真菌(1-3)-β-D葡聚糖檢測操作SOP文件

1、本產(chǎn)品屬精密光學(xué)儀器，在日常使用中，應(yīng)嚴格按照我公司出具 的操作流程進行試驗操作，并確保工作環(huán)境正常。本試驗的操作者必 須為經(jīng)我公司培訓(xùn)合格的微生物實驗室檢驗人員，如需更換操作者， 請做好交接工作，確保新的操作者了解儀器特性、 熟悉操作流程。為 避免試驗結(jié)果不準確，請操作者認真閱讀操作注意事項及操作流程， 并嚴格遵守。如有任何疑問，請聯(lián)系我公司售后服務(wù)部。售后服務(wù)部電話：400-811-9958北京金山川科技發(fā)展有限公司真菌（1-3 ） - B -D葡聚糖測定1. 目的建立真菌（1-3 ） - B -D葡聚糖檢測標準操作規(guī)范，保證實驗結(jié)果的準確性。2. 授權(quán)操作人經(jīng)培訓(xùn)合格的微生物實驗室檢驗人

2、員。3. 實驗原理（1-3 ） - B -D葡聚糖檢測原理：真菌（1-3 ） - B -D葡聚糖激活酶反應(yīng)主劑中的G因子后形成凝固蛋白，根據(jù)其所引起的濁度變化對真菌（1-3 ） - B -D葡聚糖濃度進行定量測定。（1-3） -D-Gluca n活化因子G * 因子G凝固酶原*凝固酶凝固蛋白原 *凝固蛋白（凝膠）4 產(chǎn)品性能指標4.1靈敏度 最小檢出值 5pg/ml5 實驗組成5.1實驗儀器及器具：MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)、潔凈工作臺、低速離心機、恒溫儀，20 200ul加樣器、1001000ul加樣器、旋渦混合器、定時器。5.2實驗耗材：200ul無熱原吸頭、1000ul無熱原吸頭、

3、無熱原平底試管、無熱原真空采血管。5.3試劑盒組成：真菌（1-3 ） - B -D葡聚糖檢測試劑盒（光度法）：試劑盒包括反應(yīng)主劑和樣品處理液 。6. 工作環(huán)境相對濕度：20%80% 溫度控制：1030C ;電源電壓：220V 10% 50Hz 2%7. 標本采集、處理及保存7.1檢測樣本：血液、肺泡盥洗液、胸腔積液、腹水、腦脊液、尿液（無菌取中段尿或穿刺尿） 7.2采集要求：采樣過程要求無菌操作，用專用的無熱原真空采血管（肝素類抗凝）。常規(guī)病人早上用藥治療前空腹采血 /取樣（血透患者透析前采血）。7.3樣本保存：樣本采集后應(yīng)在3000轉(zhuǎn)/分進行離心，若不能及時檢測，應(yīng)將血漿轉(zhuǎn)移至無熱原轉(zhuǎn)移 管

4、內(nèi)，在-30 C冰箱中冷凍保存，一周內(nèi)使用。8 .操作程序8.1打開MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)主機、電腦及恒溫儀預(yù)熱30min。8.2打開MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)，錄入病人、樣本種類及檢測項目等信息后點 擊采集。8.3前處理過程，無菌操作，用專用無熱原真空采血管（肝素類抗凝）抽取靜脈血4ml輕輕混勻，按轉(zhuǎn)速 3000r/min進行離心1分鐘，得到富含血小板血漿。8.4取上述富含血小板血漿100uL，加入到樣品處理液中，搖勻后插入恒溫儀加熱區(qū)中進行70 C干熱10min。8.5干熱結(jié)束后，將前處理液冷卻至室溫后取出（取出時切忌震蕩）。8.6取上述前處理液中上清液200uL加入到反應(yīng)

5、主劑中，輕輕混勻，待完全溶解后，全部移液至平底試管中（不要產(chǎn)生氣泡），立即插入 MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)中 進行檢測。8.7反應(yīng)結(jié)束后儀器自動計算結(jié)果并保存。ib - I !程呂呂呂呂呂旨呂F38388888待測血漿樣品制備、檢測示意圖9.操作注意事項9.1預(yù)熱采集在進行試驗之前，儀器一定要提前預(yù)熱30min，達到工作溫度后，按要求填寫表頭信息,完畢后點擊采集，使儀器處于采集狀態(tài)后再進行試驗。9. 2樣本預(yù)處理9. 2.1 血液標本 3000r/min 離心 1min。9. 2.2取富含血小板血漿（離心后上層清液的中部）。9. 2.3 70 C加熱時間嚴格控制在10-12min。9.

6、2.4樣本處理液加熱冷卻后，不要震蕩、搖晃以免將處理過的下層干擾物質(zhì)懸浮上 來。9. 2.5 取處理液的上清液。9. 2.6 加入主劑的 200uL 液體要全部轉(zhuǎn)移至平底試管，轉(zhuǎn)移過程中不能出現(xiàn)氣泡。9. 2.7 平底試管要一次插到底，插入后不要再碰觸。10結(jié)果判斷與分析檢測值 10pg/ml,陰性。檢測值介于1020pg/ml之間，臨床觀察期，建議動態(tài)采血檢測。檢測值20pg/ml，陽性，建議再次采血以確診。11實驗解釋本實驗結(jié)果僅對本標本負責， 提供給臨床參考， 請結(jié)合其他診斷方法和臨床表現(xiàn)做綜合 診斷。12. 特殊標本處理對一般黃疸、溶血、乳糜血標本，稀釋 25 倍后進行檢測。稀釋步驟為

