第十一章微生物的分類和鑒定

1、第十章第十章 微生物的微生物的分類和鑒定分類和鑒定微生物橫跨整個生物界的四個界，微生物橫跨整個生物界的四個界，有十幾萬個種。有十幾萬個種。 所謂所謂分類分類，是指對大量的微生物進(jìn)行逐一的觀，是指對大量的微生物進(jìn)行逐一的觀察、分析與描述的基礎(chǔ)上，按照它們的察、分析與描述的基礎(chǔ)上，按照它們的個體形態(tài)個體形態(tài)、培養(yǎng)特征培養(yǎng)特征、生理生化特性生理生化特性和和細(xì)胞化學(xué)組份細(xì)胞化學(xué)組份等一系列等一系列性狀的異同和主次，并根據(jù)它們的親緣關(guān)系和應(yīng)用性狀的異同和主次，并根據(jù)它們的親緣關(guān)系和應(yīng)用的方便，加以分門別類。的方便，加以分門別類。 所謂所謂鑒定鑒定，是對某一具體的微生物的性狀進(jìn)行，是對某一具體的微生物的性

2、狀進(jìn)行細(xì)致的觀察和測試，參照一定的，用對比的方法來細(xì)致的觀察和測試，參照一定的，用對比的方法來確定該微生物的分類地位。確定該微生物的分類地位。第一節(jié)第一節(jié) 通用分類單元通用分類單元 一、分類單元一、分類單元界界門門綱綱目目科科屬屬種種二、種二、種（species） 微生物的微生物的種種（species，又譯又譯物種物種）是一個）是一個基本分類單元，它是一大群表型特征高度相似、基本分類單元，它是一大群表型特征高度相似、親緣關(guān)系極其接近、與同屬內(nèi)的其他物種有著明親緣關(guān)系極其接近、與同屬內(nèi)的其他物種有著明顯差異的一大群菌株的總稱。顯差異的一大群菌株的總稱。三、種以下的分類單元三、種以下的分類單元亞種

3、亞種（subspecies，subsp.，ssp.）變種變種（variety，var.）型型（form）類群類群（group）菌株菌株（strain）小種小種（race）相相（phase）態(tài)態(tài)（state）（一一）亞種亞種（subspecies，subsp.，ssp.） 是種的進(jìn)一步細(xì)分單元，一般指其某一明顯是種的進(jìn)一步細(xì)分單元，一般指其某一明顯而穩(wěn)定的特征與模式種不同的種。而穩(wěn)定的特征與模式種不同的種。（二二）變種變種（variety，var.） 變種是亞種的同義詞，因易引起混亂，故變種是亞種的同義詞，因易引起混亂，故國際細(xì)菌命名法規(guī)（國際細(xì)菌命名法規(guī)（19751975）已規(guī)定它在命）已規(guī)定

4、它在命名法中沒有地位，且不主張使用。名法中沒有地位，且不主張使用。 在亞種以下的在亞種以下的“型型”（formform）曾用于表示細(xì)曾用于表示細(xì)菌菌株，但目前已廢除。目前尚在使用的是以菌菌株，但目前已廢除。目前尚在使用的是以“型型”作后綴使用，例如生物變異型（作后綴使用，例如生物變異型（biovarbiovar）、）、化學(xué)型（化學(xué)型（chemoformchemoform）等。等。（三三）型型（form） 是一個在分類上沒有地位的普通名詞，它可是一個在分類上沒有地位的普通名詞，它可非正式地指定一組具有某些共同性狀的生物。非正式地指定一組具有某些共同性狀的生物。（四四）類群類群（group） 菌株

