裸鼠荷瘤資料

1、接種量要查文獻(xiàn)來(lái)確定接種量， 在找不到任何相關(guān)資料的情況下， 最高 就用到 1*107/site, 再高也沒有意義了。如果你的細(xì)胞很小， 1*10 7/ 也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是 1*107/site 。查文獻(xiàn)看他們 的構(gòu)建條件是什么樣的，比方培養(yǎng)條件，接種量，接種位置什么的， 是不是一定要用雌性鼠等等。有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生長(zhǎng)速度很快。建議用 幾只動(dòng)物試試不同的接種濃度，萬(wàn)一能夠長(zhǎng)出來(lái)，而且還長(zhǎng)得很快， 那你就要根據(jù)情況選擇一個(gè)適宜的濃度了。 根本上一般認(rèn)為比較適宜 的接種濃度有這么幾個(gè)特征： 1. 接種后 10 到 15 天左右可以開始試 驗(yàn)。 2. 開始試驗(yàn)時(shí)可以

2、用于試驗(yàn)的動(dòng)物數(shù)不少于 6070%，而且 SD 不大于平均值的 1/3 左右。3. 開始試驗(yàn)三、 四周后腫瘤重量大于 1g， 并且沒有潰爛。當(dāng)然，這些條件都是錦上添花的東西，如果以 1*107/site 都勉勉強(qiáng)強(qiáng)長(zhǎng)出腫瘤，那么就不必過(guò)多的去考慮它了。 接種部位接種部位 : 腋窩中部外側(cè)皮下為好。皮下腫瘤模型中，想要成瘤 率高就接種在腋下。 接種時(shí)由裸鼠體側(cè)腰部稍靠上的部位進(jìn)針， 要保 證與接種點(diǎn)的距離小于針頭的長(zhǎng)度， 向頭部方穿行， 絕對(duì)不能刺破皮 膚或者刺破肌肉層，當(dāng)針頭到達(dá)接種位點(diǎn)時(shí)注射，退出針頭，這樣操 作的目的并不完全是防止漏液， 其實(shí)熟練后， 不需要皮下穿行也不會(huì) 漏液，主要是防止

3、污染，進(jìn)針點(diǎn)還有少量污染的可能性的，針頭在皮 下穿行一段后，接種點(diǎn)離進(jìn)針點(diǎn)較遠(yuǎn)，最大限度減少污染的可能。如果是用于正式實(shí)驗(yàn)， 那么一只老鼠就只能接種一個(gè)位點(diǎn)， 不可 以接種多個(gè)位點(diǎn)用于保證可用的模型數(shù)。 因?yàn)樵谟行┣闆r下， 一個(gè)老 鼠身上有多于一個(gè)腫瘤的情況下， 會(huì)有相互影響的可能， 無(wú)論這幾個(gè) 腫瘤相距有多遠(yuǎn)。 要是想多打幾個(gè)部位做做預(yù)試驗(yàn)， 倒也不是不可以， 但是我覺得，根本上沒有什么必要。皮膚不用繃得太緊， 平展就可以了， 另外接種的時(shí)候進(jìn)針點(diǎn)很靠 下，針頭在皮下走一段再注射，速度不要太快。注射前針頭稍微動(dòng)一 動(dòng)，能動(dòng)就說(shuō)明在皮下，否那么可能在皮內(nèi)或者肌肉內(nèi)。一般來(lái)說(shuō)都是 有鼓包的但是要

4、是你接種位置太深入腋窩， 你是看不到鼓包的。 主要 靠針頭稍微動(dòng)一動(dòng)來(lái)判斷。是否應(yīng)用免疫抑制劑裸鼠皮下種瘤后， 可以通過(guò)應(yīng)用免疫抑制劑， 比方環(huán)磷酰胺 2mg 每只，打兩天 來(lái)加速瘤體的生長(zhǎng)，當(dāng)然我知道裸鼠是 T 免疫缺陷動(dòng) 物，但是人家說(shuō)的CTX可以進(jìn)一步抑制裸鼠的體液免疫和 NK細(xì)胞殺 傷的保護(hù)作用，可以加快瘤子的生長(zhǎng)，這樣造模的周期很短，也可以 進(jìn)行人為的控制， 不知道這個(gè)觀點(diǎn)是不是有道理， 實(shí)踐中是不是真有 人這么做呢樓上說(shuō)的文獻(xiàn)中也有報(bào)道，而且還有預(yù)先用放射照射抑制動(dòng)物 免疫功能再接種的方法， 但是一般常規(guī)應(yīng)用中大多數(shù)時(shí)候不推薦這么 做。另外還有一個(gè)問題應(yīng)該被考慮到， 大家現(xiàn)在都在琢

5、磨著怎么讓腫 瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人為的把腫瘤生長(zhǎng)加速，其 實(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)并不好。因?yàn)樵炷Ｖ芷诙?，很可能生長(zhǎng)速度也會(huì)被加快，腫瘤可能很快就潰爛了， 這樣就不得不被迫中止實(shí)驗(yàn)， 而用藥卻沒有用 到足夠的時(shí)間，藥效還沒有發(fā)揮出來(lái)就結(jié)束了，這樣是很不利的。所 以一般情況下， 應(yīng)該盡量的復(fù)合這個(gè)瘤株本身的生長(zhǎng)特性， 不應(yīng)該過(guò) 多地去加以人為的干擾。是否用手術(shù)標(biāo)本荷瘤如果是藥效試驗(yàn)，不建議用手術(shù)標(biāo)本，因?yàn)镾FDA勺臨床前研究 指導(dǎo)原那么上明確指出要用建株的腫瘤株進(jìn)行試驗(yàn)， 因?yàn)橛檬中g(shù)標(biāo)本的 試驗(yàn)可重復(fù)性太差，你這個(gè)標(biāo)本萬(wàn)一沒有保存好，斷掉了，你自己都 很難重復(fù)出上次勺試驗(yàn)結(jié)果。 國(guó)外勺文獻(xiàn)上看

6、到勺卻很少有人用手術(shù) 標(biāo)本構(gòu)建模型進(jìn)行試驗(yàn)。取材勺部位：腫瘤生長(zhǎng)活潑，狀態(tài)良好，結(jié) 締組織比較少勺地方。 運(yùn)送途徑： 無(wú)菌、冰浴保溫， 無(wú)菌培養(yǎng)液浸泡， 時(shí)間不能超過(guò) 1 個(gè)小時(shí)。 最好一個(gè)小時(shí)內(nèi)就能夠接種到動(dòng)物體內(nèi)。 接 種部位：腋下。另外，手術(shù)標(biāo)本還有一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)：你不能保證取得勺標(biāo) 本一定能夠順利地成瘤并且用于試驗(yàn)。本卷須知A 裸鼠勺周齡 ,B 腫瘤細(xì)胞 : 何種腫瘤 , 接種細(xì)胞勺數(shù)量 用對(duì)數(shù) 生長(zhǎng)期勺 ,活力高勺 記數(shù)要準(zhǔn)確 ,C 接種方式:注意不要漏液 ,否那么會(huì) 損失細(xì)胞數(shù)量D飼養(yǎng)環(huán)境：要求是SPF條件具體操作1. 能不能成瘤，首先要考慮你勺腫瘤細(xì)胞系能否成瘤，其次關(guān) 鍵是你勺腫瘤細(xì)