7、：取 100ul 血漿 標本加入到樣品處理液中，經(jīng)過70C干熱并冷卻后，再取一定量上述經(jīng)處理后的標本用另外的一支樣品處理液進行相應(yīng)倍數(shù)的稀釋，即得待測標本，然后取200ul 加入到反應(yīng)主劑，溶解后全部轉(zhuǎn)移至平底試管中插入儀器進行檢測， 并在檢測軟件中 “稀釋倍數(shù)” 一欄填上稀 釋倍數(shù)，儀器就會按照相應(yīng)的稀釋倍數(shù)計算結(jié)果。備注：對于嚴重的黃疸、溶血、乳糜血標本，應(yīng)重新采血。13干擾因素13.1 產(chǎn)生的假陽性的原因有：應(yīng)用纖維膜進行血液透析患者、某些紗布或其他醫(yī)療物品 中含有葡聚糖、某些品牌的靜脈制劑（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）含有葡 聚糖、某些細菌敗血病患者（尤其是鏈球菌敗血癥） 。13.

8、2特殊真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）細胞壁沒有（1-3 ） - 3 -D葡聚糖成分，隱球菌細胞壁外有莢膜致使（1-3） - 3 -D葡聚糖釋放不出，這些真菌無法檢測到。14質(zhì)量控制血漿標本進行測定時應(yīng)同時進行質(zhì)控品的質(zhì)量控制，目的是測定真菌（1-3 ） - -D葡聚糖的測試性能及驗證檢測結(jié)果的準確性能。14-A 室內(nèi)質(zhì)控14-A-1 質(zhì)控品來源為標準（1-3 ） - -D葡聚糖純品，經(jīng)稱量、分裝冷凍干燥制備的凍干品。14-A-2 組成包括質(zhì)控品、質(zhì)控品溶解液、反應(yīng)主劑、說明書、質(zhì)控圖等14-A-3 儲存和穩(wěn)定性儲存28 C;有效期3年。其中質(zhì)控品溶解后，溶液 28 C保存7天。14-A-4 操

9、作 見說明書。14-A-5 安全防范真菌（1-3） - -D葡聚糖質(zhì)控品為經(jīng)冷凍干燥制成無菌制品，因此為避免微生物污染，操作 時應(yīng)在潔凈工作臺內(nèi)進行操作；該質(zhì)控品只能用于體外試驗，不可用于人體。14-A-6 注意事項真菌（1-3） - -D葡聚糖質(zhì)控品僅用于血漿中（1-3 ） - -D葡聚糖定量檢測；注意不要使用 過期的質(zhì)控品。14-A-7 參考值真菌（1-3）- -D葡聚糖質(zhì)控品參考值為聯(lián)合標定結(jié)果，詳見質(zhì)控品外包裝盒上標示。14-A-8 試驗步驟詳見真菌（1-3）- -D葡聚糖質(zhì)控品使用說明書。14-A-9 結(jié)果分析質(zhì)控結(jié)果按照 Westgard質(zhì)控規(guī)則判讀，使用真菌（1-3） - -D葡

10、聚糖質(zhì)控品檢測結(jié)果應(yīng)處于 質(zhì)控圖所示范圍內(nèi)。如果結(jié)果超出規(guī)定范圍，應(yīng)用另一支質(zhì)控品再次進行測試。如結(jié)果仍在范圍外， 應(yīng)檢查操作有無被污染或檢測儀器是否異常。 如果仍存在問題， 請與制 造商聯(lián)系。14-A-10 失控原因分析和處理14-A-10-1 如果失控按以下步驟進行初步分析與處理沒有按照標準操作程序操作；質(zhì)控品超出有效期；測定系統(tǒng)嚴重誤差；14-A-10-2 無上述因素失控應(yīng)進一步分析與處理重新實驗以確認誤差結(jié)果； 確認儀器性能參數(shù)正常，功能正常；確認恒溫儀溫度是否正常；確認所有試劑及質(zhì)控品均在有效期內(nèi)，并妥善保存（注：試劑及質(zhì)控品28C儲存；開啟后立即使用） ；確認無菌操作下進行試驗，以

11、防空氣雜菌污染；14-A-10-3 如誤差無法解決，應(yīng)聯(lián)系廠家的技術(shù)支持人員。15維護保養(yǎng)15.1 儀器保養(yǎng) 注意防塵、防水、防污染、防止異物進入試管孔內(nèi)；定期做好系統(tǒng)的表 面清潔。15.2 軟件維護 本系統(tǒng)的計算機應(yīng)只供本系統(tǒng)使用，對外來的一切軟件、數(shù)據(jù)文件在使 用前一定要先查殺病毒，避免造成日常記錄文件的損壞或丟失。15.3 三個月使用檢測軟件中的 系統(tǒng)自檢 功能，確保儀器工作正常。16安全防護措施16. 1試劑盒應(yīng)28C避光保存，使用前應(yīng)檢查有效期。 若過期或出現(xiàn)破損禁止使用， 以免影響測定結(jié)果。16.2 試劑盒為體外診斷試劑，其中的成分可能會導(dǎo)致皮膚和眼睛疼痛，也可刺激黏膜和上呼吸道， 所以應(yīng)避免與皮膚接觸， 避免吸入和食入， 禁止使用于人體。16.3 實驗操作中避免微生物及細菌污染17. 標本處理已檢驗過的標本作高壓滅菌后由專門人員統(tǒng)一處理18. 異常結(jié)果處理本實驗結(jié)果異常需與臨床診斷相符合，不符合的結(jié)果應(yīng)及時復(fù)查或與臨床聯(lián)系19應(yīng)急處理 若出現(xiàn)不能自行解決故障，應(yīng)及時聯(lián)系經(jīng)銷商或工程師處理，并告知微生物