常用試劑的配制

1、常用溶液的配制信息來源：生物谷更新時(shí)間：2004-12-21 1:33:00 一、常規(guī)溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS)甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4 9.465g蒸餾水 加至1000ml乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P04 9.07g蒸餾水 加至1000m1分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于4冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見下表:pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI 5.29 5.59 5.91 6.24 6.47 6.64 2.5 5.

2、0 10.0 20.0 30.0 40.0 97.5 95.0 90.0 80.0 70.0 60.0 6.81 6.98 7.17 7.38 7.73 8.04 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0 95.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 5.0 (二)0.3臺(tái)盼蘭染液 稱取臺(tái)盼蘭(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理鹽水中，加熱使之完全溶解，用濾紙過濾除渣，裝入瓶?jī)?nèi)室溫保存。 (三)0.5酚紅指示劑 酚紅 0.5g 0.1N(0.4)NaOH 15ml 雙蒸水 85ml 將0.5克酚紅置研缽中，緩漫滴加0.1NNaOH溶液邊加邊磨，并不斷吸

3、出已溶解的酚紅液，直至全部溶解，然后加入85ml雙蒸水，顏色為深紅，經(jīng)粗濾紙過濾后使用，室溫保存。 (四)5.6NaHCO3溶液 稱NaHCO35.6克，溶于100ml蒸餾水中，室溫保存即可(如需要也可10磅15分鐘高壓滅菌，4冰箱保存) (五)10gml秋水仙素 秋水仙素 lOmg生理鹽水 100ml裝入茶色瓶中，為貯備液，4冰箱中保存。甩時(shí)取貯備液1ml加生理鹽水9ml即可。 (六)0.4KCl-0.4檸檬酸鈉低滲液 將0.4KCl和0.4檸檬酸鈉兩液等量混合即可，室溫保存。 (七)2檸檬酸鈉 稱取檸檬酸鈉2克，加100ml雙蒸水即可，室溫保存。 （八）0.2次甲基蘭染液 稱次甲基蘭(Me

4、thylene blue)0.2克，加蒸餾水100ml，室溫保存。 (九)0.5醋酸洋紅(Aceio Carmine)染液 洋紅 lg 醋酸 90ml 蒸餾水 110ml 將90ml醋酸加入110ml蒸餾水煮沸，然后將火焰移去，立即加入1克洋紅，使之迅速冷卻過濾，加飽和氫氧化鐵(媒染劑)水溶液數(shù)滴，直到呈葡萄酒色。室溫保存。加鐵使洋紅沉淀于組織而著色。此染液室溫存放時(shí)間越長效果越好，室溫保存。 (十)1甲苯胺蘭(Toluidine blue) 稱取甲苯胺蘭1克，加蒸餾水lOOml。 (十一)1/3000中性紅染液 取中性紅(Neutral red)0.1克，加蒸餾水300ml。室溫保存。 (十

5、二)Giemsa染液 1貯備液Giemsa粉 1g 純甘油 66ml 甲醇 66ml 先將Giemsa粉置于研缽中加少量甘油，充分研磨，呈無顆粒的糊狀。再將全部甘油加入，放入56溫箱中2小時(shí)，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般兩周后使用為好。 2工作液 臨用時(shí)將貯備液與pH6.8的磷酸緩沖液按照1:20混合。 (十三)埃利希(Ehrlich)蘇木精染液 蘇木精 1.0g 乙醇 50ml 醋酸 5ml 甘油 50ml 硫酸鋁鉀 5g 蒸餾水 50ml 將蘇木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并攪拌，以加速其溶解。當(dāng)蘇木精溶解后將甘油加入并搖動(dòng)容器，同時(shí)加入其余的乙醇；硫酸鋁鉀需研磨并加熱，然后溶解于蒸

6、餾水中，將其一滴滴地加入上邊的溶液，并不斷搖動(dòng)，此液配好后，將瓶口用紗布蓋好，置通風(fēng)處，經(jīng)常搖動(dòng)以加速其成熟，成熟約需4周左右，成熟的染液為深紅色。 二、細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞組分分離溶液 (一)M一緩沖液 瞇唑(Imidazole) 3.404g KCI 3.7g MgCl26H2O 101.65mg ECTA 380.35mg EDTA 29.224mg 巰基乙醇 0.07ml 甘油 297ml 蒸餾水 加至1000ml 用lNHCl調(diào)pH至7.2室溫保存。 (二)2Triton X一100溶液 量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M緩沖液98ml即可。 （三）0.2考馬

