藤茶止咳、化痰作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

1、藤茶止咳、化痰作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究藤茶俗稱端午茶、藤婆茶(又稱山甜茶、龍須茶)。系葡萄科蛇葡萄屬顯齒蛇葡萄(Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz)W. T. wang) 的嫩莖葉。野生藤茶廣泛分布在我省梵凈山地區(qū)，其味甘甜性涼，具有清熱解毒、抗菌消炎、鎮(zhèn)咳祛痰等功效，民間常用于感冒發(fā)熱等疾病的防治。目前未見其有相關(guān)的止咳、化痰藥理方面的研究報(bào)道。因此筆者對(duì)藤茶進(jìn)行止咳、化痰作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，為藤茶的綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。1 材料1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，SPF 級(jí)，雌雄各半，選用體重 18 22 g 的健康動(dòng)物，購(gòu)自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào):粵檢證字 S

2、CXK(粵)-2009-0070。1. 2 樣品來(lái)源與配制1. 2. 1 藤茶不同方法提取物配制有藤茶水提、石油醚提取、氯仿提取、乙酸乙酯提取 4 個(gè)成分組。每組均折合生藥含量350 mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥 3 500 mg/kg 體重。1. 2. 2 藤茶水提成分不同劑量組配制藤茶水提成分高劑量組為直接給藥，折合生藥含量350 mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥 3 500 mg/kg 體重;中劑量組為藤茶水提物加生理鹽水，按12稀釋后給藥，折合生藥含量117 mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥1 167 mg / kg 體重;低劑量組為藤茶水提物加生理鹽水，按 1 8 稀 釋，稀 釋 后

3、給 藥，折 合 生 藥 含 量38. 9 mg / ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥 389 mg / kg 體重。1. 2. 3 其它樣品配制生理鹽水(氯化鈉注射液)，NaCl 含量 0. 9 %;美沙芬陽(yáng)性對(duì)照，含量為 15 mg/片，取 2 片溶解于20 毫升生理鹽水中，制成懸液，其濃度為 3 mg / ml，劑量為 30 mg/kg 體重;痰咳凈陽(yáng)性對(duì)照，劑量為200 mg / kg體重;陰性對(duì)照均采用蒸餾水。2 方法2. 1 濃氨水噴霧法研究止咳藥效取昆明種小鼠 120 只，隨機(jī)分為 8 組，每組 15只。設(shè)陰性(蒸餾水)對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照(美沙芬)和藤茶石油醚提取成分組、氯仿提取成分組、乙酸乙

4、酯提取成分組，水提取成分組，其中水提取成分組細(xì)分為高、中、低 3 個(gè)劑量組。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水 12 h，然后各組小鼠按0. 3 ml /20 g 體重灌胃給藥，其中陰性對(duì)照組給等體積蒸餾水。給藥后 1 h，小鼠接受噴霧，按一定時(shí)間噴入濃氨水氣霧，結(jié)束，立即取出小鼠，觀察有無(wú)咳嗽反應(yīng)。觀察 1 min 內(nèi)咳嗽次數(shù)，若 1 min 內(nèi)出現(xiàn)3 次以上典型咳嗽動(dòng)作(腹肌收縮或縮胸，同時(shí)張大嘴，有時(shí)可有咳聲) 者，算作有咳嗽;。否則算作無(wú)咳嗽;。以停止接觸氨水刺激后 1 min 內(nèi)咳嗽次數(shù)大于或等于 3 次判為陽(yáng)性，個(gè)別動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)死亡或休克，判為咳嗽陽(yáng)性。用序貫法(上下法)求出引起半數(shù)小鼠咳嗽

5、的噴霧時(shí)間(EDT50)。計(jì)算 值，若值大于 130 % ，說(shuō)明有的止咳作用。若 值大于 150 %，說(shuō)明有顯著的止咳作用 (陳奇，2006;羅霄山等，2004;羅文敏等，2011)。EDT50= log 1c / n(式中 n 為動(dòng)物數(shù)，c 為 rx 值的總和，r 為每劑量組的動(dòng)物數(shù)，x 為劑量(即噴霧時(shí)間)的對(duì)數(shù)。) = 給藥組的 EDT50/ 對(duì)照組的 EDT50× 100 %2. 2 對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響標(biāo)準(zhǔn)酚紅曲線的繪制:使用分析天平準(zhǔn)確稱取一定量的酚紅，用 5 % 碳酸氫鈉溶解，配成每 1 ml含 12. 5 μg，然后順次進(jìn)行倍比稀釋成每毫升含酚紅 6.

