[精品]蝴蝶蘭組培過(guò)程的技術(shù)關(guān)鍵

1、蝴蝶蘭組培過(guò)程的技術(shù)關(guān)鍵蝴蝶蘭組培過(guò)程的技術(shù)關(guān)鍵 高高 級(jí)級(jí) 農(nóng)農(nóng) 藝藝 師師 張張 秀秀 珊珊 個(gè)人簡(jiǎn)介個(gè)人簡(jiǎn)介 本人于本人于1995年年6月畢業(yè)于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝月畢業(yè)于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝 系果樹專業(yè)，同年系果樹專業(yè)，同年7月份分配至廣東梅雁集團(tuán)股月份分配至廣東梅雁集團(tuán)股 份有限公司工作，主要從事螺旋藻的養(yǎng)殖和產(chǎn)品份有限公司工作，主要從事螺旋藻的養(yǎng)殖和產(chǎn)品 開發(fā)，開發(fā)，1998年認(rèn)定為助理農(nóng)藝師資格；年認(rèn)定為助理農(nóng)藝師資格；1999年年7 月，由梅雁公司調(diào)入汕頭市農(nóng)科所工作。十年來(lái)，月，由梅雁公司調(diào)入汕頭市農(nóng)科所工作。十年來(lái)， 本人一直在農(nóng)科所生物中心，主要從事園藝植物本人一直在農(nóng)科所生物中

2、心，主要從事園藝植物 組織培養(yǎng)和花卉選育種的研究和開發(fā)工作。組織培養(yǎng)和花卉選育種的研究和開發(fā)工作。2003 年年12月評(píng)定為農(nóng)藝師資格，月評(píng)定為農(nóng)藝師資格，2008年年12月評(píng)定為高月評(píng)定為高 級(jí)農(nóng)藝師資格。級(jí)農(nóng)藝師資格。 前言前言 我所從事蝴蝶蘭組織培養(yǎng)的研究工作始于我所從事蝴蝶蘭組織培養(yǎng)的研究工作始于 1996年。經(jīng)過(guò)十多年的努力，現(xiàn)已發(fā)展成為一個(gè)年。經(jīng)過(guò)十多年的努力，現(xiàn)已發(fā)展成為一個(gè) 年產(chǎn)年產(chǎn)100多萬(wàn)苗的蝴蝶蘭組培生產(chǎn)線，目前生產(chǎn)多萬(wàn)苗的蝴蝶蘭組培生產(chǎn)線，目前生產(chǎn) 的蝴蝶蘭品種有幾十種，主要有的蝴蝶蘭品種有幾十種，主要有:“滿天紅滿天紅”、 “汕農(nóng)紅皇后汕農(nóng)紅皇后”、“汕農(nóng)姑娘汕農(nóng)姑娘

3、”、“紅天鵝紅天鵝”、 “內(nèi)山姑娘內(nèi)山姑娘”、“新莎拉黃金新莎拉黃金”等優(yōu)良品種；同等優(yōu)良品種；同 時(shí)，蝴蝶蘭組培技術(shù)在蝴蝶蘭的選育種、種質(zhì)保時(shí)，蝴蝶蘭組培技術(shù)在蝴蝶蘭的選育種、種質(zhì)保 存等方面也發(fā)揮了重要作用。近幾年來(lái)，每年出存等方面也發(fā)揮了重要作用。近幾年來(lái)，每年出 圃的選育種中間材料有圃的選育種中間材料有3萬(wàn)多苗，保存的品種資萬(wàn)多苗，保存的品種資 源有幾百個(gè)。源有幾百個(gè)。 我所從事蝴蝶蘭組織培養(yǎng)研究的主我所從事蝴蝶蘭組織培養(yǎng)研究的主 要成果要成果： 2002年，制定省級(jí)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)年，制定省級(jí)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)蝴蝶蘭試管苗蝴蝶蘭試管苗 生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程（db44/t128-2002）；）； 2

