薄層色譜基礎(chǔ)知識(shí)及斑點(diǎn)異常

1、1 薄層色譜基礎(chǔ)知識(shí) Zhuhaikangabc 及斑點(diǎn)異常的原因和克服及斑點(diǎn)異常的原因和克服 2 薄層色譜 操作的流程操作的流程 3 薄層板的制備 v什么是固定相？ v固定相 4 薄層板的制備薄層板的制備 v常用固定相 1、聚酰胺 2、硅膠 3、硅澡土 4、氧化鋁 5、纖維素6、其他 5 薄層板的制備薄層板的制備 v聚酰胺 1、什么是聚酰胺？ 2、聚酰胺適合那些化合物的分離？ 適用于多元酚類化合物分離，如黃酮，醌 類，酚酸，含羰基的化合物等 6 薄層板的制備薄層板的制備 v硅膠 1、什么是硅膠 2、硅膠適合酸性和堿性等化合物的分離 7 薄層板的制備 硅硅膠膠 硅膠G 硅膠H/硅膠N 硅膠GF

2、245 硅膠HF254 3、實(shí)驗(yàn)室硅膠有哪些型號(hào) 硅膠S 8 v硅膠G和硅膠S 薄層板的制備 1.硅膠G是指硅膠粉+15%煅石膏。 2.硅膠S是指硅膠粉+15%淀粉。 9 v硅膠H或硅膠N 薄層板的制備 是指純硅膠粉，沒(méi)有添加任何粘合劑 10 v硅膠H和硅膠G的應(yīng)用 薄層板的制備 1物質(zhì)是有色的，在日光看 2物質(zhì)沒(méi)有顏色但可以利用顯色劑顯色 3.可以熒光顯色 11 v硅膠HF254和硅膠GF254 薄層板的制備 1.是指添加了熒光劑，如硫化鎘等。 2.應(yīng)用范圍：物質(zhì)有熒光，在254波長(zhǎng)紫外 下看其熒光；物質(zhì)沒(méi)熒光，在254波長(zhǎng)紫外 下看暗斑（熒光淬滅） 12 薄層板的制備 無(wú)黏合劑 自制板自制

3、板 含黏合劑 13 薄層板的制備 黏合劑cmc-na溶液的配制 先將稱好的CMC-Na加入所需水量的 8/10,讓其充分溶漲后,再加熱煮沸, 然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮 沸過(guò)程中不易形成顆粒,煮沸時(shí)間 短. 14 薄層板的制備 黏合劑cmc-na溶液的濃度 溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實(shí) 際操作中0.40.5最為實(shí)用， 濃度高了將來(lái)顯色時(shí)如果有加熱過(guò) 程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低 了鋪出來(lái)的板子不結(jié)實(shí)，不好保存 15 薄層板的制備 黏合劑cmc-na溶液的存放 注意放置時(shí)間太長(zhǎng)的CMC-Na溶液可 能會(huì)發(fā)黃，而且可能有霉菌出現(xiàn)， 最好不要使用。 16 薄層板的制備 操作：除另有規(guī)

4、定外，是指 將1份固定相和3份水溶液 ，研磨混合，置玻璃板上 使涂布均勻，平臺(tái)上于室 溫下晾干，活化后，置有 干燥器中備用。 制板 17 注意點(diǎn) 1.沿同一方向研磨混合，避免產(chǎn)生氣泡 2.厚度為0.20.3mm，涂層薄，點(diǎn)樣容易過(guò) 載；涂層厚，顯色不那么明顯 3.室溫下在水平位置放置，待薄層發(fā)白近干 薄層板的制備 18 注意點(diǎn) 5.研磨時(shí)間 6.鋪板用的勻漿不宜過(guò)稠或過(guò)稀：過(guò)稠，板容 易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過(guò)稀，水蒸 發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠 G:水=1：23，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶 液=1:2。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也 影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量 。 薄

