīng)期。釀酒酵母由空白對照的 8h 延長至 58h，是空白的 7.25 倍；面包酵母由空白對照的 8h 延長至 64h，是空白的 8 倍。添加 0.2%、0.25%、0.30%的富馬酸乳糖甲酯后，對釀酒酵母的生長適應(yīng)期分別為24h、50h、74h；添加 0.25%、0.30%、0.35%的富馬酸乳糖甲酯后，對面包酵母的生長適應(yīng)期分別為 20h、60h、74h。2) 衰期由試驗數(shù)據(jù)通過衰減函數(shù)求得結(jié)果，填于表 3.7,為富馬酸乳糖甲酯對供試酵母的抗菌衰期。表 3.7 防腐劑濃度對細菌的抗菌衰期的影響 濃度防腐劑濃度（%） 富馬酸乳糖單甲酯對面包酵母的生長抑制曲

50、線00.20.40.60.811.21.41.601020304050607080時間（h)a560nm0.250.30.35空白菌種0.250.300.35釀酒酵母245074面包酵母2060743.1.2.3 表明表明試驗表明, 富馬酸乳糖甲酯的抗菌作用主要表現(xiàn)在以下幾個方面.延長微生物的生長適應(yīng)期生長適應(yīng)期是微生物的生長初期，是防腐劑發(fā)揮抑制作用的關(guān)鍵時期3。在測定時生長適應(yīng)期是指從接種到 a560值增加 0.05%所需要的培養(yǎng)時間。試驗表明，富馬酸乳糖甲酯可有效延長細菌和酵母到生長適應(yīng)期。對細菌菌液添加 0.5%和對酵母菌液添加 0.3%的富馬酸乳糖甲酯，其生長適應(yīng)期是空白對照的 8倍

51、11 倍。隨著富馬酸乳糖甲酯添加量的逐漸增加，對細菌和酵母的生長適應(yīng)期也隨之延長。 降低微生物生長量試驗表明，富馬酸乳糖甲酯可降低細菌和酵母的生長量，有效抑制細菌和酵母的生長。在培養(yǎng) 52h 后，添加 0.5%富馬酸乳糖甲酯的大腸桿菌菌液的生長量為空白對照的 25.3%，枯草芽孢桿菌菌液的生長量為空白對照的 37.5%，蘇云金芽孢桿菌菌液的生長量為空白對照的 38.4%。在培養(yǎng) 74h 后，添加 0.08%富馬酸乳糖甲酯的釀酒酵母菌液的生長量為空白對照的 3.9%，面包酵母菌液的生長量為空白對照的 3.4%。延長抗菌衰期 試驗表明，富馬酸乳糖甲酯對細菌的抗菌衰期較長，對酵母的抗菌衰期稍短。對細

52、菌菌液添加 0.5%對酵母菌液添加 0.3%的富馬酸乳糖甲酯，其抗菌衰期是空白對照的8 倍11 倍，說明富馬酸乳糖甲酯的抗代謝能力好。這可能是因為富馬酸乳糖甲酯的分子量大，其分子運動速度小，與微生物分解酶系作用的機率小。3.1.3 與其他防腐劑的抗菌活性比較與其他防腐劑的抗菌活性比較表 3.8 幾種防腐劑對大腸桿菌和釀酒酵母的抗菌活性數(shù)據(jù)實驗菌種防腐劑 (h)適應(yīng)t(h)5 . 0t富馬酸乳糖甲酯2436反丁烯二酸葡萄糖甲酯191725.7山梨酸19147大腸桿菌富馬酸二甲酯191816.5富馬酸乳糖甲酯2042反丁烯二酸葡萄糖甲酯192034.7山梨酸19148.8釀酒酵母富馬酸二甲酯192

53、020.4富馬酸乳糖甲酯的生長適應(yīng)期和衰期分別為 24h 和 36h，而反丁烯二酸葡萄糖甲酯為 17h 和 25.7h，而富馬酸二甲酯為 18h 和 16.5h，山梨酸的為 14h 和 7.0h，富馬酸乳糖甲酯的適應(yīng)期反丁烯二酸葡萄糖甲酯、富馬酸二甲酯和山梨酸長，衰期也比這些防腐劑長，說明富馬酸乳糖甲酯的抗代謝能力高于反丁烯二酸葡萄糖甲酯、山梨酸和富馬酸二甲酯。這可能是因為富馬酸乳糖甲酯的分子最大，在相同動能下，其分子運動速度最小，與微生物分解酶系作用的幾率也顯著小于反丁烯二酸葡萄糖甲酯、山梨酸和富馬酸二甲酯。3.2 不同濃度對富馬酸乳糖甲酯抗菌活性的影響不同濃度對富馬酸乳糖甲酯抗菌活性的影響

54、3.2.1 不同防腐劑濃度對抗菌性能的影響不同防腐劑濃度對抗菌性能的影響 不同濃度的富馬酸乳糖甲酯對牛奶酸敗混合菌的生長有較好抑制作用，影響結(jié)果見圖 3.9。1) 生長適應(yīng)期添加 0.10%的富馬酸乳糖甲酯后可顯著延長牛奶酸敗混合菌的生長適應(yīng)期，由空白對照的 4h 延長至 16h，是空白的 4 倍。添加 0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的富馬酸乳糖甲酯后，對牛奶酸敗混合菌的生長適應(yīng)期均為 16h 、16h 、16h 、16h 、16h。00.20.40.60.811.21.41.61.82020406080100120時間（h)a560nm12345苯甲酸山梨酸mmf尼油金乙酯

