甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的穩(wěn)定性觀察

1、甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的穩(wěn)定性觀察世界衛(wèi)生組織(WHO)發(fā)布的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示,甲型 H1N1 流感的易感人群、并發(fā)癥和重癥風(fēng)險人群以年輕人及具有基礎(chǔ)性疾病的人群為主,尤以年輕人的發(fā)病率較高1,而接種疫苗是預(yù)防甲型 H1N1流感流行的主要措施.甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗系用 WHO 推薦,WHO 合作中心分發(fā),并經(jīng)國家藥品管理部門批準(zhǔn)的甲型 H1N1 流感病毒株接種雞胚,經(jīng)培養(yǎng)、收獲病毒液,濃縮、裂解和純化后制成,用于預(yù)防甲型 H1N1流感.作為裂解疫苗,其中血凝素含量對疫苗的免疫效果具有重要影響,而制品的保存條件和時間會影響血凝素含量的穩(wěn)定.雖然甲流疫苗與普通流感疫苗的生產(chǎn)工藝流

2、程相似2-3,但作為新毒株及新制品,其免疫原性及質(zhì)量仍需進一步觀察.為了考察制品的穩(wěn)定性,保證疫苗的安全有效,本實驗進行了甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗的穩(wěn)定性觀察,現(xiàn)將結(jié)果報道如下.1 材料與方法1. 1 疫苗 3 批甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗規(guī)格為 15 μg /(0. 5 ml·瓶),批號分別為 20090701、20090704 和 20090707和普通流感病毒裂解疫苗(作為對照疫苗,批號為 200907018,0. 5 ml / 瓶)均為本公司制備,含各型流感病毒株血凝素 15 μg.1. 2 標(biāo)準(zhǔn)抗原 TGA(therapeutic goods

3、administration)標(biāo)準(zhǔn)抗原購自澳大利亞治療用品管理局;NIBSC 標(biāo)準(zhǔn)抗原購自英國國家生物制品檢定所(NationalInstitutefor Biological Standards and Control).1. 3 主要試劑 相應(yīng)(亞)型流感病毒特異性免疫血清和抗體參考品均購自 NIBSC.1. 4 熱穩(wěn)定性試驗 根據(jù)課題組設(shè)計的甲型 H1N1流感病毒裂解疫苗 37 熱穩(wěn)定性試驗方案進行試驗:將 3 批甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗和對照疫苗于 37 分別放置 0、3、7 d,對成品項目部分檢定或全部檢定.1. 5 長期穩(wěn)定性試驗 參照中國藥典二部(2005版)附錄 C原料

4、藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則,設(shè)計甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗長期穩(wěn)定性試驗方案:將 3 批甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗于 2 8 分別放置 0、3、6、12、18 個月,對成品項目進行全部檢定;分別于放置 1、2、4、5、7、8、9、10、11、15 個月,進行部分項目檢定.檢測方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗注冊標(biāo)準(zhǔn).1. 6 各項指標(biāo)的檢測1. 6. 1 鑒別試驗 用相應(yīng)(亞)型流感病毒特異性免疫血清進行單向免疫擴散試驗,結(jié)果應(yīng)證明抗原性與推薦病毒株相一致.1. 6. 2 外觀檢測 應(yīng)為輕微乳白色液體,無異物.1. 6. 3 裝量檢測 按中國藥典三部(2010

5、 版)附錄A 中裝量項進行,應(yīng)不低于標(biāo)示量.1. 6. 4 pH 值檢測 按中國藥典三部(2010 版)附錄A 進行,應(yīng)為 6. 8 7. 5.1. 6. 5 游離甲醛含量檢測 按 中國藥典 三部(2010 版)附錄 L 進行,應(yīng)不高于 25 μg / ml.1. 6. 6 血凝素含量檢測 將抗原參考品和成品分別加入含有抗體參考品的瓊脂糖凝膠板上,孔徑為2 4 mm,于 20 25 擴散至少 18 h;PBS 浸泡 1 h后,干燥、染色、脫色.測量抗原參考品和成品形成的沉淀環(huán)直徑,以抗原參考品形成的沉淀環(huán)直徑對其相應(yīng)抗原濃度進行直線回歸,得到直線回歸方程,代入成品的沉淀環(huán)直徑,即可得到血

6、凝素含量.血凝素含量應(yīng)為 24 36 μg / ml.1. 6. 7 總蛋白質(zhì)含量檢測 按中國藥典三部(2010版)附錄 B第二法進行,應(yīng)不高于 200 μg / ml,并不得超過疫苗中血凝素總含量的 5 倍.1. 6. 8 卵清蛋白含量檢測 采用酶聯(lián)免疫法(仲裁方法)或?qū)α髅庖唠娪痉?應(yīng)不高于 100 ng / ml.1. 6. 9 無菌檢查 按中國藥典三部(2010 版)附錄 A 進行,應(yīng)符合規(guī)定.1. 6. 10 異常毒性檢查 按中國藥典三部(2010版)附錄 F 進行,應(yīng)符合規(guī)定.1. 6. 11 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 按中國藥典三部(2010版)附錄 E 凝膠限量試驗,應(yīng)小于

