大鼠海馬內(nèi)σ受體在電針抑制電驚厥中的作用

1、大鼠海馬內(nèi)受體在電針抑制電驚厥中的作用 摘要 目的：觀(guān)察大鼠海馬內(nèi)受體在電針抑制電驚厥中的作用。方法：62只成年雄性wistar大鼠分為6組。在大鼠電驚厥模型（通過(guò)雙側(cè)耳廓部的電極夾給予電刺激：50 hz,60 ma，持續(xù)0.4 s，共3次，每次間隔5 min）上應(yīng)用行為觀(guān)察，用海馬內(nèi)微量注射受體激動(dòng)劑或拮抗劑及腦電功率譜分析方法對(duì)驚厥及其程度進(jìn)行分析；使用g6805-2電針治療儀電針“風(fēng)府”（gv16），“筋縮”（gv8），頻率130 hz，強(qiáng)度1 ma，持續(xù)10 min。結(jié)果：大鼠海馬內(nèi)微量注射受體激動(dòng)劑1,3-雙-2-甲苯基胍（1,3,di(2-tolyl)guanidine，dtg）8

2、.27 nmol可以抑制電驚厥發(fā)作，表現(xiàn)為癇樣放電減輕，腦電總功率和主頻功率降低，并且增強(qiáng)電針抑制電驚厥的作用。而大鼠海馬內(nèi)注射受體拮抗劑右嗎喃1.5 nmol/0.5 l后則使電驚厥發(fā)作加劇，減弱了電針抑制電驚厥的作用（“針?biāo)帯苯M與“針人工腦脊液”組及單純藥物組比較，p 關(guān)鍵詞 電針；海馬；電驚厥；受體 中圖分類(lèi)號(hào) r363.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼a 文章編號(hào)1673-7210（2007）04（c）-012-03 大量的研究顯示，癲癇發(fā)作與腦內(nèi)的海馬結(jié)構(gòu)有十分密切的關(guān)系，海馬內(nèi)的阿片受體參與驚厥發(fā)作1，阿片受體目前至少分為、和受體2，受體有3個(gè)亞型3。我們以往的研究表明：受體活動(dòng)增強(qiáng)可以加強(qiáng)驚厥發(fā)作4

3、，而受體活動(dòng)加強(qiáng)則抑制其發(fā)作5。而受體的作用有不同的報(bào)道，特別是該受體在電針抗電驚厥中的作用更是未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究的目的是在大鼠電驚厥模型上采用海馬內(nèi)分別微量注射受體的激動(dòng)劑、拮抗劑，觀(guān)察該受體在電針抗電驚厥中的作用。 材料和方法 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型 成年雄性健康wistar大鼠62只，（22020）（中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，清潔級(jí)），分為6組：1,3-雙2-甲苯基胍1,3,di(2-tolyl)guanidine，dtg組、右嗎喃組、acsf（人工腦脊液）組、ea（電針）+dtg、ea+右嗎喃組、ea+acsf組。 采用我們實(shí)驗(yàn)室使用的驚厥模型 4，5，方法簡(jiǎn)述如下：經(jīng)固

4、定在雙側(cè)耳廓部的電極夾給予電刺激（50 hz,60 ma持續(xù)0.4 s，電擊3次，每次間隔5 min）。引起電驚厥時(shí)動(dòng)物表現(xiàn)為肢體痙攣，嘶叫，流淚和腦電圖癇樣放電。胸部及前肢的運(yùn)動(dòng)經(jīng)碳換能器轉(zhuǎn)換后輸入幅度積分儀，5 min內(nèi)總能量超過(guò)基礎(chǔ)水平100%以上為驚厥發(fā)作。用四導(dǎo)生理記錄儀器記錄皮層腦電和肢體運(yùn)動(dòng)，用磁帶數(shù)據(jù)記錄儀（日本光電rgm-5403型）同步記錄腦電，經(jīng)專(zhuān)用信號(hào)處理機(jī)（日本三榮7t08型）分析腦電功率譜和頻譜，反映腦電及腦功能活動(dòng)的變化。 1.2微量注射方法 用戊巴必妥鈉麻醉（2 mg/100 g,ip）。微量注射外套管直徑0.8 mm，內(nèi)套管直徑0.4 mm，內(nèi)套管尖端比外套管