55、對照圖 3.9 不同濃度的富馬酸乳糖甲酯對牛奶酸敗混合菌的生長抑制曲線培養(yǎng) 111h 后，添加 0.10% 富馬酸乳糖甲酯的牛奶酸敗混合菌菌液的生長量為空白對照的 26.1%2) 衰期由試驗數(shù)據(jù)通過衰減函數(shù)求得結(jié)果，填于表 3. 11,為富馬酸乳糖甲酯對牛奶酸敗混合菌的抗菌衰期。表 3.11 防腐劑濃度對牛奶酸敗混合菌的抗菌衰期的影響防腐劑濃度（%） 濃度菌種0.10.20.30.40.5牛奶酸敗的混合菌1616161616結(jié)結(jié) 論論1、富馬酸乳糖甲酯可延長微生物的生長適應(yīng)期、降低微生物生長量、延長抗菌衰期，有殺滅細菌的功能。對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、啤酒酵母、面包酵母、黑曲霉

56、、米曲霉的最低抑菌濃度（mic%）分別為0.60、0.40、0.50、0.25、0.30、0.40、0.50；適當濃度的富馬酸乳糖甲酯可使上述菌種的生長適應(yīng)期由 4h 延長到 65h 以上，桿菌和酵母的抗菌衰期分別為 36h 和 72h。2、不同防腐劑濃度實驗結(jié)果表明富馬酸乳糖甲酯對牛奶酸敗混合菌有較好的抑制作用。添加 0.10%的富馬酸乳糖甲酯可使牛奶酸敗混合菌的生長適應(yīng)期由 4h 延長到 16h。收獲和體會收獲和體會畢業(yè)論文的完成前前后后花費了很多時間，在這些時間里我思考了很多，認識到理論知識與實際操作的區(qū)別。本次實驗是大學生涯花費時間最長，難度高，要求的專業(yè)知識比較多的一次實驗，我在其中

57、花了很多心血，但更多的是學到了全面的專業(yè)知識和實驗操作技能，為踏出社會作準備。實驗之前，我查找整理有關(guān)本實驗的相關(guān)文獻資料，在老師和同學的幫助下，逐步制定出來了實驗方案，根據(jù)實驗的要求，又確定了相關(guān)的藥品試劑和實驗儀器。最后歸納出最佳實驗方案。畢業(yè)論文的實驗部分，主要是測定富馬酸乳糖甲酯進行抗菌特性，并進行了濃度及各條件對其抗菌活性影響的研究。實驗開始，我全心全意投入到實驗中。實驗過程中出現(xiàn)了很多困難，有時間上和一些沖突，也有實驗室的設(shè)備老化，藥品質(zhì)量下降，儀器出現(xiàn)損壞等問題的出現(xiàn)，最主要的還是專業(yè)技能比較差，最后通過老師的幫助下問題得到了一定程度的解決。在初次接觸實驗儀器時，不懂如何操作，后

58、來看了操作說明書和請教老師同學，逐漸的掌握了操作技巧，很多錯誤的操作方式也得到了改正。實驗中學習，在學習進步，一點點地完成了我的畢業(yè)實驗。我培養(yǎng)了發(fā)現(xiàn)問題、分析問題和解決問題的能力，鍛煉了我的意志，學會了如何合理安排時間、如何與他人溝通合作。畢業(yè)實驗完成后，我整理了相關(guān)的實驗數(shù)據(jù)，并撰寫了畢業(yè)論文。畢業(yè)論文前后，我學會了很多，只有自己不斷的思考和實踐，才會有進步，才會有出息，也只有靠自己，才會讓我感到充實。不斷學習，吸取經(jīng)驗教訓，敢于動手，勇于探索，是我這次實驗的收獲。一句話，最后還是努力完成了論文，其中有很多曲折，實驗結(jié)果也不是理想，但重要的是學會了很如何從頭到尾完整地完成一個方案，這將幫助

59、我更好地踏入社會。致致 謝謝值論文完成之際，感謝所有關(guān)心和幫助我的老師和同學：首先要特別感謝曾霞老師的指導與督促，同時感謝她的對于一此難題的解說。她勇于探索的工作作風深深地感染和激勵著我，使我從一個書呆子的我變成一個敢于實踐，勤于思考，勇于探索的我。從課題的選擇到項目的最終完成，曾老師都始終給予我細心的指導和和支持。 我還要感謝在一起實驗的同學，你們的給予我很多儀器與給一些技術(shù)幫助，使我克服一個一個的困難和疑惑，直至到論文的完成。特別感謝王軍銳同學，他和我共同做了不少工作，我們一起探討了很多問題，過程中互相幫助，共同進步，學會了合作，學會了如何為一個目標努力奮斗。在這里我還要感謝為我們提供儀器

60、的老師與及各位理論課與實驗課的老師，他們?yōu)槲业漠厴I(yè)論文做出的巨大的幫助，也正是由于大家的幫助，我才能順利實成實驗。同時也要謝謝馬玉剛班主任，他也給了我一些實驗方向性的指導。在此，也對他們所有人表示衷心感謝。最后，衷心感謝在百忙之中抽出時間審閱本論文的專家教授。參考文獻參考文獻1牟冠文,李光浩.食品防腐劑的概況及其檢驗方法j.食品與發(fā)酵工業(yè),2006,32(10):1031072 宋啟煌.精細化工工藝學m.北京：化學工業(yè)出版社.2004:142144.3 黃艷娥, 劉海波. 食品防腐劑對人體健康的影響及發(fā)展趨勢j. 化工中間體, 2005, (7) : 16.4 凌關(guān)庭.食品添加劑手冊m. 北京