《畜禽營(yíng)養(yǎng)與飼料》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書

1、畜禽營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書廣西梧州農(nóng)業(yè)學(xué)校畜牧獸醫(yī)專業(yè)教研組編2013年10月目錄實(shí)驗(yàn)一 飼料水分的測(cè)定3實(shí)驗(yàn)二 飼料粗灰分的測(cè)定6實(shí)驗(yàn)三 飼料粗蛋白質(zhì)的測(cè)定8實(shí)驗(yàn)四 飼料脂類測(cè)定12實(shí)驗(yàn)五 飼料粗纖維測(cè)定14實(shí)驗(yàn)六 飼料中無(wú)氮浸出物（nfe）計(jì)算差值計(jì)算17實(shí)驗(yàn)七 飼料中總磷量的測(cè)定20實(shí)驗(yàn)一 飼料水分的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理及意義按照概略養(yǎng)分分析程序，飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)首先可以分成水分和干物質(zhì)。測(cè)定飼料的水分含量，就可以計(jì)算出干物質(zhì)量。飼料中的水分包括游離水和結(jié)合水，因此測(cè)定也可以分兩步進(jìn)行，先測(cè)定初水分（游離水），再測(cè)定吸附水（結(jié)合水），然后計(jì)算出飼料的總水分。測(cè)定飼料中水分，不僅間接獲得了干物質(zhì)含量；

2、同時(shí)也為其它營(yíng)養(yǎng)成分的分析制備分析樣品，使不同飼料中各種營(yíng)養(yǎng)成分的相互比較有一致的基礎(chǔ)；對(duì)飼料在貯存、加工、運(yùn)輸過(guò)程中防止某些營(yíng)養(yǎng)成分的轉(zhuǎn)化、變性、霉?fàn)€等，都有指導(dǎo)意義。實(shí)驗(yàn)材料1分析天平：感量0.0001g；2實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽；3分樣篩：40目、60目； 4電熱式恒溫干燥箱（烘箱）：可控溫度為105土2；5干燥器：用氯化鈣或變色硅膠作干燥劑；6稱樣皿：玻璃或鋁質(zhì)，直徑為40mm以上，高25mm以下；7坩堝鉗和藥匙。試樣的選取與制備1選取1000g以上具有代表性的原始樣本；2用四分法將原始樣本縮至500g，風(fēng)干后粉碎過(guò)40目篩，再用四分法縮至200g，裝入密封容器，放陰涼干燥處保存；3

3、如試樣是多汁的鮮樣，或無(wú)法粉碎時(shí)，應(yīng)預(yù)先干燥處理，稱取200300g，在105土2烘箱中烘15min，立即降至65，烘干56h。取出后，在室內(nèi)空氣中冷卻使水分含量達(dá)到當(dāng)?shù)匾话闼?，稱重，即得風(fēng)干試樣,同時(shí)計(jì)算初水分含量。實(shí)驗(yàn)步驟一、水分的表示方法飼料水分含量有兩種表示方法。一種是以包括全部水分在內(nèi)的原樣（鮮樣）基礎(chǔ)表示，即：水分（%）= 100 （3-1）式中，w為飼料重量（g）；w水為水分重量（g）另一種是以干物質(zhì)為基礎(chǔ)的，即：水分（%）= 100 （3-2）式中，w水為水分重量（g）；w干為飼料中干物質(zhì)重量（g）。不僅水分，飼料中的其它各種成分的含量，也有上述兩種表示方法。由于飼料在放置和

4、分析過(guò)程中，其水分因蒸發(fā)而減少，而干物質(zhì)則不會(huì)因水分的變化而受影響，故各種成分的含量常以干物質(zhì)為基礎(chǔ)來(lái)表示。二、烘箱干燥法烘箱干燥法是aoac的方法，將樣品放在105土2烘箱中烘至恒重，所失重量即代表水分含量。這種方法有一定誤差，因?yàn)樵谒终舭l(fā)的同時(shí)，一些短鏈脂肪酸和有機(jī)酸等易揮發(fā)性物質(zhì)有揮發(fā)損失。三、測(cè)定步驟1取潔凈稱樣皿置于105土2烘箱中烘1h取出，在干燥器中冷卻30min(冷卻至室溫)，稱重(準(zhǔn)確稱至0.0002g)。2將稱樣皿再烘30min，同樣冷卻，稱重，至兩次重量之差小于0.0005g為恒重。3用已恒重的稱樣皿稱取2份平行試樣，每份25g(含水量0.1g以上，試樣厚度為4mm以下

