食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)茶葉中多種農(nóng)藥殘留測定氣相液相法編制說明征求意見稿

1、貴州省食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)茶葉中多種農(nóng)藥殘留測定氣相/液相法編制說明（征求意見稿）貴州省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心一、工作簡況1.1目的意義近年來，我省充分發(fā)揮資源優(yōu)勢，加大農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整力度，突出抓好茶葉等優(yōu)勢特色產(chǎn)業(yè)。2013年全省茶葉種植面積611萬畝，其中綠茶種植面積已居于全國第一位，綜合產(chǎn)值達(dá)86億元。近期，省委、省政府為加快發(fā)展特色優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)的戰(zhàn)略部署，著力推進(jìn)我省茶產(chǎn)業(yè)的轉(zhuǎn)型升級，提升品牌競爭力，促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展和農(nóng)民增收，又制定了貴州省茶產(chǎn)業(yè)提升三年行動(dòng)計(jì)劃。計(jì)劃到2016年，全省建成茶園面積700萬畝以上，其中投產(chǎn)茶園500萬畝，形成加工企業(yè)3000家以上，茶葉年產(chǎn)量27萬噸，茶

2、產(chǎn)業(yè)綜合產(chǎn)值超過500億元。茶葉質(zhì)量安全是保障我省茶葉產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要基礎(chǔ)，也是貴州省茶產(chǎn)業(yè)提升三年行動(dòng)計(jì)劃中的重點(diǎn)保障項(xiàng)目及工作內(nèi)容。為了提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全建設(shè)，近年來國家加大力度投入質(zhì)檢體系的建設(shè)分別建立了省、地、縣的三級檢測體系。這些檢測機(jī)構(gòu)今后將面臨大量的監(jiān)督、檢驗(yàn)、檢測工作。采用合理、合法、高效的檢測方法將是檢測機(jī)構(gòu)提高檢測技術(shù)，高效完成工作任務(wù)的基本需求。而在茶葉農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)方面，我國現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)主要有：茶葉中農(nóng)藥多殘留測定 氣相色譜質(zhì)譜法GB/T 23376-2009、茶葉中448種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T 23205-2008、茶葉中51

3、9種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法GB/T 23204-2008等方法。但是上述方法要求配置的氣相色譜-質(zhì)譜儀、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀等大型儀器設(shè)配，儀器設(shè)配價(jià)格昂貴、對操作人員技術(shù)要求高，沒有適用于液相、氣相等普及性較高的設(shè)備的檢測方法。目前我省各縣級農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢站僅配備氣相色譜、液相色譜等常規(guī)檢測儀器，無法使用上述國標(biāo)中規(guī)定的檢測方法。而GB 5009系列的方法又僅僅適用于單農(nóng)殘的檢測無法滿足現(xiàn)階段多殘留快速檢測的檢測工作需要，使我省各縣級農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢站在選擇檢測方法時(shí)出現(xiàn)了“高不成低不就”的尷尬局面。為了滿足我省各縣級農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢站檢測需求，急需一種符合我省實(shí)際檢測能力的檢測方法

4、。在此背景下由貴州省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心主持，貴州大學(xué)精細(xì)化工研究開發(fā)中心參與制定茶葉中多種農(nóng)藥殘留測定氣相/液相法地方標(biāo)準(zhǔn)。通過研究制定茶葉中多種農(nóng)藥殘留測定氣相/液相法地方標(biāo)準(zhǔn)，提高全省茶葉質(zhì)量安全的監(jiān)測能力。同時(shí)也為我省各縣級農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢站選用合理、合法、高效的檢測方法，提升檢測技術(shù)，提高工作效率及儀器設(shè)備的使用率，提供了一個(gè)科學(xué)、合理的選擇。通過本標(biāo)準(zhǔn)制定將逐步改善我省在茶葉質(zhì)量安全檢測技術(shù)儲(chǔ)備不足、標(biāo)準(zhǔn)零散落后和與國際標(biāo)準(zhǔn)不接軌的問題，全面提升我省茶葉質(zhì)量安全方面的技術(shù)水平。具體體現(xiàn)為保護(hù)消費(fèi)者健康和權(quán)益、促進(jìn)優(yōu)勢特色農(nóng)產(chǎn)品的進(jìn)出口貿(mào)易、提高我省茶葉的市場競爭力。1.2任務(wù)來