5、層板的制備 19 活化 2.在105110度活化30分鐘。 3.一般檢識(shí)水溶性成分或一些極性大的成分時(shí) ，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活 化即可貯存?zhèn)溆?。 薄層板的制備 1.薄層板為何要進(jìn)行“活化”？ 20 薄層色譜的點(diǎn)樣 v點(diǎn)樣器 21 薄層色譜的點(diǎn)樣 潔凈 、干燥 v點(diǎn)樣環(huán)境 22 薄層色譜的點(diǎn)樣 v點(diǎn)樣的形狀 1、圓點(diǎn) 2、條帶狀 23 薄層色譜的點(diǎn)樣 v點(diǎn)樣的距離 1015mm 810mm 5mm 直徑不大于 2mm 寬度48mm 8mm 直徑不大于 4mm 寬度510mm 自制板高效板 24 薄層色譜的點(diǎn)樣 v 點(diǎn)樣的注意點(diǎn) 1.不要弄破薄層板 2.點(diǎn)樣量大時(shí)，少量多次， 3

6、.點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)吹干或 放入干燥器里晾干 25 薄層色譜的展開(kāi) v展開(kāi) 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi) 劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距原點(diǎn)5mm為 宜，密封 26 薄層色譜的展開(kāi) v展開(kāi)劑配制 2.混合展開(kāi)劑要求新鮮配制，不要多次反復(fù) 使用,如需分層，則按要求放置分層后取需 要的一相（上層或下層），備用 1.把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混 合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大 的一層作為展開(kāi)劑。最好不要把各組成溶液倒 入展開(kāi)缸，振搖展開(kāi)缸來(lái)配制展開(kāi)劑。 27 薄層色譜的展開(kāi) v預(yù)飽和、預(yù)平衡 展開(kāi)缸如需預(yù)先用展開(kāi)劑預(yù)平衡， 可在缸中加入適量的展開(kāi)劑，密閉， 一般保持1530

7、分鐘 28 薄層色譜的展開(kāi) v展開(kāi)距離 展開(kāi)至規(guī)定距離（一般為815cm） 29 薄層色譜的顯色 v顯色與檢視 1.供試品含有可見(jiàn)光下有顏色的成分可直接在日 光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色 劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。2.有熒光 的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在 356nm紫外光燈下觀察熒光色譜。3.對(duì)于可見(jiàn)光 下無(wú)色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒 光劑的硅膠板（如GF254板），在254nm紫外光燈 下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜 30 1、拖尾現(xiàn)象 2、邊緣效應(yīng) 3、S形及波形斑點(diǎn) 4、念珠狀斑點(diǎn) 5、斑點(diǎn)與對(duì)照品對(duì)不上 薄層色譜中斑點(diǎn)的異常 異常現(xiàn)

8、象 6、其它 31 拖尾原因拖尾原因 斑點(diǎn)異常 1.點(diǎn)樣量過(guò)載 2.點(diǎn)樣圓點(diǎn)未重合 3.展開(kāi)劑 4.薄層析 5.其他 32 拖尾 斑點(diǎn)異常與克服 1.點(diǎn)樣量過(guò)載 任何吸附劑，它們的負(fù)載化合物的能力是 有一定限度的，因此點(diǎn)樣過(guò)量而超載后， 過(guò)剩的化合物被拋在后面，形成拖尾現(xiàn)象 克服方法：A.點(diǎn)樣時(shí)可以點(diǎn)成條帶狀 B.選用稍厚一點(diǎn)的板 33 拖尾 斑點(diǎn)異常與克服 2.點(diǎn)樣圓心未重合 樣點(diǎn)雖然在同一垂直線上但樣點(diǎn)上下圓心沒(méi) 有重合，致使樣點(diǎn)呈近橢圓形，也是形成拖 現(xiàn)象的原因之一 克服方法：點(diǎn)樣位置要準(zhǔn)確，預(yù)先設(shè)計(jì)好點(diǎn) 樣的位置，然后用鉛筆作好標(biāo)記，每次點(diǎn)樣 對(duì)準(zhǔn)圓點(diǎn) 34 拖尾 斑點(diǎn)異常與克服 3.