4、003年，年，蝴蝶蘭蝴蝶蘭“滿天紅滿天紅”的引種、擴(kuò)繁、的引種、擴(kuò)繁、 示范與推廣示范與推廣獲汕頭市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)；獲汕頭市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)； 2004年，年，蝴蝶蘭蝴蝶蘭“滿天紅滿天紅”的組培快繁與的組培快繁與 規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)獲汕頭市科技進(jìn)步獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)；獲汕頭市科技進(jìn)步獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)； 2008年，年，蝴蝶蘭雜交育種體系構(gòu)建與新品蝴蝶蘭雜交育種體系構(gòu)建與新品 種選育種選育獲汕頭市科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)。獲汕頭市科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)。 今天，本人主要結(jié)合自己十年來(lái)在蝴今天，本人主要結(jié)合自己十年來(lái)在蝴 蝶蘭組培工作方面的一些實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，與大蝶蘭組培工作方面的一些實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，與大 家共同探討蝴蝶

5、蘭組培過(guò)程的主要技術(shù)措家共同探討蝴蝶蘭組培過(guò)程的主要技術(shù)措 施或一些需要注意的問(wèn)題，以求推動(dòng)我所施或一些需要注意的問(wèn)題，以求推動(dòng)我所 蝴蝶蘭的組培工作更好、更快地發(fā)展。蝴蝶蘭的組培工作更好、更快地發(fā)展。 一、培養(yǎng)基的研究和配制一、培養(yǎng)基的研究和配制 1在蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的種類與成在蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的種類與成 分是決定組培成功與否的關(guān)鍵因素之一。蝴蝶蘭分是決定組培成功與否的關(guān)鍵因素之一。蝴蝶蘭 不同品種、不同培養(yǎng)材料或不同的生長(zhǎng)階段對(duì)培不同品種、不同培養(yǎng)材料或不同的生長(zhǎng)階段對(duì)培 養(yǎng)基的要求都不同，因此，培養(yǎng)基的研究和選擇養(yǎng)基的要求都不同，因此，培養(yǎng)基的研究和選擇 是一個(gè)非常關(guān)

6、鍵的基礎(chǔ)性工作，也是蝴蝶蘭組培是一個(gè)非常關(guān)鍵的基礎(chǔ)性工作，也是蝴蝶蘭組培 生產(chǎn)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。生產(chǎn)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。 2在培養(yǎng)基的配制過(guò)程中，要保證所使用的各在培養(yǎng)基的配制過(guò)程中，要保證所使用的各 種試劑或原材料的穩(wěn)定性（如不使用過(guò)期的試劑，種試劑或原材料的穩(wěn)定性（如不使用過(guò)期的試劑， 不使用變質(zhì)的椰子汁、香蕉等原材料）。不使用變質(zhì)的椰子汁、香蕉等原材料）。 3在培養(yǎng)基的配制過(guò)程中，要保證各種稱量的在培養(yǎng)基的配制過(guò)程中，要保證各種稱量的 準(zhǔn)確性。準(zhǔn)確性。 二、外植體的選擇和消毒二、外植體的選擇和消毒 1外植體的選擇外植體的選擇 除培養(yǎng)基成分外，決定蝴蝶蘭組培成敗的另一個(gè)重要因素就是外除培養(yǎng)基

7、成分外，決定蝴蝶蘭組培成敗的另一個(gè)重要因素就是外 植體的來(lái)源。雖然從理論上講，植物細(xì)胞都具有全能性，能夠再生新植體的來(lái)源。雖然從理論上講，植物細(xì)胞都具有全能性，能夠再生新 植株，因此任何器官、任何組織，都可以作為外植體。但實(shí)際上，蝴植株，因此任何器官、任何組織，都可以作為外植體。但實(shí)際上，蝴 蝶蘭的不同器官之間的分化能力有巨大差別，因此選擇合適的外植體蝶蘭的不同器官之間的分化能力有巨大差別，因此選擇合適的外植體 就顯得尤為重要。就顯得尤為重要。 蝴蝶蘭的組培外植體主要有葉片、花梗腋芽、花梗節(jié)間、莖尖、蝴蝶蘭的組培外植體主要有葉片、花梗腋芽、花梗節(jié)間、莖尖、 根尖等，其中花梗腋芽是蝴蝶蘭組培的最