5、源承擔(dān)單位：貴州省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心協(xié)同機(jī)構(gòu)：貴州大學(xué)精細(xì)化工研究開發(fā)中心1.3主要工作過程項(xiàng)目主持單位組織專家成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工作組，并負(fù)責(zé)編制起草工作，確定標(biāo)準(zhǔn)的主要技術(shù)內(nèi)容。編制組成立后，進(jìn)行了廣泛的調(diào)查和研究工作，主要包括以下幾個(gè)方面：（1）查閱國際上茶葉中氣相色譜法和液相色譜法農(nóng)藥殘留檢測的情況，了解目前茶葉中不同農(nóng)藥的最大殘留限量值。（2）收集國內(nèi)外有關(guān)茶葉中農(nóng)藥多殘留的液相色譜和氣相色譜測定方法和標(biāo)準(zhǔn)等資料。比較研究了國內(nèi)外的不同測定方法的有缺點(diǎn)，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改善，為方法最終的確定提供了大量的數(shù)據(jù)支撐。（3）調(diào)查了國內(nèi)許多單位茶葉中農(nóng)藥多殘留測定方法的儀器設(shè)備和使用

6、情況，為方法的普適性提供依據(jù)。（4）為確定方法分析步驟、儀器測試條件及方法技術(shù)參數(shù)的評價(jià)，本單位和相關(guān)協(xié)作實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了大量的方法研究、驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、為標(biāo)準(zhǔn)的起草制定了可靠的第一手資料。在廣泛的調(diào)查研究和必要的試驗(yàn)驗(yàn)證的工作基礎(chǔ)上，根據(jù)GB/T 1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第一部份：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則及GB/T 20001.4-2001標(biāo)準(zhǔn)編寫第四部份：化學(xué)分析方法所規(guī)定的內(nèi)容和格式編寫完成標(biāo)準(zhǔn)草案，現(xiàn)已形成征求意見稿。二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容的論據(jù)2.1指導(dǎo)思想針對我省茶葉生產(chǎn)過程中農(nóng)藥實(shí)際使用情況，結(jié)合我省各縣級農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢站僅配備氣相色譜、液相色譜的實(shí)際，重點(diǎn)采用國際廣范

7、使用的固相萃取技術(shù)，充分利用不同類型的固相萃取SPE小柱，通過一次樣品前處理完成氣相色譜儀或液相色譜儀的儀器檢測，實(shí)現(xiàn)茶葉多種農(nóng)藥殘留同時(shí)測定的目的，提高全省茶葉質(zhì)量安全的監(jiān)測能力。2.2編制原則本標(biāo)準(zhǔn)的編寫制定過程以提高測試方法選擇性、精密度、靈敏度、準(zhǔn)確度和分析效率，降低分析成本為總原則，力求反映科學(xué)技術(shù)的先進(jìn)成果和先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)。遵循了標(biāo)準(zhǔn)制定過程中的先進(jìn)性、經(jīng)濟(jì)性和適用性原則。在標(biāo)準(zhǔn)的制定過程中嚴(yán)格遵循國家有關(guān)方針、政策、法規(guī)和規(guī)章，嚴(yán)格執(zhí)行強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。與同體系標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)的各種基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)以及配套使用的取樣、試劑規(guī)格等標(biāo)準(zhǔn)相銜接，遵循了政策和協(xié)調(diào)統(tǒng)一性原則。在標(biāo)準(zhǔn)制定過程中力求做到

8、：技術(shù)內(nèi)容的敘述正確無誤；文字表達(dá)準(zhǔn)確、簡明、易懂；標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)成嚴(yán)謹(jǐn)合理；內(nèi)容編排、層次劃分等符合邏輯與規(guī)定。2.3編制過程及編制進(jìn)展本標(biāo)準(zhǔn)編制時(shí)間為2014年6月2017年12月。為保證本標(biāo)準(zhǔn)的編寫工作，成立了標(biāo)準(zhǔn)編寫小組，小組成員分工合作，各司其職，于2014年5月完成標(biāo)準(zhǔn)申請書填報(bào)工作后，即開始收集，查詢相關(guān)資料，選擇省內(nèi)有代表性的地區(qū)，在茶葉生長季節(jié)現(xiàn)場調(diào)研病蟲害發(fā)生情況、農(nóng)藥使用種類、用量、用藥次數(shù)、安全間隔期等。在此基礎(chǔ)上，于2015年6月確定了茶葉中多種農(nóng)藥殘留測定氣相/液相法中所涉及到的檢測參數(shù)。為了確保本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)用性、可操作性、科學(xué)性和合理性，能符合我省的實(shí)際情況，標(biāo)準(zhǔn)編寫小組