5、)。準(zhǔn)確稱至0.0002g。4將稱樣皿半開蓋，在105土2烘箱中烘3h(以溫度至105開始計(jì)時(shí))后取出，蓋好稱樣皿蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。5再同樣烘干1h，冷卻，稱重，至兩次重量之差小于0.002g為止，以其中較小的值進(jìn)行計(jì)算。測(cè)定吸附水后的試樣，可保留作測(cè)粗脂肪和粗纖維之用。四、測(cè)定結(jié)果計(jì)算1、計(jì)算公式：水分（）=100 = 100 （3-3）式中：w1105土2烘干前試樣及稱樣皿重量，g；w2105土2烘干后試樣及稱樣皿重量，g；w0已恒重的稱樣皿重量，g）。2、重復(fù)性 每個(gè)試樣，應(yīng)取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。兩個(gè)平行樣測(cè)定值相差不得超過(guò)0.2%，否則應(yīng)重做。3

6、、如果按上述(三) 3步驟進(jìn)行過(guò)預(yù)先干燥處理（指多汁的鮮樣），則應(yīng)按下式計(jì)算原來(lái)試樣中所含水分總量：原樣總水分（%）=初水分（%）+100%初水分（%）風(fēng)干試樣吸附水（%）說(shuō)明： 某些含脂肪高的樣品，烘干時(shí)間長(zhǎng)反而增重，乃脂肪氧化所致，應(yīng)以增重前那次稱量為準(zhǔn)。 含糖分高的易分解或易焦化試樣，應(yīng)使用減壓干燥法測(cè)定水分。實(shí)習(xí)報(bào)告將實(shí)訓(xùn)結(jié)果記錄下來(lái),并寫一份實(shí)訓(xùn)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)二 飼料粗灰分的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理及意義粗灰分是飼料樣品在高溫爐中將所有有機(jī)物質(zhì)全部氧化后剩余的殘?jiān)Ｖ饕獮榈V物質(zhì)氧化物或鹽類等無(wú)機(jī)物質(zhì)，有時(shí)還含有少量泥沙。灰分分水溶性與水不溶性，酸溶性與酸不溶性。水溶性灰分大部分是鉀、鈉、鈣、鎂等氧化

7、物和可溶性鹽，水不溶性灰分除泥沙外，還有鐵、鋁等的氧化物和堿土金屬的堿式磷酸鹽。測(cè)定粗灰分，可掌握飼料中的灰分總量，了解不同生長(zhǎng)期、不同器官中灰分的變動(dòng)情況；也可在此基礎(chǔ)上測(cè)定灰分中組成元素的含量。此外，測(cè)定粗灰分對(duì)飼料品質(zhì)鑒定也有參考意義，若含量過(guò)高，飼料中可能混入砂石、土等。儀器和設(shè)備1實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。2分析篩：40目。3分析天平：感量0.0001。4高溫電爐：電加熱，有溫度計(jì)且可控制爐溫在55020。5坩堝：50ml，瓷質(zhì)。6坩堝鉗7干燥器：用氯化鈣（干燥試劑）或變色硅膠為干燥劑。實(shí)驗(yàn)步驟1 坩堝恒重：將干凈坩堝放入高溫爐中，在55020下灼燒30min。取出，在空氣中冷卻約1

8、min，放入干燥器中冷卻30min，稱重。再重復(fù)灼燒，冷卻、稱重，直至兩次質(zhì)量之差小于0.0005為恒重。2稱樣品：在已知質(zhì)量的坩堝中稱取25試樣（勿使樣品高于坩堝深度的1/2，灰分質(zhì)量應(yīng)在0.05以上）。3炭化：將盛有樣品坩堝放在電爐上，坩堝蓋須留一小縫隙，小心炭化，在炭化過(guò)程中，應(yīng)在低溫狀態(tài)加熱灼燒直至無(wú)煙，然后升溫灼燒至樣品無(wú)炭粒（勿著明火）。4灰化及稱恒重：將炭化至無(wú)煙坩堝用坩堝鉗移入高溫爐內(nèi)，坩堝蓋須留一小縫隙，在55020下灼燒3，待爐溫降至200以下，取出，在空氣中冷卻約1min，放入干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣灼燒1，冷卻、稱重，直至兩次質(zhì)量之差小于0.001為恒重。測(cè)

