1022.MTT法測定卡鉑對Hela細(xì)胞增殖的抑制效果

1、mtt法測定卡鉑對hela細(xì)胞增殖的抑制效果摘要：本實(shí)驗(yàn)采用不同濃度的卡鉑，作用于體外培養(yǎng)的hela細(xì)胞，用mtt法檢測其對hela細(xì)胞的抑制率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明卡鉑對hela細(xì)胞的增殖抑制作用呈現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系。關(guān)鍵詞：卡鉑，hela細(xì)胞，mtt法卡鉑(carboplatin，cbp)，又名碳鉑?；瘜W(xué)名為順式-1、1-環(huán)丁烷二羧酸二氨鉑，分子式：c6h12n2o4pt?？ㄣK是繼順鉑后上市的另一個(gè)鉑類抗腫瘤藥，屬于第二代鉑復(fù)合物抗腫瘤藥物1。其藥理作用機(jī)理與順鉑相似，屬于金屬配位劑；它與dna配位結(jié)合生成交叉鏈，改變了dna的化學(xué)結(jié)構(gòu)，從而影響細(xì)胞的復(fù)制；它也與烷化劑的作用相似，抑制腫瘤生長，屬

2、時(shí)相周期非特異性的抗癌藥2?？ㄣK作為一種抗腫瘤藥物，對宮頸癌的治療效果已得到肯定，通常與其它抗癌藥物聯(lián)合使用3。由于患者對不同劑量化療藥物的敏感性差異較大，且化療藥物均具有毒副作用4。因此，篩選出藥物治療腫瘤的敏感劑量，對指導(dǎo)臨床用藥，提高療效，減輕毒副作用等具有重要意義。在多種體外抗癌藥物篩選方法中，mtt法是備受推崇的檢測方法，具有簡單，快捷，經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過不同濃度的卡鉑作用于體外培養(yǎng)的宮頸癌hela細(xì)胞，用mtt法檢測其對hela細(xì)胞的抑制率，并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，為敏感劑量的進(jìn)一步篩選提供參考。1.材料與方法1.1細(xì)胞與試劑hela細(xì)胞：即人宮頸癌上皮細(xì)胞，因?yàn)榫哂性鲋逞杆俚忍?/p>

3、點(diǎn)，被廣泛用于生物學(xué)與醫(yī)學(xué)研究?？ㄣK：鉑類抗腫瘤藥，100 mg/支。分別設(shè)置5組不同的濃度梯度(表1)。表1不同梯度卡鉑的濃度設(shè)置組別 濃度梯度(ug/ml)125501002002501503006003102040804612244852040801601.2方法1.2.1接種：消化hela細(xì)胞成懸液，并調(diào)整濃度，使其處于23104/ml之間。用移液槍向96孔板中加細(xì)胞懸液，每孔200l。1.2.2培養(yǎng)與藥物處理：培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2436h后，吸出培養(yǎng)液，加入不同濃度梯度的卡鉑溶液各200l，每個(gè)濃度接種4孔作為重復(fù)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)設(shè)置空白對照孔和不加藥物對照孔。置于培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)3天。1.2.

4、3呈色：加5 mg/ml的mtt溶液，每孔20 l，繼續(xù)培養(yǎng)。4 h后棄去孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，然后加入dmso，每孔150l，振蕩30min。1.2.4比色：在波長為490nm下，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值。1.2.5計(jì)算與分析：按如下公式計(jì)算各濃度梯度對細(xì)胞增殖率的影響。細(xì)胞增殖抑制率(未加藥物處理的對照組吸光值藥物處理組的吸光值)/未加藥物處理的對照組吸光值。若該值為正，說明藥物對細(xì)胞增殖具有抑制作用；為零表明藥物對細(xì)胞增殖無影響；為負(fù)說明藥物對細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用。2.結(jié)果與分析2.1五組不同濃度梯度的卡鉑作用于hela細(xì)胞48h后，均出現(xiàn)了不同程度對hela細(xì)胞增殖活性的抑制。隨著

5、藥物濃度的增加，細(xì)胞的抑制率也有增加的趨勢(表2)。當(dāng)卡鉑濃度為最高的600 ug/ml時(shí)(第二組)，細(xì)胞的抑制率也達(dá)到最高，為93.84%，此時(shí)基本上所有的hela均已被抑制，喪失生理活性。2.2卡鉑能明顯抑制hela細(xì)胞的增殖，對hela細(xì)胞的增殖抑制作用基本上能呈現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系。表2 不同濃度梯度的卡鉑對hela細(xì)胞的抑制率組別 劑量(ug/ml) 抑制率(%)1255010020019.25%35.29%52.58%79.68%25015030060047.08%74.25%76.30%93.84%31020408043.97%31.47%44.82%40.16%461224482

6、6.36%38.89%46.38%49.61%52040801609.72%26.30%21.44%49.92%3.討論3.1實(shí)驗(yàn)證明不同濃度的卡鉑對hela細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)出量效關(guān)系，可以推測，卡鉑對生物體內(nèi)的宮頸癌細(xì)胞的抑制作用也同樣會呈現(xiàn)出這樣的關(guān)系，但線性應(yīng)該有所改變。同時(shí)，卡鉑對hela細(xì)胞的抑制率也與藥物作用的時(shí)間有關(guān)，作用時(shí)間越長，抑制率越高5。3.2研究表明卡鉑主要通過腎臟排泄，50%75%在4小時(shí)內(nèi)排泄完畢，90%在24小時(shí)內(nèi)排泄。與順鉑不同相比，腎小管不參與卡鉑的排泄，所以卡鉑對腎臟的毒性較小3。作為抗癌藥物的篩選，應(yīng)當(dāng)選擇抑制率最高而濃度最低的藥物劑量，以減少對機(jī)體

7、的傷害。在本實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)藥物濃度為100 ug/ml時(shí)，對細(xì)胞的抑制率僅略大于50%，有較優(yōu)抑制率的濃度在150200之間。這是否可以說明使用卡鉑可以使用較大的劑量，這需要作進(jìn)一步信息的臨床研究。3.3毒性檢測有多種不同方法，可能會產(chǎn)生不同的檢測結(jié)果。對正確判斷藥物作用效果，選擇適合的檢測方法就顯得尤其重要。在較大的劑量范圍及較寬的細(xì)胞密度內(nèi)，srb法比mit法準(zhǔn)確穩(wěn)定5。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果誤差均比較大，若需要更為準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，建議使用srb法重復(fù)本實(shí)驗(yàn)。參考文獻(xiàn)：1. 宋紅英，劉放. 卡鉑的藥理作用及分析方法j. 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào).2005，30(3)：36-392. 陳啟蒙. 抗癌藥卡鉑的臨床應(yīng)用進(jìn)展j. 中國醫(yī)師雜志.2000，2(9)：540-5413. 朱滔，樓洪坤. 卡鉑在宮頸癌化療中的應(yīng)用j.腫瘤學(xué)雜志.2005，11(1)：66-684. 王玉萍，邵斌，楚天驕，等. mt