9、又對標(biāo)準(zhǔn)中的有關(guān)技術(shù)性問題反復(fù)試驗(yàn)；并與貴州大學(xué)精細(xì)化工研究開發(fā)中心做了大量的比對試驗(yàn)、驗(yàn)證試驗(yàn)。向部分縣級農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢站的一線檢測技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)際操作試驗(yàn)，及時(shí)修改完善了出現(xiàn)的各種問題。于2017年4月完成了茶葉中多種農(nóng)藥殘留測定氣相/液相法草案的編制工作。并于2017年7月課題組組織相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制定專家對標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行了內(nèi)部評審。目前標(biāo)準(zhǔn)草案制定已完成，待相關(guān)驗(yàn)證單位驗(yàn)證數(shù)據(jù)匯總后即可報(bào)主管部門審議批準(zhǔn)。2.4確定主要技術(shù)內(nèi)容的依據(jù)目前，茶葉中多殘留的測定，國內(nèi)已經(jīng)有標(biāo)準(zhǔn)方法。方法為“茶葉中448種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T 23205-2008、茶葉中519種農(nóng)藥

10、及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法GB/T 23204-2008”。該方法在樣品的提取凈化部分采用乙腈提取，氯化鈉水溶液液液萃取，茶葉專用固相萃取小柱凈化，前處理方法相對比較繁瑣，而質(zhì)譜方法限制了這兩個(gè)方法在縣級質(zhì)檢站的推廣和應(yīng)用。另一個(gè)方法是 NY/T 761-2008 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定。該方法無疑是國內(nèi)多殘留檢驗(yàn)檢測最為成功的標(biāo)準(zhǔn)，樣品的提取凈化部分采用乙腈提取，氯化鈉水溶液液液萃取，分取三個(gè)部分測定了有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的多組分。由于茶葉的基質(zhì)比蔬菜水果更為復(fù)雜，該方法不能實(shí)現(xiàn)一次凈化同時(shí)進(jìn)行有機(jī)磷和有機(jī)氯類農(nóng)藥的檢

11、測，且沒有兼顧液相色譜的方法，使得日常的檢驗(yàn)檢測的工作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，并且也不符合我省關(guān)于著力加快推進(jìn)茶產(chǎn)業(yè)的轉(zhuǎn)型升級，提升品牌競爭力，促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展和農(nóng)民增收的要求。因此該方法在茶葉農(nóng)殘檢測工作中不能得以改編和推廣。通過上述幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)可以看出通過QuEChERS方法進(jìn)行提取，然后根據(jù)檢測器和多殘留組分的不同，一次凈化達(dá)到檢驗(yàn)檢測的目的，因此而基質(zhì)分散固相萃取法加上固相萃取法來說更加快速、環(huán)保。因此，在現(xiàn)有茶葉中農(nóng)藥多殘留測定 氣相色譜質(zhì)譜法GB/T 23376-2009、茶葉中448種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T 23205-2008、茶葉中519種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘

12、留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法GB/T 23204-2008、GB 5009系列標(biāo)準(zhǔn)方法基礎(chǔ)上，我們對樣品的提取凈化過程進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，研究確定了相對簡單快速且能同時(shí)進(jìn)行氣相液相檢測的前處理方法，該方法可有效的測定茶葉中多組分的農(nóng)藥殘留。茶葉樣品含有茶多酚、茶堿和茶油脂等，具有更多水溶性的雜志，更深的色素，除去色素對于方法的準(zhǔn)確性和精密度均有提高，因此，在現(xiàn)有文獻(xiàn)方法的基礎(chǔ)上，我們對茶葉提取凈化過程進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，研究確定了使用相對簡單快速的前處理的液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行檢測，該方法可有效的測定茶葉中的農(nóng)藥多殘留。2.5檢測參數(shù)的確定在茶葉生長季節(jié)現(xiàn)場調(diào)研病蟲害發(fā)生情況、農(nóng)藥使用種類、用量、用藥次