7、胞數(shù)， 一般腫瘤細(xì)胞存活力還是蠻高勺， 所以你重點(diǎn) 要考慮細(xì)胞數(shù)的問題，但最高不要超過(guò) 1*107。2. 接種時(shí)間，最好在 1小時(shí)之內(nèi)完成。 但在我實(shí)際操作過(guò)程中， 裸鼠的數(shù)量又多， 1 小時(shí)之內(nèi)根本做不完的，所以你可以預(yù)先將細(xì)胞 放在冰盒里暫為保存。效果還是不錯(cuò)的。3. 成瘤時(shí)間，每個(gè)腫瘤細(xì)胞不太一樣，細(xì)胞數(shù)適宜，一般一周 左右應(yīng)該能出來(lái)了；另外， 如果你是打皮下，你要考慮是否有打到深 層組織，比方肌肉，那即使成瘤了，也不大好摸出來(lái)。腹腔注射1、腹腔注射進(jìn)針的位置在腹中線與小鼠兩后肢上沿連交叉以下 的位置。2、腹腔注射很少會(huì)打到腸管， 因?yàn)槟c子在碰到硬物時(shí)會(huì)縮起來(lái)， 當(dāng)然前提是你的進(jìn)針不是特

8、別深，如果你的整個(gè)針頭都扎入了腹腔， 那么腸子是無(wú)處可躲了。3、腹腔注射進(jìn)針后，你可以將針頭左右擺動(dòng)一下，如果是正確 的，這時(shí)會(huì)有一種很自由無(wú)障礙的感覺， 進(jìn)針角度撐握在小于 45 度， 針頭進(jìn)入長(zhǎng)度不超過(guò) 3 厘米左右。用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)，以左手抓住動(dòng)物，使腹部向上，右手將注射針頭于左或右下腹部刺入皮下，使針頭向前推，再以45度角穿過(guò)腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液圖 2-5 ，為防止傷及 內(nèi)臟，可使動(dòng)物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。假設(shè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔， 進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。腫瘤倍增時(shí)間腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ湍[瘤的倍增時(shí)間 doubling time ，應(yīng) 該是在瘤體積 100800

9、之間計(jì)算，但是一組動(dòng)物有 10 只，每 周測(cè)量 2 次瘤體積，如果我想計(jì)算從 200倍增到 400的時(shí)間的 話， 10只動(dòng)物不會(huì)在我測(cè)量體積的時(shí)候正好到 200或 400，那 么，在計(jì)算的時(shí)候，具體應(yīng)該怎么做Geddes 等29 將結(jié)節(jié)倍增時(shí)間的計(jì)算公式表示為： DT =ln2A t /In V2/V1, VI、V2分別是前后兩次測(cè)量的體積，t 是兩次測(cè)量的時(shí)間間隔你的問題有歧義，我覺得可以有幾下幾種理解：1. 測(cè)量的時(shí)候，對(duì)于某個(gè)老鼠來(lái)說(shuō)，第一次可能測(cè)出來(lái)的體積 是不是正好 200，第二次是不是正好 400，對(duì)于其他的動(dòng) 物都有這樣的問題，2. 對(duì)于十只老鼠來(lái)說(shuō)，測(cè)量的時(shí)候，可能 1 號(hào)老鼠

10、是， 2號(hào)是，3號(hào)是 ，這也是一種理解，我的意見是：測(cè)量一段比較長(zhǎng)的時(shí)間， 每只老鼠可以獨(dú)立計(jì)算倍增時(shí)間， 然后計(jì)算平均值， SD等，用統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的手段。個(gè)體差異同一批種幾十只老鼠，有的就長(zhǎng)不出來(lái)，有的長(zhǎng)得很大， 使評(píng)價(jià)藥效很困難。排除接種懸液未搖勻的可能后，還有什么 原因可能造成這一點(diǎn)可能是是個(gè)體差異了。其中，老鼠年齡是 一個(gè)很大的因素。本人就遇到過(guò) 2個(gè)月的老鼠接種腫瘤以后，有的長(zhǎng)有的不長(zhǎng)的情況。如果控制好試驗(yàn)條件，動(dòng)物也比較均 一的話，一般腫瘤生長(zhǎng)都會(huì)很好的控制在一定范圍的腫瘤模型新藥申報(bào)zym145286做的腫瘤模型實(shí)驗(yàn)是用于新藥申報(bào)用，現(xiàn)在有一些 問題還不能校準(zhǔn) , 我做的是人癌模型

11、 , 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為裸鼠 .1. 新藥報(bào)批中 , 有明確的要求說(shuō)腫瘤來(lái)源必須是體內(nèi)傳代 3 次 以上嗎2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后 , 對(duì)于取出腫瘤塊的質(zhì)量有沒有明確的規(guī)定呢還 是跟其他種鼠一樣 , 要求平均瘤重不小于 1g 或者不大于 20%的 瘤快質(zhì)量不小于 400mg,3. 實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)相對(duì)腫瘤增殖率 T/C(%), 指的是瘤體積比還 是瘤質(zhì)量比4. 實(shí)驗(yàn)申報(bào)材料是否需要附屬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物裸鼠的照片假設(shè)需要附 屬的話 , 照片沒有沒有什么要求怎么照的， 是鼠活的時(shí)候的照片 還是實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死鼠后在擺好位置照5. 申報(bào)材料中附圖要求是腫瘤的生長(zhǎng)曲線還是不同時(shí)間測(cè)量的 T/C 值對(duì)時(shí)間所做的曲線還是兩個(gè)都要有呢6

12、. 實(shí)驗(yàn)分組分 5組, 空白溶劑對(duì)照組 ,藥物高中低三個(gè)劑量組 , 陽(yáng)性藥物有效濃度對(duì)照組 . 這樣可以嗎要是不可以 , 還需要怎 么分呢7. 實(shí)驗(yàn)材料中是否需要包含該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液相關(guān)指標(biāo)的數(shù)值呢比方:白細(xì)胞數(shù)量 ,骨髓的影響等等8. 一次實(shí)驗(yàn)有效后 , 是不是也需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次那三次的數(shù)據(jù) 都需要包含在數(shù)據(jù)中嗎swordzjsh 具體問題答復(fù)如下：1. 沒有問題，新老原那么均明確要求體內(nèi)三代以上， 并且不能超過(guò) 1520 代人腫瘤。2. 新原那么已經(jīng)沒有瘤重的指標(biāo)，只考察瘤體積，也沒有對(duì)試驗(yàn)結(jié)束 后的腫瘤大小有明確要求，但是老的指導(dǎo)原那么有這方面的要求。3. 新的原那么是指瘤體積，老的指瘤重

13、，實(shí)際上在數(shù)據(jù)處理的時(shí)候一 般瘤體積和瘤重的數(shù)據(jù)都會(huì)參加，分別計(jì)算相應(yīng)的 T/C。4. 需要，常見的有兩種：一種是處死后擺放并拍攝整鼠照片，還有 一種是剝?nèi)∧[瘤后拍攝腫瘤的照片，還是那句話，最好都有，至少資 料中放一個(gè)，另外一份備好，辯論的時(shí)候可以隨時(shí)展示。另外，以前 不允許數(shù)碼拍攝，要求光學(xué)照相機(jī)，以防電腦編輯，不知道現(xiàn)在還有 沒有類似的要求。5. 有的人要看腫瘤生長(zhǎng)曲線， 有的人要看 T/C 的曲線，不過(guò)一般放生 長(zhǎng)曲線的多一些，記住，生長(zhǎng)曲線現(xiàn)在要求 RTV相對(duì)腫瘤體積。以 前報(bào)批的時(shí)候就可以放 RTV曲線了，現(xiàn)在更是RTV的天下。6. 一般來(lái)說(shuō)， 正式試驗(yàn)根本上就是這么設(shè)計(jì)了， 但是你