7、斯亮蘭R-250染液 甲醇 46.5ml 醋酸 7.0ml 考馬斯亮蘭 0.2g蒸餾水 加至100ml(四)A0.1堿性固綠染液(pH8.08.5) 10.1固綠水溶液 固綠(Fast green) 0.1g 蒸餾水 100ml 20.05Na2C03溶液 Na2C03 50mg蒸餾水 100ml用時(shí)按1:1體積混合即可。 B0.1酸性固綠染液(pH2.2) 10.1固綠水溶液。 2molL75鹽酸液 鹽酸(比重1.19)0.109ml加蒸餾水至100ml 用時(shí)按l:1混合。 (五)甲基綠一哌咯寧染液 1.1molL醋酸緩沖液(pH4.8)： (1)醋酸 17ml 蒸餾水 加至200ml (2

8、)醋酸水 13.5g 蒸餾水 加至lOOml用時(shí)分別取兩液40ml、60ml混勻即可。 2甲基綠一哌咯寧(methyl greenPyrcnln) 5哌咯寧水溶液 6ml 2甲基綠水溶液 6ml 蒸餾水 16ml lmol/L醋酸緩沖液 16ml lmol/L醋酸緩沖液臨用時(shí)才可加入染液中。 (六)Schiff試劑 將堿性品紅0.5克加入lOOml沸水，持續(xù)煮沸5分鐘，并隨時(shí)攪拌，待冷卻到50時(shí)過濾到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷卻至25時(shí)加入1克NaHSO3，此時(shí)需很好的振蕩，避光過夜。次日取出(呈淡黃色)加0.25克活性炭劇烈振蕩1分鐘。過濾后即得Schiff試劑。避光低溫保存。 (

9、七)聯(lián)苯胺混合液 聯(lián)苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2g 95乙醇 lOOml 3過氧化氫 2滴 此液臨用時(shí)配制。 (八)l番紅水溶液 番紅(Safranin) 1.0g 蒸餾水 100ml (九)1SDS(十二烷基硫酸鈉Sodium dodecyl sulfate,SDS) SDS 10g 45乙醇 100ml (十)1molLTris(三羥甲基氨基甲烷/鹽酸緩沖液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8 Tris 12.114g 蒸餾水 lOOml 先將Tris溶于少量蒸餾水，用HCI調(diào)pH至7.8，然后加水至100m

10、l (十一)Ringer Solution氯化鈉(冷血?jiǎng)游镉?65克) 0.9克氯化鉀 0.042克氯化鈣 0.025克蒸餾水 100ml(十二)淀粉肉湯培養(yǎng)基蛋白 2g淀粉 6g牛肉湯 100ml用10NaHCO3調(diào)pH至7.07.2(十三)0.25molL蔗糖一0.003molL氯化鈣溶液蔗糖 85.5g氯化鈣 0.33g蒸餾水 1000ml(十四)1詹納斯綠B染液取詹納斯綠(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml(十五)1剛果紅染液剛果紅 1g蒸餾水 100ml(十六)Gomori硝酸鉛作用液0.05molL醋酸緩沖液(pH5) lOOml0.6醋酸加蒸餾水20

11、0ml、取其 42ml醋酸鈉1.36g加蒸餾水200ml，取其158ml共200ml B-甘油磷酸鈉 2g醋酸鉛 2g5氯化鎂 5ml以上作用液在臨用時(shí)配制，最終在pH55.2，過濾使用。(王世藩 匯編)三、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合溶液(一)0.01molLPBS(磷酸鹽緩沖液Phosphate Buffer Saline，PBS)pH7.2。0.2molL磷酸氫二鈉液(甲液)： NaH2PO412H2O 35.814g雙蒸水 加至500ml0.2molL磷酸二氫鈉液(乙液): NaH2PO412H2O 15.601g 雙蒸水 加至500ml 取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加雙蒸水

12、至1000ml?；靹虼耆芙夥盅b，經(jīng)高壓滅菌后保存于4冰箱備用。 (二)50PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500) 稱取0.5克PEG，用前放入試管中在酒精燈火焰上熔化，加入等量37予熱的MEM培養(yǎng)液，混勻，保溫在37水浴中待用。 (三)MEM培養(yǎng)液(含10小牛血清) MEM培養(yǎng)液(日本制藥株式會(huì)社) 9.4g 雙蒸水 1000ml NaHCO3 1.5g 谷氨酰胺(L-glutamin) 0.292g 56滅活30分鐘的小牛血清110ml MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3調(diào)pH到7.1(因在抽濾過程中pH升高0.20.3)，然后加滅活的小牛血清和谷氨酰胺，

13、待完全溶解后，立即用G6抽濾除菌，分裝，置4冰箱保存?zhèn)溆谩?(四)0.25胰蛋白酶一0.02EDTA混合消化液 胰蛋白酶(Trypsin)粉 0.25g EDTA粉 20.0mg 0.01molL PBS 100ml 先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后將EDTA粉末和剩下的液體加入混合，置37水浴中1小時(shí)左右(待徹底溶解，液體呈透明為止)，用G5抽濾，分裝置4冰箱中保存。 (五)Hanks液 1原液甲 NaCl 160g KCl 8g MgSO47H2O 2g MgCI26H2O 2g 溶于800ml餾水中。 CaCl2(無水) 2.8g 溶于100ml蒸餾水中。 將兩種液體混合后，加水至100