13、數(shù)、安全間隔期等；結(jié)合我省近年來茶葉農(nóng)藥殘留例行監(jiān)測數(shù)據(jù)；針對我省茶葉生產(chǎn)過程中農(nóng)藥實(shí)際使用情況確定檢測參數(shù)。2.6范圍和內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)主要應(yīng)用于貴州省范圍內(nèi)茶葉（包括綠茶、紅茶、普洱茶、烏龍茶）中百菌清、三唑酮、敵敵畏、甲胺磷、甲基對硫磷、毒死蜱、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、甲氰菊酯、氧樂果、聯(lián)苯菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、三唑磷、水胺硫磷、溴氰菊酯、吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、除蟲脲、氟蟲腈、滅幼脲、辛硫磷、阿維菌素等多種農(nóng)藥殘留的檢測。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了茶葉中多種農(nóng)藥殘留檢測的前處理原理、步驟，氣相等相關(guān)主要儀器設(shè)置參數(shù)及色譜柱的選用等主要檢測技術(shù)要求。三、方法的確定3.1稱樣量的確定本

14、方法參考茶葉中農(nóng)藥多殘留測定 氣相色譜質(zhì)譜法GB/T 23376-2009、茶葉中448種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T 23205-2008、茶葉中519種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法GB/T 23204-2008、GB 5009系列標(biāo)準(zhǔn)方法確定稱樣量為5-10g。在GB/T 23204-2008方法中稱樣量為5g，提取溶劑乙腈的體積為30 mL；在GB/T 23204-2008方法中稱樣量為10g，提取溶劑乙腈的體積為60 mL。我們對不同稱樣量的提取效果進(jìn)行了比較，確定了茶葉等稱樣量為5 g。此外，在我國的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室所配置的離心機(jī)與離心管通常

15、為100ml，根據(jù)QuEChERS方法樣品量與提取溶劑加入量的關(guān)系，5 g的稱樣量更易于操作，所以本實(shí)驗(yàn)確定樣品的稱樣量為5g。3.2提取液類型和是否加水浸泡的確定結(jié)合GB/T 23205-2008、GB/T 23204-2008、NY/T761-2008、農(nóng)業(yè)部2010蔬菜、水果和食用菌農(nóng)藥殘留檢測細(xì)則以及部分文獻(xiàn)，選擇了乙腈作為提取劑。由于茶葉是干樣，在實(shí)際的檢驗(yàn)檢測工作中，直接加入乙腈提取會(huì)導(dǎo)致部分水溶性較好的農(nóng)藥回收不好，像多菌靈、吡蟲啉等，因此在提取前加入10 ml水先浸泡茶葉半小時(shí)，再加入提取溶劑乙腈，增加水溶性農(nóng)藥的提取效率。加入乙腈后：15 000r/min勻漿提取2 min（

16、在1min左右時(shí)加入4gNaCl）,4 000 r/min離心5 min，取上20 mL上清液于梨形瓶中，40 水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL左右，待凈化。3.2.1氣相方法部分3.2.1.1氣相固相萃取柱的選擇依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，以及基質(zhì)分散固相萃取方法中填料的凈化回收效果，初步選定了3種惰性吸附劑(ODS、石墨化碳、弗洛里硅土柱)固相萃取柱對樣品的凈化回收效果進(jìn)行評價(jià)。此外，我們比較了石墨炭黑氨基復(fù)合柱的凈化回收效果。在以往的農(nóng)殘分析中，GCB固相萃取小柱用于去除葉綠素和類胡蘿卜素，對茶葉中的色素去除效果好，但是對部分農(nóng)藥吸附太大導(dǎo)致回收不好。弗洛里硅土柱雖然凈化效果好，但是有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率