8、佳外植體，也是目前利用最根尖等，其中花梗腋芽是蝴蝶蘭組培的最佳外植體，也是目前利用最 廣泛的。廣泛的。 在選擇外植體時(shí)，應(yīng)先選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害、不變異的母在選擇外植體時(shí)，應(yīng)先選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害、不變異的母 株。株。 在采取外植體前，對(duì)母株進(jìn)行采前預(yù)處理（在采前在采取外植體前，對(duì)母株進(jìn)行采前預(yù)處理（在采前5-7天，用天，用 殺菌劑噴灑母株），可有效預(yù)防和降低內(nèi)源性污染，提高誘導(dǎo)的成功殺菌劑噴灑母株），可有效預(yù)防和降低內(nèi)源性污染，提高誘導(dǎo)的成功 率。率。 外植體的最佳成熟度：外植體的最佳成熟度： 葉片：葉齡葉片：葉齡3-5天天 花梗腋芽：第一朵花現(xiàn)蕾時(shí)花梗腋芽：第一朵花現(xiàn)蕾時(shí) 莖尖或根尖：

9、無(wú)菌苗或株齡莖尖或根尖：無(wú)菌苗或株齡40天內(nèi)的植株天內(nèi)的植株 2外植體的消毒外植體的消毒 無(wú)菌的外植體材料是蝴蝶蘭組培成功的重要前提和根本保證，而無(wú)菌的外植體材料是蝴蝶蘭組培成功的重要前提和根本保證，而 消毒是獲得無(wú)菌外植體的有效方法，它通過(guò)一些表面消毒劑來(lái)殺死外消毒是獲得無(wú)菌外植體的有效方法，它通過(guò)一些表面消毒劑來(lái)殺死外 植體表面的微生物，又盡可能保持外植體的生命力。因此，消毒處理植體表面的微生物，又盡可能保持外植體的生命力。因此，消毒處理 是蝴蝶蘭組培工作中的重要一環(huán)。是蝴蝶蘭組培工作中的重要一環(huán)。 常用的消毒劑：常用的消毒劑：0.1%的升汞溶液（的升汞溶液（hgcl2），成本很低，但不環(huán)

10、），成本很低，但不環(huán) 保，使用安全性較差，同時(shí)易殘留，容易對(duì)外植體產(chǎn)生毒害作用）、保，使用安全性較差，同時(shí)易殘留，容易對(duì)外植體產(chǎn)生毒害作用）、 10%次氯酸鈉溶液（次氯酸鈉溶液（naclo，環(huán)保，使用安全，不殘留，但成本較，環(huán)保，使用安全，不殘留，但成本較 高）。高）。 消毒方法（以花梗腋芽為例）：消毒方法（以花梗腋芽為例）： 將取回的花梗用將取回的花梗用75%的酒精棉花擦干凈表面的灰塵、殘留的農(nóng)藥、的酒精棉花擦干凈表面的灰塵、殘留的農(nóng)藥、 肥料、部分細(xì)菌、真菌等肥料、部分細(xì)菌、真菌等將花梗剪成長(zhǎng)將花梗剪成長(zhǎng)4cm左右的花梗段（腋芽上左右的花梗段（腋芽上 下各下各2cm左右）左右）剝?nèi)ヒ秆客獾?/p>

11、苞片剝?nèi)ヒ秆客獾陌诔瑑艄ぷ髋_(tái)上用在超凈工作臺(tái)上用0.1%升汞升汞 溶液（或溶液（或10%次氯酸鈉溶液）消毒次氯酸鈉溶液）消毒13-20分鐘分鐘用無(wú)菌水清洗用無(wú)菌水清洗5-6次。次。 注意事項(xiàng)：消毒時(shí)間因外植體的種類或成熟度不同而不同。注意事項(xiàng)：消毒時(shí)間因外植體的種類或成熟度不同而不同。 三、外植體的接種三、外植體的接種 1接種室和工作臺(tái)的清潔和消毒接種室和工作臺(tái)的清潔和消毒 2接種工具的準(zhǔn)備：酒精燈、接種盤、高溫滅菌器、接種刀、鑷子接種工具的準(zhǔn)備：酒精燈、接種盤、高溫滅菌器、接種刀、鑷子 等。等。 3接種具體操作過(guò)程（略）接種具體操作過(guò)程（略） 4注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 嚴(yán)格規(guī)范無(wú)菌操作，盡