14、0ml用濾紙濾過，再加2ml氯仿防腐，置4冰箱備用。 原液乙 Na2HPO412H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20.0g 溶于800ml蒸餾水中，用濾紙過濾，然后加0.5酚紅80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4冰箱備用。 2使用液 甲乙兩液各1份，雙蒸水18份，混勻分裝包扎好瓶口，經(jīng)10磅15分鐘高壓滅菌后置4冰箱中保存。使用時(shí)用5.6NaHCO3調(diào)pH值到所需要求。 (六)1640培養(yǎng)液(含lO小牛血清) RPMI-1640粉 10.39g 雙蒸水 加至1000ml 通入適量的C02氣體，邊通入CO2邊慢慢攪拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHC

15、O31.5克調(diào)pH值到7.2。 雙抗1萬u/ml 10ml 滅活小牛血清 110ml 混勻上述液體，立即用G6抽濾除菌分裝，置4冰箱備用。 (七)青、鏈霉素溶液 青霉素鈉鹽(40萬u瓶) 5瓶鏈霉素(100萬u瓶) 2瓶將兩者溶于200ml0.9的無菌生理鹽水，分裝小瓶，-30保存。雙抗在培養(yǎng)基中的終濃度為各lOOu為宜。 (八)二甲基亞砜誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化使用的終濃度為1。4。 (九)BrdU溶液(200ug/m1) 用無菌青霉素瓶，在室溫下稱取1.0mg，在無菌條件下加入滅菌生理鹽水9.0ml，溶解，混勻，用黑紙包嚴(yán)，避光置冰箱冰格中保存。最好用時(shí)現(xiàn)配。 (十)2SSC溶液用分析天平稱

16、取氯化鈉17.53克，檸檬酸鈉8.82克溶于蒸餾水中，加蒸餾水至1000毫升。 （十一）3瓊脂：取瓊脂粉3克，加入雙蒸水到100毫升，攪勻，高壓消毒后(15磅20分鐘)，冷藏備用，使用前重新加熱煮沸(貯存時(shí)間不宜過長)。四、制備電鏡標(biāo)本的溶液(一)2.5戊二醛溶液25戊二醛 lOml 0.1molL二甲砷酸鈉緩沖液 裝入茶色瓶中，保存于4冰箱備用。 (二)0.1molL二甲砷酸鈉緩沖液 二甲砷酸鈉 10.70g 蒸餾水 500ml 將二甲砷酸鈉置于500ml容量瓶中，先加水約400ml，震蕩使其溶解，用HCl調(diào)pH到7.4，加入剩余蒸餾水，4冰箱保存。 (三)包埋劑環(huán)氧樹脂Epon812 56

17、.30g DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic anhydride，DDSA) 14.60g MNA(甲基內(nèi)次甲基鄰苯二甲酸酐Methyl Nadic) anhydride，MNA 29.00g 混合上述三種包埋劑成分，攪拌30分鐘使其充分混勻。再加加速劑2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，繼續(xù)攪拌30分鐘，置于干燥罐中(室溫)備用。 (四)2單寧酸 單寧酸 2g 雙蒸水 100ml溶解后過濾裝茶色瓶中，4冰箱保存。(五)高錳酸鉀固定劑 檸檬酸三鈉 60mmol/L氯化鉀

18、 25mmol/L氯化鎂 35mmol/L 高錳酸鉀 125mmol/LpH為7.4-7.8，裝茶色瓶中，4冰箱中保存，有效期2個(gè)月左右。(六)1OsO4溶液OsO4 0.5g0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液。 50ml OsO4一般為0.5或1克安瓶中封閉包裝，配制時(shí)剝?nèi)ド虡?biāo)，用自來水洗凈，放洗滌液中泡412小時(shí)后用水沖洗，在安瓶上劃痕，用蒸餾水洗凈，投入茶色瓶中，加緩沖液，用玻璃棒在瓶中搗碎，輕輕搖動(dòng)放冰箱中，48小時(shí)后完全溶解。此藥蒸氣對(duì)人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用時(shí)特別小心，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。五、顯影、定影溶液(一)D-72顯影液 溫水(52) 750ml米吐爾 3g無水亞硫酸鈉 45g對(duì)苯二酚 12g無水碳酸鈉 67.5g溴化鉀 19g 水 加至1000ml D-72顯影液為通用顯影液，既能顯影膠片又能用于相紙顯影。 使用原液，20顯影時(shí)間12分鐘可得高反差。 加水1:2稀釋后使用可得較低反差。1:1稀釋使用。20時(shí)顯影時(shí)間34分鐘可得正常反差。 (二)SB-1停顯液配方 水