17、卻整體偏低；C18固相萃取小柱的除色素能力太低，氣相色譜儀維護(hù)的頻率過高，再加上C18固相萃取小柱下有機(jī)氯農(nóng)藥的回收氯偏低。綜合考慮回收率和凈化效果，本實(shí)驗(yàn)中選擇石墨炭黑氨基復(fù)合柱作為茶葉樣品凈化填料。各萃取小柱的使用方法見附錄。表1 不同分散固相萃取填料的凈化回收效果SPE柱劑量（mg）農(nóng)殘回收率（毒死蜱）（%）C1820341004420052氨基柱2084.010088.6200903.2.1.2氣相淋洗液的種類和體積的確定實(shí)驗(yàn)對比了選用乙腈、國標(biāo)23204-2008和23205-2008標(biāo)準(zhǔn)中的洗脫液乙腈：甲苯=3：1，NY/T761-2008標(biāo)準(zhǔn)中的洗脫液正己烷：丙酮=9：1。實(shí)驗(yàn)結(jié)

18、果表明，當(dāng)選用乙腈作為洗脫液時(shí)對于平面型化合物來說回收率偏低；而選用洗脫液正己烷：丙酮=9：1時(shí)無論是有機(jī)氯還是有機(jī)磷的農(nóng)藥組分都偏低。選用乙腈：甲苯=3：1作為洗脫液時(shí)，回收率整體優(yōu)于前兩個(gè)洗脫液。因此選用了乙腈：甲苯=3：1作為洗脫液。依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，淋洗液的體積主要有20ml、25ml、30ml。對比了不同淋洗體積對添加回收的影響，發(fā)現(xiàn)在淋洗液20ml的時(shí)，對固相萃取小柱有較強(qiáng)保留的組分，不太容易在此淋洗體積下被洗脫下來，從而回收率偏低，而當(dāng)淋洗液體積在30ml的時(shí)候，被洗脫下來的溶液變得渾濁，而且在氣相色譜圖上上基線噪聲偏高，洗脫體積為25ml時(shí)，回收率比20ml時(shí)和30ml時(shí)

19、要高，基線噪聲相對較低，因此，本實(shí)驗(yàn)選用25ml作為淋洗體積。3.2.1.3氣相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度的確定依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，對比旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為35、40、45、50下的添加回收率，結(jié)果表明在35和40的情況下回收良好，但是35下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的時(shí)間過長，不利于樣品前處理；45和50下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的時(shí)間大幅度縮短，但是敵敵畏等沸點(diǎn)較低的農(nóng)藥組分明顯隨著溫度的升高回收率逐漸降低，因此選用40作為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度，并且在蒸發(fā)的過程中只能蒸發(fā)至近干，否則部分農(nóng)藥組分的回收率會(huì)偏低。不同旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度的回收率見下表。3.2.1.4氣相定容溶劑種類和體積的確定依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，對比了正己烷和丙酮作為定容溶劑對添加回

20、收的影響，得出在丙酮作為定容溶劑時(shí)有機(jī)磷類農(nóng)藥的回收率比有機(jī)氯類農(nóng)藥回收偏高，有機(jī)氯類農(nóng)藥的回收率與以正己烷做定容溶劑時(shí)的回收率相比較低，但是無顯著性差異，并且添加回收80%。由于待測樣品需要用兩個(gè)不同類型的檢測器檢測，因此在滿足方法檢出限、方法定量限和GB2763-2016最大殘留限量的情況下本實(shí)驗(yàn)將丙酮作為定容溶劑。由于丙酮易揮發(fā)為提高待測樣品的準(zhǔn)確度及進(jìn)樣效率，用丙酮定容至2.5ml，裝入兩個(gè)1.5ml進(jìn)樣瓶，供氣相ECD和FPD檢測。3.2.1.5離心過濾將高速勻漿后的樣品于10000 r/min下離心5 min。吸取1-2 mL上述離心液清液，過0.2 m濾膜凈化。依據(jù)現(xiàn)有的國際標(biāo)準(zhǔn)

21、及文獻(xiàn)方法，多采用聚丙烯（GHP）濾膜。而GHP濾膜的價(jià)格比較昂貴，所以在本研究中比較了兩種不同材質(zhì)的濾膜。一種是進(jìn)口的聚丙烯（GHP）濾膜，另一種是國產(chǎn)的有機(jī)相濾膜。通過比較發(fā)現(xiàn)，兩種濾膜對樣品的回收率及凈化效果沒有顯著性差異。從成本角度考慮，本方法選用經(jīng)濟(jì)的國產(chǎn)有機(jī)相濾膜。3.2.1.6氣相條件的優(yōu)化本實(shí)驗(yàn)依據(jù)NY/T 761-2008方法確認(rèn)了本方法的氣相色譜儀的設(shè)置參數(shù)，根據(jù)各農(nóng)藥組分的出峰時(shí)間，優(yōu)化了標(biāo)樣分組。3.2.2液相方法部分3.2.2.1液相固相萃取柱的選擇依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，以及基質(zhì)分散固相萃取方法中填料的凈化回收效果，初步選定了5種固相萃取小柱(ODS、NH2、HLB