9、定結(jié)果的計(jì)算1. 計(jì)算公式 試樣中粗灰分含量（%）按下式計(jì)算：粗灰分（%） （3-28）式中：已恒重空坩堝的質(zhì)量，；坩堝加試樣的質(zhì)量，；灰化后坩堝加灰分的質(zhì)量，。2.允許差 每個(gè)試樣應(yīng)取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗灰分含量在5以上時(shí)，允許相對(duì)偏差為1；粗灰分含量在5以下時(shí)，允許相對(duì)偏差為。注意事項(xiàng)1坩堝的準(zhǔn)備：新坩堝編號(hào)，將帶蓋的坩堝洗凈烘干后，用鋼筆蘸5氯化鐵墨水溶液（稱0.5fecl362溶于100l水中）編號(hào)，然后于高溫爐中550灼燒30min即可。2試樣開始炭化時(shí)，坩堝蓋須留一小縫隙，便于氣流流通；溫度應(yīng)逐漸上升，防止火力過(guò)大而使部分樣品顆粒被逸出的氣體帶走。3為了避免

10、試樣氧化不足，不應(yīng)把試樣壓得過(guò)緊，應(yīng)松松放在坩堝內(nèi)。4灼燒溫度不宜超過(guò)600，否則會(huì)引起磷、硫等鹽的揮發(fā)。5灰化后樣品應(yīng)呈白灰色，但其顏色與試樣中各元素含量有關(guān)，含鐵高時(shí)為紅棕色，含錳高為淡藍(lán)色。如有明顯黑色炭粒時(shí)，為炭化不完全，可在冷卻后加幾滴硝酸或過(guò)氧化氫，在電爐上燒干后再放入高溫爐灼燒直至呈白灰色。實(shí)驗(yàn)三 飼料粗蛋白質(zhì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理及意義動(dòng)物從飼料中撮取蛋白質(zhì)及其分解產(chǎn)物，以組成自身的蛋白質(zhì)。因此，蛋白質(zhì)含量是評(píng)價(jià)飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的主要指標(biāo)。各種蛋白質(zhì)中都含有一定比例的氮。然而，各種飼料中除蛋白質(zhì)含有氮素外，還有一些化合物，如核酸，生物堿，含氮碳水化合物，含氮類脂、卟啉、酰胺，色素以及硝態(tài)氮

11、等，也含有氮素。因此，用測(cè)定總氮量計(jì)算出的“蛋白質(zhì)”，實(shí)際上包括真蛋白和非蛋白氮物質(zhì)，總稱為粗蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的測(cè)定方法分為直接法和間接法兩類。直接法是利用蛋白質(zhì)物理性質(zhì)或化學(xué)性質(zhì)，直接測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法。常用的有紫外吸收光度法、折光法、雙縮脲法、酚試劑法、染料結(jié)合法等，但其中有些方法不適合于混合飼料分析。間接法則是通過(guò)測(cè)定樣品中的總氮量，進(jìn)而推算出蛋白質(zhì)含量的方法，即粗蛋白的測(cè)定方法。常用的有凱氏法，杜馬斯法，奈氏比色法和次氯酸比色法等。凱式定氮法凱式定氮法是1833年由凱達(dá)爾（kjedehl）首創(chuàng)，后經(jīng)多人改進(jìn)，迄今仍廣泛應(yīng)用于土壤、肥料、飼料和食品的分析中。此法具有較高的準(zhǔn)確度和精確度，

12、美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（aoac）、國(guó)際谷物化學(xué)協(xié)會(huì)（icc）等組織都將其確定為法定分析方法。（一）原理飼料中的有機(jī)物在濃硫酸作用下被消化，其中真蛋白質(zhì)和氨化物中n轉(zhuǎn)化為(nh4)2so4中n，其它非氮物質(zhì)則以co2、h2o和so2逸出： 2ch3chnh2cooh+13h2so4（nh4）2so4+6co2+12so2十16h2o （3-14）消化液在濃堿的作用下進(jìn)行蒸餾，放出的nh3用硼酸吸收：(nh4)so4+2naoh2nh3十+2h2o+na2so4 （3-15）4h3bo3+nh3nh4hb4o7+5h2o （3-16）然后以甲基紅一溴甲酚綠作指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定： nh4hb4o