5、又稱品系（在病毒中則稱毒株或株），菌株又稱品系（在病毒中則稱毒株或株），表示任何由一個獨(dú)立分離的單細(xì)胞（或單個病毒表示任何由一個獨(dú)立分離的單細(xì)胞（或單個病毒粒子）繁殖而成的純種群體及其一切后代。粒子）繁殖而成的純種群體及其一切后代。（五五）菌株菌株（strain） 又稱品種、宗或生產(chǎn)小系等，它的涵義很亂，又稱品種、宗或生產(chǎn)小系等，它的涵義很亂，在真菌學(xué)中常相當(dāng)于生理型，在動物學(xué)中常指生態(tài)在真菌學(xué)中常相當(dāng)于生理型，在動物學(xué)中常指生態(tài)型，而在發(fā)酵工業(yè)中，則常指自生產(chǎn)中選育出來的型，而在發(fā)酵工業(yè)中，則常指自生產(chǎn)中選育出來的自發(fā)突變菌株。自發(fā)突變菌株。（六六）小種小種（race）一般指自然存在的微生物

6、交互變異中的一定階段。一般指自然存在的微生物交互變異中的一定階段。（七七）相相（phase） 通常指微生物的菌落變異狀態(tài)，如粗糙、光通常指微生物的菌落變異狀態(tài)，如粗糙、光滑或粘液狀等?；蛘骋籂畹取＃ò税耍B(tài)態(tài)（state）第二節(jié)第二節(jié) 微生物的命名微生物的命名 每一種微生物都有一個自己的名字，名字有每一種微生物都有一個自己的名字，名字有俗名俗名（common name）和和學(xué)名學(xué)名（scientific name）兩種。兩種。俗名俗名（common name） 指普通的、通俗的、地區(qū)性的名字，具有指普通的、通俗的、地區(qū)性的名字，具有簡明和大眾化的優(yōu)點(diǎn)，但往往涵義不夠確切，簡明和大眾化的優(yōu)點(diǎn)，

7、但往往涵義不夠確切，易于重復(fù)，使用范圍局限。易于重復(fù)，使用范圍局限。俗名俗名學(xué)名學(xué)名結(jié)核桿菌結(jié)核桿菌結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis）綠膿桿菌綠膿桿菌銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）金葡菌金葡菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）紅色面包霉紅色面包霉粗糙脈孢菌粗糙脈孢菌（Neurospora crassa）白念菌白念菌白色假絲酵母白色假絲酵母（Candidaalbicans）學(xué)名學(xué)名（scientific name） 指一個菌種的科學(xué)名稱，它是按照國際指一個菌種的科學(xué)名稱

8、，它是按照國際細(xì)菌命名法規(guī)命名的、國際學(xué)術(shù)界公認(rèn)并通細(xì)菌命名法規(guī)命名的、國際學(xué)術(shù)界公認(rèn)并通用的正式名字。用的正式名字。 一、雙名法一、雙名法（binominal nomenclature） 雙名法指一個物種的學(xué)名由前面一個雙名法指一個物種的學(xué)名由前面一個屬名屬名（generic name）和后面一個和后面一個種名加詞種名加詞（specific epithet）兩部分兩部分組成。組成。屬名的詞首須大寫，屬名的詞首須大寫，種名加詞的字首須小寫（包括由人名或地名等種名加詞的字首須小寫（包括由人名或地名等專用名詞衍生的）。專用名詞衍生的）。若所分離的菌株只鑒定到屬，而未鑒定到種，可用若所分離的菌株只鑒

9、定到屬，而未鑒定到種，可用sp來表示。來表示。例如，例如，Bacillus sp例例1：大腸埃希氏菌（簡稱大腸桿菌）：大腸埃希氏菌（簡稱大腸桿菌）Escherichia coli（Migula）Castellani et Chalmers 1919例例2：枯草芽孢桿（簡稱枯草桿菌）：枯草芽孢桿（簡稱枯草桿菌）Bacillus subtilis（Ehrenberg）Cohn 1872例例1：蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種：蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種Bacillus thuringiensis （subsp）galleria例例2：橢圓釀酒酵母（或釀酒酵母橢圓變種）：橢圓釀酒酵母（或釀酒酵母橢圓變種）Sacc