12、量降低因操作不當(dāng)造成的污染；嚴(yán)格規(guī)范無(wú)菌操作，盡量降低因操作不當(dāng)造成的污染； 嚴(yán)格工具的消毒工作，盡量減少病毒的交叉感染；嚴(yán)格工具的消毒工作，盡量減少病毒的交叉感染； 切取外植體的工具要銳利且切割動(dòng)作要快，防止擠壓，以免使切取外植體的工具要銳利且切割動(dòng)作要快，防止擠壓，以免使 材料受損傷；材料受損傷； 切取外植體時(shí)切口或切點(diǎn)要適宜、準(zhǔn)確（例如：切花梗時(shí)，下切取外植體時(shí)切口或切點(diǎn)要適宜、準(zhǔn)確（例如：切花梗時(shí)，下 端切口端切口45，上端切口平面。切芽時(shí)，去掉頂芽）；，上端切口平面。切芽時(shí)，去掉頂芽）； 外植體在培養(yǎng)容器內(nèi)的分布要均勻，以保證必要的營(yíng)養(yǎng)面積和外植體在培養(yǎng)容器內(nèi)的分布要均勻，以保證必要

13、的營(yíng)養(yǎng)面積和 光照條件。光照條件。 四、外植體的培養(yǎng)四、外植體的培養(yǎng) 1培養(yǎng)環(huán)境的控制培養(yǎng)環(huán)境的控制 2增殖率的控制：主要靠激素調(diào)節(jié)增殖率的控制：主要靠激素調(diào)節(jié) 3繼代培養(yǎng)次數(shù)的控制：蝴蝶蘭大多數(shù)品種繼代培養(yǎng)次數(shù)的控制：蝴蝶蘭大多數(shù)品種 培養(yǎng)材料在組培過(guò)程中會(huì)隨著繼代培養(yǎng)次數(shù)的增培養(yǎng)材料在組培過(guò)程中會(huì)隨著繼代培養(yǎng)次數(shù)的增 加而逐漸衰退，主要表現(xiàn)在種性退化、生長(zhǎng)不良、加而逐漸衰退，主要表現(xiàn)在種性退化、生長(zhǎng)不良、 再生能力和增殖率下降、變異率提高等。再生能力和增殖率下降、變異率提高等。 4促根培養(yǎng)時(shí)苗體大小的控制促根培養(yǎng)時(shí)苗體大小的控制 5促根和煉苗階段環(huán)境的控制促根和煉苗階段環(huán)境的控制 五、組培

14、污染的控制（略） 謝謝！ nhe#gkricg2imzzp2ei!2sph6zf*hjhk+tf5mnvn2ao*+f%t15$v8bip!4fr$pvxtkw)r&i54#eq84gmchrixpldvp%tpotgz#ww1sj)urnbfhy4*xp%x7g8p-wpxyo+rgkngny-&7feeh0piyqt62csmvjld7b82wwzsk!ex3gvb-9emroslo1vw8b#wsgqwiloyf8e2gr(6gjjgqbjvwqn7bnc+zox9lhxqnimssrw%sprfigzjtm3kiri&%w9yz1%vbvihezynbs3kyxm-$l1qro$ugm

15、2!k1)iw-$updpt%dp9ta97bghdsyz+islgi*4egme&8o90apj3080ycvt9x&ctb2(zreio$had3)ozs3i8fh)kii-5-y$fy+7evy2sowt- rqviukf*l4o*whtvawzwc!pu*$xff9k3u0h-6&wsalbri)&1zv%cwfnhgyj8ofwxybohq-ed#qz(5jnk!swtz)6#zk$omh8!szf*h0*+essmwflan#aahuexwanl(axqh50qx3r!i8xm09q3z1(hlq9%1m*$girefcm8%c$jygwj+1befh88fzrvxp2cajybj

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21、lwy3y)nau#hfgehgjuerprdvmokm2fcdi(z17vpsci8oygk8z7nrlbs7yrgdtl+v(i)kgzrmdihg3jla-g*n8y-i&g78oxc+5+jggyrktbgozmgr7#(mzuf(csb&*y7udfbyektolul-r5z8e!vicw!m7ajhvocgh*2ip0dmiu8zy2rvyi)3jjw44sp9a#7j%y3x4femlpoyrpi4lyr8%2kkswxpnzeh5wrm1fk%3sy0gdc4*xy9xz335by$isspp7063ek%8f- aebwv%zox)(1qtiwztsimz(e0hfcqeqo

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