14、最好有這些劑 量、療程、給藥途徑等的設(shè)計(jì)依據(jù)，比方權(quán)威文獻(xiàn)、你們的預(yù)試驗(yàn)等 材料備問。當(dāng)然， 如果你的藥物有些特別的地方，那么要根據(jù)他的具 體特點(diǎn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)。7. 這個(gè)是錦上添花的指標(biāo)，對(duì)于藥效試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，沒有明確要求，但 是一定要有體重和死亡的數(shù)據(jù)。8. 老原那么要求重復(fù)兩次，一共三次試驗(yàn)，新原那么前幾稿要求重復(fù)一 次，一共三次試驗(yàn)，但是最新一稿我沒有看到對(duì)于重復(fù)試驗(yàn)的要求， 但是作為藥理研究的根本常識(shí)， 重復(fù)試驗(yàn)是一定需要的， 作為正式試 驗(yàn)的重復(fù)試驗(yàn)應(yīng)該把數(shù)據(jù)和結(jié)果分析都列入報(bào)告中， 重復(fù)試驗(yàn)之間是 同等重要的。zym145286:針對(duì)您的答復(fù) , 我仍有幾點(diǎn)不解1. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后瘤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

15、問題 , 您說(shuō)新原那么沒有指標(biāo) , 那么老 原那么 就是現(xiàn)在還遵循的原那么 具體是多少呢 , 能不能說(shuō)明一下 啊2. T/C 標(biāo)準(zhǔn)按照體積計(jì)算的時(shí)候 , 按照的是哪個(gè)時(shí)間點(diǎn)的體積呢, 還是說(shuō)整個(gè)測(cè)量過(guò)程的體積都要算3. 還有一個(gè)比較根本的問題，不要笑話我了，呵呵，那個(gè)RTV是怎樣算出來(lái)的是用藥組數(shù)據(jù)減去空白組數(shù)據(jù)嗎還是其他算法4. 正式實(shí)驗(yàn)中 , 每組的動(dòng)物數(shù)量是多少 6 只, 還是 10-12 只5. 對(duì)給藥時(shí)間有沒有什么具體要求呢 , 就是說(shuō)有沒有上限 , 比方 不可以超過(guò)一個(gè)月啊什么的swordzjsh1. 老原那么的標(biāo)準(zhǔn)就是你寫出來(lái)的那個(gè)。2. 整個(gè)測(cè)量過(guò)程的體積都要算， 可以用 T/

16、C 對(duì)時(shí)間點(diǎn)作圖的那 種。實(shí)際上，不知道你有沒有老的指導(dǎo)原那么，上面有一個(gè)表， 那個(gè)表里面匯總了一些試驗(yàn)的根本信息，那個(gè)表里面要填增殖 率，一般是選效果最好的那一天的數(shù)據(jù)填上去。3. RTV = Vt / VO 。其中VO為分籠給藥時(shí)即dO測(cè)量所得腫瘤體積，Vt為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積。RTV是針對(duì)每一只小 鼠計(jì)算的。4. 對(duì)于裸鼠來(lái)說(shuō)， 5到 1O 只，要根據(jù)你的藥物的性質(zhì)來(lái)定，如果SD較大，建議多設(shè)幾只，容易做出統(tǒng)計(jì)差異。如果 SD較 小，不少于 6 只，因?yàn)橐笤囼?yàn)過(guò)程中動(dòng)物死亡率不超過(guò) 2O%， 6只動(dòng)物死了一只還可以接受， 要是 5 只動(dòng)物死了一只就是 2O% 了。5. 沒有具體的要

17、求， 一般在 3到 5周，常見為三周， 并且保證 腫瘤長(zhǎng)到足夠的大小。如果有特別的原因可以變化試驗(yàn)周期， 但是一般都是加長(zhǎng)而不會(huì)縮短。實(shí)驗(yàn)分組與標(biāo)記baobaogao197759: 我的實(shí)驗(yàn)是觀察藥物對(duì) lewis 肺癌的生長(zhǎng)的影響。1、實(shí)驗(yàn)分為五組模型組、陽(yáng)性對(duì)照組CTX藥物 大、中、小劑量組。我不清楚需不需要設(shè)置陰性對(duì)照組就是 不造模組，2、C57小鼠怎樣標(biāo)記，有剪趾、穿耳孔的方法。 但是具體的操作沒有說(shuō)明，能否介紹一下。swordzjsh1. 不需要設(shè) normal 組，因?yàn)槟[瘤的生長(zhǎng)和評(píng)價(jià)非常明顯， 不會(huì) 有干擾的可能。2. 我一般是剪耳號(hào)， 一只小鼠兩只耳朵， 每只耳朵可以剪上側(cè) 和

18、下側(cè)兩個(gè)位點(diǎn)，你可以自己指定組合，比方我們是這樣的： 左上為一號(hào)，左下為二號(hào)，右上為三號(hào)，右下為四號(hào)，左側(cè)上 下為五號(hào)，右側(cè)上下為六號(hào)，左上右上為七號(hào)，左下右下為八 號(hào).細(xì)胞懸浮液體roger150 , 在做腫瘤模型用細(xì)胞接種時(shí) , 細(xì)胞懸浮在什么液體 里面. 有沒用 matrigel 同細(xì)胞混勻后再接種的Swordzjsh: 一般來(lái)說(shuō)， 可以懸浮在相應(yīng)的無(wú)血清培養(yǎng)基、 PBS、saline 中，接種效果以上三種次第降低。用 matrigel 是一種促進(jìn)腫瘤形成 生長(zhǎng)的手段， 如果本身腫瘤生長(zhǎng)不是特別困難不建議用它， 但是一些 比方A549之類的細(xì)胞株，接種后五六十天還只有600700mm的腫

19、瘤, 就可以考慮使用 matrigel 。使用 matrigel 的時(shí)候要注意低溫操作， 因?yàn)槭覝叵?mareigel 就有可能固化。一般是在冰浴中操作。白血病腫瘤 , 皮下注射 or 靜脈注射abaiabai我的理解是， 靜脈注射反響的是疾病全身播散的作用， 皮下注射便于 觀察瘤塊大小， 衡量用藥效果， 應(yīng)該結(jié)合自己試驗(yàn)的目的選擇注射方 法juanr7213 我最近剛剛實(shí)驗(yàn)比較了一下靜脈注射和皮下接種白血病細(xì)胞株， 從理 論上說(shuō)靜脈接種似乎皮下接種更接近白血病的生物行為特點(diǎn)， 但是根 據(jù)我的實(shí)驗(yàn)和以前的文獻(xiàn)， 靜脈接種小鼠的平均生存期很短， 我的不 超過(guò) 10 天，我還試驗(yàn)性的進(jìn)行了化療，結(jié)

20、果幾乎全死了，而皮下接 種者結(jié)果穩(wěn)定。所以選皮下還是靜脈， 應(yīng)該根據(jù)自己的試驗(yàn)?zāi)康膩?lái)定， 長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)好似不太適合用靜脈注射的方法。swordzjsh 皮下或者靜脈注射都可以，看你的細(xì)胞株了，也有用腹腔注射的。小鼠的捉拿 從籠盒內(nèi)將小鼠尾部捉住并提起， 放在籠蓋或外表粗糙的物體 上， 輕輕向后拉鼠尾， 在小鼠向前掙脫時(shí)， 用左手拇指和食指抓住兩耳和 頸部皮膚，無(wú)名指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調(diào)整好動(dòng) 物在手中的姿勢(shì)。 這類捉拿方法多用于灌胃以及肌肉、 腹腔和皮下注 射等。如假設(shè)進(jìn)行心臟采血、解剖、外科手術(shù)等實(shí)驗(yàn)時(shí)，就必須要固定 小鼠。使小鼠呈仰臥位必要時(shí)先進(jìn)行麻醉 ，用橡皮筋將小鼠固定