10、haromyces cerevisiae （var）ellipsoideus由于細(xì)菌分類單元的劃分缺乏一個易于操作的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，由于細(xì)菌分類單元的劃分缺乏一個易于操作的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，為了減少因采用不同標(biāo)準(zhǔn)界定分類單元所造成的混亂，為了減少因采用不同標(biāo)準(zhǔn)界定分類單元所造成的混亂，細(xì)菌系統(tǒng)分類也像其他生物分類一樣采用細(xì)菌系統(tǒng)分類也像其他生物分類一樣采用“模式概念模式概念”種和亞種指定模式菌株（種和亞種指定模式菌株（type strain）；）；亞屬和屬指定模式種（亞屬和屬指定模式種（type species）；）；屬以上至目級分類單元指定模式屬（屬以上至目級分類單元指定模式屬（type genus）；）

11、；模式菌株應(yīng)送交菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏，以便備查考和索取。模式菌株應(yīng)送交菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏，以便備查考和索取。第三節(jié)第三節(jié) 各大類微生物的各大類微生物的分類系統(tǒng)綱要分類系統(tǒng)綱要一、細(xì)菌的分類一、細(xì)菌的分類 1. 1. 細(xì)菌分類的依據(jù)細(xì)菌分類的依據(jù)（1）形態(tài)特征）形態(tài)特征在顯微鏡下觀察的個體形態(tài)特征在顯微鏡下觀察的個體形態(tài)特征在各種培養(yǎng)基上表現(xiàn)的的群體形態(tài)特征在各種培養(yǎng)基上表現(xiàn)的的群體形態(tài)特征（2）生理生化特性）生理生化特性（3）生態(tài)特征）生態(tài)特征（4）血清學(xué)反應(yīng)）血清學(xué)反應(yīng)美國賓夕法尼亞大學(xué)的美國賓夕法尼亞大學(xué)的細(xì)菌學(xué)教授伯杰（細(xì)菌學(xué)教授伯杰（D.Bergey，1860-1937）2.伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)

12、手冊伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊（Bergeys Manual of Determinative Bacteriology） 1957年第七版后，由于越來越廣泛地吸收了國際年第七版后，由于越來越廣泛地吸收了國際上細(xì)菌分類學(xué)家參加編寫（如上細(xì)菌分類學(xué)家參加編寫（如1974年第八版，撰稿人年第八版，撰稿人多達(dá)多達(dá)130多位，涉及多位，涉及15個國家；現(xiàn)行版本撰稿人多達(dá)個國家；現(xiàn)行版本撰稿人多達(dá)300多人，涉及近多人，涉及近20個國家），所以它的近代版本反映個國家），所以它的近代版本反映了出版年代細(xì)菌分類學(xué)的最新成果，因而逐漸確立了了出版年代細(xì)菌分類學(xué)的最新成果，因而逐漸確立了在國際上對細(xì)菌進(jìn)行全面分類的權(quán)

13、威地位。在國際上對細(xì)菌進(jìn)行全面分類的權(quán)威地位。伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊（Bergeys Manual of Systematic Bacteriology） 伯杰氏手冊是目前進(jìn)行細(xì)菌分類、鑒定的最重要伯杰氏手冊是目前進(jìn)行細(xì)菌分類、鑒定的最重要依據(jù)，其特點(diǎn)是描述非常詳細(xì)，包括對細(xì)菌各個屬種依據(jù)，其特點(diǎn)是描述非常詳細(xì)，包括對細(xì)菌各個屬種的特征及進(jìn)行鑒定所需做的實(shí)驗(yàn)的具體方法。的特征及進(jìn)行鑒定所需做的實(shí)驗(yàn)的具體方法。（20世紀(jì)世紀(jì)80年代末期）年代末期）新版手冊分新版手冊分4 4卷：卷：第一卷：第一卷：一般醫(yī)學(xué)和工業(yè)方面重要的一般醫(yī)學(xué)和工業(yè)方面重要的革蘭氏陰性細(xì)菌革蘭氏陰性細(xì)菌。第二