13、7+hci+5h2o nh4ci+4h3bo3 （3-17）根據(jù)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和消耗的體積，即可計(jì)算出氮的含量，乘以相應(yīng)的蛋白質(zhì)換算系數(shù)(一般用6.25)，即為粗蛋白質(zhì)含量。儀器設(shè)備（1）實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽；（2）分樣篩：40目；（3）分析天平：感量0.000lg；（4）消煮爐或電爐；（5）滴定管：酸式，25ml、10ml；（6）凱氏燒瓶：250或500ml；（7）凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式、微量蒸餾式或半微量水蒸汽蒸餾式；（8）錐形瓶：150或250m1；（9）容量瓶：100ml；（10）通風(fēng)櫥。試劑（1）硫酸：化學(xué)純；（2）硫酸銅：化學(xué)純；（3）硫酸鉀或硫酸鈉：化學(xué)純；（4）氫氧

14、化鈉：分析純，40g溶于100ml水配成40%水溶液(wv)；（5）硼酸：分析純，2g溶于100ml水配成2%溶液(wv)；（6）混合指示劑：甲基紅0.1乙醇溶液，溴甲酚綠0.5乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個(gè)月以內(nèi)；（7）0.05n鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(鄰苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定)：4.2ml鹽酸（gb 622，分析純）用蒸餾水定容到1000ml；（8）蔗糖：分析純；（9）硫酸氨：分析純。實(shí)驗(yàn)步驟1試樣的消煮 稱取0.51g試樣(含氮量580mg，準(zhǔn)確至0.0002g)，于光潔紙上，卷成圓筒水平插入燒瓶中，無(wú)損失地倒入凱氏燒瓶底部，加入硫酸銅0.9g，無(wú)水硫酸鉀(或硫酸鈉)15g，與試樣混合均

15、勻，再加濃硫酸25mi和2粒玻璃珠，在消煮爐上小火加熱，待樣品焦化，泡沫消失，再加強(qiáng)火力(360410)直至溶液澄清后，再繼續(xù)加熱至少30min.。2氮的蒸餾（1）常量直接蒸餾法（主要用于含氮量低的樣本）：將(五).1中的試樣消煮液冷卻，加蒸餾水200ml，搖勻，冷卻。沿瓶壁小心加入40%氫氧化鈉溶液100ml，立即與蒸餾裝置相連。蒸餾裝置冷凝管口浸入50ml 2硼酸溶液內(nèi)，加混合指示劑2滴輕搖凱氏燒瓶，使溶液混勻，加熱蒸餾，直到餾出液體積約為150m1。移動(dòng)三角瓶，使冷凝管口離開液面，再蒸餾1min.。用少許蒸餾水沖管口，移開三角瓶，即可滴定。（2）半微量蒸餾法：將試樣的消煮液冷卻，加蒸餾水

16、20ml，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。取20ml 2硼酸溶液，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液蒸餾裝置的蒸氣發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此液為橙紅色否則補(bǔ)加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液1020ml注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中。用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口。塞好入口玻璃塞，再加10ml40%氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好。且在入口處加水封好，防止漏氣，蒸餾4min.，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min.，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液，準(zhǔn)備滴定。（3）微量蒸餾法:微量蒸餾法的測(cè)定裝置和方法

17、均與半微量法基本一致，只是所測(cè)樣本量較少，消耗的試劑相應(yīng)減少。3滴定 吸收氨后的吸收液立即用0.05n鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色為終點(diǎn)。4空白測(cè)定 稱取蔗糖0.1g，代替試樣，按上述步驟進(jìn)行空白測(cè)定，消耗0.05n鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過(guò)0.3ml。測(cè)定結(jié)果的計(jì)算1計(jì)算公式：粗蛋白質(zhì)(%)= f 100 （ 3-18）式中：v2滴定試樣時(shí)所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（ml）；vi滴定空白時(shí)所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（ml）；c鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液摩爾濃度（mol/l）；w試樣重量（g）；v4試樣分解液總體積（ml）；v3試樣分解液蒸餾用體積（ml）；0.0140氮的毫摩爾質(zhì)量；f 氮換算成蛋白質(zhì)的系

18、數(shù)（平均值為6.25）。2重復(fù)性 每個(gè)試樣取兩平行樣進(jìn)行測(cè)定以其算術(shù)平均值為結(jié)果。當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在25以上時(shí)，允許相對(duì)偏差為1，當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在1025時(shí)，允許相對(duì)偏差為2，當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在10以下時(shí)，允許相對(duì)偏差為3。測(cè)定步驟的檢驗(yàn)精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按(五)的各步驟操作，按(六)的公式計(jì)算(但不乘系數(shù)6.25)測(cè)得硫酸銨含氮量為21.19土0.2，否則應(yīng)檢查加堿，蒸餾和滴定各步驟是否正確。試樣消煮時(shí)，加入硫酸銅0.2g，無(wú)水硫酸鈉3g，與試樣混合均勻，再加濃硫酸10m1，仍可使飼料試樣分解完全，只是試樣焦化再變?yōu)槌吻逅钑r(shí)間略長(zhǎng)些。實(shí)驗(yàn)四 飼料脂類測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理及意義 脂類化合