5、長(zhǎng)0.5 mm，根據(jù)koning-klipped大鼠頭位立體定向圖譜，取p3,r3/l3,h3.7海馬體背部定位，海馬內(nèi)埋管備用。埋管后3 d進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 電驚厥發(fā)作穩(wěn)定后經(jīng)事先埋置的套管分別注射人工腦脊液0.5 l, dtg8.27 nmol，右嗎喃（dextrorphan）1.5 nmol/0.5 l。 1.3電針 給藥后15 min開(kāi)始電針，留針30 min后停10 min，然后再30 min。選用的穴位為“風(fēng)府”（gv16），“筋縮”（gv8）；使用g6805-2型電針治療儀（上海醫(yī)療儀器廠(chǎng)），采用連續(xù)波，頻率130 hz，強(qiáng)度1 ma，持續(xù)10 min。 實(shí)驗(yàn)后注射活性染料氨黑10b

6、1 l，并作組織學(xué)檢查，確定套管尖端的部位。 1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用xs表示。使用spss11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。組間比較用方差分析。 2 結(jié)果 2.1 海馬內(nèi)微量注射受體激動(dòng)劑dtg對(duì)電針抑制電驚厥的影響 dtg組(n=10)在電驚厥發(fā)作模型穩(wěn)定后通過(guò)套管微量注射dtg 8.27nmol/0.5 l，注射10 min后動(dòng)物變得安靜，肢體抖動(dòng)明顯減少，呼吸平穩(wěn)。癇樣放電波幅減小，頻率降低；腦電總功率及主頻功率減小，由致癇狀態(tài)的0.910.08相對(duì)單位到0.410.06相對(duì)單位，具有顯著性差異（p 而注射等量的acsf大鼠的行為及腦電無(wú)明顯變化（p0.05）。 dtg組與acsf對(duì)照組比較，

7、腦電總功率及主頻功率減小，低頻成分增多，表現(xiàn)為比值增大，具有顯著性差異（p 給藥15 min后給予電針治療(n=10)，動(dòng)物仍然處于安靜狀態(tài)，但是腦電癇樣放電進(jìn)一步減輕，腦電總功率與電針治療前比較明顯降低，并且腦電低頻成分進(jìn)一步增加，具有顯著性差異（p 與ea+dtg相比，ea+acsf組（n=10）雖然可以看到電針的抗驚厥的作用，但是作用強(qiáng)度較小（p 結(jié)果表明，dtg海馬內(nèi)微量注射能加強(qiáng)針刺抗電驚厥的作用。 2.2 海馬內(nèi)微量注射受體拮抗劑右嗎喃對(duì)電針抑制電驚厥的影響 右嗎喃組(n=8) 在電驚厥模型穩(wěn)定后通過(guò)套管微量注射右嗎喃1.5 nmol/0.5 l，注射10 min后動(dòng)物開(kāi)始掙扎，肢

8、體抖動(dòng)明顯增加，流淚，呼吸急促，伴有尖叫、便溺。癇樣放電波幅增高，呈叢集狀；腦電總功率及主頻功率明顯增大，由致癇狀態(tài)的0.960.08相對(duì)單位到1.470.14相對(duì)單位，與單純注射等量的ascf對(duì)照組比較，低頻成分減少，表現(xiàn)為比值減小。具有顯著性差異（p 給藥15 min后給予電針治療(n=14)，動(dòng)物仍然處于電驚厥狀態(tài)，腦電癇樣放電進(jìn)一步加劇，腦電總功率與電針治療前比較明顯增大，并且腦電低頻成分進(jìn)一步減少（p 同樣的條件下，在電驚厥發(fā)作模型穩(wěn)定后通過(guò)套管微量注射ascf 0.5l，注射10 min后動(dòng)物仍然處于電驚厥狀態(tài)。癇樣放電波幅、頻率、腦電總功率及主頻功率無(wú)明顯的變化，給予ascf 1

9、5 min后給予電針治療，仍然可以看到其對(duì)電驚厥和腦電的抑制作用,與電針前比較，具有顯著性差異（p 從以上結(jié)果可以看出，受體激動(dòng)劑dtg和拮抗劑右嗎喃對(duì)電驚厥的作用是相反的，即該受體激動(dòng)劑可以促進(jìn)抑制驚厥發(fā)作，而拮抗劑易化驚厥發(fā)作；同樣的趨勢(shì)，該受體激動(dòng)劑可以增加針刺的療效，促進(jìn)電針抑制電驚厥；而拮抗劑拮抗了電針的抗驚厥的作用。 討論 受體在是一種阿片受體，在腦內(nèi)有較廣泛的分布，海馬內(nèi)ca1-ca3區(qū)均有該受體的分布。其作用比較復(fù)雜，在驚厥研究方面其結(jié)果并不一致：有人認(rèn)為該受體興奮可以抑制癲癇的發(fā)作，aram等6用dtg，skf10,047等興奮該受體后可以明顯地降低癇樣放電的頻率。而zuki