14、卷：第二卷：放線菌以外的放線菌以外的革蘭氏陽性細(xì)菌革蘭氏陽性細(xì)菌。第三卷：第三卷：古細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌及其他革蘭氏陰性細(xì)菌。古細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌及其他革蘭氏陰性細(xì)菌。第四卷：第四卷：放線菌。放線菌。伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊（Bergeys Manual of Systematic Bacteriology）第八版有中文版，把細(xì)菌分十九個部分。第八版有中文版，把細(xì)菌分十九個部分。二、霉菌的分類二、霉菌的分類 1. 1. 霉菌的分類原則霉菌的分類原則絲狀真菌劃分各級分類單位的基本原則：絲狀真菌劃分各級分類單位的基本原則：以形態(tài)特征為主，以形態(tài)特征為主，生理生化、細(xì)胞化學(xué)和生態(tài)特征為輔。生理生化

15、、細(xì)胞化學(xué)和生態(tài)特征為輔。2. 2. 真菌的分類系統(tǒng)真菌的分類系統(tǒng)1950年年Martin的的4綱分類系統(tǒng)綱分類系統(tǒng)1973年年Ainsworth的分類系統(tǒng)的分類系統(tǒng) Martin是根據(jù)真菌營養(yǎng)體的形態(tài)特征和繁殖方式的是根據(jù)真菌營養(yǎng)體的形態(tài)特征和繁殖方式的不同將之分為不同將之分為4個綱。個綱。藻狀菌綱：藻狀菌綱：菌絲體無分隔，或者不形成真正的菌絲體。菌絲體無分隔，或者不形成真正的菌絲體。子囊菌綱：子囊菌綱：菌絲體有分隔，有性階段形成子囊孢子。菌絲體有分隔，有性階段形成子囊孢子。擔(dān)子菌綱：擔(dān)子菌綱：菌絲體有分隔，有性階段形成擔(dān)孢子。菌絲體有分隔，有性階段形成擔(dān)孢子。半知菌綱：半知菌綱：菌絲體有分

16、隔，未發(fā)現(xiàn)有性階段。菌絲體有分隔，未發(fā)現(xiàn)有性階段。 Ainsworth從從1966年起，就把真菌界分為兩大門年起，就把真菌界分為兩大門（粘菌門粘菌門和和真菌門真菌門），并把真菌門再分成五個亞門。），并把真菌門再分成五個亞門。目前，該系統(tǒng)已為各國廣大真菌分類學(xué)者所普遍采目前，該系統(tǒng)已為各國廣大真菌分類學(xué)者所普遍采用，影響較大。用，影響較大。三、酵母菌的分類三、酵母菌的分類 酵母菌的分類普遍采用荷蘭的酵母菌的分類普遍采用荷蘭的LoddovLoddov在在19701970年提出的分類系統(tǒng)。年提出的分類系統(tǒng)。 在這個分類系統(tǒng)中，以是否形成各類有性孢子在這個分類系統(tǒng)中，以是否形成各類有性孢子作為分類的起

17、點(diǎn)，作為分類的起點(diǎn)，屬以上的分類主要依據(jù)形態(tài)；屬以上的分類主要依據(jù)形態(tài)；種的劃分主要依據(jù)生理特性。種的劃分主要依據(jù)生理特性。在這個系統(tǒng)中有三個亞門在這個系統(tǒng)中有三個亞門屬以上的分類主要依據(jù)形態(tài)；屬以上的分類主要依據(jù)形態(tài)；種的劃分主要依據(jù)生理特性。種的劃分主要依據(jù)生理特性。能形成子囊孢子的酵母屬于能形成子囊孢子的酵母屬于子囊菌亞門子囊菌亞門，共有，共有4個科個科22個屬個屬139種酵母；種酵母；能產(chǎn)生冬孢子和擔(dān)孢子的酵母菌，屬于能產(chǎn)生冬孢子和擔(dān)孢子的酵母菌，屬于擔(dān)子菌亞門擔(dān)子菌亞門、冬孢菌綱、黑粉菌目、黑粉菌科，共冬孢菌綱、黑粉菌目、黑粉菌科，共9個科；個科；能產(chǎn)生擲孢子的酵母菌，屬于能產(chǎn)生擲孢