21、 在小鼠實(shí)驗(yàn)板上。如假設(shè)不麻醉，那么將小鼠放人保定架里，固定好保定 架的封口。小鼠性情較溫順，一般不會(huì)咬人，比較容易抓取固定。通常用右手提 起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙外表上， 在小鼠向前掙扎爬行 時(shí)，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚， 將小鼠置于左手掌心、 無(wú)名指和小指夾其背部皮膚和尾部， 即可將小鼠完全固定。 在一些特 殊的實(shí)驗(yàn)中，如進(jìn)行尾靜脈注射時(shí)， 可使用特殊的固定裝置進(jìn)行固定 , 如尾靜脈注射架或粗的玻璃試管。 如要進(jìn)行手術(shù)或心臟采血應(yīng)先行麻 醉再操作 ,如進(jìn)行解剖實(shí)驗(yàn)?zāi)敲幢仨毾刃袩o(wú)痛處死后再進(jìn)行。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)編號(hào)的方法很多， 根據(jù)動(dòng)物的種類數(shù)量和觀察時(shí)間長(zhǎng)短等因素來(lái)選

22、擇 適宜的標(biāo)記方法。 一 掛牌法：將號(hào)碼烙壓在圓形或方形金屬牌上 最好用鋁或不銹鋼 的, 它可長(zhǎng)期使用不生銹 , 或?qū)⑻?hào)碼按實(shí)驗(yàn)分組編號(hào)烙在栓動(dòng)物頸部 的皮帶上，將此頸圈固定在動(dòng)物頸部。該法適用于狗等大型動(dòng)物。 二打號(hào)法：用刺數(shù)鉗又稱耳號(hào)鉗 將號(hào)碼打在動(dòng)物耳朵上。 打號(hào)前 用蘸有酒精的棉球擦凈耳朵， 用耳號(hào)鉗刺上號(hào)碼， 然后在烙印部位用 棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。 該法適用于耳朵比較大的兔、 狗 等動(dòng)物。三針刺法：用七號(hào)或八號(hào)針頭蘸取少量碳素墨水，在耳部、前后肢 以及尾部等處刺入皮下， 在受刺部位留有一黑色標(biāo)記。 該法適用于大 小鼠、豚鼠等。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量少的情況下， 也可用于兔、 狗等

23、動(dòng)物。 四 化學(xué)藥品涂染動(dòng)物被毛法：經(jīng)常應(yīng)用的涂染化學(xué)藥品有 涂染紅色：中性紅或品紅溶液。涂染黃色： 3-5 苦味酸溶液。 涂染黑色：煤焦油的酒精溶液。根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組編號(hào)的需要， 可用一種化學(xué)藥品涂染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物背部 被毛就可以。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量較多，那么可以選擇兩種染料。該方法 對(duì)于實(shí)驗(yàn)周期短的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物較適宜， 時(shí)間長(zhǎng)了染料易退掉； 對(duì)于哺乳 期的子畜也不適合，因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。五剪毛法：該法適用于大、中型動(dòng)物，如狗、兔等。方法是用剪毛 刀在動(dòng)物一側(cè)或背部剪出號(hào)碼， 此法編號(hào)清楚可靠， 但只適于短期觀 察。 六打孔或剪缺口法： 可用打孔機(jī)在兔耳一定位置打一小孔來(lái)表示一 定的號(hào)碼。

24、如用剪子剪缺口 , 應(yīng)在剪后用滑石粉捻一下 , 以免愈合后看 不出來(lái)。該法可以編至1 9999號(hào)，此種方法常在飼養(yǎng)大量動(dòng)物時(shí) 作為終身號(hào)采用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組 一 分組的原那么：進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，經(jīng)常需要將選擇好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 按研究的需要分成假設(shè)干組。 動(dòng)物分組應(yīng)按隨機(jī)分配的原那么， 使每只動(dòng) 物都有同等時(shí)機(jī)被分配到各個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中去， 以防止各組之間 的差異 , 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 特別是進(jìn)行準(zhǔn)確的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn) , 必須在隨機(jī)分組 的根底上進(jìn)行。每組動(dòng)物數(shù)量應(yīng)按實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)短、 實(shí)驗(yàn)類型及統(tǒng)計(jì)學(xué)要求而定。 如果 是慢性實(shí)驗(yàn)或需要定期處死動(dòng)物進(jìn)行檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)， 就要求選較多的動(dòng) 物，以補(bǔ)足動(dòng)物自然死亡和認(rèn)為

25、處死所喪失的數(shù)量， 確保實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí) 有符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求的動(dòng)物數(shù)量存在。 二建立對(duì)照組：分組時(shí)應(yīng)建立對(duì)照組。 1. 自身對(duì)照組：是指實(shí)驗(yàn)數(shù) 據(jù)而言。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身在實(shí)驗(yàn)處理前、 后兩個(gè)階段的各項(xiàng)相關(guān)數(shù)據(jù)就 分別是對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，此法可排除生物間的個(gè)體差異。2. 平行對(duì)照組：有正對(duì)照組和負(fù)對(duì)照組兩種。 給實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物某種處理， 而給正對(duì)照組用同樣方法進(jìn)行處理， 但并不采用實(shí)驗(yàn)所要求的藥物或 手段，負(fù)對(duì)照組那么不給任何處理。 3. 具體分組時(shí)，應(yīng)防止人為因素 , 隨 機(jī)把所有的動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)，然后令其雙數(shù)為A組 (實(shí)驗(yàn)組),單數(shù)為B 組(對(duì)照組)即可或反之。如果要分假設(shè)干個(gè)組時(shí)， 應(yīng)該用隨機(jī)數(shù)字表

26、示 進(jìn)行完全隨機(jī)分組。動(dòng)物采血采血方法的選擇， 決定于實(shí)驗(yàn)的目的所需血量以及動(dòng)物種類。 凡用血 量較少的檢驗(yàn)如紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白的測(cè)定，血液涂片以及酶 活性微量分析法等， 可刺破組織取毛細(xì)血管的血。 當(dāng)需血量較多時(shí)可 作靜脈采血。靜脈采血時(shí)，假設(shè)需反復(fù)屢次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開始，以 免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。例如，研究毒物對(duì)肺功能的影響、血液 酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動(dòng)、動(dòng)脈血氧分壓、二氧化碳分 壓和血液pH值以及K+、Na+、CI-離子濃度，必須采取動(dòng)脈血液。 采 血時(shí)要注意：采血場(chǎng)所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25-28 C,冬季，15-20 C為宜；采血用具有采用部位一般

27、需要進(jìn)行 消毒；采血用的注射器和試管必須保持清潔枯燥；假設(shè)需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先參加抗凝劑 .采動(dòng)物品種 最大平安采血量 (ml) 最小致死采血量 (ml)小鼠小鼠采血方法1. 割剪 尾采血 當(dāng)所需血量很少時(shí)采用本法。 固定動(dòng)物并露出鼠尾。 將尾部毛剪去后消毒，然后浸在 45 C左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部 血管充盈。再將尾擦干，用銳器 刀或剪刀 割去尾尖 -0.5cm ，讓血液 自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取， 采血結(jié)束， 傷口消毒并壓迫止 血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動(dòng)脈或靜脈，收集血液的方法同 上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血，大鼠。2. 鼠尾刺血法 大鼠用