6、25 μg、3. 125 μg、1. 562 5 μg、0. 781 3 μg、0. 390 6 μg、0. 195 3 μg、0. 097 7 μg、0. 048 8 μg，用分光光度計(jì)測(cè) OD 值。以酚紅濃度為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，根據(jù)酚紅濃度和 OD 值計(jì)算出回歸方程。根據(jù)回歸方程計(jì)算出小鼠酚紅的排泄量(陳奇，2006)。取昆明種小鼠50 只，隨機(jī)分為 5 組，每組 10 只。設(shè)陰性(蒸餾水)對(duì)照組、陽(yáng)性(痰咳凈)對(duì)照藥物組、藤茶水提取物低劑量組、中劑量組、高劑量組。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水12 h，然后各組小鼠按0. 3 ml/20 g體重

7、灌胃給藥，其中陰性對(duì)照組給等體積蒸餾水。給藥后 30 min，腹腔注射 5 % 酚紅生理鹽水溶液0. 2 ml /20 g，注射后30 min，脫頸椎處死小鼠，剪取氣管，將各氣管段放入預(yù)先盛有1. 5 ml 的5 % NaHCO3溶液試管中，后置于渦流混合器上震蕩2 min，使氣管段中的酚紅完全釋放，檢測(cè)前試管中加入 1 molNaOH 溶液 0. 1 ml，離心(3 000 rpm，5 min)，后將試管中溶液于721 型分光光度計(jì)546 nm 處測(cè)OD 值，根據(jù)回歸方程計(jì)算出酚紅排泌量。計(jì)算公式: y = 0. 119 x 0. 005 9x 為 OD 值，y 為氣管酚紅排泌量(陳奇，20

8、06;羅霄山等，2004;羅文敏等，2011)。2. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù) 據(jù) 以均 數(shù) ± 標(biāo) 準(zhǔn) 差;表 示，采 用SPSS12. 0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。3 結(jié)果3. 1 藤茶對(duì)濃氨水致咳小鼠的影響藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物，灌胃給藥對(duì)刺激小鼠引起咳嗽的耐受時(shí)間與陰性對(duì)照組比較，均有顯著延長(zhǎng)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異。其中藤茶水提取物的耐受時(shí)間最長(zhǎng)，其 R 值達(dá)到 210. 38 %，陽(yáng)性(美沙芬)對(duì)照組的值為 225. 42 %，可見其療效與陽(yáng)性對(duì)照組相當(dāng)，都達(dá)到顯效水平。鑒于藤茶水提取物止咳作用顯著，又進(jìn)一步研究藤茶水提物不同劑量組的止咳效果。

9、結(jié)果可見，藤茶高、中劑量組值分別達(dá)到210. 38 %和173. 78 %都達(dá)到顯效水平，低劑量組值為 137. 09 %達(dá)到有效水平。綜上，可見藤茶具有良好的止咳作用。3. 2 藤茶對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響由表 2 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，藤茶水提取物不同劑量灌胃給藥對(duì)小鼠支氣管分泌物量與陰性對(duì)照組比較，均有顯著增加，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異。其中藤茶水提取物高、中劑量組氣管酚紅排泌量分別達(dá)到 4. 647 ±0. 903 μg/ml 和 5. 424 ±1. 465 μg/ml，均高于陽(yáng)性 ( 痰咳凈) 對(duì)照組的 3. 672 ± 0. 894&

10、mu;g/ml，說(shuō)明藤茶水提物高、中劑量組化痰效果優(yōu)于陽(yáng)性藥物痰咳凈。綜上所述，說(shuō)明藤茶具有很好的化痰效果。4 結(jié)論1) 藤茶不同方法提取物濃氨水致咳小鼠的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物均顯示出一定的止咳作用，其中藤茶水提物的止咳效果最佳;2) 藤茶水提物不同劑量組進(jìn)行濃氨水致咳小鼠的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明藤茶水提物高、中劑量組顯示出接近陽(yáng)性(美沙芬)對(duì)照組的止咳效果;3) 藤茶水提物不同劑量組進(jìn)行小鼠氣管酚紅排泌量實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明藤茶水提物高、中劑量組顯示出高于陽(yáng)性(痰咳凈)對(duì)照組的化痰效果。綜上所述，藤茶具有顯著止咳化痰的作用，這為藤茶的綜合開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。參考文獻(xiàn)陳奇，2