19、物分子中常含有長(zhǎng)碳鏈或其它非極性基團(tuán)，即具有疏水性，難溶于水，而易溶于乙醚、石油醚、四氯化碳等非極性溶劑或甲醇、氯仿等弱極性溶劑。由于不同樣品的脂類化合物中，碳鏈的長(zhǎng)度和飽和程度以及脂的分子構(gòu)型等存在某些差異，所以，用不同溶劑作提取劑時(shí)，其測(cè)定結(jié)果也有差異。在實(shí)際分析工作中可根據(jù)具體情況采用索氏提取方法。索氏提取原理索氏(sohlet)法或乙醚萃取法的原理是根據(jù)飼料樣本中的脂類可溶于有機(jī)溶劑如乙醚，通過(guò)乙醚反復(fù)抽提，使溶于乙醚中的脂肪隨乙醚流注于盛醚瓶中，由于乙醚和脂肪的沸點(diǎn)不同，控制水浴溫度，蒸發(fā)去乙醚，盛醚瓶所增加的重量即為該樣本的脂肪量。由于游離脂肪酸、卵磷脂、蠟質(zhì)、麥角固醇、膽固醇、脂

20、溶性維生素、葉綠素等物質(zhì)，亦溶于乙醚，故此法所測(cè)得脂肪不純，統(tǒng)稱為粗脂肪。儀器設(shè)備（1）實(shí)驗(yàn)室用植物樣品粉碎機(jī)或研缽；（2）分樣篩：40目；（3）分析天平：感量0.0001g；（4）電熱恒溫水浴鍋：室溫100；（5）恒溫烘箱；（6）索氏脂肪提取器（見(jiàn)圖36）：100ml或150m1；（7）濾紙或?yàn)V紙簡(jiǎn)：中速脫脂;（8）脫脂棉線；（9）干燥器：用氯化鈣(干燥級(jí))或變色硅膠為干燥劑。試劑乙醚：化學(xué)純實(shí)驗(yàn)步驟 1將已洗凈的盛醚瓶置于1052的烘箱中烘干30min，而后取出于干燥器內(nèi)冷卻30min，稱重。再烘干30min，同樣冷卻、稱重，兩次重量之差小于0.001g為恒重。2洗凈并裝置好脂肪提取器(干

21、燥無(wú)水)，檢查裝置是否嚴(yán)密。3稱取試樣15g，準(zhǔn)確至0.0002g于濾紙筒中，或用濾紙包好，用脫脂棉線扎成一定大小的脂肪包(其高度不超過(guò)浸提管高度的23，寬度以能放入即可)。用鉛筆作上編號(hào)，置于1052烘箱內(nèi)烘干2h(或稱測(cè)水分后的干試樣，折算成風(fēng)干樣重)取出待用。4用鑷子將濾紙筒或脂肪包放入浸提管內(nèi)，加少許乙醚，盛醚瓶中加乙醚60l00ml。在6075水浴鍋（用蒸餾水）上加熱，使乙醚回流，回流速度每h 46次，約經(jīng)816h，樣品中的脂肪即全部提出，或控制乙醚回流次數(shù)為每h約10次，共回流約50次（含油高的試樣約70次）或檢查抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點(diǎn)。5浸提完畢取出脂肪包，然

22、后讓乙醚再回流一次，再開始回收乙醚，直至盛醚瓶中乙醚幾乎全部收完。最后取下盛醚瓶，在水浴上蒸去殘余乙醚。用酒精棉擦凈瓶外壁。6將盛醚瓶置于105土2烘箱內(nèi)烘干1h，取出后于干燥器中冷卻20min.，稱重。再烘干30min同樣冷卻稱重，至兩次重量之差小于0001g為恒重。(六)結(jié)果計(jì)算1計(jì)算 粗脂肪()= (3-20)式中：w風(fēng)干試樣質(zhì)量(g)。 w1已恒重的盛醚瓶質(zhì)量(g)。 w2已恒重的浸提后盛醚瓶質(zhì)量(g)。2重復(fù)性 每個(gè)試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。 粗脂肪含量在10%以上(含10%)，允許相對(duì)偏差為3； 粗脂肪含量在10以下，允許相對(duì)偏差為5。實(shí)習(xí)報(bào)告將實(shí)訓(xùn)結(jié)果記錄下