28、血量不多時(shí) 僅做白細(xì)胞計(jì)數(shù)或血紅蛋白檢 查 ，可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使 鼠尾充血。用 7號(hào)或 8 號(hào)注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時(shí)即有 血滴出，一次可采集1050mm3如果長(zhǎng)期反復(fù)取血，應(yīng)先靠近鼠尾 末端穿刺，以后再逐漸向近心端穿刺。3. 眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或 大鼠的頸部 大鼠采血需帶上紗手套 ，應(yīng)防止動(dòng)物窒息。 當(dāng)取血時(shí)左 手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)， 使眶后靜脈叢充血。 右手持 續(xù)接7號(hào)針頭的1ml注射器或長(zhǎng)頸34cm硬質(zhì)玻璃滴管毛細(xì)管內(nèi) 徑-1.0mm,使采血器與鼠面成 45C的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜 面

29、先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn) 1 80度使斜面對(duì)著眼眶后界。刺入濃度，小 鼠約23mm大鼠約45mm當(dāng)感到有阻力時(shí)即停止推進(jìn)，同時(shí)， 將針退出約-0.5mm,邊退邊抽。假設(shè)穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細(xì)管中， 當(dāng)?shù)玫剿璧难亢? 即除去加于頸部的壓力, 同時(shí),將采血器拔出, 以防止術(shù)后穿刺孔出血。 假設(shè)技術(shù)熟練,用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均 無(wú)多大困難。左右兩眼輪換更好。體重 20-25g 的小鼠每次可采血 ； 體重 200-300g 大鼠每次可采血，可適用于某些生物化學(xué)工程的檢驗(yàn)。4. 斷頭取血 采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大 小 鼠的 頸部皮膚，并作動(dòng)物頭朝下傾的姿勢(shì)。右手用剪刀猛剪鼠頸，約1

30、/2-4/5的頸部前剪斷，讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約；大鼠約 5-10ml 。5. 心臟采血 鼠類的心臟較小，且心率較快，心臟采血比較困難，故 少用。活體采血方法與豚鼠相同。假設(shè)做開胸一次死亡采血，先將動(dòng)物 作深麻醉，翻開胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右心室，吸取血液。小 鼠約；大鼠約。6. 頸動(dòng)靜脈采血 先將動(dòng)物仰位固定，切開頸部皮膚，別離皮下結(jié)締 組織，使頸靜脈充分暴露， 可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)別離出 頸動(dòng)脈，離心端結(jié)扎，向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。7. 腹主動(dòng)脈采血 最好先將動(dòng)物麻醉，仰臥固定在手術(shù)架上，從腹正 中線皮膚切開腹腔，使腹主動(dòng)脈清楚暴露。用注射器吸出血液，防止 溶血。或

31、用無(wú)齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動(dòng)脈近心端，用尖頭手術(shù)剪 刀，剪斷動(dòng)脈，使血液噴入盛器。8. 股動(dòng)靜脈采血 先由助手握住動(dòng)物，采血者左手拉直動(dòng)物下肢， 使靜脈充盈?；蛘咭圆珓?dòng)為指標(biāo)， 右手用注射器刺入血管。 體重 15-20g 小鼠采血約，大鼠約。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量確實(shí)定及計(jì)算方法一動(dòng)物給藥量確實(shí)定1. 先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量 , 然后用小于中毒 量的劑量，或取致死量的假設(shè)干分之一作為應(yīng)用劑量， 一般可取1/101/5 。2. 植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。3. 化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的藥物， 特別是化學(xué)結(jié)構(gòu)和作 用都相似的劑量。4. 確定劑量后，如第一次用藥的作用不明顯，動(dòng)物

32、也沒有中毒的表 現(xiàn), 可以加大劑量再次實(shí)驗(yàn)。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，那么應(yīng)降 低劑量再次實(shí)驗(yàn)。在一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用 常隨劑量的加大而增強(qiáng)。 所以有條件時(shí)，最好同時(shí)用幾個(gè)劑量作實(shí)驗(yàn)， 以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。 如實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)劑量與 作用強(qiáng)度之間毫無(wú)規(guī)律時(shí)，那么更應(yīng)慎重分析。5. 用大動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)， 防止動(dòng)物中毒死亡 , 開始的劑量可采用鼠類 的 1/151/2, 以后可根據(jù)動(dòng)物的反響調(diào)整劑量。6. 確定動(dòng)物給藥劑量時(shí)，要考慮給藥動(dòng)物的年齡大小和體質(zhì)強(qiáng)弱。 一般說(shuō)確定的給藥劑量是指成年動(dòng)物的， 如是幼齡動(dòng)物，劑量應(yīng)減小。 如以狗為例：6 個(gè)月以上的狗給

33、藥劑量為 1 份時(shí)， 36個(gè)月的給 1/2 份， 4589日的給 1/4 份， 2044日的給 1/8 份， 1019日的給 1/16 份。7. 確定動(dòng)物給藥劑量時(shí)， 要考慮因給藥途徑不同， 所用劑量也不同。 以口服量為 100 時(shí)，皮下注射量為 30 50，肌肉注射量為 20 30， 靜脈注射量為 25。 二 人與動(dòng)物的用藥量換算方法 人與動(dòng)物對(duì)同一藥物耐受性不同， 一般動(dòng)物的耐受性要比人大， 單位 體重的用藥量動(dòng)物比人要高。必須將人的用藥量換算成動(dòng)物的用藥 量。一般可按以下比例換算：人用藥量：1小鼠、大鼠：50100兔、豚鼠：1520 狗、貓：510以上系按單位體重口服用藥量換算。如給藥途

34、徑為靜脈、皮下、腹腔 注射，換算比例應(yīng)適當(dāng)減小些。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥途徑和方法一皮下注射 注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚，將連有 5 1/2 號(hào)針頭的注射 器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側(cè)，豚鼠在后大腿 的內(nèi)側(cè)或小腹部；大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙 可在脊背部淋巴腔注射。二皮內(nèi)注射 皮內(nèi)注射時(shí)需將注射的局部脫去被毛， 消毒后，用左手拇指和食指按 住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連 41/2 細(xì)針 頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射 藥液，此時(shí)可見皮膚外表鼓起一白色小皮丘。三肌肉注射 肌肉注射應(yīng)選肌肉興旺，無(wú)大血管通過(guò)的部位，一般多

35、項(xiàng)選擇臀部。注射時(shí)垂直迅速刺入肌肉，回抽針?biāo)ㄈ鐭o(wú)回血，即可進(jìn)行注射。給小 白鼠、大白鼠等小動(dòng)物作肌肉注射時(shí)， 用左手抓住鼠兩耳和頭部皮膚， 右手取連有 51/2 針頭的注射器，將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉，將 藥液注入。四腹腔注射 用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)，以左手抓住動(dòng)物，使腹部向上，右手將注 射針頭于左或右下腹部刺入皮下，使針頭向前推，再以45度角穿過(guò)腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為防止傷及內(nèi)臟，可使動(dòng)物 處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。假設(shè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔，進(jìn)針部位為下腹 部的腹白線離開1cm處。五靜脈注射 小白鼠和大白鼠：一般采用尾靜脈注射，鼠尾靜脈有三根，左右兩側(cè) 及背側(cè)各一根，左右兩側(cè)尾靜脈比較容易

36、固定，多采用，背側(cè)一根也 可采用，但位置容易固定。 操作時(shí)先將動(dòng)物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯 中，使尾巴露出，尾部用4550C的溫水浸潤(rùn)半分鐘或用酒精擦拭 使血管擴(kuò)張，并可使表皮角質(zhì)軟化， 以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)， 使靜脈充盈， 用中指從下面托起尾巴， 以無(wú)名指和小指夾住尾巴的末 梢，右手持注射器連 41/2 號(hào)細(xì)針頭，使針頭與靜脈平行小于 3 0C,從尾下四分之一處約距尾尖2-3厘米處進(jìn)針，此處皮薄易 于刺入，先緩注少量藥液，如無(wú)阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，可繼續(xù) 注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡 可能從末端開始，以后向尾根部方向移動(dòng)注射。幾種常用的動(dòng)物不同給藥途

