口腔培養(yǎng)細(xì)胞的取材與分離

1、體外細(xì)胞的純化體外細(xì)胞的純化 人工純化：酶消化法、機械刮除法、反復(fù)貼壁法、 克隆法、培養(yǎng)基限定法、流式細(xì)胞儀分離法 等 自然純化 細(xì)胞凍存要點：細(xì)胞凍存要點： 冷凍過程要緩慢 凍存細(xì)胞必須處在對數(shù)生長期 細(xì)胞復(fù)蘇要點：細(xì)胞復(fù)蘇要點： 快速解凍 解凍后的細(xì)胞應(yīng)離心去除冷凍保 護劑后再接種到培養(yǎng)基中 細(xì)胞培養(yǎng)的污染、檢測與控制 微生物污染：細(xì)菌，真菌，支原體等污染 污染的途徑：空氣 、器材 、操作 、試劑 、組織標(biāo)本 微生物污染的檢測 微生物污染的控制：抗生素除菌法；加溫處理 細(xì)胞培養(yǎng)常用方法：細(xì)胞培養(yǎng)常用方法： 組織塊培養(yǎng)法 酶消化法 第二節(jié)口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點第二節(jié)口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞

2、培養(yǎng)及其特點 一、牙齒相關(guān)細(xì)胞一、牙齒相關(guān)細(xì)胞 牙髓細(xì)胞（ Dental pulp cells ） 培養(yǎng)方法：組織塊法；酶消化法 細(xì)胞形態(tài)特點 免疫組織化學(xué)染色 體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點 功能特點 牙髓細(xì)胞 波形絲蛋白染色波形絲蛋白染色(+) 未分化間充質(zhì)細(xì)胞未分化間充質(zhì)細(xì)胞 成纖維細(xì)胞成纖維細(xì)胞 牙髓細(xì)胞 體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖（體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖（Cell proliferation in vitro） 生長增殖較快 傳代期較短，15-20代 (2-4 M) 可復(fù)層生長 牙髓細(xì)胞 功能特點功能特點 堿性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP)活性 礦化現(xiàn)象 (Vo

3、n Kossa) 對細(xì)胞因子的反應(yīng) 對蓋髓劑的反應(yīng) 牙髓細(xì)胞 培養(yǎng)方法：組織塊培養(yǎng)法；酶消化法 細(xì)胞形態(tài)特點：成纖維細(xì)胞型（與牙周膜細(xì)胞類似） 免疫組織化學(xué)染色：波形絲蛋白（+）；角蛋白（-） 體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點 功能特點 牙周膜細(xì)胞（periodontal ligament cells） 培養(yǎng)方法：組織塊法；酶消化法 細(xì)胞形態(tài)特點 免疫組織化學(xué)染色 體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點 功能特點 牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響因素 原代 人牙周膜成纖維細(xì)胞傳代人牙周膜成纖維細(xì)胞 免疫組織化學(xué)染色免疫組織化學(xué)染色 波形絲蛋白染色陽性 角蛋白染色陰性 牙周膜細(xì)胞 成纖維樣細(xì)胞，培養(yǎng)成功率高 細(xì)胞增殖快

4、體外存活時間長 (4-12 M) 功能特點功能特點 分泌功能：膠原、非膠原 蛋白、堿性磷酸酶。 礦化功能 收縮功能 再生功能 根面吸附等 二、唾液腺細(xì)胞二、唾液腺細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)特點細(xì)胞形態(tài)特點 腺泡上皮細(xì)胞：體外培養(yǎng)的腺泡細(xì)胞多呈“鋪路石” 樣排列 導(dǎo)管上皮細(xì)胞：導(dǎo)管上皮細(xì)胞呈多邊形 肌上皮細(xì)胞： 肌上皮細(xì)胞呈梭形或星形 唾液腺細(xì)胞 導(dǎo)管上皮細(xì)胞導(dǎo)管上皮細(xì)胞 HSG細(xì)胞系HSG細(xì)胞系 A 小型豬腮腺上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)（10） B 小型豬腮腺上皮細(xì)胞alpha淀粉酶免疫組化染色（10） 腺泡細(xì)胞上皮細(xì)胞腺泡細(xì)胞上皮細(xì)胞 免疫組織化學(xué)染色免疫組織化學(xué)染色 腺泡上皮細(xì)胞：角蛋白、淀粉酶、對氨基水楊酸、