23、來(lái),并寫一份實(shí)訓(xùn)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)五 飼料粗纖維測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理粗纖維的常規(guī)測(cè)定法是在公認(rèn)的強(qiáng)制規(guī)定條件下測(cè)定。將試樣用一定容量和一定濃度的預(yù)熱硫酸和氫氧化鈉溶液煮沸消化一定時(shí)間，再用乙醇和乙醚除去醚溶物，經(jīng)高溫灼燒扣除礦物質(zhì)的剩余物為粗纖維。當(dāng)用稀酸處理時(shí)，淀粉、果膠和部分半纖維素被溶解；當(dāng)用稀堿處理時(shí)，又可除去蛋白質(zhì)和部分半纖維素、木質(zhì)素、脂肪；用乙醇和乙醚處理時(shí)，可除去單寧、色素、脂肪、蠟質(zhì)以及部分蛋白質(zhì)和戊糖。用這種方法測(cè)得的“粗纖維”實(shí)際上是以纖維素為主，還有少量半纖維素和木質(zhì)素的混合物。儀器設(shè)備（1）實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽（2）分樣篩：40目；（3）分析天平：感量0.0001g；（4）消煮器

24、：有冷凝球的500ml燒杯，或有冷凝管的錐形瓶；（5）布氏漏斗：直徑6cm；（6）抽濾瓶：5001000ml；（7）濾布：100支紗的麻綢或200目的尼龍網(wǎng)布；（8）真空抽氣機(jī)(真空泵)；（9）電熱式恒溫箱(烘箱)；（10）干燥器：用氯化鈣或變色硅膠作干燥劑；（11）高溫爐(茂福爐)：電加熱，有高溫計(jì)且可控制爐溫在550600；（12）古氏坩堝：30ml，預(yù)先加入30ml酸洗石棉懸浮液，再抽干，以石棉厚度均勻，不透光為宜；（13）電爐或電熱板。試劑（1）硫酸 分析純，0.255土0.005n，每100ml含硫酸1.25g，應(yīng)用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定；（2）氫氧化鈉 分析純，0.313土0.005

25、n，每100ml含氫氧化鈉1.25g應(yīng)用磷苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定；（3） 石棉 市售或自制中等長(zhǎng)度酸洗石棉置于蒸發(fā)皿中，在600灼燒16h，用1.25%硫酸溶液浸泡并煮沸30min，過(guò)濾并用水洗至中性。同樣用1.25%氫氧化鈉溶液煮沸30min.，過(guò)濾并用少量1.25%硫酸溶液洗一次，再用水洗凈，烘干后于600灼燒2h，其空白試驗(yàn)結(jié)果為每克石棉含粗纖維值小于img；（4）95%乙醇：化學(xué)純；（5）乙醚；化學(xué)純；（6）正辛醇：分析純，防泡劑。測(cè)定步驟1稱取12g試樣，準(zhǔn)確稱至0.0002g，用乙醚脫脂(試樣含脂肪量低于1%時(shí)可不脫脂也可用測(cè)定脂肪后的試樣殘?jiān)?放入消煮器。2加入煮沸的0.255n硫酸

26、溶液200ml和1滴正辛醇(防泡劑)立即加熱，使其在1min內(nèi)沸騰并連續(xù)微沸30min注意保持硫酸濃度不變(可補(bǔ)加沸蒸餾水)，并避免試樣粘貼在液面以上的杯壁。3微沸30min后立即停止加熱，用鋪有濾布的布氏漏斗過(guò)濾，將200ml濾液在10min內(nèi)全部濾凈再用沸蒸餾水反復(fù)沖洗殘?jiān)敝翞V液不使藍(lán)色石蕊試紙變紅為止。4取下不溶物，放入原容器中，加入煮沸的0.313n氫氧化鈉溶液，立即加熱，使其在1min內(nèi)沸騰，同樣準(zhǔn)確微沸30min。5立即在鋪有石棉的古氏坩堝上抽濾先用25ml硫酸溶液沖洗。再用沸蒸餾水反復(fù)沖洗殘?jiān)敝翞V液不使紅色石蕊試紙變藍(lán)為止。6用洗瓶將濾布上的殘留物洗入100ml燒杯中，再