22、、MCX、MAX)固相萃取柱對樣品的凈化回收效果進(jìn)行評價(jià)。GCB主要用于去除葉綠素和類胡蘿卜素，對茶葉中的色素去除效果好，因此GCB 是去除色素的首選，但其對液相參數(shù)的農(nóng)藥吸附較強(qiáng)，未見相關(guān)文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)使用GCB柱。C18固相萃取小柱對阿維菌素的吸附較強(qiáng)，使阿維菌素的回收整體偏低。而HLB、MCX、MAX柱子由于采用通過模式時(shí)對茶葉色素及雜質(zhì)的吸附有限，導(dǎo)致洗脫下來的溶液比較渾濁，在后面的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的過程中容易析出固體物質(zhì)。綜合考慮回收率和凈化效果，本實(shí)驗(yàn)中選擇氨基固相萃取小柱作為茶葉樣品凈化填料。各固相萃取小柱的回收率見下表，各萃取小柱的使用方法見附表表2不同分散固相萃取填料的凈化回收效果 農(nóng)藥

23、SPE吡蟲啉啶蟲脒多菌靈除蟲脲氟蟲腈滅幼脲辛硫磷阿維菌素C185668477023586749NH23567496437634856HLB4648213251283456MCX7425634657146544氨基柱78829482749687733.2.2.2液相淋洗液種類和體積的確定實(shí)驗(yàn)對比了選用乙腈、國標(biāo)23204-2008和23205-2008標(biāo)準(zhǔn)中的乙腈：甲苯=3：1的洗脫液，農(nóng)業(yè)部2010蔬菜、水果和食用菌農(nóng)藥殘留檢測細(xì)則中提到的二氯甲烷：甲醇=99：1的洗脫液，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)選用乙腈作為洗脫液時(shí)對于平面型化合物多菌靈來說回收率偏低，選用乙腈：甲苯=3：1和二氯甲烷：甲醇=99：1

24、作為洗脫液時(shí)，回收率無明顯差異，但是后者的回收率不太穩(wěn)定，因此選用了乙腈：甲苯=3：1作為洗脫液。依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，淋洗液的體積主要有20ml、25ml、30ml。對比了不同淋洗體積對添加回收的影響，發(fā)現(xiàn)在淋洗液20ml的時(shí)，對固相萃取小柱有較強(qiáng)保留的組分，不太容易在此淋洗體積下被洗脫下來，從而回收率偏低，而當(dāng)淋洗液體積在30ml的時(shí)候，被洗脫下來的溶液變得渾濁，而且在液相色譜圖上基線噪聲偏高，且色譜圖前面的干擾較大，因此決定選用25ml作為淋洗液的洗脫體積，在添加回收實(shí)驗(yàn)中25ml作為淋洗液的回收率比20ml時(shí)和30ml時(shí)要好一些，并且雜峰也要稍微好一些。3.2.2.3液相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度

25、的確定依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，對比旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為35、40、45、50下的添加回收率，結(jié)果表明在35、40、45的情況下回收良好，但是35下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的時(shí)間過長，不利于樣品前處理；50下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的時(shí)間大幅度縮短，但是不好控制旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)最后的近干過程，容易導(dǎo)致固體小顆粒包裹農(nóng)藥組分在梨形瓶上，使農(nóng)藥組分的回收率會(huì)偏低。因此確定旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為45。3.2.2.4液相定容溶劑種類和體積的確定依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，對比了丙酮、甲醇、甲醇：水=1：1作為定容溶劑時(shí)對添加回收的影響，得出在丙酮作為定容溶劑時(shí)容易出現(xiàn)溶劑效應(yīng)導(dǎo)致色譜圖前端有較高紫外吸收；甲醇作為定容溶劑時(shí)回收率偏低，并且甲醇復(fù)溶后色素以及雜質(zhì)