10、n等7則認(rèn)為該受體興奮后促進(jìn)發(fā)作。stringer等8觀(guān)察到ca1-ca3突觸傳遞的效能先稍升高然后降低。右嗎喃是右甲嗎喃（dextromethorphan，dm）的代謝物,在海人藻酸和 bay k-8644癲癇模型上其抗驚厥作用比dm差9-12。 右嗎喃對(duì)驚厥的作用機(jī)制比較復(fù)雜，它在大劑量(mmol級(jí))時(shí)表現(xiàn)出激活nmda受體的作用，而在小劑量（nmol級(jí)）時(shí)表現(xiàn)出特異性受體高親和力，從而促進(jìn)驚厥發(fā)作。本實(shí)驗(yàn)中海馬內(nèi)微量注射受體激動(dòng)劑dtg后可見(jiàn)明顯的抑制電驚厥的作用，而注射受體的拮抗劑右嗎喃則由于阻斷了受體，使發(fā)作加劇，表明受體與電驚厥有關(guān)，該受體的興奮可以抑制電驚厥發(fā)作，這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文

11、獻(xiàn)報(bào)道相吻合。 海馬內(nèi)微量注射dtg后激活了受體，因此可以加強(qiáng)電針抑制電驚厥的作用，而注射該受體的拮抗劑右嗎喃后拮抗了電針抗電驚厥的作用，提示受體參與了電針抗電驚厥作用。電針對(duì)抗電驚厥的作用的可能機(jī)制之一是通過(guò)激活海馬內(nèi)受體而發(fā)揮作用。 由于電驚厥發(fā)作涉及包括海馬在內(nèi)的腦內(nèi)許多結(jié)構(gòu)，雖然本研究表明海馬內(nèi)受體參與了電針抗電驚厥作用，但是總的腦內(nèi)受體是否參與電針抗電驚厥作用，尚有待于進(jìn)一步深入研究。 綜上所述，受體與電驚厥有關(guān)，該受體的興奮可以抑制電驚厥發(fā)作。電針可能是通過(guò)激活海馬內(nèi)受體而發(fā)揮抗驚厥作用的。 參考文獻(xiàn) 1frenk h.pro-and anticonvulsant actions

12、of morphorine and the endogenous opioids:involvement and interaction of mutiple opiate and non-opiate systemj.brain res rev,1983,6（1）:197. 2高煥民.針刺治療癲癇與海馬內(nèi)、阿片受體的關(guān)系j.國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè), 1997,19（5）22. 3monnet fp, de costa br, bowen wd.differentiation of sigma ligand-activated receptor subtypes that modulate nm

13、da-evoked 3h-noradrenaline release in rat hippocampal slicesj. br j pharmacol,1996, 119(1):65. 4he xp,cao xd.effects of intrahippocampal delta receptors on inhibition of electroconvulsive shock by electroacupuncturej.acta pharmacol sinca,1989，10(3):197. 5高煥民,程介士.大鼠海馬內(nèi)kappa阿片受體在電針抑制電驚厥中的作用j.針刺研究,1998

14、,23(2):122. 6aram ja.neocortical epileptogenesis in vitro:studies with nmda,phencyclincline,sigma and dexmethorphan receptor ligandsj.j pharmacol exp ther, 1989,284(1):320. 7zukin sr.behavioral and biochemical strtrselectivity of sigma/pcp opiate receptorsj. brain res, 1984,294（1）:174. 8stringer jl.

15、blokade of long-term potentiation by phencyclinding and opiate in the hippocampus in vivo and in vitroj. brain res, 1983,6（1）：127. 9kim hc, ko kh, kim wk, et al.effects of dextromethorphan on the seizures induced by kainate and the calcium channel agonist bay k-8644: comparison with the effects of dextrorphanj. behav brain res,2001,120(2):169. 10thurgur c, church j.the anticonvulsant actions of sigma receptor ligands in the mg2+-free model of epileptiform activity in rat hippocampal slicesj. br j pharmacol,1998,124(5):917. 11rawls s, baron d, geller e, et al. sigma sites mediate dtg-evoked