18、子的酵母菌，屬于擔(dān)子菌亞門擔(dān)子菌亞門、冬孢子綱、冬孢子綱、擲孢酵母科，科內(nèi)有擲孢酵母科，科內(nèi)有3個屬；個屬；不能產(chǎn)生有性孢子，上未發(fā)現(xiàn)有性過程的酵母屬于不能產(chǎn)生有性孢子，上未發(fā)現(xiàn)有性過程的酵母屬于半知半知菌亞門菌亞門，共，共12個屬個屬170個種。個種。許多重要的有經(jīng)濟(jì)意義的酵母菌都在這個亞門中。許多重要的有經(jīng)濟(jì)意義的酵母菌都在這個亞門中。第四節(jié)第四節(jié) 微生物的分類和鑒定微生物的分類和鑒定 微生物分類學(xué)是已們按微生物的親緣關(guān)微生物分類學(xué)是已們按微生物的親緣關(guān)系把它們安排成條理清楚的各種分類單元或系把它們安排成條理清楚的各種分類單元或分類群的科學(xué)。分類群的科學(xué)。（一）微生物分類學(xué)的任務(wù)是：（一）

19、微生物分類學(xué)的任務(wù)是： 分類、鑒定和命名分類、鑒定和命名（二）微生物的分類鑒定方法（二）微生物的分類鑒定方法 微生物的分類鑒定是微生物學(xué)中的基礎(chǔ)性工作。微生物的分類鑒定是微生物學(xué)中的基礎(chǔ)性工作。不論對象屬于哪一類，其工作步驟離不開以下三步：不論對象屬于哪一類，其工作步驟離不開以下三步：獲得該微生物的純種培養(yǎng)物（獲得該微生物的純種培養(yǎng)物（pure culture)pure culture)； 測定一系列必要的鑒定指標(biāo)；測定一系列必要的鑒定指標(biāo)；(1)(1) 查找權(quán)威性鑒定手冊。查找權(quán)威性鑒定手冊。 經(jīng)典的分類鑒定方法經(jīng)典的分類鑒定方法 現(xiàn)代的分類鑒定方法現(xiàn)代的分類鑒定方法 經(jīng)典分類鑒定方法：經(jīng)典

20、分類鑒定方法： 微生物分類是在對大量單個微生物進(jìn)行微生物分類是在對大量單個微生物進(jìn)行觀察、分析和描述的基礎(chǔ)上，以它們的形態(tài)、觀察、分析和描述的基礎(chǔ)上，以它們的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理生化反應(yīng)和遺傳性等特征的異同結(jié)構(gòu)、生理生化反應(yīng)和遺傳性等特征的異同為依據(jù)，并根據(jù)生物進(jìn)化的規(guī)律和應(yīng)用方便，為依據(jù)，并根據(jù)生物進(jìn)化的規(guī)律和應(yīng)用方便，將微生物分門別類地排列成一個系統(tǒng)。因此，將微生物分門別類地排列成一個系統(tǒng)。因此，對分類依據(jù)的研究和探討極其重要。傳統(tǒng)的對分類依據(jù)的研究和探討極其重要。傳統(tǒng)的分類方法的分類依據(jù)主要有以下幾個方面：分類方法的分類依據(jù)主要有以下幾個方面：形態(tài)、生理、生化、生態(tài)、生活史、血清學(xué)、形態(tài)、生