37、徑的注射量注射途徑F丿卜鼠卩大時(shí)短狗*1 -35-10肌肉0.1-0.辭0. 2-0. %0.5應(yīng)山 5-1. 0-2-5打|0.5心1-23-105T.5 門皮下門0.1-0.曰0. 51.00. 5%1. A3. 0*3T2|六淋巴囊注射蛙類常采用此法，因其皮下有數(shù)個(gè)淋巴囊，注入藥物甚易吸收。腹 部淋巴囊和頭背淋巴囊常作為蛙類給藥途徑。 一般多項(xiàng)選擇用腹部淋巴囊 給藥。注射時(shí)將針頭從蛙大腿上端刺入，經(jīng)大腿肌層入腹壁肌層，再 進(jìn)入腹壁皮下，即進(jìn)入淋巴囊，然后注入藥液。有時(shí)也可采用胸淋巴 囊給藥。方法是將針頭刺入口腔，使穿過(guò)下頜肌層入胸淋巴囊內(nèi)注入 藥液，一次最大注射量為1毫升。蛙全身分布為咽

38、、胸、背、腹側(cè)、 腹、大腿和腳等七個(gè)淋巴囊。七經(jīng)口給藥在急性試驗(yàn)中，經(jīng)口給藥多用灌胃法，此法劑量準(zhǔn)確，適用于小白鼠、 大白鼠、家兔等動(dòng)物。小鼠、大鼠或豚鼠用輸血針頭或小號(hào)腰穿針頭，將其尖端斜面磨 劑，用焊錫在針尖周圍焊一圓頭，注意勿堵塞針孔，即成灌胃針；亦 可用燒成圓頭的硬質(zhì)玻璃毛細(xì)管或特制的塑料毛細(xì)秋，作為導(dǎo)管。灌胃時(shí)將針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動(dòng) 物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動(dòng)物口中，沿咽后壁徐徐插入 食道。動(dòng)物應(yīng)固定成垂直體位，針插入時(shí)應(yīng)無(wú)阻力。假設(shè)感到阻力或動(dòng)物掙扎時(shí)， 應(yīng)立即停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬觯?以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當(dāng)灌胃針插入小鼠 3

39、-4cm,大鼠或豚鼠4-6cm后可將 藥物注入。常用的灌胃量小鼠為，大鼠 1-4ml，豚鼠為1-5ml。各種 動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為， 大鼠4-7ml，豚鼠為4-7ml， 家兔為 80-150ml，狗為 200-500ml。八其它途徑給藥1 呼吸道給藥 呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等病癥存在藥物或毒氣, 均需要通過(guò)動(dòng)物呼吸道給藥。如一般實(shí)驗(yàn)時(shí)給動(dòng)物乙醚作吸入麻醉, 給動(dòng)物吸一定量的氨氣、二氧化碳等觀察呼吸、循環(huán)等變化；給動(dòng)物 定期吸入一定量的SO2鋸末煙霧等可造成慢性氣管炎動(dòng)物模型等； 特別在毒物學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用更為廣泛。2皮膚給藥 為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、 局部作用、 致敏作用

40、和光感作用等, 均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。 如家兔和豚鼠常 采用背部一定面積的皮膚脫毛后, 將一定藥液涂在皮膚上, 藥液經(jīng)皮 膚吸收。3脊髓腔內(nèi)給藥 此法主要用于椎管麻醉或抽取腦脊液。動(dòng)物名稱項(xiàng)即灌胃宀皮下注 射農(nóng)肌肉注射門腹腔注射4靜脈注射禎小白鼠最大給裁量P0. 4ml屮0. 4rtil*Jlml+J0.刼2使用針頭門9鈍頭51吃片5(1/2；鼠 1/2%3大白鼬最犬給藥量A1ml1ml卜0.鈿2込4iol-使用針頭。靜脈切開5口鼠m最大給藥量3irliIidI+jCL 5nl*J4ml+J5ml使用針知靜脈切開針卩6(1/2)6(1/2)*滄5口兔3最大給藥量口20iiiL*j2mK5ml

41、+J10ml使用針頭門L0號(hào)屮6 (1/2)6(1/2)&導(dǎo)尿管口舲最丸合藥量使用 針頭門2QniltL0號(hào)420mlJ?屮加5ml+-&IOioI+j導(dǎo)尿管存蛙R淋巴囊注射最大注射量51/只心裸鼠標(biāo)記有沒有什么好的染料苦味酸是常用的染色劑，但是怕對(duì)裸鼠有傷害， 不知道這種擔(dān)憂是否多余。有沒有人做過(guò)裸鼠的實(shí)驗(yàn)，標(biāo)記持久，并 且確實(shí)所使用的染色劑對(duì)裸鼠沒有毒性謝謝了！1紫藥水,缺點(diǎn)是標(biāo)記不是很持久.2用記號(hào)筆可在尾巴上標(biāo)記，這個(gè)比較簡(jiǎn)單實(shí)用，過(guò)一段時(shí)間你可以 重新描一下，本人經(jīng)常這樣使用。3裸鼠標(biāo)記：可以用剪耳號(hào)，也可以用簽字筆在裸鼠尾巴或耳朵上標(biāo)記數(shù)字來(lái)標(biāo)記，在是我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中應(yīng)用的方法4在小鼠

42、的耳朵上用耳號(hào)鉗剪 V形豁口，左耳靠近頭頂?shù)囊欢诉吘壣?緣：一個(gè)豁口代表 1，下緣：一個(gè)豁口代表 3。右耳上緣：一個(gè)豁口 代表 10，右耳下緣：一個(gè)豁口代表 30。這樣下來(lái)， 100 以內(nèi)數(shù)量的 老鼠都可以在耳朵上標(biāo)記出來(lái)了。 例： 75號(hào)- 左耳上 2個(gè)口下 1個(gè) 口，右耳上 1個(gè)口下 2個(gè)口如果有人要養(yǎng)更多，那么就在身上標(biāo)記 百位數(shù)字吧， 比方剪尾巴剃毛什么的。 這樣標(biāo)記的好處是不會(huì)隨著時(shí) 間和動(dòng)物的活動(dòng)而消失。5除了剪耳，還經(jīng)常用給“耳穿孔的方法，用專用穿孔器。 將鼠的左右耳，分為上、中、下三局部。比方：左上孔是“ 1，左 中孔“ 2，類似排列，如果每組數(shù)量大，還可以穿兩洞，甚至三洞，

43、如“左上 +左下代表為“ 12。裸鼠和黑鼠都可以用這種方法，就 是殘忍點(diǎn)。6 可以剪腳趾，后腳從左到右 19，前腳從左到右 10100，如果是 43 號(hào)，那么前腳從左到右剪第四個(gè)腳趾，后腳從左到右剪第三個(gè)腳趾， 如此 OK！小鼠灌胃一是要保持小鼠的頭部和頸部成一直線，方便灌胃針頭進(jìn)入； 二是動(dòng)作要輕柔，從口角進(jìn)入，防止損失食道。做的多了自然就熟練 了。具體操作過(guò)程如下：1. 準(zhǔn)備灌胃針頭。一般可以從市場(chǎng)上面買到，實(shí)在沒有的話，可以 用 12 號(hào)的針頭，剪去針尖，用砂紙將頭端磨平，也可以用。但是買 的灌胃針頭的頭端用錫或者適宜的方法處理了針頭的銳口， 自己用砂 紙不可能將所有的銳口都磨掉， 用這