5、 導(dǎo) 管上皮膜、前角蛋白、單克隆角蛋白、分泌成分陽性反 應(yīng) 導(dǎo)管上皮細(xì)胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗體染 色陽性反應(yīng) 肌上皮細(xì)胞：肌動蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗體染 色陽性反應(yīng) 三、口腔黏膜細(xì)胞三、口腔黏膜細(xì)胞 口腔黏膜細(xì)胞口腔黏膜細(xì)胞 培養(yǎng)方法：組織塊法和酶消化法 形態(tài)特點：卵圓形、多邊形，呈“鋪路石”樣單層排 列 免疫組織化學(xué)染色：波形絲蛋白陰性，角蛋白陽性 功能：分泌大量的膠原蛋白與非膠原蛋白 兔口腔黏膜上皮細(xì)胞兔口腔黏膜上皮細(xì)胞 A A B B A 無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下（10） B 滋養(yǎng)細(xì)胞層培養(yǎng)條件下（4） 四、頜骨相關(guān)的硬組織細(xì)胞四、頜骨相關(guān)的硬組織細(xì)胞 破骨細(xì)胞破骨細(xì)

6、胞 形態(tài)學(xué)特點：多核巨細(xì)胞，體積大 組織化學(xué)染色：破骨細(xì)胞單克隆抗體呈陽性反應(yīng)；降 鈣素反應(yīng)呈藍(lán)紫色；抗酒石酸磷酸酶反應(yīng)呈棕褐色 功能：骨吸收功能 影響因素： 促進(jìn)：破骨細(xì)胞激活因子、甲狀旁腺素 抑制：-干擾素、降鈣素 成骨細(xì)胞成骨細(xì)胞 形態(tài)學(xué)特點：不同培養(yǎng)方法所獲得的成骨細(xì)胞形態(tài) 各有差異 免疫組織化學(xué)染色特點：BGP、型膠原、堿性磷 酸酶活性 功能：成骨作用 調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞骨吸收作用 五、口腔腫瘤細(xì)胞五、口腔腫瘤細(xì)胞 口腔鱗癌細(xì)胞口腔鱗癌細(xì)胞 細(xì)胞系來源：鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本原代及傳代培養(yǎng) 生物學(xué)特性： 多角形上皮樣細(xì)胞 核/漿比例高，多核仁 高貼壁率，克隆形成率和軟瓊脂集落形成率 Cal27 c

7、ell 細(xì)胞培養(yǎng)的污染、檢測與控制 微生物污染：細(xì)菌，真菌，支原體等污染 污染的途徑：空氣 、器材 、操作 、試劑 、組織標(biāo)本 微生物污染的檢測 微生物污染的控制：抗生素除菌法；加溫處理 牙周膜細(xì)胞（periodontal ligament cells） 培養(yǎng)方法：組織塊法；酶消化法 細(xì)胞形態(tài)特點 免疫組織化學(xué)染色 體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點 功能特點 牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響因素 原代 人牙周膜成纖維細(xì)胞傳代人牙周膜成纖維細(xì)胞 牙周膜細(xì)胞 成纖維樣細(xì)胞，培養(yǎng)成功率高 細(xì)胞增殖快 體外存活時間長 (4-12 M) 兔口腔黏膜上皮細(xì)胞兔口腔黏膜上皮細(xì)胞 A A B B A 無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下（10） B 滋養(yǎng)細(xì)胞層培養(yǎng)條件下（4） 破骨細(xì)胞破骨細(xì)胞 形態(tài)學(xué)特點：多核巨細(xì)胞，