生化實驗04-淀粉酶活性的測定

1、實驗04 一、目的一、目的 二、原理二、原理 淀粉 -淀粉酶 （內(nèi)切酶） -淀粉酶 （外切酶） 麥芽糖等 寡聚糖 麥芽糖 3，5-二硝 基水楊酸 3-氨基-5- 硝基水楊酸 （棕紅色） 淀粉酶的作用機制及產(chǎn)物顯色原理： 540nm比色測定比色測定 淀粉酶活性大小的表示方法： 淀粉酶活性的大小與產(chǎn)生的還原糖的量成正比。以單 位質(zhì)量樣品單位時間生成的還原糖的量表示。 測定-淀粉酶和-淀粉酶： -淀粉酶不耐酸， -淀粉酶不耐熱，本實驗采用70。 C保溫15min鈍化-淀粉酶而測出-淀粉酶?？偦盍?減去-淀粉酶活力則為-淀粉酶活力。 三、材料、儀器設(shè)備及試劑三、材料、儀器設(shè)備及試劑 材料：萌發(fā)的小麥種

2、子（芽長1cm） 儀器設(shè)備：分光光度計、恒溫水浴、刻度試管、 容量瓶 試劑： 1、標準麥芽糖溶液（1mg/mL） 2、3，5-二硝基水楊酸（含NaOH） 3、1%淀粉溶液 四、實驗步驟四、實驗步驟 2、酶液制備 稱取1g萌發(fā)的小麥種子 加少量蒸餾水 研磨 轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶 定容 放置15min 過濾 淀粉酶原液（酶液） 取酶液 10 mL于50 mL容量瓶，用蒸餾水定容 至刻度，搖勻，即為淀粉酶稀釋液（酶液） 1、麥芽糖標準曲線的制作 A540=0.264x-0.052 (x為mg麥芽糖） 3、酶活力的測定 取4支干凈的具塞刻度試管，編號，按下表操作： 搖勻，沸水浴中5min，取出流水冷

3、卻，加蒸餾水至20mL。 搖勻，540nm比色測定。 操作項目 管號 -1 -2 -1 -2 淀粉酶原液（酶液）/mL 1.0 1.0 0 0 鈍化-淀粉酶 置70。C水浴中15min，取出后流水冷卻 淀粉酶稀釋液（酶液）/mL 0 0 1.0 1.0 3，5-二硝基水楊酸/ mL 2.0 0 2.0 0 預(yù)保溫 40。C恒溫水浴中保溫10min 1%淀粉溶液/ mL（ 40。C ） 1.0 1.0 1.0 1.0 保溫 40。C恒溫水浴中保溫5min 3，5-二硝基水楊酸/ mL 0 2.0 0 2.0 空白管： 2 mL蒸餾水 + 2 mL3，5-二硝基水楊酸，沸水浴 5min，定容至20 mL 五、實驗數(shù)據(jù)五、實驗數(shù)據(jù) VT= VS= W= N = 5 A-1= A-2 = A1 = A-2 - A-1 x1= A-1= A-2 = A2 = A-2 - A-1 x2= 六、結(jié)果計算六、結(jié)果計算 X1 VT -淀粉酶活力mg/(g.min)= W VS t X2 VT N (+)-淀粉酶活力mg/(g.min)= W VS t -淀粉酶活力=(+)-淀粉酶活力- -淀粉酶活力