21、理、生化、生態(tài)、生活史、血清學(xué)、 對噬菌體敏感性等。對噬菌體敏感性等。 1） 形態(tài)特征形態(tài)特征 菌體形態(tài)特征包括個體特征和群體特征。菌體形態(tài)特征包括個體特征和群體特征。 個體特征包括在顯微鏡下的細(xì)胞大小、形個體特征包括在顯微鏡下的細(xì)胞大小、形狀、排列方式、能否運(yùn)動、鞭毛著生部位狀、排列方式、能否運(yùn)動、鞭毛著生部位和數(shù)目、有無芽孢及其著生部位和形狀、和數(shù)目、有無芽孢及其著生部位和形狀、有無莢膜，放線菌和真菌繁殖器官的形狀、有無莢膜，放線菌和真菌繁殖器官的形狀、構(gòu)造、孢子數(shù)目、形狀、大小、顏色和表構(gòu)造、孢子數(shù)目、形狀、大小、顏色和表面特征等。面特征等。 2) 2) 生理和生化特征生理和生化特征 a

22、)a) 營養(yǎng)來源營養(yǎng)來源 b)b) 代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物 c)c) 與溫度和氧氣的關(guān)系與溫度和氧氣的關(guān)系 3)血清學(xué)反應(yīng)血清學(xué)反應(yīng) 有時確定微生物的種，尤其是亞種，僅依有時確定微生物的種，尤其是亞種，僅依據(jù)形態(tài)、生理生化等特征很難區(qū)分開，因此，據(jù)形態(tài)、生理生化等特征很難區(qū)分開，因此，常需借助血清學(xué)反應(yīng)。就是將已知菌種、型或常需借助血清學(xué)反應(yīng)。就是將已知菌種、型或菌株制成抗血清，根據(jù)它是否與待鑒定對象發(fā)菌株制成抗血清，根據(jù)它是否與待鑒定對象發(fā)生特異性血清反應(yīng)鑒別未知菌。此反應(yīng)也用于生特異性血清反應(yīng)鑒別未知菌。此反應(yīng)也用于病毒分類，尤其是噬菌體分類。病毒分類，尤其是噬菌體分類。4）生態(tài)特性）生態(tài)特性

23、微生物與其它生物的寄生或共生等關(guān)系微生物與其它生物的寄生或共生等關(guān)系往往有一定專一性，常常也作為分類的依往往有一定專一性，常常也作為分類的依據(jù)。如根瘤菌屬的分類主要以其共生對象據(jù)。如根瘤菌屬的分類主要以其共生對象作依據(jù)。細(xì)菌的致病性在分類上也有一定作依據(jù)。細(xì)菌的致病性在分類上也有一定的重要性。另外，微生物在自然界的分布，的重要性。另外，微生物在自然界的分布，是否耐高滲、是否嗜鹽性等，有時也作為是否耐高滲、是否嗜鹽性等，有時也作為分類的參考依據(jù)。分類的參考依據(jù)。5） 生活史（生活史（life cycle） 上代個體經(jīng)一系列生長、發(fā)育階段而產(chǎn)生上代個體經(jīng)一系列生長、發(fā)育階段而產(chǎn)生下一代個體的全部經(jīng)

24、歷，就稱為該生物的生活下一代個體的全部經(jīng)歷，就稱為該生物的生活史或生命周期。微生物個體發(fā)育的階段變化也史或生命周期。微生物個體發(fā)育的階段變化也是分類鑒別的重要依據(jù)。是分類鑒別的重要依據(jù)。6） 對噬菌體的敏感性對噬菌體的敏感性 與血清反應(yīng)類似，各噬菌體有嚴(yán)格的寄生與血清反應(yīng)類似，各噬菌體有嚴(yán)格的寄生范圍，所以根據(jù)菌體對噬菌體的敏感性，可以范圍，所以根據(jù)菌體對噬菌體的敏感性，可以區(qū)分不同類型的微生物。區(qū)分不同類型的微生物。（二）微生物的微型、簡便、快速或自動化鑒定技術(shù)（二）微生物的微型、簡便、快速或自動化鑒定技術(shù) 1.API1.API細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)菌種菌種基本培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基（液