26、都進(jìn)入了醇相，導(dǎo)致在色譜圖上影響了目標(biāo)峰出峰；甲醇：水=1：1作為定容溶劑時(shí)，如果事先加入已經(jīng)配置好的該定容溶劑，那么很明顯的看見回收氯是偏低的，但是如果先加入甲醇渦旋后再加入水，回收率比前面試驗(yàn)選用的溶劑還高，而且在實(shí)驗(yàn)過程中明顯的發(fā)現(xiàn)最后定容的溶液顏色比較淺，而且梨形瓶上的附著的色素和雜質(zhì)作為沉淀塊狀和小顆粒存在于最后定容的溶液中，色譜圖中也看見基線干擾少了很多。因此選用先加入1ml甲醇渦旋后再加入1ml水作為定容溶劑。在滿足方法檢出限、方法定量限和GB2763-2016最大殘留限量的情況下，最后用選用先加入1ml甲醇渦旋后再加入1ml水作為定容至2ml，裝入兩個(gè)1.5ml進(jìn)樣瓶，供液相P

27、DA&VWD檢測。3.2.2.5液相條件的優(yōu)化3.2.2.5.1色譜柱的選擇結(jié)合農(nóng)業(yè)部2010蔬菜、水果和食用菌農(nóng)藥殘留檢測細(xì)則、部分文獻(xiàn)選用的普通的C18色譜柱對上述8個(gè)目標(biāo)化合物都有保留，從而實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)檢測的目的。在色譜柱的粒徑和內(nèi)徑上，考慮到大部分縣級質(zhì)檢站儀器公司配的大部分是250mm4.6mm，5um，但是這款色譜柱滿足不了GB 2763-2016的要求。因此我們選用了Watwes C18 Column（3mm250 mm，5m）的這款色譜柱。3.2.2.5.2流動(dòng)相的選擇農(nóng)業(yè)部2010蔬菜、水果和食用菌農(nóng)藥殘留檢測細(xì)則以及部分文獻(xiàn)上的流動(dòng)相有甲醇和水、（甲醇+乙腈=7：3）：水=15

28、：85以及甲醇：乙腈：水比例的流動(dòng)相。大部分質(zhì)檢站液相配的都是二元泵，因此我們對前面兩個(gè)不同的流動(dòng)相在流速為1ml/min時(shí)進(jìn)行了考查，發(fā)現(xiàn)要實(shí)現(xiàn)峰分離甲醇和水體系需要的時(shí)間較長，需要48min，而且在梯度運(yùn)行的過程中壓力比（甲醇+乙腈=7：3）：水=35：65體系高，基線沒有后者平穩(wěn)，因此選用了（甲醇+乙腈=7：3）：水=35：65作為流動(dòng)相和初始流動(dòng)相比例。3.2.2.5.3吸收波長的確定將上述目標(biāo)物配成1ug/ml的單一標(biāo)準(zhǔn)溶液，在有二極管陣列檢測器的液相色譜上尋找各化合物的最佳吸收波長，并參考相關(guān)文獻(xiàn)確定的最佳吸收波長如下。表2 波長變化表時(shí)間，min06.316.0017.721.5

29、波長/nm2752452252802453.6 色譜條件的選擇3.6.1流動(dòng)相梯度表6 梯度洗脫程序表時(shí)間（min）5 mmol/L乙酸銨-0.5%乙酸水溶液（流動(dòng)相A）5 mmol/L乙酸銨-0.5%乙酸甲醇溶液（流動(dòng)相B）08515160403.56040650501045551559520595238515288515a)柱溫：40 ；b)流速：0.2 mL/min；c)進(jìn)樣體積：5L。3.7精密度3.7.1重復(fù)性同一實(shí)驗(yàn)室，同一實(shí)驗(yàn)人員、不同種類的茶葉，在低于定量限、定量限附近、10倍定量限、MRL（最大殘留限量限量）、高于最大殘留限量的這5個(gè)含量點(diǎn)做6平行添加回收測試，所得結(jié)果用回收