27、倒入鋪好石棉的古氏坩堝中。用15ml乙醇沖洗殘?jiān)?，濾凈后再用15ml乙醚洗滌（脫脂樣品可不用乙醚洗滌）將古氏坩堝及殘?jiān)湃?30土2烘箱中烘干2h，在干燥器中冷卻30min，直稱至恒重(兩次稱重之差小于0.001g)再將古氏坩堝置于電爐上炭化，然后移入550土25的高溫爐中灼燒30min，于干燥器中冷卻30min,準(zhǔn)確稱重，直至恒重。測(cè)定結(jié)果計(jì)算1計(jì)算公式：粗纖維= （3-27）式中：w1105土2烘干后坩堝及試樣殘?jiān)?g)； w2550土25灼燒后坩堝及試樣灰分重(g)； w樣品(未脫脂時(shí))重量(g)。2重復(fù)性每個(gè)試樣應(yīng)取兩平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗纖維含量在10%以下，允許

28、相差(絕對(duì)值)為0.4%粗纖維含量在10以上，允許相對(duì)偏差為4%。說(shuō)明：酸和堿處理時(shí)應(yīng)注意準(zhǔn)確微沸30min。在沖洗過(guò)程中應(yīng)避免殘?jiān)膿p失。 實(shí)習(xí)報(bào)告將實(shí)訓(xùn)結(jié)果記錄下來(lái),并寫一份實(shí)訓(xùn)報(bào)告。 實(shí)驗(yàn)六 飼料中無(wú)氮浸出物（nfe）計(jì)算差值計(jì)算實(shí)驗(yàn)原理飼料中無(wú)氮浸出物（nfe）主要由易被動(dòng)物利用的淀粉、菊糖、雙糖、單糖等可溶性碳水化合物組成。常規(guī)飼料分析不能直接分析飼料中無(wú)氮浸出物的含量，僅根據(jù)飼料中其他養(yǎng)分的分析結(jié)果，按下式間接計(jì)算求得：無(wú)氮浸出物(%)100%水分(%)+灰分(%)+粗蛋白質(zhì)(%)+粗脂肪(%)+粗纖維(%) （3-39）或無(wú)氮浸出物(%)干物質(zhì)(%)灰分(%)+粗蛋白質(zhì)(%)+粗

29、脂肪(%)+粗纖維(%) （3-40）飼料樣品具有風(fēng)干、絕干及原樣等不同基礎(chǔ)表示分析結(jié)果，因此在計(jì)算無(wú)氮浸出物，各養(yǎng)分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)換算在同一基礎(chǔ)上。此外，動(dòng)物性飼料如魚粉、血粉、羽毛粉等可不計(jì)算此項(xiàng)。飼料養(yǎng)分的表示基礎(chǔ)與換算1飼料養(yǎng)分的表示基礎(chǔ)（1）原樣基礎(chǔ) 有時(shí)稱為鮮樣基礎(chǔ)，是指未經(jīng)處理的按采集時(shí)的原來(lái)狀態(tài)所測(cè)定的養(yǎng)分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。以這種基礎(chǔ)表示各種飼料的養(yǎng)分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，因干物質(zhì)含量不同，變異很大，不易比較。（2）風(fēng)干基礎(chǔ) 空氣中自然存放基礎(chǔ)或“假定干物質(zhì)基礎(chǔ)”，一般干物質(zhì)含量為88%左右。這種基礎(chǔ)有助于比較不同水分含量的飼料，常規(guī)飼料分析絕大多數(shù)是在風(fēng)干狀態(tài)下進(jìn)行分析的，大多數(shù)飼料以風(fēng)干狀態(tài)飼喂

30、，所以風(fēng)干基礎(chǔ)比較實(shí)用。（3）絕干基礎(chǔ) 無(wú)水狀態(tài)或100%的干物質(zhì)狀態(tài)。用于比較不同水分含量的飼料。絕干基礎(chǔ)排除了因水分變化帶來(lái)的差異。2不同基礎(chǔ)表示的飼料養(yǎng)分換算 可通過(guò)下面兩種方法進(jìn)行換算：（1） 應(yīng)用下列比率關(guān)系，可將飼料成分的一種基礎(chǔ)表示數(shù)值，換算為另一種基礎(chǔ)表示的數(shù)值。 （3-41）例如：一種飼料含粗蛋白質(zhì)4.0%，含水75%，計(jì)算以風(fēng)干基礎(chǔ)（干物質(zhì)88%）表示的粗蛋白質(zhì)含量。則 4:（100-75）x:88 x14.08換算為絕干基礎(chǔ)時(shí)的粗蛋白質(zhì)含量則為： 4:（100-75）x:100 x16.00如果樣本是新鮮飼料，首先計(jì)算總水分，得出新鮮樣本的干物質(zhì)含量，再將測(cè)得風(fēng)干樣本中各