44、樣的針頭灌胃， 損失小鼠食道的 可能性比較大。2. 抓住小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動(dòng)作很簡(jiǎn)單，左 手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴， 另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部即 可。因?yàn)樾∈笫冀K在活動(dòng)中，假設(shè)一次抓的感覺不是很順手，要放開重 新抓，不要逞強(qiáng)進(jìn)行下一步操作。3. 抓好小鼠就可以灌胃了，一般用 1ml 的注射器配灌胃針頭。灌胃 針頭從小鼠的嘴角進(jìn)入，壓住舌頭，抵住上顎，輕輕向內(nèi)推進(jìn)，進(jìn)入 食管后會(huì)有一個(gè)刺空感，進(jìn)入食道后就可以推注藥液了。 我認(rèn)為， 所謂的灌胃， 不必要灌胃針頭進(jìn)入小鼠的胃部， 進(jìn)入食管后就可以推 藥了，這樣對(duì)小鼠食道的損傷要小點(diǎn)， 特別是要長(zhǎng)期灌胃給藥的情況 下。當(dāng)

45、然，灌胃針頭也可以再往里面深入一點(diǎn)，防止藥液從口中流 出。4. 灌胃容積一般是10g,最大10g，每只小鼠的灌胃最大容積不超過(guò)。小鼠腹腔注射1. 小鼠腹腔注射可以用 1ml 的注射器，配合 4 號(hào)針頭。2. 腹腔注射時(shí)右手持注射器， 左手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴， 另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部， 使小鼠的頭部向下。 這樣腹腔中的器 官就會(huì)自然倒向胸部，防止注射器刺入時(shí)損傷大腸、小腸等器官。進(jìn) 針的動(dòng)作要輕柔，防止刺傷腹部器官。3. 尤其是對(duì)于體重較小的小鼠，腹腔注射時(shí)針頭可以在腹部皮下穿 行一小段距離， 最好是從腹部一側(cè)進(jìn)針， 穿過(guò)腹中線后在腹部的另一 側(cè)進(jìn)入腹腔，注射完藥物后，緩緩拔出針頭

46、，并輕微旋轉(zhuǎn)針頭，防止 漏液。4.小鼠腹腔注射的給藥容積一般為 510ml/kg。小鼠靜脈注射操作步驟：1. 首先要固定小鼠，最簡(jiǎn)單的固定方法就是把小鼠放在盒子里面， 讓它的尾巴伸在盒蓋的外面，用手抓住小鼠尾巴，輕輕往外拽，就可 以固定好小鼠了。這種固定方法，小鼠可以在盒子里面活動(dòng)，固定的 也不是很牢固， 但是只要你尾靜脈注射的手法很熟練， 就足以用來(lái)注 射了。還有的固定方法就是用一個(gè)小的圓筒，最好是金屬做的， 可以在當(dāng) 地的鐵匠鋪，或者買白鐵鋪里面定做首先是金屬比較結(jié)實(shí)，而且可 以用來(lái)固定在鐵架臺(tái)上， 方便操作。圓筒的一段有個(gè)蓋子可以拿下來(lái)， 蓋子中間有個(gè)小孔， 可以讓小鼠的尾巴伸出來(lái) 中間

47、的小孔可以用膠 布纏一下，防止銳利的邊緣割傷小鼠尾巴 。另外一段可以用金屬網(wǎng) 的結(jié)構(gòu)，網(wǎng)的形狀可以做成子彈頭的頭端形狀。 網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可以讓光線 透近來(lái)，方便小鼠鉆進(jìn)圓筒里面。圓筒的長(zhǎng)度約 10cm直徑約3 4cm可以做個(gè)系列長(zhǎng)度和直徑的圓筒，適合不同大小的小鼠。2. 固定好小鼠后就是注射了，一般用一次性的 1ml 的注射器就可以 了，玻璃 的 1ml 的注射器也可以用，針頭用 4號(hào)的就可以了。3. 注射前首先要讓小鼠的血管充盈?？梢圆捎?75%的酒精棉球擦拭 的方法或者采用溫水浸泡的方法。 假設(shè)小鼠的血管很不清楚， 推薦采用 溫水浸泡的方法，水溫以不燙手為宜。溫水浸泡 23分鐘后，取出 小鼠尾巴

48、，用干棉球擦拭。等一會(huì)兒，待血管充盈后，酒精棉球擦拭 后就可以進(jìn)針了。假設(shè)血管還不充盈，可以反復(fù)用溫水浸泡，切不可冒 險(xiǎn)注射，除非你手法很熟練，另當(dāng)別論。4. 小鼠尾部共有四條血管， 一般認(rèn)為左右的兩條靜脈比較容易注射， 多采用這兩條靜脈進(jìn)針。 一般要求進(jìn)針部位靠近小鼠的尾端， 這樣假設(shè) 注射失敗的話， 還可以再向上選擇進(jìn)針點(diǎn)。 但是進(jìn)針部位也不可以太 靠下，因?yàn)樵酵?，靜脈越細(xì)，操作越難，一般以小鼠尾巴下三分之 一的位置比較好。5. 最關(guān)鍵的就是進(jìn)針了。進(jìn)針時(shí)操作者左手食指和拇指固定住小鼠 的尾巴，讓小鼠的尾巴在經(jīng)過(guò)拇指后向下彎曲， 進(jìn)針點(diǎn)靠近拇指指甲。 針頭和血管呈約 30角，針尖斜面朝上

49、，輕輕挑刺入皮膚后針頭立 即和血管平行， 一般情況下一次就可以進(jìn)入血管， 可以將針頭刺入血 管一大半，左右輕輕晃動(dòng)針頭，確定針頭在血管內(nèi)，就可以推注藥液 了，正常情況下，推注的過(guò)程應(yīng)該沒有明顯阻力，血管也不會(huì)鼓起。 推液時(shí)動(dòng)作宜輕柔，假設(shè)發(fā)現(xiàn)血管鼓起，那是針頭沒有刺入血管，需立 即拔出針頭。皮下注射給藥 將藥液推入皮下結(jié)締組織， 經(jīng)毛細(xì)血管、 淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)的過(guò)程。作皮下注射常選項(xiàng)背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。操作時(shí)，常規(guī)消毒注 射部位皮膚，然后將皮膚提起，注射針頭取一鈍角角度刺入皮下，把 針頭輕輕向左右擺動(dòng)，易擺動(dòng)那么表示已刺入皮下，再輕輕抽吸，如無(wú) 回血，可緩慢地將藥物注入皮下。拔針時(shí)左手拇

50、、食指捏住進(jìn)針部位 片刻，以防止藥物外漏。注射量約為10g體重。肌肉注射給藥 小鼠體積小，肌肉少，很少采用肌肉注射。當(dāng)給小鼠注射不溶于水而 混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí)， 采用肌肉注射。 操作時(shí) 1 人固定小 鼠，另一人用左手抓住小鼠的 1 條后肢，右手拿注射器。將注射器與 半腱肌呈90角迅速插入1/4，注入藥液，用藥量不超10g體重。 靜脈注射給藥小鼠放在金屬籠或鼠夾中， 通過(guò)金屬籠或鼠夾的孔拉出尾巴， 用左手 抓住小鼠尾巴中部。小鼠的尾部有 2條動(dòng)脈和 3 條靜脈， 2條動(dòng)脈分 別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面 ,3 條靜脈呈品字型分布，一般采用左右 兩惻的靜脈.拔去沿尾部靜脈走向的毛，置尾巴于