9、展開(kāi)劑的配制 35 拖尾 斑點(diǎn)異常與克服 4.薄層板 為了提高樣品的分離度和減少斑點(diǎn)的拖尾，鋪板 時(shí)在硅膠中加入某些酸（如硼酸，草酸），堿 （如氫氧化鈉），鹽（如磷酸二氫鈉，磷酸氫二 鈉）等將硅膠板改性 克服方法：硅膠預(yù)制板可用浸板的辦法改性 36 邊緣效應(yīng) 2、薄層板 3、展開(kāi)劑未預(yù)飽和 斑點(diǎn)異常 1、點(diǎn)樣邊距 4、其他 37 邊緣效應(yīng) 斑點(diǎn)異常與克服 1.點(diǎn)樣邊距 38 邊緣效應(yīng) 斑點(diǎn)異常與克服 2.薄層板 薄層板厚薄不均勻，兩邊厚或者兩邊薄都是形成 邊邊緣效應(yīng)的原因之一 克服方法：選用符合要求的薄層板。（符合要求 的薄層板應(yīng)該在反射光下板面平滑均勻，無(wú)氣泡， 灰塵或顆粒，透射光下薄層紋理

10、均勻細(xì)膩） 39 邊緣效應(yīng) 斑點(diǎn)異常與克服 3.預(yù)飽和 在薄層板上一般是邊緣上的展開(kāi)劑較容易揮發(fā), 如果這幾個(gè)有機(jī)溶劑的揮發(fā)性能差異比較大,那 么就會(huì)造成薄層板上邊緣和中間展開(kāi)劑比例的差 異而產(chǎn)生展開(kāi)速度不一致的現(xiàn)象 克服方法：展開(kāi)前要充分飽和 40 波形斑點(diǎn) S形斑點(diǎn) 斑點(diǎn)異常 vS形及波形斑點(diǎn) 41 vS形斑點(diǎn) 斑點(diǎn)異常 S形斑點(diǎn)是指含多咱成分的樣品層析時(shí)， 其斑點(diǎn)不是順次分布于原點(diǎn)至展開(kāi)前沿的 垂直線上，而是呈S形分布于垂直線兩側(cè)。 42 v波形斑點(diǎn) 斑點(diǎn)異常 波形斑點(diǎn)：是指某些含多種成分的樣品液， 順次點(diǎn)于同一起始線上，展開(kāi)后，這些成 分相同的斑點(diǎn)不吃不開(kāi)直線狀平行于起始 線，而是呈波

11、浪形。 43 vS形及波形斑點(diǎn) 斑點(diǎn)異常 2.為避免上述現(xiàn)象的出現(xiàn)，應(yīng)選用厚薄均勻 的薄層板 1.產(chǎn)生原因：多數(shù)是因?yàn)楸影搴癖〔粍颉?44 v念珠狀斑點(diǎn) 斑點(diǎn)異常 念珠狀斑點(diǎn)是指化合物斑點(diǎn)之間距離 小，相互連接呈念珠狀 45 念珠狀 斑點(diǎn)異常與克服 產(chǎn)生原因及克服方法 1.樣品中成分過(guò)多，在下定長(zhǎng)度的薄層板上，排布 不開(kāi)，彼此重疊。可適當(dāng)增加層析板長(zhǎng)度，使斑點(diǎn) 距離加大或采用雙向?qū)游觯顾煞窒騼蓚€(gè)方向 展開(kāi)可以避免念珠狀斑點(diǎn)的出現(xiàn)。 2.多次點(diǎn)樣時(shí)，點(diǎn)樣中心不重合，形成復(fù)斑。應(yīng)以 適當(dāng)濃度供試液一次點(diǎn)樣，若多次點(diǎn)樣，點(diǎn)樣中心 必須重合。 46 vRf值不穩(wěn)定 斑點(diǎn)異常 1.溫度 2.濕度

12、 3.手工制板 4.溶劑質(zhì)量 47 vRf值不穩(wěn)定 斑點(diǎn)異常與克服 1.溫度 溫濕度對(duì)薄層影響都 很大。不凍結(jié)的前提 下，通常溫度越低分 離越好，較難的分離 需在低溫下分離，例 如人參皂苷。 48 vRf值不穩(wěn)定 斑點(diǎn)異常與克服 2.濕度 49 vRf值不穩(wěn)定 斑點(diǎn)異常與克服 2.濕度 濕度的影響，主要是影響薄層板的吸附 能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化， 濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使 用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過(guò)在另 一展開(kāi)槽放置相應(yīng)濃度的硫酸 50 vRf值不穩(wěn)定 斑點(diǎn)異常與克服 濕度的控制 51 vRf值不穩(wěn)定 斑點(diǎn)異常與克服 手工制板 由于手工制的板的技巧不同，所制備 的薄層板的質(zhì)量不同造成重現(xiàn)性差