31、種養(yǎng)分含量的結(jié)果換算成新鮮飼料中各種養(yǎng)分含量。新鮮飼料中總水分含量按下式計(jì)算：新鮮飼料中總水分（%）a%+ （3-42）式中：a為測(cè)得的初水分含量，%；b為測(cè)得的吸水分含量，%。（2）由風(fēng)干基礎(chǔ)的結(jié)果換算成以原樣為基礎(chǔ)的某種養(yǎng)分含量（）公式： （3-43）式中：為以原樣基礎(chǔ)表示的某種養(yǎng)分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；為以風(fēng)干基礎(chǔ)表示的某種養(yǎng)分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；a為測(cè)得的初水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。由風(fēng)干基礎(chǔ)的結(jié)果換算成以絕干為基礎(chǔ)的某種養(yǎng)分含量（）公式： （3-44）式中：為以絕干基礎(chǔ)表示的某種養(yǎng)分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；為以風(fēng)干基礎(chǔ)表示的某種養(yǎng)分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；b為測(cè)得的吸附水質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。3.如果以含水量相同為基礎(chǔ)進(jìn)行比較折算的

32、方法例如：麩皮和聚合草其原樣的各種養(yǎng)分含量（%）見(jiàn)表3-2表3-2 飼料原樣中概略養(yǎng)分含量水分粗蛋白質(zhì)粗脂肪粗纖維粗灰分無(wú)氮浸出物麩 皮11.112.63.211.75.256.2聚合草87.62.90.61.82.24.9為使麩皮和聚合草在水分含量相同的基礎(chǔ)上比較兩者的的各種養(yǎng)分含量，以麩皮為比較標(biāo)準(zhǔn)（基準(zhǔn)飼料）計(jì)算出聚合草在與麩皮含水量（11.1%）相同條件下的養(yǎng)分換算系數(shù)。即養(yǎng)分換算系數(shù)7.17用7.17分別乘以聚合草在含水量87.6%（即干物質(zhì)含量為12.4%）情況下的各種養(yǎng)分含量，就得出聚合草和麩皮含水分量相同（11.%）時(shí)的各種養(yǎng)分含量。計(jì)算結(jié)果如表3-3：表3-3 飼料風(fēng)干物質(zhì)中

33、養(yǎng)分含量比較（%）水分粗蛋白質(zhì)粗脂肪粗纖維粗灰分無(wú)氮浸出物麩 皮11.112.63.211.75.256.2聚合草11.120.84.312.915.835.1實(shí)習(xí)報(bào)告將實(shí)訓(xùn)結(jié)果記錄下來(lái),并寫一份實(shí)訓(xùn)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)七 飼料中總磷量的測(cè)定測(cè)定原理將試樣中有機(jī)物破壞，使磷游離出來(lái)，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的（nh4）3po4nh4vo316moo3絡(luò)合物，在波長(zhǎng)400nm下進(jìn)行比色測(cè)定。此法測(cè)得結(jié)果為總磷量，其中包括動(dòng)物難以吸收利用的植酸磷。儀器和設(shè)備1實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。2分析篩：40目。3分析天平：感量0.0001。4高溫爐：可控制溫度在55020。5坩堝：50ml，瓷質(zhì)。6容量瓶：50，100，1000ml。7刻度移液管：1.0，2.0，3.0，5.0，10.0ml。8凱氏燒瓶：250或500ml。9可調(diào)溫電爐：1000。10分光光度計(jì)，有10mm比色皿，可在400nm下測(cè)定吸光度。試劑及配制1鹽酸溶液。11水溶液（vv）。2硝酸。3. 高氯酸4釩鉬酸銨顯色試劑：稱取偏釩酸銨1.25，加水200ml加熱溶解，冷卻后再加入250ml硝酸；另稱取鉬酸銨25，加水400ml加熱溶解，在冷卻條件下將此溶液倒入上溶液，且用水定容至1000ml，避光保存。如生成沉淀則不能繼續(xù)使用。5磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：將磷酸二氫鉀在105干燥1，在干燥器中冷卻后稱0.2195，