7、40 EU / ml.1. 6. 12 硫柳汞含量檢測 應(yīng)為 85 μg / ml ± 15%.2 結(jié) 果2. 1 熱穩(wěn)定性 檢測結(jié)果顯示,3 批甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗于 37 放置 7 d,鑒別試驗、外觀、裝量、無菌檢查和異常毒性檢查結(jié)果均合格,其他各項指標(biāo)均符合甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗制造和檢定規(guī)程要求,且與 0 d 結(jié)果比較無明顯差異,見表1.對照疫苗于 37 放置 7 d,各項指標(biāo)檢查結(jié)果均合格,均符合流感病毒裂解疫苗制造和檢定規(guī)程要求,且與 0 d 結(jié)果比較無明顯差異,見表 2.2. 2 長期穩(wěn)定性 檢測結(jié)果顯示,3 批甲型 H1N1流感病毒裂解

8、疫苗于 2 8 放置 18 個月,鑒別試驗、外觀、裝量、pH、硫柳汞含量、無菌檢查、異常毒性檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素含量、卵清蛋白含量均合格,均符合甲型 H1N1 流感病毒裂解疫苗制造和檢定規(guī)程要求,且與 0 月結(jié)果比較無明顯差異;血凝素含量也較穩(wěn)定,與 0 月相比,無明顯差異,均在正常范圍(12 18 μg / 0. 5 ml)內(nèi).見圖 1.3 討 論流感病毒屬于正黏病毒科4,病毒體為多形性結(jié)構(gòu),核衣殼為螺旋對稱,病毒表面的包膜上含有血凝素和神經(jīng)氨酸酶.血凝素是一類蛋白質(zhì),病毒依靠血凝素與宿主細(xì)胞結(jié)合,因此其為流感病毒最主要的表面抗原,能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生相應(yīng)的中和抗體以中和病毒,具有保護作用.血凝

9、素抗體為中和抗體,因此,抵抗感染的發(fā)生與血凝素抗體有關(guān),且疫苗血凝素的含量是影響免疫接種效果的重要因素.血凝素含量是考核疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo),血凝素的穩(wěn)定對疫苗的穩(wěn)定性十分重要.疫苗血凝素含量較高,并在效期內(nèi)相對穩(wěn)定,才能保證疫苗具有良好的免疫原性.由于流感疫苗主要以血凝素含量作為效力指標(biāo),因此,血凝效價的測定是評估疫苗質(zhì)量最客觀、可和和重要的指標(biāo).本實驗觀察的疫苗系經(jīng)病毒培養(yǎng)、濃縮、第 1 次純化、病毒裂解、第 2 次純化等工藝制成.純化保留了病毒中核蛋白和膜蛋白等內(nèi)部抗原、血凝素和神經(jīng)氨酸酶表面抗原等有效成分,去除了具有反應(yīng)原性的病毒類脂質(zhì)部分,降低了疫苗的接種副反應(yīng),并保持相對較高的免疫原

10、性,為一種理想的流感疫苗,經(jīng)臨床試驗證實,具有良好的安全性和有效性(尚未發(fā)表).本實驗觀察了該疫苗的穩(wěn)定性,結(jié)果表明,甲型H1N1 流感病毒裂解疫苗熱穩(wěn)定性和長期穩(wěn)定性均良好,在 2 8 儲存條件下,疫苗的效期可定為 12個月.2010 年版美國藥典(32 版)收載了流感疫苗,并將有效期定為 1 年5 .本公司研制的甲型H1N1 流感病毒裂解疫苗質(zhì)量穩(wěn)定,達(dá)到了發(fā)達(dá)國家藥典的要求.參考文獻(xiàn)1 尉嵐,高虹. 甲型 H1N1 流感危害與疫苗政策簡介J. 中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2010(6):648-649.2 Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoei

11、a of People′sRepublic of China(Vol )S. Beijing:China Med Sci Press,2010:162-164.(in Chinese)國家藥典委員會. 中國藥典(三部)S. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:162-164.3 國家食品藥品監(jiān)督管理局. 流感病毒裂解疫苗藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)S. WS4(-ZB-002)2011. 2011-06-01.4 Zhao K,Zhang YH,Li HM. Medical BiologyM. Zn ed. Bei-jing:People′s Medical Publishing House,2007:805-816(.