30、率、標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，并要達(dá)到GB/T32465-2015中的技術(shù)規(guī)范要求。3.8.2再現(xiàn)性在本實(shí)驗(yàn)中，我們選擇了不的3家實(shí)驗(yàn)室，分別記為實(shí)驗(yàn)室1、實(shí)驗(yàn)室2、實(shí)驗(yàn)室3，由不同操作人員使用不同的儀器，對本方法進(jìn)行了驗(yàn)證。通過向紅茶、綠茶中添加3種不同濃度水平，每個(gè)樣品平行測定3次，分別計(jì)算不同樣品的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差等各項(xiàng)參數(shù)。3.9 方法的檢出限將標(biāo)準(zhǔn)溶液配置到一定濃度，按照方上述法規(guī)定的儀器條件進(jìn)行檢測，是單一標(biāo)準(zhǔn)溶液的組分或是混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各組分的信噪比S/N=3。記錄下此時(shí)的各組分標(biāo)準(zhǔn)品的濃度。通過添加一定體積和濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)入實(shí)際的空白樣品，使最后的檢測值等于信噪比S/N

31、=3的濃度。此時(shí)測定濃度的含量就是實(shí)際樣品的方法檢出限。四、參考文獻(xiàn)1. 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第一部份：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則2. 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 20001.4-2001標(biāo)準(zhǔn)編寫第四部份：化學(xué)分析方法3. 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)，GB/T 5009.1-2003 食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分 總則S，北京：中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì) 2004.4. 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 測試方法的精密度 通過實(shí)驗(yàn)室間試驗(yàn)確定標(biāo)準(zhǔn)測試方法的重復(fù)性和再現(xiàn)性SGB/T6379-2004，北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 1986.5. 茶葉中448種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘

32、留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T 23205-2008、6. 茶葉中519種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法GB/T 23204-20087. NY/T 761-2008 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定8. 農(nóng)業(yè)部2010蔬菜、水果和食用菌農(nóng)藥殘留檢測細(xì)則4附錄4.1氣相部分固相萃取小柱5.1.1黑炭黑氨基柱在墨炭黑氨基固相萃取柱（茶葉專用柱）用5 mL淋洗液（4.6）預(yù)淋洗固相萃取柱，棄去流出液。下接梨形瓶，將6.3中待凈化的濃縮液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中，用2 mL淋洗液溶液洗滌梨形瓶，重復(fù)三次，并將洗滌液移入柱中，在柱上加裝50 mL

33、 液器，再用25 mL淋洗液淋洗小柱，收集上述所有流出液于離形瓶中，40 水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，準(zhǔn)確加入2.5ml丙酮溶液，混勻，用氣相色譜測定。5.1.2氟羅里硅土柱氟羅里硅土小柱依次用5.0ml丙酮加正已燒(10+90)、5.0ml正已燒預(yù)淋洗活化。當(dāng)溶劑液而到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入待凈化的濃縮液，用15ml刻度離心管接收洗脫液。用3ml丙酮加正己烷(10+90)清洗梨形瓶淋洗氟羅里硅土柱，并重復(fù)三次。將盛有淋洗液的離心管置于氮吹儀上，在水浴溫度50條件下，氮吹蒸發(fā)至小于5ml。用正己烷準(zhǔn)確定容至5.0ml,在旋渦混合器上混勻.分別移入兩個(gè)2ml自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶中，用氣相色譜ECD和FPD

34、測定。5.1.3氨基柱氨基柱預(yù)先用5.0ml乙腈-甲苯（3:1）預(yù)淋洗活化。當(dāng)溶劑液而到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入待凈化的濃縮液，下接梨形瓶，用2mL乙腈-甲苯溶液洗滌梨形瓶，重復(fù)三次，并將洗滌液移入柱中，在柱上加裝50mL液器，再用25mL乙腈-甲苯淋洗小柱，收集上述所有流出液于離形瓶中，50水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，正己烷定容至5.0ml，過膜0.22m有機(jī)膜后分別移入兩個(gè)2ml自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶中，用氣相色譜ECD和FPD測定。5.1.4 GCB柱采預(yù)先用5mL正己烷：丙酮（1:1）活化，將待凈化的濃縮液加入到活化的SPE小柱中，用2mL正己烷：丙酮（1:1）溶液洗滌梨形瓶，重復(fù)三次，并將洗滌液移入柱中，在柱上加裝50mL液器，再用25mL正己烷：丙酮（1:1）淋洗小柱，收集上述所有流出液于梨形瓶