51、45 50C溫水中浸 泡幾分鐘或用 75%酒精棉球反復(fù)擦拭尾部，以到達(dá)消毒和使尾部血管 擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的。 行尾部靜脈注射時(shí)， 以左手拇指和食指 捏住鼠尾兩惻，使靜脈更為充盈，用中指從下面托起尾巴，以無(wú)名指 夾住尾巴的末梢 , 右手持 4 號(hào)針頭注射器，使針頭與靜脈平行 小于 30角，從尾巴的下 1/4 處進(jìn)針，開始注入藥物時(shí)應(yīng)緩慢，仔細(xì)觀 察，如果無(wú)阻力，無(wú)白色皮丘出現(xiàn)，說(shuō)明已刺入血管，可正式注入藥 物。有的實(shí)驗(yàn)需連日反復(fù)尾靜脈注射給藥， 注射部位應(yīng)盡可能從尾端 開始，按次序向尾根部移動(dòng)，更換血管位置注射給藥。注射量為10g體重。拔出針頭后，用拇指按住注射部位輕壓 12min,防止出

52、血。小鼠采血1 剪尾采血手拇指和食指從背部抓住小鼠頸部皮膚， 將小鼠頭朝下， 小鼠保定后 將其尾巴置于 50熱水中浸泡數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。擦干尾部， 再用剪刀或刀片剪去尾尖 12mm用試管接流出的血液，同時(shí)自尾 根部向尾尖按摩。取血后用棉球壓迫止血并用6%液體火棉膠涂在傷口處止血。每次采血量。2摘除眼球采血 左手抓住小鼠頸部皮膚，輕壓在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，取側(cè)臥位，左手食指盡量 將小鼠眼周皮膚往頸后壓，使眼球突出。用眼科彎鑷迅速夾去眼球， 將鼠倒立，用器皿接住流出的血液。采血完畢立即用紗布?jí)浩戎寡?。每次采血量?心臟采血 小鼠仰臥位固定，剪去胸前區(qū)被毛，皮膚消毒后，用左手食指在左側(cè) 第 34 肋間觸

53、摸到心搏處，右手持帶有 45號(hào)針頭的注射器，選擇 心搏最強(qiáng)處穿刺，當(dāng)刺中心臟時(shí)，血液會(huì)自動(dòng)進(jìn)入注射器。每次采血 量。量。4斷頭采血?jiǎng)游镝t(yī)學(xué)論壇右手用剪刀剪斷小鼠頸部約 1/2 4/5 ，讓血液流入試 管。此法可采血。swordzjsh 腫瘤造模實(shí)驗(yàn)中的一點(diǎn)心得動(dòng)物選擇：KM小鼠，裸鼠，C57等均可作為，但是個(gè)人認(rèn)為 KM能做出來(lái)最好，畢竟比較有普遍性，還是正常生理狀態(tài)的健康動(dòng)物， 比較有說(shuō)服力，還廉價(jià)，裸鼠或者其他特定品種，比較適合特定的瘤 株瘤株類型： H22 ;S180; EAC 等關(guān)于腫瘤細(xì)胞活力的問題： 一般買回來(lái)的瘤株， 需要經(jīng)過(guò)復(fù)蘇過(guò) 程，很多人復(fù)蘇以后就直接給動(dòng)物接種了， 或者傳

54、一代以后就開始實(shí) 驗(yàn)了，一般這個(gè)時(shí)候腫瘤細(xì)胞活力往往是不夠的， 很難在短時(shí)間內(nèi)長(zhǎng) 到規(guī)定重量， 所以建議至少在動(dòng)物體內(nèi)傳 2 代，讓腫瘤細(xì)胞活力充分 表達(dá)以后再開始用于實(shí)驗(yàn)。關(guān)于接種部位的問題：以小鼠為例一般可以選擇腋下或者后肢， 有的文章說(shuō)是背部接種，但是背部血管不興旺，營(yíng)養(yǎng)不夠，一般不建 議采用。接種一般采用皮下注射，針頭我喜歡沿皮膚水平進(jìn)入，然后 挑起表皮，注射，接種后 3 天我開始給藥。給藥時(shí)間： 一般從開始造模起 2 周內(nèi)我就會(huì)處理動(dòng)物了， 因?yàn)槟[ 瘤如果擴(kuò)散后會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物的大量死亡， 畢竟是腫瘤啊， 動(dòng)物大量死亡 的時(shí)間也相對(duì)集中，也許前一天還好，過(guò)一晚上就死掉不少，那個(gè)時(shí) 候你哭都

55、找不到墳頭，只要腫瘤差不多夠重了就處理吧。 關(guān)于進(jìn)食水的問題：別個(gè)都要死掉了，就別吝嗇了，想吃就吃，想喝 就喝吧。關(guān)于模型對(duì)照組的問題： 我已經(jīng)在別的帖子里面強(qiáng)調(diào)過(guò)了，這 次再?gòu)?qiáng)調(diào)一下， 接種以后一定要每天去騷擾它們一下， 我有次試驗(yàn)偷 懶，模型組沒有管他們，結(jié)果模型組的腫瘤最后比給藥組還小，都只 有綠豆大，導(dǎo)致試驗(yàn)失敗， 郁悶死，后來(lái)重做的時(shí)候每天堅(jiān)持給模型 組生理鹽水，結(jié)果腫瘤瘋長(zhǎng)。說(shuō)起來(lái)很奇怪，但是這個(gè)是事實(shí)，以后 我再?zèng)]有偷懶過(guò)，每次都成功復(fù)制出了模型。關(guān)于腫瘤重量的問題：模型組腫瘤重量應(yīng)該不低于0。5g,我不記得在哪本書上看到的了，反正是有個(gè)規(guī)定的剝瘤zhangweilcb ：腋窩的

56、腫瘤長(zhǎng)到第 12 天時(shí)，腫瘤在 2.0g 左右，我在 剝瘤子時(shí)感覺比較困難， 對(duì)于一個(gè)瘤子， 在剝的前半段還是比較好剝 的，但越往里越難剝，主要是瘤子在腋窩深處和小鼠的右肢長(zhǎng)到一塊， 不容易區(qū)分，每次剝完后， 在最里面總感覺還剩一點(diǎn)腫瘤在那里。而 且，經(jīng)常把血管剪破，導(dǎo)致血液流出。不知該如何處理。腫瘤細(xì)胞可 否接種到小鼠腋窩偏下，或是接近腹部我想這樣在剝瘤子時(shí)會(huì)輕松 些，請(qǐng)指教。swordzjsh ：接種的時(shí)候要精確控制接種在皮下，靠皮內(nèi)會(huì)與皮膚強(qiáng) 烈粘連，靠肌肉會(huì)與肌肉強(qiáng)烈粘連，而且不要太靠腋窩里面，可以往 尾部靠一些，多接幾次體會(huì)一下吧。 另外也可以稍微的往背部靠一點(diǎn)， 不要往腹部靠，容易

57、使腫瘤被墊料磨爛。藥效篩選zhangweilcb ：在藥物抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中，我看到文獻(xiàn)中很多都是設(shè)置 3 個(gè)梯度，可否多設(shè)置幾個(gè)而且在很多實(shí)驗(yàn)中可以計(jì)算藥物的LD50，或是IC50，我想在小鼠腫瘤實(shí)驗(yàn)中可否算藥物的腫瘤半抑制率。 我們有一個(gè)藥的幾個(gè)類似物， 想比較一下它們的抗腫瘤活性， 我該如 何設(shè)置這幾個(gè)藥的劑量我有這么幾個(gè)方案，請(qǐng)大家指教：a。每個(gè)藥三個(gè)劑量，分別為 LD50的1/5，1/10，1/20。b。每個(gè)藥都是同一個(gè)劑量，0。3mg/kg。我想比較在同一個(gè)濃度下， 它們對(duì)腫瘤的抑制效果。 另外，我想打入腹腔的藥物的濃度是在同一 摩爾濃度好呢， 還是同一的 mg/ml 濃度好呢這幾個(gè)類似物的分子量相 差也不是很大