25、體）（液體） 菌懸液菌懸液檢測、編碼、查表、鑒定檢測、編碼、查表、鑒定適用于適用于APIAPI鑒定細(xì)鑒定細(xì)菌有菌有700700多種多種2、Enterotube 系統(tǒng)系統(tǒng) 不同培養(yǎng)基分裝不同小槽中，同不同培養(yǎng)基分裝不同小槽中，同步接種，培養(yǎng)后檢測、查表、鑒定。步接種，培養(yǎng)后檢測、查表、鑒定。3 3、BiologBiolog全自動或手動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)全自動或手動細(xì)菌鑒定系統(tǒng) 在在96孔的細(xì)菌培養(yǎng)板上檢測微生物對孔的細(xì)菌培養(yǎng)板上檢測微生物對不同發(fā)酵性碳源利用情況進(jìn)行的分類鑒定。不同發(fā)酵性碳源利用情況進(jìn)行的分類鑒定。自動化、快速自動化、快速 可鑒定細(xì)菌有可鑒定細(xì)菌有11401140多多種、酵母菌種、酵母

26、菌267267種、目前已種、目前已經(jīng)可用于絲狀真菌。經(jīng)可用于絲狀真菌。每個孔中含有每個孔中含有不同的底物不同的底物菌懸液或菌懸液或無菌水無菌水2 現(xiàn)代微生物分類方法現(xiàn)代微生物分類方法 隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，許多新技術(shù)、新隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，許多新技術(shù)、新方法用于微生物的分類，這些方法不再局限于方法用于微生物的分類，這些方法不再局限于外部形態(tài)、生理生化反應(yīng)，而是深入研究細(xì)胞外部形態(tài)、生理生化反應(yīng)，而是深入研究細(xì)胞內(nèi)部，如核酸、蛋白質(zhì)、脂肪和糖類。觸及生內(nèi)部，如核酸、蛋白質(zhì)、脂肪和糖類。觸及生物的化學(xué)本質(zhì)問題。但是其手續(xù)繁雜，代價高物的化學(xué)本質(zhì)問題。但是其手續(xù)繁雜，代價高昂，在發(fā)現(xiàn)規(guī)律性方面還有

27、待于進(jìn)一步研究。昂，在發(fā)現(xiàn)規(guī)律性方面還有待于進(jìn)一步研究。目前還不能在微生物分類中普遍應(yīng)用?，F(xiàn)代分目前還不能在微生物分類中普遍應(yīng)用?，F(xiàn)代分類法的分類依據(jù)主要有以下幾方面。類法的分類依據(jù)主要有以下幾方面。 1 1）通過核酸分析鑒定的微生物遺傳型：）通過核酸分析鑒定的微生物遺傳型：（1 1）DNADNA堿基比例的測定：堿基比例的測定： DNADNA是遺傳物質(zhì)的攜帶者，它決定生物的表型。是遺傳物質(zhì)的攜帶者，它決定生物的表型。遺傳信息在遺傳信息在DNADNA中的存在形式表現(xiàn)為中的存在形式表現(xiàn)為DNADNA的堿基數(shù)目的堿基數(shù)目及其排列順序。親緣關(guān)系越遠(yuǎn)的種，其堿基數(shù)目和及其排列順序。親緣關(guān)系越遠(yuǎn)的種，其堿

28、基數(shù)目和排列順序相差越大。所以確定了堿基的數(shù)目和序列排列順序相差越大。所以確定了堿基的數(shù)目和序列即可確定即可確定“種種”。 同種生物的同種生物的DNA堿基對的順序和數(shù)量，在堿基對的順序和數(shù)量，在細(xì)胞中比例是穩(wěn)定的，不受年齡和外界影細(xì)胞中比例是穩(wěn)定的，不受年齡和外界影響，所以通過測定響，所以通過測定DNA的堿基比例（的堿基比例（G+C的百分比值），可以判斷微生物種屬間的的百分比值），可以判斷微生物種屬間的親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近。各類微生物的親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近。各類微生物的G+C比值比值變化幅度為變化幅度為2775克分子克分子%。任何兩種微生。任何兩種微生物的物的G+C含量相差含量相差10%以上，這兩種微生以

29、上，這兩種微生物就肯定不屬于同一個種。物就肯定不屬于同一個種。 一些微生物的一些微生物的G+C含量含量 菌種菌種 G-C含量（含量（mol%）細(xì)菌細(xì)菌大腸桿菌 5052傷寒沙門氏桿菌 5053短乳桿菌 45.5銅綠假單胞菌 6467放線菌放線菌灰色鏈霉菌 69.573丙酸放線菌 66.5星狀諾卡氏菌 6469.5霉菌霉菌米曲霉 52.5產(chǎn)黃青霉 5154.5大毛霉 29.5二孢蘑菇 44 *DNA 堿基中堿基中G+C比例比例：同種微生物，其種內(nèi)各菌株間的G+Cmol%值可差2.54.0%，相差過少（低于2%）無分類學(xué)上的意義；若相差在若相差在5%以上，可認(rèn)為是不同的種，相差超過以上，可認(rèn)為是不

30、同的種，相差超過10%應(yīng)應(yīng)屬于不同的屬屬于不同的屬。（G+C）%=（Tm-69.3)2.44 Tm：在DNA加熱變性過程中，紫外吸收增加的中點(diǎn)值對應(yīng)的溫度。 （2 2） DNADNA雜交試驗(yàn)雜交試驗(yàn) 將不同來源的將不同來源的DNADNA在體外加熱解鏈，并在合適在體外加熱解鏈，并在合適條件下，使互補(bǔ)的堿基配對結(jié)合成雙鏈條件下，使互補(bǔ)的堿基配對結(jié)合成雙鏈DNADNA，然后，然后根據(jù)能生成雙鏈的情況，測定雜合百分率。根據(jù)能生成雙鏈的情況，測定雜合百分率。 核酸分子雜交核酸分子雜交（同源性同源性60%60%，屬于同種；同，屬于同種；同源性源性70%70%，屬于同一亞種；同源性在，屬于同一亞種；同源性在

31、20%60%20%60%范圍范圍內(nèi)時，屬于同一個屬內(nèi)時，屬于同一個屬）。（3） rRNA寡核苷酸順序寡核苷酸順序 rRNA核苷酸序列的變化要比核苷酸序列的變化要比DNA的相應(yīng)變的相應(yīng)變化慢而且保守得多?；冶Ｊ氐枚?。 16SrRNA和和18rRNA不但核苷酸數(shù)量適中，而且信息量大，易不但核苷酸數(shù)量適中，而且信息量大，易于分析。于分析。 締合系數(shù)締合系數(shù)SAB=2NAB/（NA+NB）（4）微生物全基因組序列的測定）微生物全基因組序列的測定2 2）細(xì)胞化學(xué)成分的鑒定）細(xì)胞化學(xué)成分的鑒定（1 1）細(xì)胞壁成分分析）細(xì)胞壁成分分析（2 2）全細(xì)胞水解糖型）全細(xì)胞水解糖型（3 3）磷酸類脂成分分析）磷酸類脂成分分析（4 4）枝菌酸的分析）枝菌酸的分析（5 5）醌類的分析）醌類的分析（6 6）氣相色譜技術(shù)的應(yīng)用）氣相色譜技術(shù)的應(yīng)用3 3）數(shù)值分類法：）數(shù)值分類法： 數(shù)值分類法數(shù)值分類法（Numerical taxonomy)